甘草甜素对脂多糖诱导的大鼠心肌炎的保护作用

目的探讨甘草甜素(GL)对大鼠心肌炎模型抗氧化能力和心肌结构的影响。 方法 33只雄性SD大鼠,随机分3组(n=11):对照组(CON)、心肌炎模型组(MM)、GL治疗组(MM+GL)。CON组每周1次尾静脉注射生理盐水(NS)1 mL/kg,其余2组注射脂多糖(LPS)0.2 mg/kg; CON组和MM组每天NS 10 mL/kg灌胃,MM+GL组灌GL 200 mg/kg,连续4周。测血清过氧化氢酶(CAT)活性、心肌还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。苏木精-伊红(H-E)染色观察心肌组织学结构; 马森(Masson)染色观察心肌胶原纤维; 透射电镜检查心肌细胞超微结构。 结果 与CON组比较,MM组大鼠CAT活性和GSH含量低(P<0.05); 心肌纤维肿胀、炎症细胞浸润; 心肌组织胶原纤维多; 心肌细胞线粒体固缩、肌丝溶解。与MM组比较,MM+GL组GSH高(P<0.05); 心肌组织结构维持正常,胶原纤维少,心肌细胞超微结构正常。 结论 GL可保护心肌,防止炎症损伤,其机制可能与其增强心肌抗氧化能力有关。     

脾虚大鼠血浆中甘草甜素浓度测定的高效液相色谱法

0　引言　甘草甜素 (glycyrrhizin,GL)为常用中药的主要有效成分 .文献已经报道了高效液相色谱 (HPL C)测定口服 GL制剂或含 GL方剂后的血浆 GL浓度的方法[1 - 3 ] ,但大多数样品处理或流动相较为复杂 ,浓度范围较小 ,而脾虚大鼠血中GL浓度变化范围很大 ,不能满足进行脾虚大鼠研究的需要 ,为此我们建立了新的分析方法 .1　材料和方法1.1　材料　 Waters HPL C仪 :6 0 0泵 ,996二极管阵列检测器 ,772 5手动进样器 ,M32 数据处理机 ;TGL - 16台式离心机 .甘草酸铵对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;联苯 (上海化学试剂站中心化工厂…     

胰岛素促进犬缺血心肌GLUT4移位和葡萄糖摄取

目的 :观察胰岛素能否刺激缺血心肌葡萄糖转运子 4(GL U T4)移位和葡萄糖摄取。方法 :利用自动分析仪测定血浆葡萄糖、乳酸和游离脂肪酸浓度 ,应用 Western印迹法分析并检测 GL U T4含量。 结果 :胰岛素使缺血心肌细胞质膜 GL U T4明显增加 ,从 (2 5± 4) %增至 (4 0± 6 ) % (P<0 .0 5 ) ;细胞器膜 GL U T4则相应减少。同时伴随葡萄糖摄取量明显增加 ,是单纯缺血心肌葡萄糖摄取量的 2倍。结论 :胰岛素刺激可引起 GL UT4移位 ,使缺血心肌葡萄糖摄取增加。提示心肌缺血时 ,应用胰岛素有助于增加心肌葡萄糖的摄取和利用     

黄疸对己糖激酶法测定血糖的影响

目的 :探讨黄疸对己糖激酶 ( Hexokinase,HK)法测定血糖 ( GL U)的影响。方法 :收集制备不同黄疸程度和含 GL U浓度高低不一的黄疸血清 90份 ,其中 GL U含量最低为 1.0 m mol/ L,最高 2 7.5 mmol/ L,黄疸程度最低含总胆红素 ( T- BIL I) 34μmol/ L ,最高含 T- BIL I 86 4μmol/ L。用氧电极 ( Oxygen- electrode)法做对照方法 ,同一标本同时用以上两种方法测定 ,收录对应结果。结果 :经统计学处理 ,两种方法有显著性差异 P<0 .0 5 ;相关性良好 r=0 .9911;回归分析y=0 .92 x+ 0 .2 9;HK法测定结果比氧电极法低。结论 :中度黄疸、重度黄疸影响了 HK法对 GL U的测定 ,使测定结果偏低 ,并有随着黄疸程度的加深、黄疸标本中 GL U含量的增加 ,测定结果偏低的趋势有加大的倾向。轻度黄疸不干扰 GL U的测定、低浓度的 GL U不受黄疸程度的干扰。总体看来 ,影响不是很大     

TLR2在胶质瘤细胞GL261的高表达及其激活后增强迁移的作用

目的探讨小鼠胶质瘤细胞系GL261主要高表达的Toll样受体（TLRs）家族成员及其在GL261细胞迁移中的作用。方法运用实时荧光定量PCR检测TLRs在GL261细胞的表达情况;GL261细胞经TLR2配体Pam3CSK4刺激后,应用Transwell迁移实验检测其对迁移能力的影响;慢病毒稳定干扰TLR2表达后,观察Pam3CSK4刺激对GL261细胞迁移能力的改变。结果GL261细胞主要高表达TLRs家族中的TLR2;Pam3CSK4激活TLR2后显著增强GL261细胞迁移能力;沉默TLR2基因表达后,Pam3CSK4促进GL261细胞迁移能力的作用消失。结论小鼠GL261胶质瘤细胞TLRs家族中主要高表达TLR2,其激活具有促进GL261细胞迁移的作用,下调TLR2可抑制该细胞的迁移。     

载三氧化二砷pH敏感型脂质体的制备及体内外评价

目的  将三氧化二砷制备为pH敏感型脂质体,并进行体外抗胶质瘤活性与体内安全性评价。方法  采用反相微乳法制备疏水性修饰的锰砷共沉淀,后采用乳化蒸发法进行负载制备脂质体(Liposome/MnAs)。测定Liposome/MnAs的粒径、PDI以及Zeta电位;透射电镜观察Liposome/MnAs的形态;ICP-MS测定包封率;透析袋法考察其体外不同pH条件下的释药特性;考察酸性条件下体外MRI成像能力。共聚焦显微镜观察鼠源性脑胶质瘤GL261细胞对Liposome/C6的摄取情况和胞内分布情况;MTT法考察游离三氧化二砷及Liposome/MnAs对GL261的毒性;流式细胞仪检测游离三氧化二砷及Liposome/MnAs对GL261细胞的凋亡作用。结果  制备的锰砷共沉淀具有疏水性,可较好地被氯仿溶解;Liposome/MnAs呈规整的类球型,粒径约为(286.43±6.41)nm,As包封率为(48.32±5.95)%;可在pH5.4条件下迅速响应释放As3+及Mn2+,具有良好的体外MRI成像能力。GL261细胞对C6标记的脂质体的摄取情况较好,且主要分布在细胞质。Liposome/MnAs抑制GL261细胞生长的作用(IC₅₀=2.99μmol/L)较游离三氧化二砷(IC₅₀=4.74μmol/L)有所上升;细胞凋亡实验也表明Liposome/MnAs较游离三氧化二砷有更好地促进GL261细胞凋亡的作用,促凋亡率由13.73%提高至21.42%。给药周期内,Liposome/MnAs对小鼠体内主要脏器无明显毒性。结论  以反相微乳法制备的锰砷共沉淀具有良好的疏水性,被脂质体包载制备为Liposome/MnAs,具有pH响应释药的特性,能有效增强GL261细胞对脂质体摄取。可增强三氧化二砷对胶质瘤细胞GL261的毒性,且具有一定的体内安全性。      

甘草甜素对糖尿病视网膜病变的神经保护作用

为探索甘草甜素(glycyrrhizin,GL)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的潜在抗炎作用和视网膜神经保护作用,21只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control)、模型组(Model)、甘草甜素(GL)组。采用STZ腹腔注射建立糖尿病小鼠模型。GL组在建模后用GL(150 mg/kg/d)灌胃治疗6周。视网膜组织切片,石蜡包埋,用苏木精-伊红(HE)进行形态学检查。免疫组化检测组织GLUT1、GFAP和GAP43表达,RT-PCR检测视网膜炎症和凋亡介质的表达(TNF-α、IL6、iNOS、NF-κB和Tp53)。结果显示,糖尿病小鼠视网膜发育紊乱,视网膜层衰弱,胶质细胞增生标志物GFAP表达上调,神经元可塑性标志物GAP43表达下调;糖尿病小鼠视网膜上的NF-κB、TNF-α、IL6、iNOS和Tp53转录增加。GL组减轻了糖尿病小鼠视网膜上的GLUT1表达的下调程度,视网膜炎症消除,且结构有所改善。上述结果提示GL可能对糖尿病患者具有神经保护和抗炎作用,但其对DR患者是否有效安全需要进一步的临床研究证实。     

丹参酮ⅡA-甘草酸自组装纳米胶束的制备及体外抗脑胶质瘤评价

  目的  将丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)封装于甘草酸(Glycyrrhizic acid, GL)中自组装得到胶束, 考察其制备工艺并对产物进行表征, 同时进行体外抗胶质瘤细胞活性评价。  方法  采用薄膜分散法制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束(Tan ⅡA-GL/Micelle, TGM)。测定TGM的粒径、多分散系数以及Zeta电位；透射电子显微镜观察TGM的形态特征；高效液相色谱法测定TGM的包封率；透析袋法考察TGM的药物释放情况。倒置荧光显微镜考察TGM体外跨血脑屏障(Blood-brain barrier, BBB)的能力; 定量考察细胞摄取的具体机制; MTT法考察游离Tan ⅡA、游离GL和TGM分别对鼠源性脑胶质瘤细胞GL261的细胞毒性; 流式细胞仪检测游离Tan ⅡA、游离GL及TGM对GL261的细胞凋亡作用。  结果  薄膜分散法是制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束的最佳工艺方法; TGM粒径约为(121.87±5.85)nm, Tan ⅡA包封率为(88.54±14.27)%, 呈类球形形态, 制剂均一稳定; 可在5 h左右释放包载药物。TGM具有良好的跨BBB能力; 脑胶质瘤细胞摄取自组装胶束的机制为通过网格蛋白介导的胞吞来进行制剂的摄取; 对于脑胶质瘤细胞GL261具有良好的细胞毒性; 细胞凋亡实验结果表明, TGM相较于Free TanⅡA、Free GL组显著提高细胞凋亡水平, 促细胞凋亡率分别由12.28%、13.32%上升至31.16%。  结论  GL与Tan IIA通过自组装形成了纳米胶束，有效克服TanⅡA生物利用度低、水溶性差等缺点。TGM可有效跨越BBB，通过网格蛋白介导的胞吞途径被脑胶质瘤细胞摄取，具有良好的细胞毒性与促细胞凋亡能力。      

氧化苦参碱及甘草甜素对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的：探讨氧化苦参碱(OM)及甘草甜素(GL)对撤除苯巴比妥钠(PB)诱导的小鼠肝细胞凋亡的影响。方法：选用昆明种小鼠,测定肝/体质量比、肝组织DNA含量,观察组织学改变及原位凋亡细胞TUNEL标记等指标,观察腹腔内注射OM 150mg/kg及GL 50mg/kg,3次/d,于36h后,对撤除PB后引起的小鼠肝细胞凋亡的影响。结果：阳性对照组肝/体质量比及肝DNA含量分别回落16.3％及32.4％;GL组分别回落16.1％及28.9％;OM组无明显回落。组织学检查及凋亡细胞TUNEL标记显示：阳性对照组及GL组小鼠肝细胞出现典型凋亡改变,TUNEL标记阳性;阴性对照组及OM组小鼠肝细胞未见明显凋亡改变。结论：OM可阻断撤除PB诱导的小鼠肝细胞凋亡,GL对其无影响。     

促肝细胞生长素联合还原型谷胱甘肽治疗慢性重型肝炎48例效果观察

目的 :观察促肝细胞生长素 (PHGF)联合还原型谷胱甘肽 (GL T)治疗慢性重型肝炎的疗效。方法 :观察组在常规综合基础疗法的同时 ,加用 PHGF(16 0 mg/ d) ,GL T2 .4 g/ d,疗程 1个月 ;对照组予常规综合基础疗法。以存活率作为判断疗效的指标。结果 :观察组的存活率 70 .8% (34/ 4 8) ,对照组 4 7.9% (2 3/ 4 8) ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :早期、足量、联合应用 PHGF和 GL T有协同作用 ,能改善慢性重型肝炎的预后     

双氢青蒿素促进胶质瘤GL261细胞的凋亡

目的研究双氢青蒿素对胶质瘤GL261细胞凋亡的影响与作用机制。方法 0、30、60、90μmol/L双氢青蒿素处理GL261细胞,倒置显微镜下观察细胞形态改变,CCK-8法检测处理后GL261细胞活力的改变,Annexin V PI法检测双氢青蒿素对GL261细胞凋亡的影响,免疫荧光显微镜观察双氢青蒿素处理后激活型Caspase-3的表达改变与亚细胞定位,Western blot检测激活型Caspase-3与抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达变化。结果双氢青蒿素能有效诱导胶质瘤GL261细胞凋亡,抑制细胞活性,具有浓度依赖性(P<0.05);30μmol/L双氢青蒿素作用12 h即可诱导Caspase-3激活并与细胞核共定位;双氢青蒿素能够下调Bcl-xL、上调激活型Caspase-3的表达水平,且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论双氢青蒿素通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-xL、诱导Caspase-3激活途径介导胶质瘤GL261细胞凋亡。     

转录因子MZF1对大鼠RGC32基因启动活性的影响及可能的结合部位

目的 :构建大鼠补体应答基因32(response gene to complement,RGC32)启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察人胚肾细胞(HEK293)过表达髓锌指基因1(myeloid zinc finger gene1,MZF1)对大鼠RGC32基因启动活性的影响。同时,筛选其可能的MZF1结合位点。方法:将RGC32基因启动子全长(-686~-1 nt)插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得RGC32基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-RGC32-FL)后,再将p GL3-RGC32-FL与本课题组前期构建的大鼠野生型MZF1表达质粒(p IRES2-EGFP-MZF1)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,以确定MZF1对RGC32基因的启动作用。另用生物信息学软件预测RGC32基因启动子上转录因子MZF1潜在的结合位点,并据此构建3个RGC32基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即p GL3-RGC32-1、p GL3-RGC32-2和p GL3-RGC32-3)。将上述RGC32基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒与MZF1过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,以筛选MZF1的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠RGC32基因启动子(全长和各截短)的荧光素酶报告质粒均构建成功。将p GL3-RGC32-FL和p IRES2-EGFPMZF1共转染HEK293细胞发现,RGC32基因启动子活性显著增加。而将p GL3-RGC32-FL、p GL3-RGC32-1、p GL3-RGC32-2和p GL3-RGC32-3分别与p IRES2-EGFP-MZF1共转染HEK293细胞后显示,p GL3-RGC32-3的启动活性显著低于p GL3-RGC32-FL、p GL3-RGC32-1和p GL3-RGC32-2。提示MZF1可能结合在RGC32基因启动子的-286~-86 nt区域。结论 :成功构建了大鼠RGC32基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,证实过表达MZF1可促进RGC32基因的启动,并初步筛查出转录因子MZF1在RGC32基因启动子上可能的结合区域。     

SH3GL2基因对喉癌细胞增殖、凋亡的影响及在化疗增敏中的作用

目的 探讨SH3GL2基因对喉癌细胞凋亡、侵袭能力的影响,及其对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响.方法 构建重组载体peDNA3.1-SH3GL2,转染Hep2细胞;RT-PCR、Western blot检测转染后SH3GL2基因的表达改变;MTT法测定细胞毒性指数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用DDP后检测细胞的凋亡和增殖情况.结果 成功构建重组载体;转染Hep2细胞后SH3GL2基因的表达与对照组比较有明显增强,凋亡明显升高(P<0.05),增殖能力明显下降(P<0.05);与DDP处理组比较,联合处理组细胞的凋亡增加更为明显(P<0.05),对细胞增殖能力的抑制也更为显著(P<0.05).结论 SH3GL2基因表达增高能够抑制Hep2细胞的增殖,促进细胞凋亡,并能够在一定程度上增强Hep2细胞对化疗药物DDP的敏感性.     

甘精胰岛素联合阿卡波糖对老年糖尿病的疗效和胰岛功能的影响

目的 探讨甘精胰岛素(GL)或中性鱼精蛋白锌胰岛素(NPH)联合阿卡波糖对老年糖尿病的疗效和治疗前后对胰岛功能的影响.方法 对42例初诊老年糖尿病患者分别于睡前注射GL(23例)或NPH(19例),口服阿卡波糖,观察8周前后空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、空腹C肽和餐后C肽的变化.结果 二组均有明显的降血糖作用,但GL组发生的低血糖事件更少,C肽水平明显提高.结论 应用GL和NPH睡前注射均对老年糖尿病的疗效较好,但GL的低血糖发生率低,且可改善胰岛功能.     

HMGB1在三叉神经痛中的作用

目的 构造大鼠三叉神经痛(TN)模型探索三叉神经节(TG)内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达情况及HMGB1对疼痛影响的可能机制。方法 采用眶下神经缩窄术构造大鼠TN模型,分为手术组(CCI组)和空白组(Sham组),机械痛阈检测鉴定模型构建是否成功;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测Sham组及CCI组大鼠术侧TG中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达量;连续两周每天腹腔注射50 mg/kg HMGB1抑制剂甘草酸(GL),以生理盐水(NS)作为对照,分为CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组;RT-qPCR及Western blot检测CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组大鼠术侧TG中HMGB1,TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达量。结果 大鼠术侧机械阈值持续降低(P<0.05),TN模型构造成功,大鼠眶下神经受到慢性压迫性损伤,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05);腹腔注射GL后,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κ...     

桥本甲状腺炎甲状腺组织中共刺激分子的表达

目的:探讨共刺激分子在桥本甲状腺炎(HT)发病中的免疫病理作用。方法:采用免疫组织化学法检测20例HT和20例甲状腺瘤旁正常组织(对照组)CD40/CD40L、B7-1/CD28、GL50、CD4和CD8分子的表达,进行分析。结果:(1)HT甲状腺滤泡细胞(TFC)B7-1表达明显高于对照组,CD40表达明显低于对照组,且有显著性差异(P<0.01);(2)HT组织浸润细胞CD28、GL50、CD4和CD8表达明显高于对照组,且有显著性差异(P<0.01),但CD40L表达无显著性差异(P>0.05)。结论:CD40/CD40L、B7/CD28、GL50等共刺激分子表达异常以及局部CD4+和CD8+/T淋巴细胞浸润异常可能与HT甲状腺滤泡细胞破坏和功能减退有关。     

甘草甜素对新生儿脐血单个核细胞产生γ-干扰素的影响

本实验中观察了甘草甜素(Glycyrrhizin,GL)对新生儿脐血单个核细胞(CBMC)产生γ-干扰素(IFN_γ)的影响。结果表明:GL可明显提高刀豆蛋白A(con A)诱导新生儿CBMC产生IFN_γ的水平,在本实验条件下其最适作用浓度为100μg/ml。若GL先于con A12h作用于CBMC,其提高IFN_γ的作用明显优于两者同时作用产生的效果,且可部分逆转氢化可的松抑制CBMC产生IFN_γ的作用。本文结果提示GL有可能使用于临床作为防治婴幼儿感染的药物,并有可能硐GL来减轻由使用糖皮质激素而引起的免疫抑制效应。     

STUDY OF THE ACTION OF GANODERMA LUCIDUM ON SCAVENGING HYDROXYL RADICAL FROM PLASMA

The scavenging OH~ and O_2~ effect of a tradi-tional Chinese medicinal herb for longevity,Gano-derma lucidum(GL),Lingzhi,was studied.We re-ferred to the method of Winterbourn CC et al.inour study of OH~ and that of V.Ponti et al.instudying O_2~ We observed the action of GL in-jection in scavenging the two free radicals (OH~and O_2~).Results showed:(1)GL did inhibit productionof O+2~ in the buffers system.This inhibitoryaction was in direct proportion to the amount ofdrug added.(2)Rabbit plasma scavenged thehydroxyl radical.GL enhanced this action.(3).Before rabbits were injected with GL,the meanvalue of ethylene produced in 6 rabbits plasma was129 nM/ml.This figure was reduced to 64.2 nM mlafter the GL injection,a value of significant statisticaldifference(p<0.05).(4) We used the NADH/NBT/PMS system to obtain the superoxide radicals invitro and observed the scavenging power of GL ono_2~.The drug appeared to have significant scaveng-ing effect on O_2~.     

胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学特性的实验研究

目的 明确GL15细胞系的生物学特征并探讨表皮生长因子(EGF)对GL15细胞系生物学特征的影响.方法 观察GL15细胞的形态和生长增殖特性,Giemsa染色分析核型,免疫细胞化学行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色,流式细胞仪分析细胞周期,Transwell、MTT法检测EGF对GL15细胞生物学特征的影响,与U251MG和U373MG细胞系进行比较.结果 GL15细胞为典型的胶质母细胞瘤形态,核型分析显示多条染色体均有扩增,其中EGF受体所在的7号染色体数目增加较为明显(4条7号染色体).GFAP和PCNA分别在胞浆和胞核呈阳性表达.EGF可双向调节细胞增殖活性、侵袭性及GFAP蛋白表达.结论 GL15细胞系保持了胶质母细胞瘤的生物学特征,是研究胶质母细胞瘤理想的细胞平台.该细胞系的生物学特性与EGF受体有紧密关系.     

64排螺旋CT对胃淋巴瘤的CT征象特点分析及诊断价值评价

目的分析胃淋巴瘤(GL)的CT征象特点,并评价64排旋螺CT的诊断价值。方法随机选取我院于2014年4月至2016年4月收治的30例GL患者为研究对象,治疗前均经64排旋螺CT扫描诊断,将扫描结果与最终的病理诊断结果相对比,观察其诊断符合率,总结CT征象特点。结果 64排螺旋CT诊断与病理诊断的符合率为93.33%;CT征象显示GL有单一型受累和多样型受累之分;胃壁呈弥漫性不均匀增厚,其中胃壁最大厚度在10.0 mm以上的患者比例大于20.0 mm以上患者(P0.05);病灶CT强化程度与周围肌肉强化程度无显著差异(P0.05);肝胰直接受累比例明显大于左肾周围脂肪囊直接受累(P0.05)。结论 GL的CT征象特点突出,而且采用64排旋螺CT可提高GL的确诊率,对临床治疗具有重要意义。