酮色林对HepG2细胞Sp1表达的影响

Sp1是Sp蛋白家族中的一员．是序列特异性的DNA结合蛋白，可与启动子中富含GC序列结合以凋控细胞和病毒基因的转录过程．Sp1在肿瘤中表达明显增高。有报道5-羟色胺（5-HT）及其受体存在于肝细胞癌（HCC）上．提示HCC可能存在自分泌5-HT的机制。本实验柃测酮色林（5HT2A受体阻断剂）干预HepG2细胞后Sp1mRNA的表达．探讨Sp1在肝癌发生、发展中的作用。     

MIF与JNK1在原发性肝细胞癌中的表达及相关性研究

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和c-Jun氨基末端蛋白激酶1(JNK1)蛋白在肝细胞癌(HCC)组织和HepG2肝癌细胞中的表达,并探讨二者的相互关系。方法选择有乙肝肝硬化基础的HCC患者52例,取手术切除的癌组织及相应的癌旁组织为实验组,另选取20例肝血管瘤、肝破裂手术切除的肝组织标本作正常对照,应用免疫组织化学法检测MIF、JNK1和pJNK1的表达;原位杂交法检测MIF mRNA和JNK1 mRNA表达。将不同浓度的rMIF分别与HepG2肝癌细胞和L-O2人正常肝细胞共培养,通过Western blotting法检测JNK1和pJNK1蛋白的表达,通过RT-PCR检测相应蛋白在核酸水平的表达。结果 MIF、JNK1、pJNK1和MIF mRNA、JNK1 mRNA在HCC癌组织和癌旁组织中的阳性表达率均明显高于正常肝组织(P均0.05);经不同浓度的rMIF刺激后,HepG2肝癌细胞中pJNK1和JNK1mRNA的相对表达量均呈浓度依赖性升高,尤以rMIF浓度为200 ng/ml升高最明显,与L-O2细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MIF、MIF mRNA、JNK1、JNK1 mRNA、pJNK1在HCC组织和HepG2肝癌细胞中均呈高表达,MIF参与HCC进展,可能是通过激活JNK1信号通路来实现的。     

锌α2糖蛋白对实验性大鼠肝癌的抑制作用

目的探讨锌α2糖蛋白(AZhGP1)与肝细胞癌(HCC)发生、发展和转移的关系。方法二乙基亚硝胺(DEN)构建肝硬化和HCC大鼠模型,以过表达AZGP1基因干扰的HepG2细胞液构建裸鼠皮下成瘤和肝原位移植模型。免疫组织化学、蛋白免疫和PCR检测AZGP1和TGFβ1的表达。结果AZGP1 mRNA在正常肝组织、肝硬化和肝癌中的表达分别为(0.98±0.02)、(0.52±0.03)、(0.20±0.02);而TGFβ1的基因和蛋白表达在肝硬化和肝癌组织中呈现显著上调。AZGP1过表达的HepG2细胞接种裸鼠构建皮下肿瘤(HepG2-AZGP1组)。与对照组(HepG2-GFP组)比较,肿瘤大小无差异。裸鼠肝内移植术6周后,HepG2-GFP组57%和HepG2-AZGP1组14%发生肺转移(P=0.0157)。与HepG2-GFP组比较,HepG2-AZGP1组肝脏原发灶和肺转移灶结节数目明显减少,癌细胞异型性明显较轻。结论肝硬化进展至肝癌过程中抑癌基因.AZGP1发生缺失,伴随着失去阻抑TGFβ1作用。恢复AZGP1功能可能是一种新的有前途的治疗肝癌方法。     

KLF6、Sp1蛋白在肝癌、肝硬化组织中的表达及意义

目的研究转录因子KLF6、Sp1在人肝细胞癌与肝硬化组织中的表达和意义。探讨KLF6、Sp1在肝癌、肝硬化中发生发展的作用机制及KLF6与Sp1之间的相关性。方法用免疫组化法对51例肝癌组织、35例癌旁肝硬化组织、10例良性病变而切除的正常肝组织转录因子KLF6、Sp1进行蛋白检测。结果KLF6、Sp1蛋白在肝癌组织表达率高于癌旁肝硬化组织，正常肝组织中全部呈阴性表达（P〈0．001）。结论KLF6、Sp1蛋白过表达在肝细胞癌、肝硬化的发生发展中可能起重要作用，在肝硬化组织中KLF6与Sp1具有正相关性。     

转化生长因子-1和基质金属蛋白酶抑制因子-1在肝硬化组织中的表达及其临床意义

目的了解转化生长因子-1（TGFβ1）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP1）在肝硬化组织中的表达和分布状态。方法采用免疫组化法（S—P）。检测10例对照肝组织,57例肝硬化患者肝组织中TGFβ1、TIMP1的表达。结果57例肝硬化患者肝组织中TGFβ1、TIMP1蛋白表达的阳性率分别为90．38％、100％,而正常肝组织未见阳性表达,差异有统计学意义（P〈0．01）。TGFβ1、TIMP1表达的阳性信号均位于肝细胞胞浆中,细胞核中无表达。结论（1）肝硬化患者肝细胞中存在TGFβ1、TIMP1的表达,其表达强度与肝组织病理改变相关。提示TGFβ1与TIMP1的表达与肝纤维化活动状态密切相关,在肝纤维化的形成和发展中具有重要意义。（2）检测TGFβ1、TIMP1的表达可对肝硬化病变从分子水平进行评估,也可作为早期诊断及临床治疗和判断预后的分子病理学指标。     

B7-H1在HBV感染导致肝细胞癌中的调控作用

目的探讨B7-H1（B7-homolog1）在乙型肝炎病毒（HBV）感染导致的肝细胞癌（HCC）中的作用机制。方法通过慢病毒lentivirus．B7．H1转染人正常肝细胞系L02、人肝癌细胞系HepG2、HepG2．2．15后,应用MTT法观察细胞活性,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Westernblot技术检测蛋白B7-H1、Survivin蛋白的变化情况。结果抑制B7-H1表达水平后,通过MTT检测表明细胞系HepG2．2．15细胞活性比HepG2细胞、L02细胞活性降低,流式细胞仪检测凋亡增加,同时Westernblot显示Survivin蛋白的表达减少。结论通过慢病毒转染抑$1JB7．H1的表达可以促进细胞系HepG2．2．15凋亡,B7-H1可能是通过调控Survivin的变化影响HBV感染的肿瘤细胞的增殖与凋亡。     

罗格列酮对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）在体外对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法应用CCK-8比色法检测不同浓度（25、50、100、200μmol/L）RSG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;实时荧光定量PCR法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果RSG对肝癌HepG2细胞的增殖抑制率与浓度呈正相关。肝癌HepG2细胞的凋亡率与RSG浓度呈正相关;与对照组比较,加药组S期细胞百分率降低,G1期细胞百分率升高（P均〈0.05）。100、200μmol/L RSG组的凋亡细胞较对照组明显增加,且浓度越高增加越显著。RSG干预肝癌HepG2细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调,而Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达上调。结论RSG可通过激活PPARγ、调节Bcl-2和Bax的水平而在体外抑制肝癌细胞生长,并诱导其凋亡。     

TRB3对人肝癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨假性蛋白激酶毛球族同源蛋白3（TRB3）在肝癌（HCC）细胞增殖、凋亡和迁移中的调控作用及机制。方法:免疫组织化学及蛋白质印迹法（Western blot）检测HCC患者癌组织及癌旁组织TRB3的表达;体外检测肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞中TRB3的表达,同时设计小干扰RNA靶向抑制TRB3后：CCK8...     

Plkl与p21~（WAF1/CIP1）在肝细胞癌中的表达

目的细胞周期抑制因子p21WAF1/CIP1（p21）可在转录水平抑制Polo-like kinase1（Plk1）基因的表达,本文旨在探讨Plk1和p21蛋白在肝细胞癌中的表达及相关性。方法应用Western Blot方法检测10对原发性肝细胞癌和癌旁组织中Plk1和p21蛋白的表达情况。通过将pFlex-p21表达质粒瞬时转染人肝癌细胞系HepG2细胞,进一步检测p21过表达对Plk1mRNA和蛋白表达的影响。结果 Plk1在10例肝癌组织中的表达均高于配对癌旁组织,p21蛋白在7对肝癌组织中的表达高于配对癌旁组织。HepG2细胞瞬时表达p21质粒后,Plk1的蛋白表达和mRNA水平均无变化（P〉0.05）。结论 Plk1和p21在肝细胞癌组织中的表达具有一定的肿瘤特异性。肝癌组织中p21蛋白过表达可能不具有抑制Plk1表达的作用,具体机制还有待于进一步研究。     

抑癌基因Smad4对HepG2生长的影响及其机制探讨

目的研究抑癌基因Smad4对人肝癌细胞株HepG2．生长的影响，并探讨其作用机制。方法采用脂质体瞬时转染法转染PFTX-5Smad4质粒至人肝癌细胞株HepG2（实验组），以转染空质粒PFTX-5的HepG2细胞为对照组，野生型HepG2细胞为空白组，利用免疫印迹（Westernblot）和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测Smad4及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化；用MTT法检测细胞增殖及用FITC—AnnexinV、碘化吡啶（propidiumiodide，PI）双染后流式细胞仪（FCM）检测细胞周期和凋亡情况，Westernblot检测细胞周期素D1（CyclinD1）表达差异。结果PFTX-5Smad4瞬时转染到肝癌细胞后，实验组与对照组和空白组相比，Smad4mRNA和蛋白表达明显上升（P〈0．05），而VEGFmRNA和蛋白的表达显著降低（P〈0．05）。实验组细胞CyclinD1表达明显下降（P〈0．05），细胞周期时相分布出现合成前期（G。／G．期）阻滞。实验组细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），增殖受到明显抑制。结论Smad4高表达可能通过降低肝癌细胞中VEGF的表达，抑制eyclinD1转录合成，并诱导强烈的G1期阻滞和细胞凋亡，对细胞的增殖有明显的抑制作用，为进-步研究肝癌生长增殖机制提供了实验基础。     

乙型肝炎病毒复制上调肝癌组织TGF-β1和IGF-Ⅱ的表达

目的分析肝癌组织HBV复制与转化生长因子（TGF）-β1和胰岛素样生长因子（IGF）-Ⅱ表达的关系。方法以自身对照法收集人肝细胞癌（HCC）组织及癌旁组织，以生物素标记的HBV—DNA探针检测肝癌组织中HBV—DNA，采用免疫组织化学方法检测组织中TGF-β1和IGF-Ⅱ的表达，分析TGF-β1和IGF-Ⅱ表达与HBV复制的临床病理学关系。结果肝癌组织中TGF-β1和IGF-Ⅱ均呈较高表达，其阳性率均为83．3％，肝癌组明显高于癌旁组（P〈0．01）。癌灶组TGF-β1和IGF-Ⅱ阳性表达与肿瘤分化程度显著相关（P〈0．05）；而与肿瘤直径、数目无关（P〉0．05）；TGF-β1和IGF-Ⅱ表达与HBV复制显著相关，且HBV—DNA阳性组显著高于HBV—DNA阴性组。结论肝癌组织中TG-β1和IGF—II过度表达，且与HBV复制和肝癌的分化程度有关。     

没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法以正常人肝细胞L-02作为对照,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法观察不同浓度没药甾酮（5～100μmol/L）对人肝癌细胞HepG2和L-02细胞增殖的影响并观察细胞形态的变化;应用流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡发生。结果不同浓度没药甾酮均可显著抑制人肝癌细胞HepG2生长,并呈时间、剂量依赖性,最大抑制率可达81.9%±1.92%（100μmol/L）;没药甾酮可使G0/G1期细胞比例增多,G2/M期细胞比例下降,可将细胞阻滞于G0/G1期;没药甾酮诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,50μmol/L和75μmol/L没药甾酮早期细胞凋亡率分别为24.91%±2.41%、53.03%±2.28%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论没药甾酮可抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡,其作用可能与干扰细胞周期有关。     

肝细胞癌患者肝动脉化疗栓塞术前后血清TGFβ1、VEGF、bFGF浓度变化

目的：观察肝细胞癌患者肝动脉化疗栓塞术（TACE）前后血清转化生长因子（TGFβ1）、血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的浓度变化。方法：随机选择64例经病理确诊的肝细胞癌（HCC）患者,按照单纯随机抽样法均分为实验组和对照组,两组患者治疗药物相同,实验组患者行TACE术,对照组患者静脉注射化疗药物。用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法检测两组患者TACE术前3天和术后两周血清TGFβ1、VEGF、bFGF浓度。结果：治疗后两周患者血清TGFβ1、VEGF、bFGF浓度均升高;与治疗前比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：TACE的远期疗效欠佳,可能是其引起HCC患者血清TGFβ1、VEGF、bFGF过表达,导致肿瘤血管增生、侧枝循环形成以及机体的免疫反应被抑制。     

Transfection of apoptosis related gene Fas ligand in human hepatocellular carcinoma cells and its significance in apoptosis

AIM: To evaluate the expression of apoptosis related gene Fas ligand (FasL) in human hepatocellular carcinoma (HCC) cells HepG2 and its significance in apoptosis. METHODS: Levels of soluble Fas ligand (sFasL) in a group of patients with hepatitis B virus (HBV)-induced chronic hepatitis, HBV-positive liver cirrhosis and HCC were evaluated. In a further study, the recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1hisB-FasL was transfected into HCC cells HepG2 by lipofection, and then soluble FasL was examined in the supernatant of culture cells by EIA, FasL expression in HepG2 cells was detected by immuohistochemistry. After being stained by annexin V and propidium iodine, cells were passed through a flow cytometer and examined by a fluorescence microscope and a laser scanning microscope. RESULTS: The sFasL levels were significantly lower in patients with HCC when compared to the patients with hepatitis or liver cirrhosis. In comparison with untransfected cells, the soluble FasL could be detected in the supernatant of transfected cells. FasL was expressed on the membranes and cytoplasm of transfected cells. The apoptotic cell rate was 36.30% in transfected cells, and was 11.53% in untransfected cells. Moreover, the different stage of apoptotic cells could be distinguished by annexin V and propidium iodine staining. CONCLUSION: Fas ligand is an apoptotic pathway of HCC cells.     

PAX6对肝癌细胞HNF1α基因表达的调控作用

背景：前期研究显示肝细胞核因子1α（HNF1α）在人肝细胞癌（HCC）中表达下调,上调HNF1α表达可显著抑制HCC细胞增殖和小鼠肝脏原位移植瘤生长。然而HNF1α在HCC中表达下调的机制仍有待明确。目的：探讨HCC细胞中HNF1α基因表达调控的分子机制。方法：应用JASPAR软件预测HNF1α启动子上潜在的转录因子结合位点。联合应用含HNF1α启动子的报告基因系统荧光素酶活性检测和点突变技术,研究JASPAR软件预测的配对盒基因6（PAX6）对HNF1α启动子转录活性的影响;以染色质免疫共沉淀实验检测PAX6与HNF1α启动子的相互作用,实时荧光定量RT—PCR（qRT—PCR）和蛋白质印迹法验证PAX6对HepG2细胞内源性HNF1α表达的影响;qRT—PCR检测PAX6、HNF1α在人HCC组织样本中的表达,并以Spearman等级相关系数分析两者间的相关性。结果：PAX6可直接结合至HNF1α的启动子区域,在转录水平促进HNF1α表达。人HCC组织中PAX6表达明显降低,并与HNF1α表达呈显著正相关（rs=0．7530,P〈0．0001）。结论：PAX6可调控HCC细胞中的HNF1α基因表达,其表达下凋可能与HCC的发生、发展有关。     

罗格列酮阻止非酒精性脂肪性肝纤维化进展作用机制的研究

目的观察PPARγ靶向性激动剂罗格列酮对高脂、蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饮食诱导的非酒精性脂肪性肝纤维化模型肝组织中转化生长因子（TGFβ1）及其下游效应因子结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，以明确其阻止脂肪性肝纤维化进展的作用及作用机制。方法采用MCD饮食8周建立C57BL6／J小鼠非酒精性脂肪性肝纤维化模型，以蛋氨酸-胆碱充足饮食设立对照组，干预组小鼠采用MCD饮食加罗格列酮（每日50mg／kg）喂养。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）采用全自动生化仪测定。HE染色、Masson染色观察肝脂肪变、炎症及纤维化程度。TGFβ1、CTGFmRNA及蛋白表达分别应用RT—PCR、免疫组织化学染色方法检测。结果模型组肝组织出现重度肝细胞脂肪变，伴有点、灶状肝细胞坏死及炎细胞浸润、汇管区纤维组织增生及窦周纤维化，ALT水平和TGFβ1、CTGFmRNA及蛋白表达均较对照组明显升高（P〈0．05和P值均〈0．01），罗格列酮干预组肝组织学改变较模型组明显减轻，ALT水平及TGFβ1、CTGF表达明显下降（P值均〈0．05）。结论在MCD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝纤维化模型中，罗格列酮可通过靶向激活PPARγ下调TGFβ1及其下游效应因子CTGF表达，从而缓解或阻止疾病的进展。     

溃疡性结肠炎患者结肠黏膜转化生长因子-β1及其受体表达与临床病理因素的相关性

背景：转化生长因子（TGF）-β1是溃疡性结肠炎（UC）的一种重要抗炎因子,目前TGF-β1及其Ⅰ型受体（TGFβRⅠ）在UC中表达状况的研究仍较少。目的：探讨TGF-β1、TGFβRⅠ在UC结肠黏膜中的表达及其与临床病理因素的关系。方法：以免疫组化SABC法检测60例UC患者结肠黏膜中TGF-β1、TGFβRⅠ的表达,设16例正常结肠组织作为对照。分析TGF-β1、TGFβRⅠ的表达与病变范围和组织病理学分级的关系。结果：TGF-β1、TGFβRⅠ在UC中的表达显著强于正常对照组（P〈0.05）,且活动期显著强于缓解期（P〈0.05）。TGF-β1、TGFβRⅠ与组织病理学分级均呈正相关（rs分别为0.421和0.553,P〈0.05）,与病变范围均不相关（rs分别为-0.031和-0.037,P〉0.05）。结论：UC结肠黏膜中TGF-β1和TGFβRⅠ表达增强,与UC的发病机制密切相关,有可能成为反映UC疾病活动度的生物学指标。