miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移及SIRT1表达的调控

目的观察前列腺癌PC-3细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)-221和miRNA-222对细胞增殖和迁移的作用,以及对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响。方法设立无处理细胞组(简称control组)、转染空载质粒pEX-5组(简称pEX-5组)、转染miRNA-221反义抑制质粒组(简称miRNA-221抑制组)、转染miRNA-222反义抑制质粒组(简称miRNA-222抑制组),应用细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞增殖的影响;采用细胞划痕修复实验检测miRNA-221和miRNA-222对细胞迁移能力的影响;采用免疫印迹法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测SIRT1在蛋白水平和mRNA水平的变化;采用miRNAanda靶标进行预测分析。结果在成功抑制了PC-3细胞中miRNA-221或miRNA-222的表达后,连续7 d检测细胞活性,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的细胞活性(A450 nm值)较pEX-5组降低1.5~2.0倍,自第3天起两组之间即有明显差异(t=6.7,P0.01;t=5.3,P0.01);划痕实验显示,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的迁移能力明显低于pEX-5组。miRNA-221抑制组、miRNA-222抑制组中SIRT1蛋白的相对表达量分别为(0.26±0.021)、(0.21±0.005 8),与pEX-5组(0.14±0.017)比较差异均有统计学意义(t值分别为6.3、6.4,P均0.05);而SIRT1 mRNA的表达水平3组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-221和miRNA-222能促进前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移能力,影响SIRT1蛋白的表达。     

miR-21、miR-191与弥漫性大B细胞淋巴瘤患者临床分期的相关性

目的：分析微小核糖核酸（mi R）-21、mi R-191与弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者临床分期的关系。方法：选取2016年1月-2021年1月山西省汾阳医院收治的100例DLBCL患者作为研究对象,于入院时根据Ann-Arbor(Cotswolds)分期将所有患者的临床分期分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期;详细统计并比较不同临床分期患者的基线资料,重点分析mi R-21、mi R-191水平与DLBCL患者临床分期的关系。结果：100例DLBCL患者中临床分期Ⅰ期15例,Ⅱ期25例,Ⅲ期37例,Ⅳ期23例。Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者的mi R-21、mi R-191水平依次升高,差异有统计学意义（P<0.05）。经Kendall’s tau-b相关性分析发现,mi R-21、mi R-191水平与DLBCL患者临床分期呈正相关（r=0.566、0.636）;多项Logistic回归分析结果显示,血清mi R-21、mi R-191过表达是DLBCL患者临床高分期的危险因子（OR>1,P<0.05）;双变量Pearson相关性分析结果显示,DLBCL患者mi R-...     

下调人乳腺癌MCF-7细胞系miRNA-221和miRNA-222表达对抑制肿瘤细胞增殖及迁移能力的探讨

目的通过敲低微小RNA(microRNA,miRNA)-221和miRNA-222的表达上调组织金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)的方法来研究人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖和迁移能力。方法根据miRBase数据库中Homo sapiens(hsa)-miRNA-221和hsa-miRNA-222的寡核苷酸序列和一段无义序列分别设计并重组成质粒:反义抑制miRNA-221(antisense-miRNA-221,AS-miRNA-221)、反义抑制miRNA-222(antisense-miRNA-222,AS-miRNA-222)、共同反义抑制miRNA-221/222(antisense-miRNA-221/222,AS-miRNA-221/222)和无义抑制(Scramble),并将其分别利用脂质体LipofectamineTM2000转染进人乳腺癌MCF-7细胞中,经G418筛选后建立稳定表达的对照细胞株[未转染正常细胞(Control组)和无义抑制细胞(Scramble组)]和低表达miRNA-221、miRNA-222细胞株(即ASmiRNA-221组、AS-miRNA-222组和AS-miRNA-221/222组)。转染24 h后于荧光显微镜下观察转染效率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组细胞中miRNA-221和miRNA-222的表达量,采用逆转录PCR检测各组细胞中质粒载体上携带的抗性neo基因的表达情况,以此来验证转染是否成功;分别采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测TIMP3和金属蛋白酶17(ADAM17)的表达差异;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测并绘制生长曲线,观察低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力;采用划痕修复实验观察转染后细胞的迁移能力。结果转染24 h之后,在荧光显微镜下观察到各转染组细胞的绿色荧光蛋白表达较多,即转染效率较高。检测转染后各组细胞中neo基因、miRNA-221和miRNA-222的表达。与Control组比较,Scramble组、ASmiRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组neo基因表达明显升高;与Scramble组比较,AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组miRNA-221和miRNA-222的表达量明显降低,即证实转染了反义抑制miRNA-221/222的低表达稳定细胞株构建成功。与Scramble组比较,AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组细胞TIMP3 mRNA表达升高,而其调控的ADAM17水平降低。生长曲线显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力明显受到抑制。划痕修复实验结果显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的迁移能力降低。结论通过敲低miRNA-221、miRNA-222、上调TIMP3表达可以抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和迁移能力。     

慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者血清miR-221-3p和miR-149-3p表达水平及其与预后的相关性分析

目的 分析慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者血清微小核糖核酸（micro RNA,miR）-221-3p和miR-149-3p水平变化及其与预后的相关性。方法 选取2019年4月～2021年10月在江油市人民医院治疗的180例慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者作为研究对象,根据一年后随访结果分为生存组（n=120）和死亡组（n=60）。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测患者血清中miR-221-3p和miR-149-3p的相对表达水平,并对生存组、死亡组患者血清miR-221-3p和miR-149-3p水平进行比较。Spearman法分析miR-221-3p,miR-149-3p与急性生理和慢性健康评分Ⅱ（APACHEⅡ）的相关性。对影响慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者预后的因素进行Logistic回归分析;受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-221-3p和miR-149-3p的表达对慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者预后的预测价值。结果 生存组血清miR-221-3p,miR-149-3p表达水平和APACHEⅡ评分分别为1.02±0.18,1.01±0.2...     

癫痫患者血清miR-222、BAFF水平表达的临床意义及对预后的影响

目的 探讨癫痫患者血清微小核糖核酸(miR)-222、B细胞活化因子(BAFF)水平表达的临床意义及对预后的影响.方法 前瞻选择2017年1月-2018年1月医院113例癫痫患者作为研究对象,入院时测定血清miRNA和炎症因子[白细胞介素(IL)-10、BAFF]水平,患者均接受常规治疗后随访1年采用Engel分级评估...     

神经生长因子以及脑源性神经营养因子的表达与脑胶质瘤发生相关性分析

选取2014年5月~2016年2月到我院就诊的58例脑胶质瘤患者,从脑胶质瘤病灶中采集58份标本作为观察组,从正常组织中采集11例标本作为对照组,通过免疫组织化学S-P染色方法检测患者NCF、BDNF表达。结果观察组患者NGF、BDNF阳性表达水平明显高于对照组,不同病理级别NGF、BDNF表达水平各不相同,其中颞叶NGF、BDNF阳性表达率最高,其次是顶叶,然后是小脑,最后是额叶,差异显著(P0.05)。脑胶质瘤中NGF、BDNF呈高表达状态,有可能参与了脑胶质瘤的发生。     

miRNA-221-3p和IGF-1在妊娠期糖尿病患者血清中的表达及与妊娠结局的相关性

目的 探究微小RNA-221-3p(miR-221-3p)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中的表达水平及其与妊娠结局的关系。方法 收集2020年5月至2022年5月于濮阳市妇幼保健院足月分娩的血糖控制良好的80例GDM患者为GDM1组，血糖控制不良的80例GDM患者为GDM2组，另选取同期足月分娩的糖代谢正常的80例健康孕妇为健康人对照组。qRT-PCR和ELISA法检测各组血清miR-221-3p、IGF-1的表达水平；Pearson法分析GDM患者血清miR-221-3p、IGF-1水平的相关性以及二者与稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)的相关性；进一步分析GDM患者血清miR-221-3p、IGF-1表达水平与妊娠结局的关系。结果 GDM1组、GDM2组患者血清IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR水平及产后出血、羊水过多、胎膜早破、巨大儿、胎儿窘迫发生率显著高于健康人对照组(P<0.05),而血清miR-221-3p的表达水平低于健康人对照组(P<0.05);且GDM2组患者...     

外周血miRNA-26b和miRNA-216a表达与支气管哮喘急性发作儿童肺功能的相关性

目的 探讨外周血微小核糖核酸(miRNA)-26b、miRNA-216a的表达和血清炎症因子水平与支气管哮喘急性发作患儿肺功能的相关性.方法 选择广东省妇幼保健院2017年12月至2019年9月收治的支气管哮喘急性发作患儿107例作为急性发作组、支气管哮喘缓解期患儿93例作为缓解组,另选同期健康体检儿童90例作为对照组...     

miR-21和miR-93表达水平与三阴性乳腺癌发生发展的相关性研究

目的探讨miR-21和miR-93的表达水平与三阴性乳腺癌(TNBC)发生发展的相关性。方法选择行乳腺癌根治术的女性患者86例,收集癌组织与正常乳腺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-21和miR-93的相对表达量,并分析其与临床病理特征的相关性。结果 miR-21和miR-93在TNBC组织中相对表达量高于癌旁组织;TNBC组织中,miR21高表达54例,占62.79%,miR-93高表达50例,占58.14%;miR-21和miR-93在肿瘤直径5 cm、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期以及淋巴结转移的患者中高表达率显著增高(P0.01);miR-21和miR-93的表达水平与患者年龄、月经状态、病理分级无明显相关性。癌组织中miR-21与miR-93表达水平呈显著正相关(r=0.761,P0.01)。结论 miR-21与miR-93在TNBC中表达异常增高,且与肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关,可作为TNBC诊断及判断预后的辅助指标。     

神经干细胞与脑胶质瘤干细胞

所有的肿瘤组织并不是由均一的肿瘤细胞所组成的,不同的细胞具有不同的增殖、浸润和转移能力,亦即肿瘤的异质性.其中存在少数担当着干细胞角色的肿瘤细胞,具有干细胞的基本特性,包括自我更新能力、无限的增殖能力和多向分化潜能,为肿瘤干细胞.神经干细胞具有很强的自我更新机制,获得较少突变即有可能恶性转化,而且干细胞存活时间较长,这意味着干细胞比成熟细胞发生细胞复制的错误几率更大.因外界环境的刺激而发生突变的机会更多,最终形成脑胶质瘤干细胞,同时调节神经干细胞增殖和自我更新的基因在脑胶质瘤的脑胶质瘤干细胞中也表达,这也是支持神经干细胞是脑胶质瘤干细胞来源的;也有推测认为它可能起源于已分化的细胞,由这些细胞突变发生去分化得来,并通过基因突变而获得了干细胞自我更新的特性,从而形成脑胶质瘤干细胞.通过探讨神经干细胞与脑胶质瘤干细胞,为脑胶质瘤的治疗提供依据.     

不明原因复发性自然流产患者蜕膜组织中miR-21和miR-31的表达及其与FOXP3的相关性研究

目的研究微小核糖核酸-21(miR-21)、miR-31和叉头样转录因子P3(FOXP3)在不明原因复发性自然流产(URSA)患者蜕膜中的表达情况,探讨miR-21、miR-31与FOXP3之间的相关性。方法运用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法测定miR-21、miR-31及FOXP3在URSA患者及正常对照组蜕膜组织中的表达情况,并分析miR-21、miR-31的表达与FOXP3表达的相关性。结果FOXP3、miR-21在URSA组中的表达均明显低于正常对照组(P均<0.05),而miR-31在URSA组中的表达高于对照组(P>0.05)。蜕膜组织中miR-21,miR-31的表达与FOXP3的表达相关(P均<0.05),其中miR-21与FOXP3表达呈正相关,而miR-31与FOXP3表达呈负相关。结论蜕膜组织中miR-21和miR-31的表达异常,可能通过下调FOXP3基因的表达而引起母体免疫耐受机制紊乱,从而导致URSA的发生。     

早产儿坏死性小肠结肠炎患者血清miR-21-3p和miR-22-3p水平表达与病情严重程度的分析研究

目的 探究坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis,NEC）早产儿血清微小核糖核酸（micro RNA,miR）-21-3p和微小核糖核酸（micro RNA,miR）-22-3p水平与病情严重程度的分析。方法 选取海南省人民医院2020年3月～2022年12月收治的112例NEC早产儿为NEC组,根据患儿病情严重程度将其分为轻度组（n=35）、中度组（n=47）和重度组（n=30）;同时根据患儿肠道菌群紊乱程度将其分为Ⅰ级紊乱组（n=34）、Ⅱ级紊乱组（n=52）和Ⅲ级紊乱组（n=26）。另选取在该院同期体检健康的早产儿100例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定研究对象血清miR-21-3p和miR-22-3p水平;采用spearman分析血清miR-21-3p和miR-22-3p水平与NEC患儿病情程度和肠道紊乱程度相关性;采用受试者工作特征（ROC）曲线评价血清miR-21-3p和miR-22-3p水平在预测NEC中重度患儿中的价值。结果 NEC组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(36.27±8.56 pg/ml)、白细胞介素-6(...     

miR-221-5p、miR-126在肾细胞癌中的相对表达水平及其对预后的预测价值

目的 探讨微小核糖核酸(miR)-221-5p、miR-126在肾细胞癌(RCC)中的相对表达水平,并分析二者对RCC预后的预测价值。方法 选取该院2016年7月至2018年7月收治的134例RCC患者作为研究对象,取患者癌旁组织(距离病灶约3 cm)进行对照,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测RCC组织、癌旁组织中miR-221-5p、miR-126相对表达水平,并分析二者与病理特征的关系。随访3年,绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank χ²检验分析不同miR-221-5p、miR-126表达水平患者预后的差异性。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析miR-221-5p、miR-126单独及联合检测评估RCC预后的价值,并计算曲线下面积(AUC)。结果 RCC组织中miR-221-5p相对表达水平高于癌旁组织,miR-126相对表达水平低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-221-5p高表达组和miR-126低表达组肿瘤最大径≥4 cm、Fuhrman分级为Ⅲ～Ⅳ级、有淋巴结转移、美国癌症联合会分期为Ⅲ/Ⅳ期占比...     

C-myb、PKCa在脑胶质瘤侵袭作用中的相关性研究

目的研究脑胶质瘤侵袭性生长过程中,C-myb的作用及其与蛋白激酶Ca之间的相互关系.方法Wistar大鼠35只,随机分为实验组(30只)和对照组(5只).实验组每只大鼠于右侧大脑皮质运动区种植C6胶质瘤细胞10μl(3×107个/μl),对照组则注入10μl生理盐水,于术后10天将大鼠全部处死取材,进行大体观察、HE染色及免疫组织化学检查,并将实验组侵袭性量化为0～Ⅳ级,分别检查对照组和实验组肿瘤侵袭性中,各组C-myb、PKCa的表达,并对其进行评分.结果1.实验组大鼠均可见肿瘤生长,其中28只表现为侵袭0～Ⅳ级;2.C-myb表达越强,脑胶质瘤侵袭的级别越高,呈正相关(P＜0.01);3.肿瘤区C-myb与PKCa表达在肿瘤各级中均为高度一致;4.在肿瘤0～Ⅳ级侵袭中,瘤周区及边缘区的C-myb、PKCa二者表达评分密切相关(P＜0.05);5.对照组中,C-myb、PKCa均为阴性表达.结论本组资料表明,C-myb是脑胶质瘤侵袭性的重要癌其因,脑胶质瘤的侵袭性生长是临床术后复发的根本原因.     

p14^ARF和p53蛋白表达与脑胶质瘤发生发展的相关性研究

目的：探讨脑胶质瘤中p14^ARF和p53蛋白表达与不同病理级别脑胶质瘤的相关性及两者之间的相互作用。方法：应用免疫组织化学技术检测31例不同病理分级脑胶质瘤中的上述遗传学改变,5例脑挫裂伤脑组织为正常对照。结果：p14^ARF和p53蛋白在低级别（Ⅰ,Ⅱ级）和高级别（Ⅲ,Ⅳ级）脑胶质瘤中的表达阳性率分别为75．00％和30．43％,12．50％和69．57％。两蛋白在低级别和高级别中的表达差异均有显著性（P〈0.05）。p14^ARF表达水平与脑胶质瘤病理分级之间呈显著负相关性（r=0．571,P〈0．01）,即随着肿瘤恶性度的升高而降低。而突变型p53蛋白正相反,与病理分级呈显著正相关性（r=0．472,P≤0．01）,即随着肿瘤恶性度增高而增高。p14^ARF和p53蛋白之间在肿瘤中存在明显的相互作用（P〈0．05）。结论：p14^ARF和p53蛋白表达异常可导致细胞周期调控失常和细胞异常增殖,并且二者之间存在协同作用,可加速脑胶质瘤恶性演进。     

血清miR-221、Aβ1-42水平与帕金森病患者认知功能障碍的相关性

目的 分析血清微小RNA-221(miR-221)、β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)水平与帕金森病(PD)患者认知功能障碍的关系.方法 前瞻纳入医院2018年5月-2020年6月就诊的113例PD患者,于患者入院时采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估患者认知功能障碍情况并分组;采集患者基线资料,检测血清miR-...     

ARF蛋白与脑胶质瘤

目的探讨ARF蛋白与脑胶质瘤发生、发展及细胞生物学特性的关系,为脑胶质瘤发病机理及基因治疗提供新的思路。方法选取108例不同级别的脑胶质瘤标本,用免疫组化法检测ARF蛋白表达的改变。结果 ARF蛋白缺失率在Ⅰ～Ⅱ级为15.0%,Ⅲ级为27.1%,Ⅳ级为40.0%,ARF蛋白缺失率随脑胶质瘤恶性程度增高呈上升趋势(P0.05)。结论 ARF蛋白异常可导致细胞周期调控失常及细胞增殖活性升高而促进脑胶质瘤的恶性演进。     

脑胶质瘤的综合治疗

胶质细胞瘤是最常见的原发性脑肿瘤,由于大多数胶质瘤呈浸润性生长,所以治疗也就十分困难。目前,胶质瘤的预后还很不乐观,特别是恶性胶质细胞瘤的平均生存时间还不超过1年,高度恶性的胶质母细胞瘤的5年生存率则不足5％。所以,如何提高胶质细胞瘤的临床治疗效果是神经肿瘤学领域的努力方向。目前,脑胶质瘤的基本治疗手段还是手术切除加放疗和化疗。近年来,免疫治疗、抗血管形成及基因治疗等新疗法也已开始从实验研究向临床应用过渡。然而,任何单一的手段都难以达到真正的治愈。因此,在脑胶质瘤的治疗决策时,必需强调综合治疗。