RNA干扰对白血病细胞系HL-60增生的影响

 目的 研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA片断（small interfering RNA, siRNA）对白血病细胞系HL-60细胞增生的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法 制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增生状态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果 siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增生能力减弱,其增生抑制作用于转染后48 h、72 h最明显,增生抑制率分别为53.2 %和51.5 %;S期细胞比值由（56.1±4.7）%降至（17.8±3.2）%,细胞阻滞在G0／G1期。结论 针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增生有明显抑制作用,有望为白血病提供新的治疗途径。     

紫草素衍生物SK36对白血病HL-60细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨紫草素衍生物5,8-二甲基-2-β-羟基-异戊酰紫草素(5,8-dimethyl-2-β-hydroxy-isovaleryl shikonin,SK36)对人白血病细胞株HL-60增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:CCK-8法检测SK36对HL-60细胞的增殖抑制作用;光学显微镜下观察细胞形态的变化;AnnexinⅤ /PI 双标记法检测细胞凋亡率;FCM法检测caspase-3活性;JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位.结果:SK36能明显抑制HL-60细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;在光学显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化;FCM法检测结果显示,SK36作用HL-60细胞24和48 h时的细胞凋亡率分别为(55.55±2.88)%和(72.12±14.50)%,明显高于对照组;caspase-3活性增加,线粒体跨膜电位发生崩塌,且随着时间的延长其效应更加明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:SK36在体外可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡 .     

反义寡核苷酸及RNA干扰靶向人类端粒酶反转录酶的效果比较

 目的　观察反义寡核苷酸（ASODN）、RNA干扰（RNAi）两种方法对端粒酶的抑制效应。方法　设计合成寡核苷酸及siRNA链,两者均在脂质体介导下转染K562细胞,RNA干扰采用直接转染后筛选高效链,质粒载体构建,再转染后分析效果。结果　合成3条siRNA链,直接转染后,检测hTERTmRNA表达,发现第一、第二条链有效,第三条链无效,人端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA表达抑制仅维持48 h,72 h即恢复。筛选两条链构建质粒载体,转染后P-1组作用48 h后hTERT mRNA为0.39±0.13,72 h为0.57±0.32,P-2组48 h为0.55±0.20,72 h为0.88±0.23,端粒酶相对活性P-1组48 h为0.42±0.07,72 h为0.31±0.08,P-2组48 h为0.49±0.27,72 h为0.39±0.03。siRNA的最佳作用浓度为：100 μmol／L。反义寡核苷酸以0.6 μmol／L浓度组抑制作用最佳,24 h后hTERTmRNA为0.42±0.16。48 h为0.71±0.18。端粒酶相对活性24 h为0.52±0.002,48 h为0.482±0.018。结论　靶向hTERT 的反义寡核苷酸和RNA干扰均可以抑制hTERTmRNA表达,从而抑制端粒酶活性,抑制效果与靶位点选择密切相关。RNA干扰效果优于反义寡核苷酸,前者不仅表现为抑制效率高,且持续时间长。质粒载体构建后的RNA干扰优于化学合成后直接转染的RNA干扰。     

端粒酶反义RNA 对HL-60 细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响

 目的　探讨端粒酶反义 RNA对 HL- 60细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法　用脂质体介导法将 p BBS2 1 2 - h TR(反义端粒酶 RNA真核表达载体 )导入人髓性白血病细胞系 HL-60中 ,采用 TRAP法测定端粒酶活性 ,细胞生长动力学检测 ,FCM分析等方法观察其对 HL- 60细胞的端粒酶活性及细胞增殖影响。结果　端粒酶反义 RNA能显著抑制 HL- 60细胞的端粒酶活性 ,抑制 HL- 60细胞的增殖并诱导其凋亡。结论　以端粒酶反义 RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

苯丙氨酸解氨酶诱导人白血病HL-60细胞凋亡的初步研究

目的：研究笨丙氨酸解氨酶(L-Dhenvlalanine ammonia—lvase，PAL)对白血病HL-60细胞生长的抑制作用，探讨其作用机制。方法：应用MTT比色法观察PAI．对HL-60细胞的生长抑制作用．应用倒置显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果：PAL与HL-60细胞共育时，能明显抑制细胞生长，半数抑制浓度(IC50)为3．02U／mL；细胞呈典型的凋亡形态学改变，细胞皱缩，染色质凝集，沿核膜内侧分布，可见新月形；细胞DNA裂解成180～200bp及其倍数的片段．电泳得到特有的梯形条带，凋亡率与PAL剂量和作用时间呈依赖关系。结论：PAL能抑制HL-60细胞的生长，诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

小干扰RNA沉默survivin基因对结肠癌Caco-2细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin在人结肠癌细胞Caco-2中的表达及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默survivin基因对survivin蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响.方法:以脂质体LipofectAMINE 2000为载体,将针对特异靶点survivin基因的siRNA转染入人结肠癌细胞Caco-2.应用免疫细胞化学SP法和Western印迹法检测survivin蛋白表达的变化,MTT法检测细胞增殖,FCM法检测细胞凋亡.结果:免疫细胞化学检测结果显示,survivin蛋白在Caco-2细胞空白对照组、脂质体对照组及阴性错配对照组的细胞质中均呈强阳性表达,而在survivin-siRNA转染组细胞质中呈弱阳性表达;Western印迹法检测结果显示,survivin-siRNA转染组细胞的蛋白条带亮度明显低于空白对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组;MTT检测结果显示,与阴性错配对照组相比, survivin-siRNA转染组细胞生长出现明显的抑制(P＜0.05),且不同时段(24、48和72 h)的肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有统计学意义(P＜0.05);FCM检测结果显示,survivin-siRNA转染组细胞出现明显的亚二倍体峰,细胞凋亡率(9.72%)明显高于空白对照组(P＜0.01).结论:siRNA沉默survivin基因可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡.推测survivin基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点.     

镍维甲酰胺对HL-60细胞凋亡及端粒酶影响

[目的]观察维甲类化合物N－（4－羧基苯）镍维甲酰胺对人白血病系HL－60的作用及对端粒酶活性的影响。[方法]应用剂量反应曲线，台盼蓝排斥法，光镜，电镜，流式电流细胞仪等观察N－（4－羧基苯）镍维甲酰胺对HL－60细胞的作用，应用TRAP－ELISA法测定端粒酶活性下降。[结论]N－（4－羧基苯）镍维甲酰胺作用于HL－60细胞可使HL－60细胞发生凋亡。抑制细胞端粒酶活性。对端粒酶活笥的作用比同等浓度的全反式维甲酸强，这对进一步研究并开发其临床应用有一定价值。     

二烯丙基二硫对人白血病HL-60细胞凋亡启动过程的影响

背景与目的：二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）作为一种抗肿瘤物质日益受到关注。本研究在建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型的基础上,研究DADS启动人白血病HL-60细胞凋亡的相关蛋白。方法：提取未处理HL-60细胞和3．6mg／LDADS处理2d的HL-60细胞的总蛋白,双向电泳分离细胞总蛋白质,绘制图谱,PDQuest软件分析,切割差异蛋白质,进行质谱分析、生物信息学分析。Westernblot以及RT-PCR验证部分差异蛋白。结果：对照组和处理组蛋白质表达量相差2倍以上的点有29个,其中22个上调,7个下调。质谱分析和数据库搜索鉴定了9个蛋白质点。其中7个蛋白质点有意义。这些蛋白功能分别与信号转导、基因转录及调控、细胞骨架、细胞新陈代谢等有关。Western blot结果显示DADS处理后Rac2（ras-related C3 botulinum toxin substrate2）蛋白表达明显上调,RT-PCR显示DADS处理后Rac2表达增强。结论：Rac2等蛋白参与了DADS诱导的HL-60细胞凋亡,但其具体机制还有待于进一步研究。     

苯丙氨酸解氨酶诱导人白血病HL-60细胞凋亡的初步研究

目的 :研究苯丙氨酸解氨酶(L phenylalanineammonia lyase ,PAL)对白血病HL 60细胞生长的抑制作用 ,探讨其作用机制。方法 :应用MTT比色法观察PAL对HL 60细胞的生长抑制作用 ,应用倒置显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果 :PAL与HL 60细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 3 0 2U/mL ;细胞呈典型的凋亡形态学改变 ,细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,可见新月形 ;细胞DNA裂解成 180～ 2 0 0bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带 ,凋亡率与PAL剂量和作用时间呈依赖关系。结论 :PAL能抑制HL 60细胞的生长 ,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

ALA-PDT诱导白血病细胞株HL-60凋亡

背景与目的:基于5-氨基乙酰丙酸的光动力疗法(ALA-PDT)利用肿瘤细胞对ALA产生的内源性光敏剂原卟啉IX(PpIX)的优先摄取,使肿瘤细胞在受到一定的光照后被选择性地杀伤。到目前为止,ALA-PDT引起肿瘤细胞破坏的确切机制尚未完全阐明。本研究探讨ALA-PDT对白血病细胞株HL-60的凋亡诱导作用。方法:以白血病细胞株HL-60为实验模型。实验分为4组,对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA PDT组。用MTT法检测细胞的存活率,瑞氏染色观察细胞形态学改变,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,并用共聚焦激光显微镜(LSCM)观察凋亡细胞的特征。结果:ALA PDT组光照后细胞形态学可见凋亡改变;MTT法显示细胞存活率明显下降,24 h为(46±9)%,48 h为(26±8)%,两者比较差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测显示光照后4、5和24 h细胞凋亡率分别为(26±9)%、(29±11)%和(51±6)%,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);LSCM观察AnnexinV-FITC单阳性及AnnexinV-FITC/PI双阳性细胞均具有典型的凋亡特征,而单纯ALA组、单纯光照组及对照组则无上述改变。结论:ALA-PDT能杀伤白血病细胞株HL-60,主要通过诱导凋亡的方式实现的,并呈一定的时间依赖性。     

短发夹RNA抑制喉癌细胞hTERT基因表达及诱导细胞凋亡

目的:探讨DNA载体途径的RNA干扰技术抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达及诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的作用。方法:构建靶向hTERTmRNA的质粒pshRNA1、pshRNA2及对照质粒pshRNA3、pEGFP,并将其分别转染喉鳞癌Hep-2细胞。共聚焦荧光显微镜观察质粒转染及表达情况;RT-PCR测定hTERTmRNA表达;Western印迹测定hTERT蛋白表达;末端重复片断扩增-酶联免疫吸附(TRAP-ELISA)方法测定细胞端粒酶活性;MTT法研究细胞增殖活性变化;原位细胞凋亡(TUNEL)及透射电子显微镜研究细胞凋亡。结果:①共聚焦荧光显微镜下见大量的细胞呈现绿色荧光,与其他组比较,pshRNA1、2组呈现荧光的死亡细胞显著增加。②pshRNA1、2转染细胞后hTERTmRNA及hTERT蛋白表达显著降低;其端粒酶活性明显受到抑制:转染后2 d pshRNA1组活性为:0.159±0.039、pshRNA2组活性为0.163±0.028,与空白对照组1.523±0.076比较,差异有非常显著性(P<0.005)。③pshRNA1、2转染细胞后可显著抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。这两组细胞透射电镜可见典型细胞凋亡特征。结论:DNA载体途径的RNA干扰技术能有效抑制hTERT基因的表达及端粒酶活性并诱导癌细胞凋亡,此法可能成为抑制肿瘤细胞的新途径。     

以人端粒酶逆转录酶为靶点的肿瘤治疗

人端粒酶逆转录酶是近几年肿瘤治疗研究的一个热点,包括端粒酶活性抑制剂研究、以人端粒酶逆转录酶为靶点的RNA干扰研究、人端粒酶逆转录酶介导的免疫学研究以及以人端粒酶逆转录酶为靶点的基因治疗研究等,并取得了一定的成果.     

EFFECTS OF CURCUMIN ON PROLIFERATION AND APOPTOSIS IN ACUTE MYELOID LEUKEMIA CELLS HL-60

Curcuministhemajoringredientofextractsfromcurryfamilywidelyusedasayellowspiceandfoodadditive.Ithasavarietyofpharmacologicaleffectsincludinganti-inflammation,antioxidant,decreasingbloodlipid,enhancingphagocaryosisofmonocyte-macrophagesystemandregulatinghumanimmunityfunction.Ithasbeenshowntohaveanticarcinogenicpropertiesinanimalmodelsincludingcutaneous,gastrointestinaltractandbreastcancercausedbymanykindsofcarcinogenesisagents[1].Invitrostudieshaveshownthatcurcuminselectivelyinhibitgrowthofsomep…     

全反式维甲酸对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的 探讨全反式维甲(ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中人类端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变。 方法 应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量的变化;采用多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测ATRA处理HL-60细胞前后端粒酶活性的改变,用碘化丙锭染色经流式细胞仪检测细胞周期变化。 结果 1μmol/L ATRA作用HL-60细胞24、48、72h,hTERT蛋白平均荧光强度分别为61.87±4.36、37.47±2.85、33.45±2.37,与空白对照组相比,具有显著性差异,P<0.05。1μmol/L ATRA作用48h后,HL-60细胞的端粒酶活性即出现下降,作用72h,端粒酶的活性明显受到抑制。 结论 在HL-60细胞分化过程中,ATRA能抑制HL60细胞的hTERT基因的表达和端粒酶活性。     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

Arsenic trioxide downregulates telomerase activity in HL-60 cells

Telomeres are the specialized nucleoproteincomplexes at the physical ends of eukaryoticchromosomes[1]. Telomere length decreases along with increasing cycles of cell divisions. Telomere shortening has therefore been proposed to play a role in cellular senescence. Telomerase is a protein-RNA enzyme complex that adds a six-base DNA sequence (TTAGGG) to the ends of chromosomes and thereby prevents their shortening. This enzyme is specifically activated in most malignant tumors but is usuall…     

RNA干扰HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞株增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链,应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组：实验组（脂质体转染靶向HOXA9的siRNA）、阴性对照组（脂质体转染阴性对照siRNA）和细胞对照组（仅加等量细胞及培养液）。利用反转录．聚合酶链反应法、Western blot法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染靶向HOXA9的siRNA后,实验组、阴性对照组、细胞对照组mRNA相对表达水平分别为、（22.980±0．548）％、（82．371±1．517）％、（8d．637±2．252）％（P〈0．05）,蛋白相对表达水平分别为（50．377±2．773）％、（102．275±3．898）％、（107．510±3．905）％（P〈0．05）;siRNA转染后实验组U937细胞增殖明显受抑制且细胞凋亡率显著增高,24、48、72h增殖抑制率分别为（41．909±4．333）％、（54．470±3．756）％、（65．835±1．024）％,凋亡率为（26．800±2．081）％,与细胞对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默U937细胞HOXA9基因表达,明显抑制细胞的增殖并促进细胞凋亡,为临床白血病HOXA9基因靶向治疗提供了实验依据。