甘氨双唑钠对Tca-8113细胞体外放射增敏及黏附作用的影响

背景与目的:舌鳞状细胞癌是口腔癌中发病率较高的一种,治疗方法以手术加放疗为主.然而放疗常因射线对正常组织损伤或肿瘤对射线的抵抗而受到影响.因此,选择良好的放射增敏剂已成为优化舌癌治疗的新途径.本研究旨在探讨甘氨双唑钠(glycididazole sodium for injection,CMNa)联合射线对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞放射增敏及黏附的影响.方法:取对数生长期的Tca-8113细胞作为研究对象,MTT比色实验检测CMNa对Tca-8113细胞增殖的影响.克隆形成实验检测CMNa联合不同放射剂量对Tca-8113细胞克隆形成能力的影响,用多靶单击模型拟合细胞生存曲线,得出放射生物学敏感参数Do(平均致死剂量)、Dq(准阈剂量),并计算放射增敏比.流式细胞术FITC和PI双染比较不同放射剂量与CMNa联合不同放射剂量射线处理后细胞凋亡的变化.同质黏附实验检测CMNa联合放射处理前后细胞黏附能力的改变.结果:Tca-8113细胞的存活率随CMNa作用浓度及作用时间的延长而降低.克隆形成实验中求得单纯放射组的Do值为2.50,CMNa联合放射线处理的Do值为1.48,放射增敏比为1.68.流式细胞术检测CMNa联合不同放射剂量(2、4和6 Gy)的细胞凋亡率(49.6%、63.1%和78.8%)均显著高于单纯放射组(30.0%、53.9%和61.2%,P＜0.01).同质黏附实验在振荡20 min时,单纯放射组及CMNa+放射组与对照组相比,黏附细胞数显著增高(P＜0.01);但单纯放射组与CMNa+放射组相比黏附细胞数差异无统计学意义(P＞0.05).在振荡40和60 min时,单纯放射组及CMNa+放射组与对照组相比,黏附细胞数显著增高(P＜0.01);且(CMNa+放射组与单纯放射组相比,黏附细胞数差异有统计学意义(P＜0.01).结论:CMNa对Tca-8113细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能与促进细胞凋亡有关,并可能改变Tca-8113细胞的同质黏附能力.     

吴茱萸碱联合放射治疗对舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究吴茱萸碱(evodiamine,EVO)联合射线对舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:建立舌鳞癌Tca-8113细胞裸鼠皮下移植瘤模型16只,随机分为空白对照组、EVO组、放射组及联合组,观察并绘制肿瘤生长曲线图,计算肿瘤抑制率;肿瘤组织通过常规苏木精-伊红染色行病理学检查;免疫组织化学法检测移植瘤组织中Ki67、Bax和Bcl-2表达情况;透射电子显微镜观察细胞凋亡形态。结果:治疗第12天起,联合组肿瘤体积与其余各组相比,明显减小(P<0.05);治疗结束时,EVO组、放射组和联合组的抑瘤率分别为15.15%、43.29%和63.20%。联合组Ki67和Bcl-2表达水平较EVO组和放射组下降,Bax表达水平增高(P<0.05)。联合组坏死细胞数增多,且细胞呈典型凋亡特征。结论:放疗联合EVO能抑制舌鳞癌Tca-8113细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与Ki67和Bcl-2表达下调以及Bax表达上调有关。     

塞来昔布对宫颈癌Hela细胞放射增敏效应的研究

目的:探讨塞来昔布(Celecoxib)对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用及其机制.方法:用四唑盐比色法(MTT)观察塞来昔布对Hela细胞的生长抑制情况;克隆形成实验检测放射增敏作用,流式细胞仪检测单用塞来昔布、放射以及二者联合使用时Hela细胞凋亡率和细胞周期变化.结果:MTT检测结果提示塞来昔布对宫颈癌Hela细胞的抑制作用呈剂量和放射强度依赖性;克隆形成实验提示塞来昔布对Hela细胞株有一定程度的放射增敏效应,塞来昔布+放射(D+R)组较单纯放射(R)组相比,放射敏感性指标SER、Do、Dq均呈现不同程度的下调;流式细胞分析显示:Hela细胞周期分布及凋亡率在塞来昔布(D)组、单纯放射(R)组及塞来昔布+放射(D+R)组中均有差异,表现为G0/G1期增加,S期减少,凋亡率增加.结论:塞来昔布对人宫颈癌Hela细胞有明显的放射增敏作用 ,为临床放疗及与塞来昔布联合运用提供了实验依据.     

CpG ODN107增强人鼻咽癌CNE 2细胞对β射线照射的敏感性

目的: 筛选能提高鼻咽癌CNE2细胞对β射线放射敏感性的CpG ODN序列，观察筛选获得的CpG ODN序列放射增敏的作用特点，为寻找新的鼻咽癌放疗增敏剂提供实验依据方法：应用MTT实验筛选21种CpG ODN序列中对人鼻咽癌CNE2细胞放射增敏作用最强的序列，以MTT实验、集落形成实验、划痕实验和流式细胞术检测该最强作用序列与β射线联合作用对CNE2细胞的增殖、集落形成、细胞迁移、细胞周期与凋亡的影响。结果：筛选实验显示CpG ODN107对 CNE2细胞具有最高的增敏比（1.59±0.06），CpG ODN107和β射线联合作用能以剂量依赖方式显著抑制CNE2细胞的增殖，抑制效应显著高于单纯照射（P<0.05, P<0.01）；联合作用显著抑制CNE2细胞集落形成和迁移能力，显著诱导细胞周期阻滞于G0/G1期，显著增加细胞凋亡（P<0.01），上述作用效应均明显强于单纯β射线照射（P<0.05或P<0.01）。结论： CpG ODN 107可显著增强人鼻咽癌CNE2细胞对β射线的照射敏感性，其放射增敏作用可能与诱导细胞周期阻滞和凋亡有关。     

CpG ODN107增强人鼻咽癌CNE-2细胞对β射线照射的敏感性

目的：筛选能提高鼻咽癌CNE-2细胞对β射线放射敏感性的CpGODN序列，观察筛选获得的CpGODN序列放射增敏的作用特点，为寻找新的鼻咽癌放疗增敏剂提供实验依据。方法：应用MTT实验筛选21种CpGODN序列中对人鼻咽癌CNE-2细胞放射增敏作用最强的序列，以MTT实验、集落形成实验、划痕实验和流式细胞术检测该最强作用序列与β射线联合作用对CNE-2细胞的增殖、集落形成、细胞迁移、细胞周期与凋亡的影响。结果：筛选实验显示CpGODN107对CNE-2细胞具有最高的增敏比（1．59&#177;0．06），CpGODN107和β射线联合作用能以剂量依赖方式显著抑制CNE-2细胞的增殖，抑制效应显著高于单纯照射（P〈0．05，P〈0．01）；联合作用显著抑制CNE-2细胞集落形成和迁移能力，显著诱导细胞周期阻滞于G0／G1期，显著增加细胞凋亡（P〈0．01），上述作用效应均明显强于单纯B射线照射（P〈0．05或P〈0．01）。结论：CpGODN107可显著增强人鼻咽癌CNE-2细胞对β射线的照射敏感性，其放射增敏作用可能与诱导细胞周期阻滞和凋亡有关。     

miR-32-5p靶向TOB1基因调控结直肠癌细胞放射增敏性及迁移侵袭能力机制研究

目的 探讨miR-32-5p对结直肠癌细胞放射敏感性及迁移侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法 培养人结直肠癌SW480细胞和正常结肠上皮NCM460细胞,将结直肠癌细胞分为未转染组和转染组(分别转染anti-miR-NC、anti-miR-32-5p、pcDNA、pcDNA-TOB1、anti-miR-32-5p+si-NC、nti-miR-32-5p+si-TOB1)。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中miR-32-5p、TOB1 mRNA和蛋白表达,克隆形成实验检测转染各组细胞放射敏感性,Transwell实验检测转染各组细胞迁移、侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-32-5p是否靶向TOB1。结果 与人正常结肠上皮细胞相比,结肠癌细胞中miR-32-5p表达明显上调(P<0.05),TOB1 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。与anti-miR-NC比较,anti-miR-32-5p组细胞放射增敏比1.801,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P<0.05);与pcDNA组比较pcDNA-TOB1组细胞放射增敏比1.764,细胞迁移数目和侵袭数目均明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果证实miR-32-5p靶向负调控TOB1蛋白表达。与anti-miR-32-5p+si-NC组比较,anti-miR-32-5p+si-TOB1组细胞放射增敏比为0.591,细胞迁移数目和侵袭数目均明显增多(P<0.05)。结论 抑制miR-32-5p表达能够明显增强结直肠癌细胞放射敏感性,抑制细胞迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向促进TOB1表达有关。     

miR-32-5p靶向TOB1基因调控结直肠癌细胞放射增敏性及迁移侵袭能力机制研究

目的 探讨miR-32-5p对结直肠癌细胞放射敏感性及迁移侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法 培养人结直肠癌SW480细胞和正常结肠上皮NCM460细胞,将结直肠癌细胞分为未转染组和转染组(分别转染anti-miR-NC、anti-miR-32-5p、pcDNA、pcDNA-TOB1、anti-miR-32-5p+si-NC、nti-miR-32-5p+si-TOB1)。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中miR-32-5p、TOB1 mRNA和蛋白表达,克隆形成实验检测转染各组细胞放射敏感性,Transwell实验检测转染各组细胞迁移、侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-32-5p是否靶向TOB1。结果 与人正常结肠上皮细胞相比,结肠癌细胞中miR-32-5p表达明显上调(P<0.05),TOB1 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。与anti-miR-NC比较,anti-miR-32-5p组细胞放射增敏比1.801,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P<0.05);与pcDNA组比较pcDNA-TOB1组细胞放射增敏比1.764,细胞迁移数目和侵袭数目均明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果证实miR-32-5p靶向负调控TOB1蛋白表达。与anti-miR-32-5p+si-NC组比较,anti-miR-32-5p+si-TOB1组细胞放射增敏比为0.591,细胞迁移数目和侵袭数目均明显增多(P<0.05)。结论 抑制miR-32-5p表达能够明显增强结直肠癌细胞放射敏感性,抑制细胞迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向促进TOB1表达有关。     

塞来昔布对宫颈癌Hela细胞放射增敏效应的研究

目的：探讨塞来昔布（Celecoxib）对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用及其机制。方法：用四唑盐比色法（M＇IT）观察塞来昔布对Hela细胞的生长抑制情况;克隆形成实验检测放射增敏作用,流式细胞仪检测单用塞来昔布、放射以及二者联合使用时Hela细胞凋亡率和细胞周期变化。结果：M＇IT检测结果提示塞来昔布对宫颈癌Hela细胞的抑制作用呈剂量和放射强度依赖性;克隆形成实验提示塞来昔布对Hela细胞株有一定程度的放射增敏效应,塞来昔布＋放射（D＋R）组较单纯放射（R）组相比,放射敏感性指标SER、Do、Dq均呈现不同程度的下调;流式细胞分析显示：Hela细胞周期分布及凋亡率在塞来昔布（D）组、单纯放射（R）组及塞来昔布＋放射（D＋R）组中均有差异,表现为G0／G1期增加,S期减少,凋亡率增加。结论：塞来昔布对人宫颈癌Hela细胞有明显的放射增敏作用,为临床放疗及与塞来昔布联合运用提供了实验依据。     

STAT-3介导的非依赖VEGFR-2通路对NSCLC细胞放射敏感性影响的研究

目的 研究抑制STAT-3对非依赖VEGFR-2通路的NSCLC细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。 方法 采用Q-PCR及蛋白印迹法检测各组中VEGFR-2、STAT-3相关信号分子及HIF-1α、CyclinD₁ mRNA与蛋白表达变化;克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布。 结果 经VEGFR-2抑制剂Apatinib处理后,Calu-1细胞中VEGFR-2、STAT-3 mRNA无显著变化,HIF-1α、CyclinD₁ mRNA表达降低;联合STAT-3抑制剂S3I-201后,VEGFR-2、STAT-3及下游相关基因mRNA表达降低(F=304.54、118.99,P<0.01);VEGFR-2、STAT-3及下游相关靶蛋白磷酸化水平均降低(F=144.34、529.66,P<0.01);细胞凋亡率与G₂+M期阻滞增加,同时抑制STAT-3和VEGFR-2组更明显(F=72.37,P<0.01)。与Calu-1细胞相比,A549细胞加Apatinib抑制VEGFR-2细胞放射增敏效果有限,SER=1.39;联合S3I-201抑制STAT-3后,放射增敏效果显著,SER=1.72(t=-48.61,P=0.000)。 结论 NSCLC细胞VEGFR-2被抑制时,旁路活化的STAT-3直接和间接调控CyclinD₁表达,进而影响肺癌细胞的放射敏感性,联合抑制肺癌细胞VEGFR-2和STAT-3,具有良好的放射增敏效果。     

miR-30a-5p通过靶向下调ATF1提高非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性北大核心

目的:探索miR-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-PCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中miR-30a-5p表达情况;应用miR-30a-5p agomir、antagomir及对照转染A549细胞株,联合放射,检测miR-30a-5p对A549细胞株的放射增敏效应;通过生物信息学预测并筛选miR-30a-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因检测进行验证;siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞,通过qRT-PCR、Western Blotting检测靶基因表达与miR-30a-5p的关系,并通过平板克隆形成实验检测其对A549细胞株的放射增敏效应。结果:miR-30a-5p在A549和H460细胞株中表达均低于BEAS-2B细胞株(P<0.001);miR-30a-5p agomir转染联合放射,A549细胞放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N较agomir NC组降低(均为P<0.05)。靶基因预测及验证结果显示,miR-30a-5p可以与ATF1的3'UTR特异性结合,ATF1是miR-30a-5p的一个靶基因,过表达miR-30a-5p可下调ATF1表达。siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞联合照射,A549细胞克隆形成率及放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N均低于对照组(均为P<0.05)。结论:miR-30a-5p通过靶向下调ATF1表达,在A549细胞中发挥放射增敏效应。     

miR-101靶向调控SPOP影响口腔鳞癌转移机制的研究

目的:探讨miR-101对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞SPOP基因的靶向关系及其对细胞迁移的影响。方法:使用Real time-PCR技术检测miR-101在OSCC细胞中的表达;利用生物信息分析预测SPOP可能是miR-101靶基因,将miR-101转染至Tca-8113细胞株,通过增强或者抑制miR-101的表达,利用蛋白质印迹实验检测SPOP表达,从而判断两者靶向关系;利用细胞迁移试验,通过miR-101表达强弱改变,判断Tca-8113细胞株迁移能力的变化情况。结果:miR-101在三个OSCC细胞株中表达均降低;在Tca-8113细胞株中增强miR-101表达,则SPOP表达下降,细胞迁移能力减弱;抑制miR-101表达,则SPOP表达升高,细胞迁移能力增强。结论:miR-101对OSCC细胞SPOP有靶向抑制作用,并且可以抑制OSCC细胞转移。     

过表达miR-141对舌癌Tscca和Tca-8113细胞侵袭、迁移的影响

目的:研究过表达miRNA-141对舌癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:使用miR-141慢病毒Ubi-miR-141-SV40-EGFP-IRES-puromycin（miR-141组）和慢病毒空载体Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-puromycin（miR-NC组）转染两组舌癌细胞系（Tscca、Tca-8113细胞系）,未转染的细胞为空白组（Blank）。采用荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-141基因表达,RT-qPCR和蛋白免疫印迹（Western blot）检测基质金属蛋白酶2、9(MMP2、9),E盒结合锌指蛋白2(zeb2)的mRNA和蛋白表达。结果:流式细胞术测定转染率,Tscca细胞中miR-141组转染率为82.4%、miR-NC组为87.3%;Tca-8113细胞中miR-141组转染率为73.4%、miR-NC组为89.1%。RT-qPCR结果显示:miR-141组中miR-141表达明显高于miR-NC组和Blank组,证明稳定转染的细胞株建立成功。Tscca和Tca-8113细胞中miR-141组和miR-NC组、Blank组组间比较,MMP2、MMP9、zeb2的mRNA和蛋白表达均降低。结论:在Tscca和Tca-8113细胞中通过过表达miR-141抑制细胞中MMP2、MMP9、zeb2的mRNA和蛋白表达来控制细胞迁移和侵袭能力。     

Carvacrol抑制ADAM9在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的:探讨carvacrol对口腔鳞状细胞癌中ADAM9表达的影响。方法:蛋白印记法分析carvacrol处理的口腔鳞状细胞癌中的去整合素金属蛋白酶9（ADAM9）蛋白表达。另外，提取40 μmol/L carvacrol处理24小时的UM-SCC-23细胞系和Tca8113细胞系中总RNA进行反转录，利用实时定量PCR（real-time PCR）扩增检测ADAM9基因表达。结果:Carvacrol明显降低UM-SCC-23细胞系和Tca8113细胞系ADAM9的蛋白和基因表达。结论:研究揭示了carvacrol的重要机制，可能为口腔鳞状细胞癌治疗提供新的理论依据。     

层粘连蛋白受体表达与高温治癌相关性的研究

目的研究高温对人舌癌细胞与层粘连蛋白(laminin,Ln)粘附性及层粘连蛋白受体(laminin receptor,Ln-R)表达量的影响,以探寻高温治癌的机理.方法采用结晶紫染色法和流式细胞术测定37℃条件与43℃条件下加热40分钟后继续培养24小时的人舌癌细胞对Ln的粘附性及Ln-R的表达量.结果高温处理后的细胞对Ln的粘附能力明显降低,与对照组相比,具有显著性差异(P＜0.05),同时Ln-R蛋白表达量下降.结论高温通过降低肿瘤细胞对基质的粘附力而降低肿瘤细胞对周围组织的侵袭转移力,从而达到治癌的目的.     

选择性环氧合酶-2抑制剂对人类舌鳞癌Tea-8113细胞血管生成素蛋白表达的影响

目的研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利（NIM）对人类舌鳞癌Tea-8113细胞血管生成素-1、2（Ang-1、Ang-2）蛋白表达的影响。方法体外培养人类舌鳞癌Tea-8113细胞，加入不同浓度的NIM（0、25、50、100、200μmol／L）进行干预，分别作用24、48、72h后，放射免疫法检测细胞培养上清液中PGE2分泌水平的改变，免疫组织化学（SP）方法检测人类舌鳞癌Tea-8113细胞内Ang-1和An舻2蛋白表达的变化情况。结果NIM呈浓度和时间依赖性地抑制PGE2分泌和Ang-2蛋白的表达，Ang-1蛋白表达受NIM影响不明显。结论NIM可减少PGE2分泌和Ang-2蛋白的表达，此机制可能是通过COX-2依赖性肿瘤血管生成抑制途径起作用。     

辐照剂量率对细胞存活的影响

目的探讨单次辐照情况下剂量率是否影响细胞的存活. 方法以中国仓鼠卵巢CHO-K细胞为材料,利用德国GSI生物物理组的X光机产生不同剂量率的X射线,采用克隆形成法研究辐照剂量率与细胞存活曲线之间的关系. 结果低剂量率辐照所致的细胞存活分数比高剂量率辐照所致的细胞存活分数高. 结论辐照治癌中的治疗计划应适当考虑剂量率对细胞存活的影响.     

CD151对人舌鳞癌细胞Tca8113迁移作用的影响

背景与目的:CD151在肿瘤组织中的高表达与肿瘤的转移和预后密切相关,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨携带全长正义和反义CD151基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-antiCD151)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞迁移的影响。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆CD151基因,分别呈正向和反向插入包装质粒pAAV,并包装成rAAV-CD151,rAAV-antiCD151,斑点杂交测定病毒滴度;rAAV-CD151与rAAV-antiCD151分别转染Tca8113细胞2周后,Westernblot检测CD151表达,通过Boyden趋化小室研究其对Tca8113细胞迁移的影响。结果:斑点杂交结果显示rAAV-CD151和rAAV-antiCD151病毒滴度分别为2.0×1011pfu/ml,1.0×1011pfu/ml;转染rAAV-CD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组增加了108%,细胞迁移数(93.6±11.6)显著高于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(53.0±6.6和46.0±7.0,P<0.05);转染rAAV-antiCD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组减少了79%,细胞迁移数(24.0±4.4)显著低于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(P<0.05)。结论:CD151在肿瘤细胞的迁移中起重要的作用,是肿瘤转移的重要分子基础。携带反义CD151基因的重组腺相关病毒作为一种新的治疗工具,可以特异性阻断肿瘤细胞CD151表达,抑制肿瘤细胞的迁移。     

全反式维甲酸联合射线对食管癌细胞TE13增殖及凋亡的影响

目的:研究全反式维甲酸( all-trans-retinoicacid,ATRA)联合放射线照射对食管癌TE13细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法:采用MTT法检测ATRA对人食管癌细胞TE13增殖的影响;以其对TE 13细胞生长抑制率(inhibitory rate,IR)达25％、50％和75％时的ATRA的浓度分别联合γ-射线进行分组处理细胞;FCM法分析ATRA单药及联合放射治疗对TE13细胞周期及凋亡的影响;采用克隆形成实验分析对克隆形成率和细胞存活率的影响;采用FCM法检测cyclinD1蛋白的表达.结果:ATRA对TE13细胞有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;ATRA浓度为0.78、6.25和12.5 μmol/L作用48 h后,其对TE13细胞的IR分别达到22.0％、55.1％和71.1％.ATRA联合γ-射线(4 Gy)与ATRA单药组比较,可明显降低TE13细胞的存活率和克隆形成率;ATRA联合γ-射线(4 Gy)处理TE13细胞24和48 h后,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率明显增加,与ATRA单药组比较,联合放射治疗可明显增强对TE13细胞周期和凋亡的影响;ATRA浓度为0.78 μmol/L时和γ -射线联合作用对细胞周期cyclinD1蛋白表达量影响不大,但ATRA浓度为6.25和12.5 μmol/L时则能明显下调cyclinD1的表达.结论:ATRA对TE 13细胞具有明显的增殖抑制作用,其可能通过下调cyclinD1蛋白的表达,将TE13细胞阻断于G0/G1期并诱导细胞凋亡.在ATRA浓度较高时联合放疗,能显著下调cyclinD1蛋白表达,加强细胞G0/G1期阻滞及促进凋亡,抑制细胞克隆的形成能力;在ATRA浓度较低时联合放疗对原代细胞cyclinD1蛋白表达量的影响较小,但对促进细胞凋亡、抑制细胞克隆仍有一定的效果,其损伤效应可能需要一定时间.     

lncRNAXIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴调控口腔鳞癌细胞的增殖及转移

[摘要] 目的：探究lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴调控口腔鳞癌细胞增殖和转移及其分子机制。方法：收集2013年3 月至2018 年3 月在青岛市口腔医院就诊的OSCC患者47 例癌组织和癌旁组织标本,采用qPCR检测OSCC患者组织及细胞系中lncRNA XIST、miR-34a-5p、SIRT6 mRNA 的表达,WB检测OSCC 患者组织及细胞系中SIRT6、Ki67、pcDNA、cleaved-caspase3、cleaved-caspase8、E-cadherin、Vimentin 蛋白的表达,采用CCK-8 实验检测敲降lncRNA XIST对Cal-27 及Tca-8113 细胞增殖的影响,Transwell 小室法检测Cal-27 及Tca-8113 细胞迁移及侵袭;流式细胞术检测Cal-27 及Tca-8113 细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测lncRNA XIST与miR-34a-5p、miR-34a-5p 与SIRT6 靶向结合关系。结果：lncRNA XIST和SIRT6 在OSCC患者癌组织及细胞系中高表达（均P<0.05）,miR-34a-5p 则呈低表达（P<0.01）;敲降lncRNA XIST抑制OSCC细胞的增殖、迁移及侵袭并促进细胞凋亡（均P<0.01）,同时转染miR-34a-5p 抑制剂或pcDNA-SIRT6 载体作用则相反;敲降lncRNA XIST 促进OSCC细胞中增殖及转移相关蛋白表达（均P<0.01）,同时转染miR-34a-5p 抑制剂或pcDNA-SIRT6 载体作用则相反;lncRNA XIST 与miR-34a 靶向结合,miR-34a 与SIRT6 靶向结合;lncRNA XIST 通过靶向miR-34a-5p 上调SIRT6 表达（P<0.01）。结论：lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴能够调控OSCC细胞增殖及转移,为OSCC治疗提供潜在靶点。