肿瘤坏死因子-α和骨形成发生蛋白2诱导成纤维细胞成骨表型表达的体外研究

成纤维细胞的成骨作用已在体内外得到证实。为进一步探索诱导成纤维细胞成骨潜能得以表现的调控因素，以实现体外获得大量成骨型成纤维细胞、形成骨修复材料的设想，采用分离，纯化人皮肤成纤维细胞，使其生长在含不同浓度的ＥＧＦ、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＢＭＰ２培养液的干预条件下，采用生物化学，组织化学和电镜观察方法，检测成纤维细胞成骨性标志物形成状况。发现：ＴＮＦ－α和ＢＭＰ２联合应用，可使成纤维细胞分泌碱性磷酸     

体外诱导成纤维细胞成骨活性表达的研究

目的探讨成纤维细胞(fibroblast,FB)体外成骨表达的诱导因素,为其能否成为骨组织工程的种子细胞提供理论依据.方法分离和纯化新西兰兔肉芽组织FB,按1×105/ml分别接种于含纤维结合蛋白(fibronectin,FN)10、20、40、60、80μg/ml条件培养液中(实验1～5组),对照组为不含FN的无血清培养液.于培养14 d后,行细胞组织学观察及钙化结节形成率、趋骨性四环素荧光标记、3H-TdR标记、骨钙素测定及3H脯氨酸标记,检测FB成骨表型表达的标志.结果组织学观察实验组发现FB由梭形逐渐趋向多突形和圆形,细胞核偏向一侧,细胞重叠成多层结构;其表面有钙盐堆积,逐渐呈云雾状物质,经不断融合和扩大形成不透光的结节.干预培养14 d钙化结节形成率:对照组15.35%±3.45%,实验1～5组分别为53.73%±9.49%、75.21%±9.80%、98.34%±15.20%、61.83%±10.04%、45.11%±8.70%,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);实验3组与其它各实验组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).趋骨性四环素特异性标记为新生骨组织;FB增殖活性,实验3、4、5组7 d时,实验2、3、4组14 d时与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).实验1～5组FB分泌骨钙素,实验2～5组3H-脯氨酸掺入量高于对照组,7、14d时与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论适量的FN可以促进FB增殖、胶原蛋白的合成及骨钙素分泌,FN可以诱导FB成骨表达,适宜浓度为40～60μg/ml.     

肿瘤坏死因子-α和骨形态发生蛋白-2诱导成纤维细胞表达成骨表型的协同作用机制

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导成纤维细胞表达成骨表型的可能机制。方法:分离、纯化人真皮成纤维细胞,使其生长在分别含一定浓度的TNF-α、BMP-2和TNF-α与BMP-2联合培养液的干预条件下,采用MTT和RT-PCR技术,检测成纤维细胞增殖和C-myc、BMP-2、BMP-4mRNA表达状况的变化。结果:单独应用TNF-α和联合应用TNF-α与BMP-2可刺激成纤维细胞增殖;TNF-α诱导成纤维细胞表达C-myc mRNA和BMP-2 mRNA;TNF-α与BMP-2联合应用可诱导成纤维细胞表达BMP-4 mRNA。结论:TNF-α可诱导成纤维细胞转化,并赋予其新的生物特征;外源性BMP-2和内源性BMP-2、BMP-4的协同效应是成纤维细胞表达成骨表型的机制之一。     

诱导成纤维细胞表达核结合因子的研究

目的：探讨诱导条件下成纤维细胞表达成骨细胞特异性转录子－核结合因子（Cbfal)的可能性及成纤维细胞表达成骨表型的发生机理。方法：分离、纯化人皮肤成纤维细胞,使其生长在分别含一定浓度肿坏死因子（TNF）α,骨诱导蛋白（BMP）－2,TNF－α加BMP－2的条件培养液中,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术,分别检测Cbfal,骨钙素,H－ras,BMPI型受体（BMPR－I A）和I,Ⅲ型胶原mRNA表达及Ras,BMPR-I A蛋白形成状况,结果：TNF－α可诱导成纤维细胞由表达I,Ⅲ型胶原表型向表达I型胶原转化;促进成纤维细胞Ras的形成,在TNF－α作用1,3h和1周后,可使成纤维细胞H－ras mRNA的相对表达量分别升高39．5％,7．4％和43．2％,TNF－α作用1h后的成纤维细胞可产生BMPR－I A,联合应用TNF－α与BMP－2可诱导成纤维细胞表达Cbfal,骨钙素mRNA。结论：TNF－α与BMP－2联合应用,可刺激成纤维细胞表型转化,是调节成纤维细胞表达Cbfal的诱导条件之一。     

成纤维细胞成骨潜能的体外培养研究

本研究采用新西兰种家兔皮肤的成纤维细胞进行体外培养，通过活体相关显微缩时录像，体视显微镜摄影，ＨＥ染色以及组织化学染色等技术做系列观察。发现成纤维细胞在体外培养条件下，不仅能产生粘多糖，胶原等基质成分，而且还能提供钙盐沉积。培养中期，成纤维细胞培养液显示Ａ１Ｐ阳性反应；培养后期，培养液与成纤维细胞都可显示Ａ１Ｐ阳性反应。     

成纤维细胞成骨潜能的研究进展

在体内组织中，有两类生成骨细胞的前体细胞：成骨前体细胞(DOPC)和可诱导的成骨前体细胞(IOPC)。前者主要存在于骨髓的基质细胞中，具有干细胞的特点，能自身复制分化成一定类型的细胞，此种基质细胞可分化成为成骨细胞、成纤维细胞、网状细胞等，即基质细胞中只有一部分属于骨祖细胞，能自发地分化为成骨细胞，骨髓多能干细胞在     

皮肤成纤维细胞在体外培养中的成骨作用

本实验采用新西兰家兔背部中厚皮片，通过组织培养获得成纤维细胞。成纤维细胞经传代培养８天时，发现标本中有不透光的骨小结节形成。培养３７天时，发现一些小结节扩大、延伸，形成骨小梁样结构；也有骨小片状结构形成。经四环素活体标记后，这些结节在蓝紫光荧光显微镜下显示金黄色荧光，表明它们是新生骨组织。该结构的钙盐染色、胶原染色也都呈阳性，充分反映骨结构中的钙及胶原成分，以及皮肤成纤维细胞在体外培养中的成骨作用     

成纤维细胞生长因子增强骨形态发生蛋白在小鼠体内骨诱导作用

在啮类动物体内植入骨形态发生蛋白后，引起细胞内一系列生化和形态学变化，在植入物内和其周转形成新骨。这过程受多因素影响。本实验将重组人成纤维细胞生长因子与部分纯化的ＢＭＰ悬液混合后注入小鼠肌肉，观察成骨反应。单独注射牛骨ＢＭＰ组和ｂＦＧＦ组为对照。     

雌激素诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转分化的机制

目的探讨雌激素诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法将人皮肤成纤维细胞分为6组：对照组（A组）、雌激素组（B组）、雌激素＋ICI-182780组（C组）、雌激素＋SB203580组（D组）、雌激素＋PD98059组（E组）和雌激素＋SP600125组（F组）。各组细胞经同步化处理后,直接以雌激素刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以雌激素刺激。收集细胞,一部分以单细胞逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测α平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscleactin,（2-SMA）阳性表达百分比,另一部分细胞抽提总RNA后采用实时荧光定量RT—PCR检测α—SMA的表达水平变化。结果B组的α—SMA表达水平和阳性百分比与A组比较显著升高（P〈0．01）,而C组和F组与B组比较α—SMA表达水平和阳性百分比升高的作用则被显著抑制（P〈0．05）。结论在雌激素诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程中,雌激素G受体及JNK—MAPK信号转导途径起到重要作用。     

成纤维细胞生长因子对骨生长及骨修复的调节作用

成纤维细胞生长因子对骨生长及骨修复的调节作用李亚非，张晶，胡蕴玉成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）在体内生物学效应广泛，本文就近年来ＦＧＦ及某些骨生长因子对骨生长、修复调节作用的研究综述如下。ＦＧＦ以两种密切相关的形式存在，即碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧ...     

Bone-resorbing cytokines enhance release of macrophage colony-stimulating activity by the osteoblastic cell MC3T3-E1

Summary It has been observed that bone resorption in response to interleukin 1 (IL 1) or tumor necrosis factor (TNF) is accompanied by an increase in osteoclast number. Because the osteoclast is of hemopoietic lineage, recruitment could be regulated by colony-stimulating factors, one of which may be macrophage colony-stimulating factor (MCSF). In this study, we show that the constitutive release of M-CSF activity by the osteoblastic cell MC3T3-E1 is enhanced by the presence of recombinant IL 1α, recombinant TNFα, or by the concurrent presence of purified transforming growth factorβ (TGFβ) and epidermal growth factor (EGF). Increased release of CSF by the osteoblast in response to these agents may provide a signal for the growth and maturation of osteoclast precursors leading to subsequent bone resorption.     

Effects of tumor necrosis factor alpha on parathyroid hormone-induced increases in osteoblastic cell cyclic AMP

Summary Tumor necrosis factor α (10⁻¹⁰–10⁻⁸M) had no effects on cyclic AMP production by the osteoblastic osteosarcomal cells, Saos-2 and G292, or normal rat calvarial cells. The cytokine did, however, inhibit the parathyroid hormone (PTH)-induced effect on cyclic AMP in the Saos-2 and normal rat osteoblastic cells. This inhibitory effect did not occur on prostaglandin E₂-induced cyclic AMP increases in the osteoblastic cells. Interleukin-1 (10 U/ml −100 U/ml) did not produce any effect on basal levels or PTH-induced cyclic AMP increases in these cells.     

一种新的三维复杂曲面测量算法分析

提出了一种全新的非接触式三维复杂曲面测量方法，利用片激光源产生的光切面在被测物表面形成一个封闭光带，并使光带同时成像在3个互成固定角度的CCD摄像机中.经过CCD摄像机像面和光切平面之间的空间映射变换及图象处理后,可一次获得被测物的某一个截面的二维轮廓信息.随着测量系统以固定的间距沿垂直于光切面的方向步进测量，最终以被测物表面的大量离散点数据非常近似地获得了整个被测物的三维曲面信息.     

胰腺癌肿瘤相关成纤维细胞的研究现状与进展

胰腺癌是恶性度极高的消化道肿瘤,其恶性表型与特殊的肿瘤微环境具有相关性。肿瘤相关成纤维细胞是胰腺癌微环境的重要组成部分,来源丰富,通过分泌细胞因子、趋化因子等与肿瘤细胞和其他细胞存在交叉对话机制,不仅可促进肿瘤增殖,改变肿瘤代谢途径,且可诱导肿瘤细胞免疫逃逸。本文拟综述肿瘤相关成纤维细胞与胰腺癌恶性表型、耐药等生物学行...     

肠缺血再灌注损伤后内毒素增敏作用及其机制的初步探讨

目的探讨肠缺血再灌注损伤（Ｉ／Ｒ）对内毒素的增敏作用及其机制。方法大鼠肠系膜上动脉阻断４５ｍｉｎ后松夹进行再灌注,静脉注射低剂量内毒素（ＬＰＳ,１５ｍｇ／ｋｇ）。观察动物多脏器功能指标及体外诱生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的改变。结果Ｉ／Ｒ＋ＬＰＳ组显著加重全身血流动力学异常改变和肝、肺、肠等器官功能损害（Ｐ＜００１）。而单纯ＬＰＳ组或Ｉ／Ｒ组上述指标改变较轻或无明显异常。体外试验显示,当ＬＰＳ刺激浓度≤１０ｎｇ／ｍｌ时,抗ＣＤ１４单抗可显著抑制全血ＴＮＦ的诱生（Ｐ＜００５～００１）,且Ｉ／Ｒ组抗ＣＤ１４单抗对ＬＰＳ诱导ＴＮＦ的抑制率明显高于伤前值或假手术组（Ｐ＜００５～００１）。结论Ｉ／Ｒ可显著提高机体对ＬＰＳ攻击的敏感性,其机理与体内ＣＤ１４依赖途径的作用增强有关。     

肠缺血再灌注损伤后内毒素增敏作用及其机制的初步探讨

目的探讨肠缺血再灌注损伤(I/R)对内毒素的增敏作用及其机制。方法大鼠肠系膜上动脉阻断45min 后松夹进行再灌注,静脉注射低剂量内毒素(LPS,1.5 mg/kg)。观察动物多脏器功能指标及体外诱生肿瘤坏死因子(TNF)的改变。结果 I/R LPS 组显著加重全身血流动力学异常改变和肝、肺、肠等器官功能损害(P<0.01)。而单纯 LPS 组或 I/R 组上述指标改变较轻或无明显异常。体外试验显示,当 LPS 刺激浓度≤10 ng/ml 时,抗 CD14单抗可显著抑制全血 TNF的诱生(P<0.05～0.01),且 I/R 组抗 CD14单抗对 LPS 诱导 TNF 的抑制率明显高于伤前值或假手术组(P<0.05～0.01)。结论 I/R 可显著提高机体对 LPS 攻击的敏感性,其机理与体内 CD14依赖途径的作用增强有关。     

pcDNA3-hBMP2基因转染成纤维细胞及其稳定表达

目的 探讨外源性hBMP2基因在成纤维细胞获得稳定表达的可行性。方法 将hBMP2的cDNA连入真核表达载体pcDNA3,形成重组真核表达载体pcDNA3-hBMP2,在脂质体介导下,将其导入小鼠成纤维细胞株（NIH3T3）。通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养4周,然后用原位杂交和免疫组织化学方法检测BMP2基因在成纤维细胞NIH3T3内的稳定表达情况。结果 经原位杂交和免疫组织化学证实,转染 pcDNA3-hBMP2后的成纤维细胞NIH3T3内有大量hBMP2 mRNA的转录和蛋白的表达。结论 在脂质体介导下,hBMP2基因能够导入成纤维细胞内并在其内获得稳定表达。     

TNF-α拮抗剂(Etanercept)治疗脊髓损伤作用机制的实验研究

目的探讨TNF-α拮抗剂Etanercept(依那西普)对继发性脊髓损伤的治疗作用和可能机制。方法建立大鼠脊髓挫伤模型,损伤后1 h对大鼠行腹腔注射5 mg/kg Etanercept或生理盐水(损伤对照组);假手术组(20只大鼠)仅行椎板切除术而无脊髓损伤,1 h后给予腹腔注射1 ml生理盐水。结果在脊髓损伤急性期(12 h、1 d、3 d),Etanercept治疗组TNF-α的蛋白表达强度明显弱于损伤对照组。与对照组相比,Etanercept治疗组TNFR1的表达在损伤后6、12 h均下降,TNFR2仅在损伤后6 h下降。损伤对照组大鼠在脊髓损伤后后肢运动功能明显受限,而Etanercept治疗组大鼠在脊髓损伤后2、4、8周,后肢BBB评分显著升高。结论 Etanercept可能通过抑制TNF-α/TNFR通路,减轻了脱髓鞘变性,促进了运动功能的恢复。     

斜扳时完整腰椎三维立体运动的研究

实验对象为Ｌ＿（１～５）的完整腰椎标本，设计了平行光脊柱三维运动测量系统，改进加载方法以更好模拟脊柱推拿手法，设置７个腰椎特定点，将观察图像动态变化输入计算机系统，应用工程系统力学中刚体转移计算理论进行计算，获得腰椎及其后部结构在模拟推拿加载时的三维运动量。根据右旋时完整腰椎的三维运动结果，发现在左侧卧位斜扳时，右侧关节突等构成神经根管壁结构发生定向位移，在各节段可以不同，但其主运动轴位移的结果可直接扩大神经根管，或牵拉，紧张小关节囊韧带和黄韧带而扩大神经根管。