聚合酶链反应检测痰标本中结核菌的临床应用--附284例检测结果

目的：探讨ＰＣＲ检测痰标本中结核菌诊断肺结核的价值。方法：收集１９９３年４月至１９９６年６月我科用ＰＣＲ检测２８４例肺部疾病患者痰标一中结核菌的资料与涂片及结核菌培养比较，结果：肺结核病组ＰＣＲ检测结核菌阳性率明显高于涂片（６３．８％比２４．３％）及培养法（６８．９％比３３．８％）。结论：ＰＣＲ检测痰标本中结核菌培养法灵敏性，特异性高。     

临床痰液标本军团菌检测方法研究

目的探讨荧光定量PCR、PCR-酶切分型及16SrDNA基因测序三种方法在检测临床痰液标本军团菌方面的应用价值。方法对274例肺部感染患者痰液标本作军团菌分离培养,荧光定量PCR、PCR-酶切分型及16SrDNA基因测序检测。结果274份痰液标本细菌培养均为阴性,经荧光定量PCR检出军团茵阳性13例（4．74％）,其中10例经PCR．酶切分型及165rDNA基因测序检测为军团菌阳性,其余261例检测为阴性。结论荧光定量PCR、PCR-酶切分型及16SrDNA基因测序均可用于临床痰液标本军团菌的检测,PCR-酶切分型是一套更合理的检测方法。     

荧光定量聚合酶链反应检测临床痰液标本中军团菌

目的建立快速、特异、敏感的TaqMan探针荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法,用于检测军团菌16SRNA基因。方法军团菌标准菌株购自美国标准菌种收藏所,临床痰标本取自南方医科大学南方医院257例病原不明肺炎住院患者。提取菌种DNA及临床痰标本DNA,通过对标准菌株及临床痰液标本DNA分别进行待考核试剂与16SrRNAPCR检测及测序,验证待考核试剂方法的敏感性、特异性。结果荧光定量PCR检测灵敏度为10cfu/mL,比16SrRNA定性PCR检测灵敏度381cfu/mL高38倍。257例病原不明肺炎患者的临床痰标本细菌培养检出嗜肺军团菌血清型1型1例。待考核试剂和16SrRNAPCR方法检测阳性率分别为8.95(23/257)和8.95(23/257),其中2例不符合,1例待考核试剂阳性16SrRNAPCR方法阴性,另一例16SrRNAPCR方法阳性,待考核试剂阴性。二者总符合率为99.22(255/257),其中阳性符合率为95.65(22/23),阴性符合率为99.57(233/234)。结论待考核试剂荧光定量PCR检测军团菌标准菌种敏感性强,特异性好,用于临床痰标本军团菌检测时假阳性率为4.35,与16SrRNAPCR方法及测序比较具有较好的符合性和等效性。     

通用PCR法在痰标本真菌检测中的临床应用

目的 用PCR法进行痰标本真菌检测,并与痰培养结果作比较,以期为临床真菌感染的早期诊断和治疗提供有效手段.方法 160例免疫力低下患者留取痰标本194份×2(均为一式双份),其中一份直接用于PCR扩增,另一份在37 ℃培养1～7 d,如见真菌或可疑菌落,则用无菌棉拭子挑取菌落,再次进行PCR扩增并测序,测序结果与已知真菌序列进行比对,以鉴定种属.然后用配对卡方检验对3种方法(直接PCR、培养、培养后PCR)的检测结果进行统计学分析.结果 194份痰标本接种于科玛嘉平板后培养7 d,其中146份见真菌生长,48份未见真菌生长;痰培养后挑取真菌或可疑菌落进行PCR分析,结果阳性170份,阴性24份;痰标本直接PCR分析,阳性178份,阴性16份.PCR扩增产物经测序、比对发现,除2份为曲霉菌,其余均为白色念珠菌.痰培养法真菌检出率显著低于痰直接PCR法(P=0.000)和痰培养后PCR法(P=0.000);痰培养后,PCR法与痰直接PCR法真菌检出率差异无统计学意义(P=0.115).结论 痰直接PCR和痰培养后PCR在真菌检测中均具有高度敏感性,但是前者操作更加简便、快速,适合临床实验室常规使用.     

显微镜观察药物敏感性技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的研究

目的探讨显微镜观察药物敏感性技术(MODS)在痰液标本中结核分枝杆菌(MTB)的检测效果,以评价其临床应用价值。方法收集150份患者临床痰标本,应用MODS技术、罗氏培养法进行MTB的检测,将两法的结果进行对比分析。结果 MODS技术与罗氏培养法结果符合率为77.8%,MODS技术检测痰标本中MTB的敏感性为93.3%,特异性为70.0%,阳性预测值(PPV)为60.8%,阴性预测值(NPV)为95.4%,正确性为77.8%。结论 MODS技术检测痰标本中MTB具有快速、灵敏、简便等优点,可作为结核病细菌学快速检测的新方法之一。     

噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本临床应用研究

结核病乃是严重威胁人类健康的重大传染病，其实验室快速诊断一直是国内外研究的焦点内容之一。噬菌体生物扩增方法（PhaB）是近年来建立的一种细菌学快速诊断新技术，具有简便、快速、灵敏、价廉的优点，非常适合结核分枝杆菌（结核菌）这类生长缓慢细菌的快速诊断。我们在建立PhaB快速检测结核菌方法学基础上，将其用于临床标本的检测，并与涂片、培养和PCR结果进行比较。     

直接检测痰标本中MPB64蛋白在结核病诊断中的临床应用价值

目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性.方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种方法的检测结果,并依据临床诊断对MPB64蛋白检测结果进行诊断方法学评价.结果:MPB64蛋白检测法与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率均为60.58%:MPB64蛋白检测的敏感度、特异度、准确度分别为58.46%、69.44%和64.23%,其敏感度显著高于涂片染色法的27.69%与荧光定量PCR法的35.38%,但其特异度和准确度则低于涂片染色法(100%、65.69%)与荧光定量PCR法(98.61%、68.61%).结论:采用免疫胶体金法直接检测痰液标本中MPB64蛋白对结核病的诊断具有较高的敏感度,可以作为筛查检测手段;但特异度相对较低,可否作为一种结核病快速诊断方法值得进一步研究.     

环介导等温扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的评价环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术在结核分枝杆菌诊断中的应用价值。方法收集246份疑似肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检,罗氏培养以及实时定量PCR和LAMP法检测。结果涂片镜检,罗氏培养实时定量PCR和LAMP法对结核分枝杆菌的检出率分别为30.89%,45.53%,54.47%,57.32%。以罗氏培养结果作为金标准,LAMP法诊断的敏感性为96.19%（101/105）,特异性为76.87%（103/134）,两种方法检测结果的一致性是Κ=0.71,两法具有很好的吻合性。以实时定量法为标准,LAMP法的敏感性为90.07%（127/141）,特异性为93.33%（98/105）,两法检测结果的一致性是κ=0.83,P〈0.001。结论 LAMP法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,与罗氏培养和RT-PCR有着较高的吻合性,很适合作为临床检测项目开展。     

咽拭子和痰标本中SARS冠状病毒核酸检测

目的 建立SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测方法。方法 合成针对SARS冠状病毒特异性引物，从SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其它已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到多例RT—PCR阳性片段，其中8个片段经克隆和DNA序列分析证实为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有参照标本RT—PCR均为阴性。结论 该方法可用于SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测。     

痰液标本中结核杆菌DNA模板快速提取方法

PCR技术自1985年问世以来，在国际上引起了极大的反响，并以惊人的速度广泛应用于生物科学的各个领域，成为当今分子生物学研究的一个热点。随着PCR技术研究的不断深入广泛，越来越多的研究趋向临床医学对疾病的直接诊断。临床结核菌PCR检测的关键是痰液的前处理及DNA模板的提取，由于痰液标本中有形成份复杂，给标本的处理及DNA模板的提取带来一定的困难。寻找一种直接快速的痰液标本的处理及DNA模板提取方法，是近年来临床检验一直有待于解决的问题。本文对痰液临床标本的前处理及DNA模板的提取方法进行了探讨，为PCR技术在结核…     

实时荧光定量聚合酶链反应快速检测MRSA的应用研究

目的研究实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用。方法收集2017年1月至2018年12月重庆市南川区人民医院患者体液标本分离培养的446例金黄色葡萄球菌,采用实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌nuc基因和mecA基因。结果 446例金黄色葡萄球菌均检出nuc基因,符合率为100.00%。经全自动细菌培养鉴定出的96例MRSA中均检出mecA基因,检出符合率为100.00%。在全自动细菌培养鉴定及药敏分析仪上检出的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌中有2例检测到mecA基因,其检测正确率为97.96%(96/98)。结论实时荧光定量PCR检测MRSA耗时短,正确率高,用于临床快速鉴定MRSA有明显优势。     

噬菌体生物扩增法检测涂阴肺结核患者痰标本的临床应用价值

目的探讨噬菌体生物扩增法对涂阴肺结核临床诊断的应用价值。方法对110例涂阴肺结核和20例非结核性其他肺部疾病患者的痰标本进行噬菌体生物扩增法检测,并同时进行分枝杆菌罗氏培养。结果110例涂阴痰标本中46例噬菌体生物扩增法阳性（41．82％）;27例罗氏培养阳性（24．55％）。结论噬菌体生物扩增法检测涂阴痰标本中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,可作为诊断涂阴肺结核的一种检测方法。     

噬菌体生物扩增法检测涂阴肺结核患者痰标本的临床应用价值

目的 探讨噬菌体生物扩增法对涂阴肺结核临床诊断的应用价值.方法 对110例涂阴肺结核和20例非结核性其他肺部疾病患者的痰标本进行噬菌体生物扩增法检测,并同时进行分枝杆菌罗氏培养.结果 110例涂阴痰标本中46例噬菌体生物扩增法阳性(41.82%);27例罗氏培养阳性(24.55%).结论 噬蒲体生物扩增法检测涂阴痰标本中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,可作为诊断涂阴肺结核的一种检测方法.     

一次性痰液收集器在ICU留取痰标本中的临床应用

对痰液进行细菌培养和药敏试验是寻找呼吸道细菌感染种类和指导临床治疗方案的一个重要手段。对于清醒合作且有力咳嗽的病人只需指导病人正确咳痰,但ICU病人多是卧床、意识不清或无力咳嗽等不能配合的病人,操作起来比较困难。为此,我科对这种病人采用一次性痰液收集器留取痰标本178例,取得了满意效果。     

一次性痰液收集器在ICU留取痰标本中的临床应用

对痰液进行细菌培养和药敏试验是寻找呼吸道细菌感染种类和指导临床治疗方案的一个重要手段。对于清醒合作且有力咳嗽的病人只需指导病人正确咳痰,但ICU病人多是卧床、意识不清或无力咳嗽等不能配合的病人,操作起来比较困难。为此,我科对这种病人采用一次性痰液收集器留取痰标本178例,取得了满意效果。1临床资料本组病人178例,男125例,女53例,年龄31岁～88岁(67岁±5.5岁)。多脏器功能衰竭21例,慢性阻塞性肺气肿37例,脑出血68例,肺心病52例。2方法2.1用物准备负压吸引器、治疗盘(内盛生理盐水)、弯盘(内放镊子)、一次性痰液收集器、吸痰管…     

ELISA检测中临界值标本的制备及临床应用

在应用酶联免疫吸附试验(ELISA)的检测过程中,往往临界值标本的作用比阳性标本的意义更大,它不仅是室内质控的重要材料,而且还可以用来监测试剂质量的变化情况.一般试剂生产厂家在试剂盒中只提供了强阳性标本,而未能提供临界值标本.为此,我们在实际工作中作了一些探索,已成功地制备出乙肝指标的临界值标本,并在实际工作中加以应用,并取得了一定的成效,现报道如下.……     

PCR检测痰标本中的肺炎链球菌

本文作者改进了检测肺炎链球菌的PCR法,采用肺炎链球菌自溶素基因lytA的一部分作为特异性寡核苷酸引物,检测临床痰标本中的肺炎链球菌。其引物序列为5’GGA GTA GAA TAT GGA AATTAA TGA和5’GGT GGA TAG GTC TCA GCATTC CAA。改进后的PCR法,对口腔链球菌检测阴性,对分离的流感嗜血杆菌、卡他莫拉氏菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和化脓性链球菌检测也阴性,而对分离的不同血清型的肺炎链球菌检测均阳性,说明该法有较高的特异性。同时,改进后的PCR法能检测出蒸馏水中10～100CFu的肺炎链球菌和模拟痰标本中1.4×10~4CFu/ml的肺炎链球菌,可见该法也有较高的灵敏度。     

环介导等温扩增法快速检测痰液标本中的结核分枝杆菌

目的由于结核病检测技术目前存在灵敏度低,检测周期长的问题,给结核病防治工作带来了诸多不便。多种基因检测技术的出现为结核病的诊断,提供了有利工具。本文通关过使用新型基因扩增法,LAMP法对痰标本中的结核分枝杆菌进行检测。方法采集54份肺结核疑似患者的临床痰标本,对每份样本使用LAMP法进行检测,并使用痰培养结果作为金标准。结果在直接检测痰标本的试验中LAMP的灵敏度为96%,特异性为100%。结论通过这项研究发现,使用LAMP技术用于痰标本中结核分枝杆菌的检测,可大大缩短检测周期,简化操作步骤,具有成本低、灵敏度高、特异性强的优点,有利于进行结合病的筛查和诊断。     

三重qPCR法快速检测肺炎克雷伯菌的方法建立与应用

目的建立三重qPCR法(实时荧光定量)快速检测肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因,期以快速精准诊断呼吸道肺炎克雷伯氏菌感染,为早期精准治疗提供依据。方法根据GenBank公布的肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因序列选择保守区设计测序引物,高保真扩增东莞樟木头医院分离到的95株肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因,经测序比对后,避开变异区和突变点分别设计检测引物和探针,建立三重qPCR方法直接检测临床呼吸道样本,并与培养及测序法比较,验证其诊断灵敏度和特异性等性能指标。结果三重qPCR法检测肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因,其检测下限低至2cfu/PCR,检测灵敏度98.9%(94/95),检测特异性97.9%(93/95);诊断灵敏度98.6%(424/430),诊断特异性98.8%(2295/2324);从样品处理到报告结果≤1.2h。结论该方法简便、快速、灵敏度高、特异性好,可实现呼吸道肺炎克雷伯氏菌感染的快速与精准诊断,为早期精准治疗赢得时间。