肿瘤坏死因子-α和骨形态发生蛋白-2诱导成纤维细胞表达成骨表型的协同作用机制

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导成纤维细胞表达成骨表型的可能机制。方法:分离、纯化人真皮成纤维细胞,使其生长在分别含一定浓度的TNF-α、BMP-2和TNF-α与BMP-2联合培养液的干预条件下,采用MTT和RT-PCR技术,检测成纤维细胞增殖和C-myc、BMP-2、BMP-4mRNA表达状况的变化。结果:单独应用TNF-α和联合应用TNF-α与BMP-2可刺激成纤维细胞增殖;TNF-α诱导成纤维细胞表达C-myc mRNA和BMP-2 mRNA;TNF-α与BMP-2联合应用可诱导成纤维细胞表达BMP-4 mRNA。结论:TNF-α可诱导成纤维细胞转化,并赋予其新的生物特征;外源性BMP-2和内源性BMP-2、BMP-4的协同效应是成纤维细胞表达成骨表型的机制之一。     

山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞成骨潜能的体外观察

目的 诱导培养椎间盘纤维环成纤维细胞，探讨其成骨潜能，比较重组人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein2，rhBMP-2）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF—α）对其成骨的不同影响。方法利用体外细胞培养技术，建立实验山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞培养体系，根据培养液的不同，分为空白对照组、TNF-α组（加入50U／ml TNF-α）、rhBMP-2组（加入0．1μg／ml rhBMP-2）和TNF—α＋rhBMP-2组（加入50U／ml TNF-α＋0．1μg／ml rhBMP-2），培养3周观察纤维环成纤维细胞在条件培养液诱导下的成骨表型变化、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和骨钙素（osteocalcin，OC）等成骨指标变化。结果 各实验组培养液对细胞增殖无明显影响。rhBMP-2组和TNF-α＋rhBMP-2组细胞趋化性生长明显，矿化结节出现，茜素红染色呈深红色钙阳性反应。各实验组ALP活力与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2组与TNF—α＋rhBMP-2组成纤维细胞的OC分泌量与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），TNF—α组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 体外培养的椎问盘纤维环成纤维细胞有成骨潜能，rhBMP-2对纤维环成纤维细胞有明确的诱导成骨作用。     

诱导成纤维细胞表达核结合因子的研究

目的：探讨诱导条件下成纤维细胞表达成骨细胞特异性转录子－核结合因子（Cbfal)的可能性及成纤维细胞表达成骨表型的发生机理。方法：分离、纯化人皮肤成纤维细胞,使其生长在分别含一定浓度肿坏死因子（TNF）α,骨诱导蛋白（BMP）－2,TNF－α加BMP－2的条件培养液中,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术,分别检测Cbfal,骨钙素,H－ras,BMPI型受体（BMPR－I A）和I,Ⅲ型胶原mRNA表达及Ras,BMPR-I A蛋白形成状况,结果：TNF－α可诱导成纤维细胞由表达I,Ⅲ型胶原表型向表达I型胶原转化;促进成纤维细胞Ras的形成,在TNF－α作用1,3h和1周后,可使成纤维细胞H－ras mRNA的相对表达量分别升高39．5％,7．4％和43．2％,TNF－α作用1h后的成纤维细胞可产生BMPR－I A,联合应用TNF－α与BMP－2可诱导成纤维细胞表达Cbfal,骨钙素mRNA。结论：TNF－α与BMP－2联合应用,可刺激成纤维细胞表型转化,是调节成纤维细胞表达Cbfal的诱导条件之一。     

重建端粒酶活性的正常人成纤维细胞的成骨潜能研究

目的　通过重建端粒酶活性延长人成纤维细胞寿命 ,并对其成骨潜能进行研究 ,为解决组织工程骨修复种子细胞老化问题提供实验依据。方法　将人端粒酶催化亚基 (h TERT)基因用电穿孔法导入正常人原代成纤维细胞 ,用 TRAP- PCR检测细胞端粒酶活性 ,用β-半乳糖苷酶活性测定评价细胞衰老情况。在此基础上用骨形成蛋白(BMP- 2 )和肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)联合诱导已重建端粒酶活性的成纤维细胞在体外培养条件下成骨 ,用四环素活体标记和茜素红染色显示钙盐结节形成。结果　转染 h TERT的人成纤维细胞能稳定表达端粒酶活性 ,培养超过 5 0代后细胞仍保持β-半乳糖苷酶阴性。经 BMP- 2和 TNF-α诱导后 ,转染后传 80代的人成纤维细胞仍可形成四环素标记和茜素红染色均为阳性的钙盐结节。结论　重建端粒酶活性、寿命延长的人成纤维细胞仍然维持了其本身所具有的成骨潜能     

腺病毒介导的骨形态发生蛋白2基因转染对成骨及血管化的影响

目的 观察骨形态发生蛋白2(BMP-2)基因转染人骨髓基质干细胞(hBMSC)对诱导成骨及血管化的影响，方法 基因转染后，检则骨钙素、Ⅰ型胶原和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。并利用转染后的培养液上清诱导小鼠成纤维细胞(L929)。然后将转染后细胞接种到PLA／PCL(聚乳酸／聚己内酯)支架上，然后扫描电镜观察。结果 BMP-2基因转染后，可诱导hBMSC有L929骨钙索、Ⅰ型胶原呈阳性表达，VEGF的表达明显增高。转染细胞在支架中上生长良好，能量谱仪测得钙质分泌。蛋白印迹法检测到培养液中有BMP-2蛋白产生。结论 BMP-2基因转染可诱导hBMSC成骨转化，且通过上调VEGF表达促进血管化，复合转染后细胞构建的组织工程骨对治疗骨缺损具有重要意义。     

BMP-2活性多肽体外定向诱导大鼠BMSCs向成骨方向分化的实验研究

[目的]骨形成蛋白-2（BMP-2）具有较强的诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨方向定向分化的能力。天然的BMP-2数量有限，结构复杂，限制了其广泛应用。本实验设计合成了BMP-2活性多肽，体外试验探讨其对BMSCs向成骨方向定向诱导成骨分化的能力，评价BMP-2活性多肽的诱导成骨效应。[方法]实验分2组，诱导组和非诱导组。取4周的Wistar大鼠分离培养BMSCs，传至第3代时，实验组，改用成骨诱导培养基（DMEM完全培养基＋BMP-2活性多肽200μg／ml）。非诱导组，仍采用DMEM完全培养基。继续培养2～4周，采用细胞爬片培养、碱性磷酸酶活性和钙含量测定、实时定量PCR检测Ⅰ型胶原（Col—Ⅰ）及骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达，评价BMP-2活性多肽的体外诱导成骨能力。[结果]诱导组BMSCs生长良好，表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性，ALP活性上升，钙含量增加，Col-Ⅰ和OPN的mRNA呈高表达。非诱导组，成骨特性不明显。[结论]合成的BMP-2活性多肽能有效地促进BMSCs向成骨方向分化，是组织工程化骨中理想的诱导成骨的细胞因子。具有与天然BMP-2类似的骨诱导活性，具有广阔的应用前景。     

转化生长因子β1诱导肾间质成纤维细胞表型转化及其对结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）诱导大鼠正常肾间质成纤维细胞（NRK-49F）表型转化过程中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的变化.方法 以不同浓度的TGF-β1（0、0.5、1、2、5、10 ng/ml）刺激NRK-49F细胞,分别应用MTT比色法、Western Blot、Northern Blot方法,检测TGF-β1刺激后肾间质成纤维细胞的增殖、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRAN的表达、细胞表型标志物α-SMA mRNA及蛋白质表达、CTGFmRNA的表达变化.结果 1 ng/ml浓度以上TGF-β1能显著促进NRK-49F细胞增殖,上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平,诱导肌成纤维细胞表型标志α-SMA mRNA及蛋白质的表达,显著上调CTGF mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.05）;以上效应均呈浓度依赖性.同时CTGF mRNA表达水平的增高与细胞表型转化的程度相一致.结论 TGF β1能诱导肾间质成纤维细胞发生表型转化,并促进了细胞增殖及细胞外基质的合成;该效应与TGF β1显著上调CTGF的基因表达一致.     

颈椎病患者颈椎间盘纤维环成纤维细胞成骨潜能的体外观察

目的研究纤维环成纤维细胞成骨化生在颈椎间盘退变机制中的作用,以进一步揭示颈椎病的发病机理。方法利用体外细胞培养技术,建立颈椎病患者的颈椎间盘纤维环中成纤维细胞的培养体系,观察其在细胞因子rhBMP、TNF-α条件培养液诱导下的成骨潜能表现。结果非条件培养组和条件培养组在传代的颈椎病患者纤维环成纤维细胞培养的各时间点的细胞增殖活力（MTY）测定无明显差异（P〉0．05）,细胞增殖速度较慢,条件培养液对细胞增殖无明显影响。rhBMP2、rhBMP2＋TNF-α条件培养组细胞趋化性生长明显,细胞呈漩涡状和复层生长,局部密度增高,可见有肉眼观呈黑色点状矿化结节出现。各条件培养组的ALP活力经测定均与空白对照组ALP活力有显著性差异（P〈0．05）,rhBMP2＋TNF-α组的成纤维细胞所形成的骨钙素分泌量均与空白对照组有显著性差异（P〈0．05）,而rhBMP1组、TNF-α组则与空白对照组无显著性差异。结论颈椎间盘纤维环成纤维细胞存在成骨潜能,rhBMP-2对纤维环成纤维细胞体外有明确的诱导成骨作用,纤维环成纤维细胞的骨化在颈椎退变的病理过程中有重要作用。     

BMP—2在成纤维细胞对BMP—3表达的调节作用

目的：观察在BMP－2作用下,成纤维细胞表达BMP－3的情况,探讨BMP－2促进成纤维细胞成骨表型表达的机制。方法：向培养的成纤维细胞内添加BMP－2,当细胞生长到60％时免疫组化观察正常与BMP－2作用下的成纤维细胞内表达BMP－3的情况。结果：下成纤维细胞内无BMP－3表达,在BMP－2作用下成纤维细胞出现BMP－3表达。结论：在成纤维细胞,BMP－2可促进BMP－3的表达。     

感染因素通过调控巨噬细胞表型变化影响伤口愈合的机制研究

目的观察感染因素(细菌脂多糖,LPS)如何通过调控巨噬细胞表型变化影响皮肤成纤维细胞的活化状态和功能。方法运用流式细胞技术检测巨噬细胞的活化表型;应用transwell共培养体系建立巨噬细胞和成纤维细胞共培养的模型;用MTT实验检测成纤维细胞的增殖情况;用细胞免疫荧光技术检测成纤维细胞α-SMA的表达;用ELISA实验检测细胞培养上清中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的分泌;用q-PCR检测成纤维细胞中MMP9,MMP13的m RNA表达情况。结果 IL4诱导的M2型激活的巨噬细胞能够显著诱导皮肤成纤维细胞(HFF)高表达活化标志物α-SMA,促进成纤维细胞增殖并分泌大量Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白。而感染因素LPS则能显著诱导巨噬细胞向M1表型活化,而这种活化的巨噬细胞与成纤维细胞共培养能显著抑制成纤维细胞胶原蛋白的分泌并促进基质金属蛋白酶的表达。结论感染因素能够通过调控巨噬细胞表型影响成纤维细胞的活化和功能,调控巨噬细胞的活化表型有望改善伤口愈合不良。     

水蛭素对瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶作用的实验研究

目的:探讨水蛭素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶(mat r i x met al l opr ot ei nas es,MMPs)表达水平的影响。方法:取10例烧伤愈合后6个月内瘢痕挛缩需手术治疗的患者的瘢痕组织,采用组织块法分离培养增生性瘢痕成纤维细胞。取第4～7代细胞实验,加入0、1、10、50U/ml的水蛭素干预。观察加药后24h、48h成纤维细胞形态学变化,利用MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法及酶联免疫吸附试验(Enzyme-l i nked i mmunos or bent as s ay,ELI SA)检测水蛭素对增生性瘢痕成纤维细胞(hypert rophi c scar fi brobl ast,HSFB)及基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的作用。结果:①1、10、50U/ml组水蛭素对HSFB均有抑制作用(P<0.05),以50U/ml作用最明显(24h、48h抑制率分别为14.75%、15.42%);②水蛭素作用成纤维细胞24h后MMP-2、MMP-9表达含量均增加,分别以1U/ml、50U/ml作用最明显,差异有统计学意义(P<0.05);48h后MMP-2表达降低,MMP-9表达有增加但无意义。结论:水蛭素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,能促进增生性瘢痕成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)有利于细胞外基质降解减少沉积。     

肿瘤坏死因子-α和骨形成发生蛋白2诱导成纤维细胞成骨表型表达的体外研究

成纤维细胞的成骨作用已在体内外得到证实。为进一步探索诱导成纤维细胞成骨潜能得以表现的调控因素，以实现体外获得大量成骨型成纤维细胞、形成骨修复材料的设想，采用分离，纯化人皮肤成纤维细胞，使其生长在含不同浓度的ＥＧＦ、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＢＭＰ２培养液的干预条件下，采用生物化学，组织化学和电镜观察方法，检测成纤维细胞成骨性标志物形成状况。发现：ＴＮＦ－α和ＢＭＰ２联合应用，可使成纤维细胞分泌碱性磷酸     

旋转系统下三维培养成纤维细胞-PGA复合物的实验研究

目的　观察微重力旋转培养系统对细胞种植于支架和细胞 支架复合物体外培养的影响。　方法　分离培养兔皮肤成纤维细胞 ,实验用第 2代细胞。 ( 1)分别用静止接种和动态接种方式 ,以 2× 10 6/cm3 的细胞密度接种于PGA网架 ,静止接种即滴加细胞悬液于PGA网架上 ,动态接种是把细胞悬液与PGA网架置于旋转细胞培养系统旋转接种 ,分别于 2、4、8、12、2 4h消化下网架上细胞后计数 ,通过计算细胞吸附率了解细胞吸附情况 ;( 2 )将相同细胞密度静止接种的细胞—PGA复合物分别置于旋转和静止条件下培养 ,于 1、3、5、7、14、2 1dMTT法检测细胞增殖 ;用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长、基质形成及其细胞与PGA纤维结合状况的变化。　结果　细胞吸附量随时间延长而逐渐升高 ,动态组在接种后 8、12、2 4h细胞吸附率显著高于静止接种组 ,分别为 ( 46 70 %±2 16 %)比 ( 31 5 0 %± 3 5 4%) ;( 5 6 36 %± 3 18%)比 ( 34 2 8%± 3 16 %) ;和 ( 6 6 32 %± 4 6 0 %)比( 37 38%± 4 6 6 %)。在 3周培养中旋转培养组细胞增殖快于静止组 ,而且细胞在网架中分布比静止组均匀 ,并伴有活跃的细胞基质分泌。　结论　旋转培养系统具有促进细胞吸附增殖分化和在支架内均匀分布的特点 ,是培养细胞支架复合物进行组织工     

组织工程肌腱种子细胞的比较研究

目的 探讨猪肌腱细胞、真皮成纤维细胞、骨髓问充质干细胞中何种细胞最适宜作为体外组织工程化肌腱构建的种子细胞.方法 收集猪肌腱细胞、真皮成纤维细胞及骨髓间充质干细胞,以50×106个细胞密度均匀接种于圆柱状聚羟基乙酸(Polyglycolic acids,PGA)上,按细胞种类分为三组,每组n=3,体外培养,并于1、2、6周取材,进行组织学检测、免疫组化检测、胶原定量测定和大体观察.结果 细胞-PGA复合物体外培养时有细胞外基质产生,六周时肌腱细胞组产生胶原量最多,明显优于真皮成纤维细胞和骨髓间充质干细胞(p＜0.01).免疫组化显示形成的主要为Ⅰ型胶原.结论 体外构建组织工程肌腱时肌腱细胞合成胶原能力最强,在现有条件下是体外构建组织工程肌腱的最佳种子细胞.     

肿瘤坏死因子α对瘢痕成纤维细胞生物学作用的实验研究

目的　探讨肿瘤坏死因子α(TNF α)对瘢痕成纤维细胞的生物学作用及其在异常瘢痕的发生和防治中的意义。方法　采用组织培养技术 ,建立了成纤维细胞系 ,以MTT法测定细胞活力 ,流式细胞仪检测纤维粘连蛋白 (FN)表达及间接免疫荧光法等技术和方法。对来源于增生性瘢痕和正常皮肤的成纤维细胞进行了对比研究。结果　①高浓度的TNF α( 10 0 0U/ml　↑ )对增生性瘢痕成纤维细胞活力具有明显抑制作用 ,并使其FN表达减少 11 7% ;②TNF α对正常皮肤成纤维细胞活力具有明显促进作用 ,并使其FN表达增加 5 8%。结论　TNF α对于增生性瘢痕和正常皮肤的成纤维细胞具有不同的生物学作用。研究TNF对增生性瘢痕的调控机制 ,有可能为防治瘢痕的异常增生提供新的方法和途径。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞对肿瘤坏死因子α调节胶原合成作用的反应

目的 探讨瘢痕疙瘩的发病机理及其成纤维细胞生物学特性。方法 用肿瘤坏死因子α（TNF-α）分别处理体外培养正常皮肤与瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用^3H－脯氨酸掺入、胃蛋白酶消化法检测成纤维细胞胶原合成量。结果 10^3U/ml的TNF－α能显著减少瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成量,且与正常皮肤成纤维细胞的反应不同,当TNF－α浓度增至10^4U/ml,瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成量却未进一步减少。结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞对TNF－α下向调节胶原合成作用的反应敏感性在一定程度上有所降低。     

Differential effect of BMP4 on NIH/3T3 and C2C12 cells: implications for endochondral bone formation.

After intramuscular implantation, BMP4-expressing NIH/3T3 fibroblasts and BMP4-expressing C2C12 myoblasts can promote ectopic cartilage and bone formation. Fibroblasts tend to undergo chondrogenesis, whereas myoblasts primarily undergo osteogenesis. These results suggest that endochondral bone formation may involve different cell types, a finding that could have major implications for the tissue engineering of bone and cartilage. INTRODUCTION: The delivery of BMP4 through cell-based gene therapy can trigger ectopic endochondral bone formation in skeletal muscle. We hypothesized that, when stimulated with or transduced to express BMP4, different types of cells residing within skeletal muscle might participate in different stages of endochondral bone formation. MATERIALS AND METHODS: We compared the responses of a fibroblast cell line (NIH/3T3), a myoblast cell line (C2C12), primary fibroblasts, and primary myoblasts to BMP4 stimulation in vitro. We then transduced the four cell populations to express BMP4 and compared their ability to promote ectopic endochondral bone formation in skeletal muscle. RESULTS: Under the influence of BMP4 in vitro and in vivo, NIH/3T3 cells differentiated toward both chondrogenic and osteogenic lineages, whereas most C2C12 cells underwent primarily osteogenic differentiation. NIH/3T3 cells genetically modified to express BMP4 induced delayed but more robust cartilage formation than did genetically modified C2C12 cells, which promoted rapid ossification. These differences in terms of the timing and amount of cartilage and bone formation persisted even after we introduced a retrovirus encoding dominant negative Runx2 (DNRunx2) into the C2C12 cells, which interferes with the function of Runx2. Superior osteogenic potential was also displayed by the primary myoblasts in vitro and in vivo compared with the primary fibroblasts. The different proliferation abilities and differentiation potentials exhibited by these cells when influenced by BMP4 may at least partially explain the differing roles that BMP4-expressing myogenic cells and BMP4-expressing fibroblastic cells play in endochondral bone formation. CONCLUSIONS: Our findings suggest that the process of endochondral bone formation in skeletal muscle after delivery of BMP4 involves different cell types, including fibroblastic cells, which are more involved in the chondrogenic phases, and myoblastic cells, which are primarily involved in osteogenesis. These findings could have important implications for the development of tissue engineering applications focused on bone and cartilage repair.     

Reciprocal action between BMP-2 and BMP-3 in cultured fibroblast in vitro

Objective:To explore reciprocal action between BMP-2 (bone morphogenetic protein-2)and BMP-3 for better understanding of the mechanism of BMP during bone fracture union.Methods:rhBMB-2 was added into the cultured fibroblasts with the concentration of 1200 ng/ml.The expression of BMP-3 in fibroblasts was detected by immunohistochemistry.Eukaryotic expression vector pcDNA3-BMP-3 was transfected into the fibroblasts.After the effective expression of BMP-3 was identified,BMP-2 was also detected by immunohistochemistry in BMP-3 expression cells.The fibroblasts transfected with empty vector pcDNA3 were used as the control.Results:Exogenous rhBMP-2 could promote the expression of BMP-3 in fibroblasts. BMP-3 also could be detected in these cells.Conclusions:BMP-2 and BMP-3 could reciprocally adjust the expression in fibroblasts.     

Scaffold seeded with cells is essential in urothelium regeneration and tissue remodeling in vivo after bladder augmentation using in vitro engineered graft

OBJECTIVE: Tissue-engineering methods using synthetic biodegradable scaffolds seeded with cells have potential to induce regeneration to a functional bladder wall. The aim of the study was to induce in vivo urothelial growth on implanted scaffolds previously seeded with stromal cells as compared with matrices implanted without cells for rat cystoplasty augmentation. MATERIALS AND METHODS: 3T3 mouse fibroblasts were multiplied up to total of 10(8) cells. Cells were grown on Dulbecco's modified essential medium supplemented with 10% of fetal bovine serum and antibiotics in CO(2) chambers. Cells were seeded on biodegradable polyglycolic acid (PGA) scaffolds in eight rats: four bladders were augmented with cell-seeded grafts and the other four with acellular scaffolds. Rats were sacrificed after 4 months in preparation for hematoxylin and eosin staining. RESULTS: One death in the acellular cystoplasty group was observed after 3 weeks. No epithelial layer was observed in the central part of the acellular graft. The cell-seeded grafts showed good visible multilayered epithelium with at least five layers of epithelial cells in the central part. The epithelium resembled rat native urothelium. The cell-seeded grafts showed a high degree of implanted 3T3 cells infiltration with good degradation of PGA fibers. CONCLUSIONS: Our data indicated that urothelial proliferation on PGA grafts was intensified using a "feeder layer" of fibroblasts.     

Expression and regulation of connective tissue growth factor by transforming growth factor beta and tumour necrosis factor alpha in fibroblasts isolated from strictures in patients with Crohn's disease

BACKGROUND: Connective tissue growth factor (CTGF) stimulates fibroblast proliferation and extracellular matrix production. Fibroblasts may initiate stricture formation in Crohn's disease through overexpression of CTGF. Stricturing that occurs in patients with Crohn's disease after treatment with anti-tumour necrosis factor (TNF) alpha may be due to dysregulation of CTGF homeostasis. The aim of this study was to examine CTGF expression and regulation in fibroblasts isolated from patients with Crohn's disease. METHODS: Fibroblasts were isolated by a primary explant technique from serosal biopsies of strictured segments of bowel in eight patients undergoing resection for Crohn's disease and from normal colon in seven patients having resection for benign or malignant colorectal disease. Cells were stimulated with transforming growth factor (TGF) beta and TNF-alpha. CTGF protein and mRNA expression were measured by western blotting and real-time polymerase chain reaction respectively. RESULTS: Mean(s.d.) CTGF protein expression in strictured Crohn's fibroblasts was higher than that in normal fibroblasts (56.5(9.7) versus 17.0(10.0) respectively; P = 0.011). In normal and strictured Crohn's fibroblasts, culture with TGF-beta increased CTGF protein and mRNA expression. Co-culture of normal fibroblasts with TNF-alpha suppressed TGF-beta-stimulated CTGF expression. CONCLUSION:: Increased expression of CTGF in strictured Crohn's fibroblasts underlies its role in fibrosis. TNF-alpha suppresses fibrosis by downregulating fibroblast CTGF expression, an effect that may be lost following anti-TNF-alpha treatment, thereby promoting stricture formation.