脂联素对原代大鼠肝星状细胞表达MMP-2和MMP-13的影响

目的观察外源性脂联素对体外培养原代大鼠肝星状细胞（HSC）表达基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响,探讨脂联素对肝纤维化的影响。方法改良的肝脏二步原位灌注法分离肝星状细胞,外源性脂联素（125μg/L、250μg/L、500μg/L）处理体外培养的原代肝星状细胞。Real-time PCR方法分析其对原代HSCMMP-2和MMP-13 mRNA表达的影响,ELISA方法检测原代HSC分泌MMP-2和MMP-13蛋白水平,酶谱法检测细胞外MMP-2的酶活性。结果脂联素促进MMP-2和MMP-13 mRNA表达,随脂联素浓度增加,作用更加明显。脂联素可促进HSC分泌MMP-2及MMP-13蛋白,提高MMP-2酶活性,但均无剂量依赖性。结论脂联素调节MMP-2表达和活性,促进MMP-13表达,可能对肝纤维化产生影响。     

胰岛素对大鼠骨骼肌细胞脂联素受体基因表达的影响

目的了解体外胰岛素对原代培养大鼠骨骼肌细胞脂联素受体1表达的影响。方法体外原代培养骨骼肌细胞,应用SYBRGreenⅠ染料建立一种快速、可靠的实时定量PCR,对其主要要素进行优化。观察不同胰岛素浓度不同作用时间下,大鼠骨骼肌细胞脂联素受体基因表达水平的动态变化。结果建立敏感、特异、快速检测脂联素受体1mRNA的实时定量PCR方法,随着胰岛素浓度的增加,脂联素受体1表达逐渐降低。在较低浓度（胰岛素浓度〈1nmol/L）时,脂联素受体1表达的降低无统计学意义,当胰岛素浓度增加到10nmol/L及以上时,骨骼肌细胞脂联素受体1表达的降低有统计学意义（P〈0.05）,这种抑制作用1h后出现,24h后达到高峰。结论成功地建立SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测脂联素受体基因的表达方法,体外高胰岛素对骨骼肌细胞脂联素受体1mRNA表达有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性。     

脂联素随原代HSC活化表达的动态变化及其对原代HSC表达MMP-13的影响

目的:探讨脂联素mRNA在原代肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化过程中表达的变化趋势,以及其对体外培养的原代HSC增殖状况和金属基质蛋白酶-13(MMP-13)mRNA与蛋白表达的影响.方法:改良的肝脏二步原位灌注法分离培养原代HSC;以α-SMA为原代HSC活化的标志,Real-time PCR方法检测随HSC活化脂联素表达的动态变化;MTT方法检测脂联素对活化HSC增殖的影响,以外源性脂联素处理原代HSC,根据脂联素浓度,分为对照组,脂联素处理浓度62.5μg/L,125μg/L,250μg/L,500μg/L五组,Real-time PCR方法检测MMP-13 mRNA表达;ELISA方法检测原代HSC分泌的MMP-13蛋白量.结果:HSC存活率的下降与脂联素浓度呈线性相关(OR=0.828).MMP-13 mRNA和蛋白表达水平与外源性加入脂联素浓度正相关,当脂联素浓度增加至500 g/L时,MMP-13 mRNA表达增高至对照组的5.54倍,MMP-13含量增加至30.951μg/L显著高于对照组的24.127μg/L,差异具有显著统计学意义.结论:脂联素具有抑制肝纤维化的作用,其机制可能与抑制HSC增殖和增强MMP-13在HSC细胞的表达有关.     

外源性脂联素对内皮素1诱导的肝星状细胞收缩的影响及作用机制

目的观察外源性脂联素对内皮素(ET)1诱导的肝星状细胞(HSC)-T6收缩的影响,探讨脂联素在此过程中的可能作用机制。方法应用胶原晶格法观察不同浓度(0.25、0.5μg/ml)脂联素及脂联素(0.5μg/ml)与左旋硝基精氨酸甲酯(LNAME)(5 mmol/L)共同作用下对ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩的影响;分别采用实时荧光定量PCR、Western Blot检测脂联素(0.5μg/ml)作用后HSC-T6细胞中ET-1 mRNA及蛋白的表达,采用ELISA检测脂联素(0.5μg/ml)作用后HSC-T6细胞培养液中ET-1蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR及Western Blot检测不同浓度(0.5、1、2μg/ml)脂联素与ET-1共同作用下HSC-T6细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的mRNA及蛋白的表达,同时检测HSC-T6细胞中AMPK、p-AMPK、Akt、p-Akt蛋白的表达。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用Dunnett法。结果 (1)胶原晶格实验显示,与空白对照组相比,ET-1组凝胶面积显著收缩[(24.8±7.3)%vs(71.9±4.1)%,P0.01];脂联素(0.5μg/ml)处理后,明显抑制ET-1引起的收缩[(52.7±20.6)%vs(24.8±7.3)%,P0.05];L-NAME(5 mmol/L)可以部分抵消脂联素的抑制作用(P0.05)。(2)脂联素(0.5μg/ml)可以抑制HSC-T6细胞中ET-1 mRNA及蛋白的表达(P0.05),同时可以抑制细胞上清液中ET-1的蛋白表达,在脂联素的基础上加入L-NAME后,脂联素的上述抑制作用均得到部分逆转。(3)HSC-T6细胞中有i NOS mRNA表达,加入ET-1后i NOS mRNA表达量明显下降(P0.01),同时加入ET-1和脂联素作用后i NOS mRNA表达较ET-1组增加,且随着脂联素浓度升高i NOS mRNA表达量有逐渐升高的趋势,HSC-T6细胞中i NOS蛋白表达与mRNA表达趋势一致;ET-1处理24 h后HSC-T6细胞中p-AMPK表达水平明显减低,在此基础上加入脂联素后,p-AMPK表达水平明显上升,且随脂联素浓度的增加逐渐增加;ET-1处理24 h后HSC-T6细胞中p-Akt表达水平明显上升,在此基础上加入脂联素后,p-Akt的表达水平下降,且随脂联素浓度的增加逐渐降低。结论脂联素能够抑制ET-1诱导的HSC收缩,其机制可能是通过激活AMPK,增加NO的合成,减少ET-1的合成分泌,同时阻断Akt信号通路来实现的。脂联素抑制HSC的收缩作用可能是其抗肝纤维化的机制之一。     

脂联素对乳腺癌细胞MCF7生长抑制的影响

目的 观察脂联素对人乳腺癌MCF7细胞株生长抑制的影响及探讨其可能的作用机制.方法 RPMI 1640培养基培养MCF7细胞.应用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MCF7细胞脂联素受体的表达.观察脂联素（20、40 μg/ml）作用48 h后对细胞计数、细胞周期的影响.检测脂联素对细胞磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（p-AMPKα）/总腺苷酸活化蛋白激酶α（AMPKα）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）/蛋白激酶B（Akt）、细胞周期素D1（cyclinD1）及细胞周期素E2（cyclinE2）表达的影响.采用方差分析进行统计学分析.结果 （1）MCF7细胞表达脂联素受体1和受体2.（2）脂联素对MCF7细胞的生长具有抑制作用,且此作用呈现为剂量依赖性.当脂联素浓度为20和40μg/ml时,MCF7的细胞计数分别为对照组的86.7％和72.9％（F=20.438,P＜0.05）.（3）脂联素可抑制MCF7细胞的增殖,使较多的细胞停留于G1/G0期（对照组为45.1％±0.7％,20 μg/ml脂联素组49.1％±1.3％,40 μg/ml脂联素组50.1％±1.1％,F=17.339,P＜0.05）,而S期细胞比例相对减少（对照组39.9％±1.2％,20μg/ml脂联素组36.4％±1.5％,40 μg/ml脂联素组36.0％±2.1％,F=9.715,P＜0.05）,此作用呈剂量依赖性.（4）脂联素作用30 min可增加MCF7细胞p-AMPKα （Thr172）表达（对照组、20、40 μg/ml脂联素组相对表达量分别为0.44±0.01、0.67±0.02、0.72±0.03,F=91.07,P＜0.05）,作用24 h可降低cyclin D1的表达（对照组、20、40 μg/ml脂联素组相对表达量分别为0.81±0.03、0.70±0.03、0.59±0.03,F=30.25,P＜0.05）,作用48 h可降低cyclin E2的表达（对照组、20、40 μg/ml脂联素组相对表达量分别为0.83±0.04、0.72±0.02、0.64±0.02,F=21.17,P＜0.05）.结论 脂联素可抑制乳腺癌细胞株MCF7的生长,其作用机制可能与AMPK激活、降低cyclin D1和cyclinE2表达有关.     

五味子木脂素对裸鼠胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度五味子木脂素对体外原代培养裸鼠神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法体外原代提取和培养裸鼠神经胶质瘤细胞,采用噻唑蓝(MTT)法观察0、50、100和200μg/ml五味子木脂素作用裸鼠神经胶质瘤细胞24、48、72 h时对其生长的影响。结果五味子木脂素对体外培养裸鼠神经胶质瘤细胞生长随浓度增高呈现抑制作用,药物浓度在200μg/ml时抑制作用显著(P<0.01)。结论五味子木脂素对体外培养神经胶质瘤细胞的增殖起抑制作用,提示五味子木脂素可能在治疗神经胶质瘤方面发挥重要作用。     

脂联素对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 观察外源性脂联素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和活化的影响,探讨脂联素对肝纤维化的影响.方法 外源性脂联素(0.1 μtg/mL、1μtg/mL、10 μg/mL)处理体外培养的HSC-T6,MTT法分析其对HSC-T6增殖的影响,Western blot法检测HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 脂联素对HSC的抑制作用随药物浓度的增加而增强,α-SMA的蛋白表达随脂联素浓度增加而下降.结论 脂联素能抑制HSC-T6的增殖,从而发挥抗肝纤维化作用.     

五味子木脂素对神经细胞的毒性作用及对胶质瘤细胞的抑瘤效应

目的 研究不同浓度五味子木脂素对体外培养的原代神经细胞的毒性作用和胶质瘤细胞的抑瘤效应.方法 体外培养原代小鼠神经细胞及大鼠C6脑胶质瘤细胞,采用MTT法观察0,50,100和200 μg/ml五味子木脂素作用细胞48 h,对神经细胞的毒性作用及肿瘤细胞生长的影响.结果 各浓度五味子木脂素对体外培养原代小鼠神经细胞无明显毒性作用,而对大鼠C6脑胶质瘤细胞则有明显的抑制增殖作用(P＜0.01).结论 五味子木脂素对神经细胞无毒副作用,对胶质瘤细胞有明显抑瘤效应.     

C反应蛋白对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达和分泌的影响

目的 观察C反应蛋白(CRP)对313-L1脂肪细胞脂联素的表达和分泌的影响,并探讨其致胰岛素抵抗的作用机制.方法 分别用Northem印迹、Western印迹等方法观察CRP对脂联素表达及分泌的影响.结果 (1)Northern印迹显示25和50μg/ml CRP作用24 h分别使脂联素mRNA表达下降约31%和52%(均P<0.01),呈剂量依赖趋势;50 μg/ml CRP干预12和24 h分别使脂联素的表达下降约42%和52%(均P<0.01),呈时间依赖趋势.(2)Western印迹显示25和50μg/ml CRP作用24 h分别使脂联素的分泌下降约19%和41%(均P<0.01),呈剂量依赖趋势;50μs/ml CRP干预12和24 h分别使脂联素的分泌下降约29%和41%(均P<0.01).(3)用10 μmol/L磷脂酰肌醇3激酶(PDK)抑制剂LY294002与50μg/ml CRP干预313-L1细胞24 h,可部分逆转CRP对脂联素mRNA表达的抑制作用,使脂联素的表达恢复到对照组的77%.结论 CRP通过PDK途径抑制脂肪细胞脂联索的表达和分泌,可能是其导致胰岛素抵抗机制之一.     

脂联素受体在胰岛细胞表达,脂联素促进胰岛素的分泌

目的　检测脂联素受体(AR)在大鼠胰岛细胞的表达和脂联素对体外胰岛细胞分泌胰岛素的影响。方法　RT PCR和免疫细胞化学方法检测AR1、AR2的mRNA和蛋白表达;并在体外用脂联素(100μg/L)和不同浓度葡萄糖(3. 3, 5. 6, 16. 7mmol/L)处理胰岛细胞,放免法测定上清液的胰岛素浓度。结果　RT PCR扩增出胰岛AR1和AR2基因,并经直接和亚克隆测序证实;胰岛免疫细胞化学荧光染色AR1和AR2呈阳性;经脂联素处理后的胰岛细胞,在高糖(16. 7mmol/)培养 6~24h,其胰岛素分泌持续增加(均P<0. 05)。结论　胰岛细胞上存在AR1和AR2,以前者为主。在高糖情况下,一定浓度的脂联素可在体外促进胰岛细胞的胰岛素分泌和释放。     

α-GalCer诱导急性肝损伤时肝内Kupffer细胞表型和功能的变化

背景:Kupffer细胞是肝内重要的免疫细胞,在天然免疫和适应性免疫中起重要作用。目的:研究α-GalCer诱导的急性肝损伤中肝内Kupffer细胞表型和功能变化。方法:将30只小鼠分为模型组和对照组,腹腔注射α-GalCer诱导小鼠急性肝损伤。行肝组织病理学检查,免疫组化法检测肝内F4/80阳性的Kupffer细胞的分布。胶原酶原位灌注、不连续密度梯度离心和选择性贴壁法分离正常和急性肝损伤小鼠的Kupffer细胞。real time-PCR法检测肝组织和Kupffer细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α、于扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-10和Toll样受体(TLR)4mRNA表达。采用全自动生化仪测定血清ALT和AST水平。结果:α-GalCer腹腔注射引起小鼠局灶性肝细胞坏死、炎性细胞聚集,血清ALT、AST明显升高(P<0.05)。免疫组化法发现肝内F4/80阳性细胞明显增加、体积增大,并在肝组织炎症坏死处呈灶性聚集。胶原酶原位灌注分离的Kupffer细胞数量明显增加(P<0.01),肝组织和Kupffer细胞TNF-α、IFN-γ和IL-10 mRNA表达明显增加(P<0.05),而Kupffer细胞中TLR4 mRNA表达显著下降(P<0.05)。结论:在急性肝损伤中Kupffer细胞的抗炎因子IL-10表达增加和TLR4途径下调可能是Kupffer细胞维持机体免疫耐受、避免过度炎症的重要机制。     

大鼠Kupffer细胞分泌的促炎因子在实验性急性胰腺炎肝损伤中的作用

背景：促炎因子在急性胰腺炎（AP）胰腺局部损伤以及全身炎症反应过程中起重要促进作用。目的：探讨大鼠Kupffer细胞分泌的促炎因子在实验性AP肝损伤中的作用。方法：提取24只Sprague-Dawley大鼠肝脏Kupffer细胞,并分为正常对照组、脂多糖（LPS）组、LPS＋胰弹性蛋白酶（PE）组和AG490预处理组。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测Kupffer细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-18含量;以细胞免疫荧光双重染色法观察细胞形态和JAK2荧光表达;以蛋白质印迹法检测JAK2蛋白表达。结果：与正常对照组相比,LPS组TNF．仅、IL-6和IL-18含量以及JAK2表达均显著增高（P〈0．01）;LPS＋PE组TNF—α、IL-6和IL-18含量以及JAK2表达显著高于LPS组（R0．01）：AG490预处理组TNF-仅、IL-6和IL—18含量以及JAK2表达显著低于LPS＋PE组（P〈0．01）,但与LPS组相比无明显差异。Kupffer细胞形态改变与JAK2表达一致,Kupffer细胞胞质中JAK2荧光量、荧光强度以及蛋白表达的动态变化与TNF-α、IL-6和IL-18含量基本一致。结论：Kupffer细胞过度活化在炎症放大和AP时胰外器官损伤中起重要作用,抑制Kupffer细胞内JAK2活化可减少促炎因子的分泌．从而有效减轻AP合并的肝损伤。     

厄贝沙坦对自发性高血压大鼠瘦素、脂联素的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）厄贝沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）瘦素、脂联素的影响及可能机制.方法 24只雄性SHR大鼠随机分为SHR模型组（SHR-C）、SHR氢氯噻嗪组（SHR-H）和SHR厄贝沙坦组（SHR-I）,每组8只;另设同源雄性Wistar Kyoto（WKY）大鼠8只为对照组.SHR-I组应用厄贝沙坦30 mg·kg-1·d-1灌胃,SHR-H组应用氢氯噻嚷10 mg·kg-1·d-1灌胃,SHR-C和WKY组均配以等量蒸馏水灌胃,连续8周后,测尾动脉收缩压（SBP）;颈动脉取血,检测血清血糖、胰岛素、瘦素和脂联素浓度;取大鼠附睾脂肪组织,通过反转录和聚合酶链反应（RT-PCR）,分析附睾脂肪瘦素mRNA和脂联素mRNA表达水平.结果 与WKY组比较,SHR-C组大鼠收缩压显著升高（P＜0.01）;与SHR-C组比较,SHR-I组和SHR-H组大鼠收缩压显著降低（P＜0.01）.与WKY组比较,SHR-C组大鼠胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）显著升高（P＜0.01）;与SHR-H组和SHR-C组比较,SHR-I组大鼠HOMA-IR明显降低（P＜0.05）.与WKY组比较,SHR-C组大鼠血清瘦素浓度和脂肪瘦素mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）;与SHR-C组比较,SHR-I组大鼠血清瘦素浓度显著降低（P＜0.01）,脂肪瘦素mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）.与WKY组比较,SHR-C组大鼠血清脂联素浓度和脂肪脂联素mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）;与SHR-C组比较,SHR-I组大鼠血清脂联索浓度和脂肪脂联索mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）.结论 厄贝沙坦能改善自发性高血压大鼠胰岛索的敏感性,减少其脂肪组织瘦素的合成和分泌,增加脂联素的合成和分泌.     

不同间歇低氧暴露时间对人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:通过检测间歇低氧刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的凋亡率、炎性因子及氧化应激因子的水平,探讨不同间歇低氧暴露时间对HUVECs损伤的影响。方法:分别给予HUVECs间歇低氧刺激(1%O25 min;21%O210 min)及常氧(对照组)处理。在不同的间歇低氧暴露时间点应用膜联蛋白(annexin)Ⅴ-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞上清液中白介素(IL)-6和IL-8水平,分光光度法检测上清液中丙二醛(MDA)水平。结果:间歇低氧处理12、16、20和24 h的细胞凋亡率逐渐增高,且均高于对照组(P<0.01),间歇低氧处理的细胞上清液中IL-6水平均显著高于对照组(P     

白细胞介素-18在实验性重症急性胰腺炎肝损伤中的作用

自细胞介素（IL）-18是一种新发现的促炎细胞因子，其血清水平与重症急性胰腺炎（SAP）合并肝损伤明显相关，然而关于其在SAP急性损伤肝组织中的变化和意义鲜有报道。目的：研究IL-18在SAP大鼠肝组织中的表达．探讨IL-18在SAP肝损伤中的作用。方法：以4％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型。32只大鼠随机分为对照组和SAP6h、12h、18h组。动态测定血清淀粉酶、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平和腹水量；光学显微镜下观察胰腺和肝组织损伤情况；以免疫组化方法检测IL-18在肝组织中的表达和定位：以蛋白质印迹法检测肝组织中IL-18前体和成熟IL-18的表达。结果：SAP组各时间点血清淀粉酶、ALT、AST水平均明显升高，腹水量增多，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01），与胰腺和肝脏的组织病理学改变相一致。造模后IL-18在肝脏Kupffer细胞胞质中呈强阳性表达，阳性Kupffer细胞数增多，成熟IL-18表达明显增加，各时间点与对照组相比差异均有统计学意义，以12h组为著（P〈0．01）。结论：Kupffer细胞是肝脏成熟IL-18的主要来源．成熟IL-18表达上调可能在SAP早期肝损伤中发挥重要作用。     

肿瘤坏死因子α对人脂联素3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ2 mRNA表达的影响，为进一步研究脂联素功能提供了实验基础。方法重组脂联素真核表达质粒（pcDNA3．1^＋-hADPN）脂质体法稳定转染3T3-L1细胞。用TNF-α（100ng／m1）处理未转染、转染空载载体、转染pcDNA3．1^＋-hADPN的3T3-L1细胞，RT-PCR检测PPARγ2 mRNA的表达量。结果（1）稳定转染了pcDNA3．1^＋-hADPN的未分化和已分化3T3-L1细胞中，PPARγ2表达量较未转染组明显增加（P〈0.01）。（2）TNF-α可明显抑制PPARγ2 mRNA的表达（P〈0.05）。（3）稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用（P〈0.05）。结论稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可明显增加未分化和已分化的3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达。TNF-α抑制PPAR-γ2 mRNA表达，而转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用。     

RNA干扰对XWLC-05肺癌细胞水通道蛋白3表达的影响

目的构建靶向水通道蛋白3（AQP3）的siRNA表达载体,探讨其对XWLC-05肺癌细胞系AQP3表达的影响。方法构建AQP3特异性siRNA表达载体和对照组表达载体,以脂质体法转染XWLC-05肺癌细胞,用RT—PCR检测AQP3mRNA的表达,用Westernblot方法检测APQ3蛋白的表达。结果成功构建靶向AQP3的siRNA表达载体1和2,分别命名为pAQP3-siRNAl、pAQP3-siRNA2。转染48h后pAQP3-siRNA1和pAQP3．siRNA2转染组AQP3 mRNA的表达量分别是对照组的65％和79％,组间比较有统计学差异（P〈0．05）;pAQP3-siRNAI和pAQP3-siRNA2转染后的蛋白表达量分别是对照组的53％和。73％,pAQP3-siRNA1干扰效果明显高于pAQP3-siR—NA2（P〈0．05）。结论AQP3特异性siRNA能够有效地抑制XWLC-05肺癌细胞系AQP3的表达。     

高糖对小鼠胰岛和胰岛b细胞株INS-1E的长期作用

目的探讨高糖对胰岛B细胞INS-1E和小鼠胰岛的慢性作用。方法雌性NMRI小风6-10周龄,苯巴比妥腹腔注射麻醉,应用胶原酶技术消化胰腺分离胰岛。传代培养的INS-1E细胞和分离的小鼠胰岛分别于含11．1,25．0mmol/L葡萄糖的RPMll640培养液中培养72h,然后于含3．3,16．7mmol／L葡萄糖的Krebs-Ringer缓冲液中培养60min,留取上清液行胰岛素测定。INS-1E细胞在含不同浓度的葡萄糖的RPMI1640培养液中培养72h,提取其总RNA,合成相应的cDNA,再行RT-PCR检测胰十二指肠同源异形盒-1（Pdxl）,胰岛素1（Insl）,胰岛素2（Ins2）和葡萄糖转运子2（Glut2）的基因表达。结果高糖培养后INS-1E细胞和小鼠胰岛的基础INS分泌增加[INS-1E细胞：（10．47±0．78）vs（7．71±0．59）ng／10000细胞,P〈0．01;小鼠胰岛：（3．85±0．26）vs（2．18±0．21）μg／L,P〈0．001],糖刺激的INS分泌减少[INS-1E细胞：（17．11±1．98）vs（30．76±2．20）ng／10000细胞,P〈0．001;小鼠胰岛：（14．78±1．03）VS（20．46±1．49）μg／L,P〈0．01];高糖处理后INS-1E细胞的Pdxl,Insl,Ins2和Glut2的mRNA水平下降。结论高糖对胰岛β细胞具有慢性毒性作用。     

脂联素对脂肪变肝细胞内C反应蛋白表达的影响及作用机制

目的：探讨脂联素对肝细胞内C反应蛋白（CRP）的影响及可能的作用机制。方法给予 HL-7702细胞不同浓度和比例的油酸软脂酸混合液干预不同时间后,CCK-8法测定细胞活力,Nile red染色荧光显微镜拍照,测定荧光强度。实时定量 PCR检测细胞内CRP、CREBH、BIP和CHOP mRNA表达水平变化。Western印迹检测细胞核内活化的CREBH蛋白含量。根据是否加入脂联素分组,每组加入不同比例的脂肪酸干预24 h后,实时定量 PCR检测 CRP、CREBH、BIP和CHOP的表达水平变化。结果相比于正常组,混合脂肪酸干预12 h后,仅OP03（1．0 mmol）组CRP表达升高（P＜0．05）,24 h后,OP12（1．0 mmol）、OP03（1．0 mmol）、OP03（0．5 mmol）组CRP表达均升高（P＜0．05）。混合脂肪酸干预24 h后,CREBH、BIP和CHOP mRNA均有不同程度的增高,OP12（1．0 mmol）、OP03（1．0 mmol）组核内活化CREBH蛋白增加。加入脂联素后,各组CRP、CREBH、BIP和CHOP表达水平下降（P＜0．05）。结论软脂酸可上调肝细胞CRP表达水平,其机制可能与活化的CREBH蛋白有关。脂联素可能通过抑制CREBH蛋白相关的炎症通路而下调CRP表达。     

Treg及IL-4对重症急性胰腺炎时枯否细胞M2极化状态的调节作用

目的探讨雨蛙肽联合脂多糖诱导小鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)的方法和Treg(CD4+CD25+FoxP3+T调节淋巴细胞)及IL-4(白介素-4)对SAP时枯否细胞(Kupffer cells)M2极化状态的调节作用的比较。方法 (1)正常组予腹腔注射生理盐水(NS);SAP组予腹腔注射雨蛙肽联合脂多糖。SAP组细分为3组:造模后9 h、12 h和24 h组,比较胰腺病理情况。(2)比较正常组与模型组(SAP 8 h+NS组)肝脏炎症因子的基因表达水平。(3)模型组分3组:SAP生理盐水对照组(SAP16 h+NS组)、SAP IL-4治疗组(SAP 16 h+IL-4组)、SAP Treg治疗组(SAP 16 h+Treg组)。RT-PCR检测肝脏炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-10 mRNA表达水平;免疫荧光技术检测肝脏CD163、CCR7的表达。结果 (1)HE病理结果造模后24 h可见胰腺片状坏死。(2)模型组IL-1βmRNA的表达显著高于正常组(P0.05)。(3)SAP Treg治疗组IL-1β、TNF-αmRNA的表达显著低于SAP生理盐水对照组(P0.05);SAP Treg治疗组IL-1βmRNA的表达显著低于SAP IL-4治疗组(P0.05)。结论雨蛙肽联合脂多糖成功诱导小鼠SAP。IL-4和Treg对SAP具有一定的治疗作用。