4-芳氨基-6-溴喹唑啉类化合物的合成及抗肿瘤活性的初步研究

目的 设计合成新的4-芳氨基-6-溴喹唑啉类化合物,并评价其抗肿瘤活性。 方法 以4-氯-6-溴喹唑啉和含有不同取代基的(E)-氨基二苯乙烯或4-[2-（2-呋喃基）]乙烯基苯胺为原料,经过亲核取代反应合成了5种目标化合物。采用MTT法,以人低分化胃癌细胞（BGC-823）和人肺癌细胞（A549）为受试细胞株对目标化合物进行体外抗肿瘤活性评价。 结果与结论 所得化合物的结构利用IR、1HNMR、13CNMR和元素分析进行了确认。5种化合物对BGC-823和A549两种细胞模型的体外抗肿瘤活性测试结果表明,大部分化合物具有较好的抗肿瘤活性。     

新型吲哚类胆固醇酯转运蛋白抑制剂的设计、合成及生物活性研究

目的设计并合成一系列以吲哚为母核的新型小分子胆固醇酯转运蛋白(CETP)抑制剂,并初步评价其体外抑制活性。方法以实验室前期获得的化合物Ⅰ为先导化合物,主要对其吲哚母环的2,3,5位进行修饰改造。以吲哚-2-羧酸乙酯衍生物为原料,通过还原、氧化、还原胺化、取代、Suzuki偶联、亲核取代反应制备得到8个目标化合物;以吲哚或吲哚-2-羧酸乙酯为原料,经Vilsmeier反应在3位引入醛基,再经过还原胺化、取代、Suzuki偶联、亲核取代得到7个目标化合物;进一步通过对2位酯基水解或经还原、烷基化得到另外2个目标化合物。采用BODIPY-CE荧光分析法,以anacetrapib为阳性对照药,测试目标化合物体外对CETP的抑制活性。结果与结论合成了17个未见报道的新化合物,结构经~1H-NM R、M S、~(13)C-NM R谱确证;活性测试表明该类化合物具有中等强度的CETP抑制活性,其中化合物10h的活性较先导化合物有接近10倍的提高,为今后该类化合物的结构优化提供了重要指导。     

N-取代苯基-2-(4-取代苯基)环丙烷-1-甲酸乙酯-1-酰胺的设计、合成及抗肿瘤活性

目的设计、合成N-取代苯基-2-(4-取代苯基)环丙烷-1-甲酸乙酯-1-酰胺类化合物,并进行抗肿瘤活性研究。方法采用微波反应,经缩合、环化、水解以及酰胺化等反应合成目标化合物。所合成化合物经1H NMR谱图和质谱进行确证,并对其进行体外抗肿瘤活性筛选。结果设计、合成了20个环丙烷酰胺类化合物。体外药理活性实验显示,所合成的目标化合物具有较好的抗肿瘤活性,其中5b对A549细胞的IC50值为6.8μM,具有进一步研究的价值。结论对氯苯基取代化合物比对三氟甲基苯基取代化合物有更好的抗肿瘤活性;酰胺芳香环吸电子基团化合物活性优于供电子基团化合物。     

新型表皮生长因子受体抑制剂抗T790M型非小细胞肺癌作用

目的观察7个FCN系列表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂对H1975细胞体内外抗肿瘤作用。方法采用非小细胞肺癌(NSCLC)H1975细胞(T790M突变)和人表皮鳞癌A431细胞(WT-EGFR)体外增殖抑制试验对7个FCN系列化合物进行筛选,得到抗肿瘤活性强且选择性更好的化合物。通过细胞划痕实验、流式细胞术分别测定化合物对细胞迁移能力、细胞周期和凋亡的影响,通过H1975细胞裸鼠移植瘤实验明确化合物在体内对肿瘤生长的影响。结果 H1975细胞增殖实验筛选出高活性化合物FCN12、FCN14和FCN15,半数抑制浓度(IC50)分别为(103.33±12.10)、(115.17±7.69)和(128.63±32.72)nmol·L~(-1);经A431细胞增殖实验筛选出FCN12、FCN14,两者的体外抗细胞增殖抑制活性与对照药AZD9291相当(IC50>2μmol·L~(-1)),并可将H1975细胞阻滞于G1期;与对照药相比,FCN12、FCN14可明显增加细胞凋亡率(P<0.01)和抑制细胞的迁移(P<0.05),且呈浓度依赖性;体内移植瘤实验结果显示FCN12、FCN14可以明显抑制肿瘤的生长并缩小肿瘤体积(P<0.01)。结论新型EGFR抑制剂FCN12、FCN14对EGFR耐药型NSCLC具有显著的体内外抗肿瘤活性。     

新型含嘧啶环吲唑衍生物的合成及初步生物活性研究

目的设计合成新型含嘧啶环的吲唑衍生物,并检测其对VEGFR-2酶的抑制活性。方法以3-甲基-6-硝基吲唑为起始原料,经N-甲基化、氢化还原、亲核取代、烷基化及亲核取代反应合成目标化合物;采用均相时间分辨荧光（HTRF）法测定目标化合物对VEGFR-2磷酸化的抑制作用。结果与结论合成了15个未见文献报道的新化合物,其结构经1H—NMR和MS谱确证。活性评价结果显示,该系列化合物对VEGFR-2酶均有抑制活性,其中化合物7a、7c、7i表现出较强的抑制活性,其抑制活性与阳性对照药帕唑帕尼接近,由此推测此类化合物可能具有潜在的抗肿瘤活性。     

基于反向找靶的3-芳基-5-芳甲酰胺基吡唑-4-乙酰胺衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究

目的运用Discovery Studio 2018软件的反向找靶功能,对设计的一类3-芳基-5-芳甲酰胺基吡唑-4-乙酰胺衍生物进行药物潜在靶点预测和筛选。方法以取代的苯甲酸甲酯为起始原料,经过亲核加成-消除、亲核取代、缩合等四步反应得到目标化合物。根据靶点筛选结果,用MTT法对其体外抗肿瘤活性进行初步筛选。结果与结论共合成了10个目标化合物,均为新化合物,其结构经~1H-NMR、~(13)C-NM R及HRMS谱确证。化合物5a～5h均具有一定的抗肿瘤活性,其中化合物5h的活性最佳,对人骨肉瘤细胞Saos-2和U-2 OS的抗增殖活性的IC_(50)值分别是1. 3μmol·L~(-1)和0. 9μmol·L~(-1)。     

去甲肾上腺素对EGFR-TKI耐药性以及Cx32蛋白表达的影响

目的在Afatinib敏感型人非小细胞肺癌HCC827细胞和Afatinib耐药型人非小细胞肺癌HCC827R细胞上探索去甲肾上腺素(NE)对Afatinib耐药性形成的影响,以及在耐药性形成过程中Cx32表达变化的影响。方法用Afatinib按梯度浓度0,0.0001,0.0005,0.001,0.01,0.1,1和10μmol·L~(-1)处理HCC827细胞,用Afatinib按梯度浓度0,0.001,0.1,1,10和20μmol·L~(-1)处理HCC827R细胞,48 h后,予以NE(50μmol·L~(-1))处理24 h,CCK-8法检测细胞存活率,计算Afatinib对细胞的半数抑制浓度(IC_(50));提取HCC827和HCC827R细胞蛋白,并以50μmol·L~(-1)NE按不同时间点(0,1,2,6,12和24 h)分别处理HCC827细胞后提取蛋白,用Western印迹法检测Cx32蛋白表达。结果Afatinib抑制HCC827和HCC827R细胞生长的IC50分别为0.0034和1.326μmol·L~(-1),HCC827R细胞耐药指数为390;NE处理后,HCC827细胞的IC50为0.0066μmol·L~(-1),显著高于未用NE处理(P<0.05),HCC827R细胞IC50为1.4632μmol·L~(-1),与未处理组无显著差异。与HCC827细胞相比,HCC827R细胞中Cx32蛋白的表达增加,50μmol·L~(-1)NE在12和24 h2个时间点上调HCC827细胞Cx32蛋白表达。结论 NE能降低人非小细胞肺癌对Afatinib的敏感性,但是不影响对Afatinib高度耐药的非小细胞肺癌细胞对Afatinib的敏感性;NE能增加人非小细胞肺癌细胞耐药性形成过程中Cx32的表达。     

DCLAK11对非小细胞肺癌细胞HCC827的抗肿瘤作用

目的：研究DCLAK11对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的抗肿瘤作用及其机制。方法：SRB法和克隆形成实验检测DCLAK11对HCC827细胞增殖的影响;流式细胞术检测DCLAK11对HCC827细胞凋亡的影响;细胞划痕愈合实验检测DCLAK11对人脐静脉血内皮细胞HUVEC迁移的作用;免疫荧光实验检测DCLAK11对HCC827细胞表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）磷酸化的作用;ATP竞争实验考察DCLAK11对EGFR激酶活性是否具有ATP竞争性特性。结果：DCLAK11显著抑制NSCLC细胞HCC827的细胞活性（P<0.01）及克隆形成;DCLAK11可诱导HCC827细胞发生凋亡;DCLAK11浓度及时间依赖性地抑制血管内皮细胞HUVEC的划痕愈合（P<0.01）;DCLAK11抑制HCC827细胞EGFR的磷酸化;DCLAK11对EGFR激酶活性的抑制作用具有ATP竞争性。结论：DCLAK11是ATP竞争性的小分子激酶抑制剂,可显著抑制NSCLC细胞HCC827的增殖及诱导该细胞发生凋亡,以上作用可能与DCLAK11抑制EGFR激活相关。此外,DCLAK11还具有抑制血管新生的作用。     

新型嘧啶类EGFR~(T790M)抑制剂的合成、体外抗肿瘤活性及分子对接研究

目的设计合成新型嘧啶类EGFRT790M抑制剂,并评价其抗肿瘤活性,初步探讨活性化合物与靶蛋白的结合模式。方法以2,4,5-三氯嘧啶为原料,经亲核取代反应、还原反应和偶联反应,运用分步合成法完成嘧啶类新化合物的合成,采用ELISA法测定目标化合物体外抗肿瘤活性,利用Autodock软件完成计算机辅助分子对接研究。结果与结论合成了10个未见文献报道的新化合物;体外抗肿瘤活性评价结果表明,化合物8a和8f对EGFRT790M激酶具有强烈的抑制活性;分子对接实验表明化合物8f的喹唑啉基团与Gln-791残基形成了氢键作用力。     

盐酸埃克替尼对人非小细胞肺癌HCC827细胞凋亡及EGFR下游信号通路蛋白表达的影响

目的 探讨盐酸埃克替尼(Icotinib)对人非小细胞肺癌(NSCLC)HCC827细胞凋亡及EGFR下游信号通路蛋白表达的影响.方法 通过噻唑蓝比色(MTT)法检测Icotinib对HCC827细胞增殖的影响,流式细胞仪观察Icotinib对HCC827细胞凋亡的诱导作用,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(AKT)、胞外信号调节激酶(ERK)、p-EGFR、p-AKT、p-ERK和Survivin等EGFR下游信号通路蛋白的表达水平.结果 Icotinib抑制HCC827细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用具有浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05);随着Icotinib对HCC827细胞作用的药物浓度升高,p-EGFR、p-AKT、p-ERK和survivin等EGFR下游信号通路蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05).结论 Icotinib可能通过抑制EGFR下游信号通路蛋白的表达,进而有效抑制HCC827细胞的增殖和诱导HCC827细胞的凋亡.