N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基与疼痛

N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体包括由NR1、NR2A~D及NR3A~B等7个亚型,已有证据表明,NR2B受体主要分布在脊髓背角和前脑扣带回,在痛觉敏化中具有重要作用。而NR2B选择性拮抗剂可抑制NR2B在脊髓和前脑的表达,产生镇痛作用,而且毒副作用较小,有可能成为未来治疗疼痛的一个新的治疗靶点。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基拮抗剂对帕金森病运动并发症大鼠行为及相关信号蛋白的影响

目的 探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂CP-101.606对帕金森病运动并发症大鼠的行为效应及相关信号蛋白的影响.方法 将6-羟多巴胺立体定向注射于大鼠前脑内侧束建立帕金森病(PD)动物模型.对模型成功的PD大鼠接受每日2次左旋多巴(每公斤体质量50mg左旋多巴加每公斤体质量12.5mg苄丝肼)腹腔注射,持续22d.在第23天左旋多巴注射前,PD大鼠给予CP-101.606处理.评估旋转反应时间,采用蛋白印迹法检测纹状体区磷酸化NR2B、磷酸化钙调激酶Ⅱ( CaMKⅡ)及磷酸化谷氨酸受体1( GluR1 S831)表达情况.结果 NR2B拮抗剂CP-101.606逆转了左旋多巴所诱导的PD大鼠旋转时间的缩短;左旋多巴长期作用后引起磷酸化NR2B及下游相关信号蛋白磷酸化CaMKⅡ与磷酸化GluR1 S831升高至(145.3±6.5)％、(132.5±5.7)％及(105.6±6.3)％,而CP-101.606能下调三者磷酸化水平,其表达量分别为(102±4.9)％、(98.4±3.9)％与(49.5±4.2)％.结论 NR2B磷酸化可能通过介导N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体功能上调并激活其下游相关信号蛋白参与了帕金森病运动并发症的发生,抑制NR2B的药物可能是治疗PD运动并发症的一种新的治疗方式.     

艾芬地尔鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的改善作用

目的 在小鼠骨癌痛模型上观察鞘内注射N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂艾芬地尔的镇痛效果.方法 将含2×105个纤维肉瘤细胞NCTC 2472的最小必需培养基(α-MEM)注射到C3H/HeJ小鼠右侧股骨远端骨髓腔,制作骨癌痛模型(T组).同时设假手术组(S组,n =10),注入不含肿瘤细胞的α-MEM.所有小鼠均于接种前1 d,接种后第3,5,7,10,14天检测痛行为学指标,包括自发性抬足次数、机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).骨癌痛模型制作成功的T组小鼠在接种后第14天,进一步分为艾芬地尔 2.5 μg、5.0 μg、10.0 μg组(I1、I2、I3 组,n =10)和对照组(C组,n =10),I1～I3组鞘内注射相应剂量的艾芬地尔,C组及S组给予溶媒,注药体积均为5.0 μl,鞘内注射后2 h、12 h、24 h再进行行为学检测.结果 与S组[(2.44±0.79)次]和术前基础值[(2.20±0.85)次]相比,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足[(13.16±1.78)次]显著增多( P ＜0.05),PWMT[(0.47±0.19)g]较S组[(1.70±0.31)g]和基础值[(1.83±0.23)g]降低( P ＜0.05),PWTL[(10.01±1.42)s]较S组[(17.62±1.07)s]和基础值[(18.32±1.57)s]缩短( P ＜0.05);给药后2 h、12 h,与C组及14 d 给药前比较,I2和I3组自发性抬足次数减少( P ＜0.05),PWMT增高( P ＜0.05),PWTL延长( P ＜0.05),且I3组比I2组对痛行为学的改善更显著( P ＜0.05);I1组给药后痛行为学无明显变化( P ＞0.05).结论 鞘内注射艾芬地尔有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学反应.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基/RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

目的前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(N-methyl-D-aspar-tate,NR2B)对晚期癌痛患者的恶性情绪体验形成具有重要作用。构建靶向NR2B基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,可为下调ACC神经元NR2B靶基因的表达提供有力工具。方法构建靶向目的基因NR2B的RNAi重组慢病毒表达载体并酶切鉴定,再以NR2B/RNAi慢病毒表达载体和NR2B的基因表达质粒共转染293T工具细胞,以Westernblot方法检测其对目的基因NR2B的敲减效率。结果酶切鉴定NR2B/RNAi慢病毒表达载体Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ构建成功。West-ern blot结果显示,NR2B/RNAi慢病毒表达载体Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ均对NR2B靶基因有敲减效果,但以NR2B/RNAi慢病毒表达载体Ⅲ效率最高。结论成功构建可高效沉默NR2B靶基因的NR2B/RNAi慢病毒表达载体,为下调ACC神经元NR2B的基因表达治疗晚期癌痛患者的恶性情绪体验提供了有力工具。     

骨癌痛模型大鼠脊髓背根神经节P2X3受体的表达变化

目的:观察骨癌痛模型大鼠脊髓背根神经节中P2X3受体及其mRNA的表达变化,初步探讨其可能的意义。方法:60只雌性Wistar大鼠随机分为3组（每组n=20）：空白对照（C）组;骨癌痛模型（CP）组,左胫骨内接种含2×105个Walker-256大鼠乳腺癌细胞的悬液10 μl;假手术（S）组,左侧胫骨骨髓腔内注入等体积的生理盐水。在接种后第4、7、10、14、17、21天进行疼痛行为学测试,在第14、21天各组分别选10只大鼠,取背根神经节,5只行免疫组化染色,另5只抽提RNA行实时PCR,检测背根神经节中P2X3受体及其mRNA的表达。结果:CP组大鼠在胫骨内接种肿瘤后第10天开始出现痛觉过敏,第14~21天最为明显。CP组接种肿瘤后第14、21天患侧背根神经节神经元中P2X3受体免疫阳性细胞率明显增高（P<0.05）,mRNA表达水平显著增高（P<0.05）。结论:骨癌痛模型大鼠存在痛觉敏化,可能与P2X3受体表达增高有关。     

脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体在结肠炎大鼠内脏高敏感性中的作用

目的：通过观察大鼠结肠炎不同时期脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）的表达,探讨突触后NMDAR在内脏高敏感性中的作用。方法：成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠70只,随机分为实验组和对照组。实验组大鼠用三硝基苯磺酸（TNBS）灌肠诱导结肠炎。对照组大鼠用生理盐水灌肠。分别在灌肠后3,7,14和28d记录结肠球囊扩张下大鼠腹壁肌电活动;应用荧光免疫组织化学法观察脊髓背角NMDAR1和NMDAR2A/B的表达。结果：TNBS灌肠后3,7和14d,实验组大鼠腹肌收缩次数明显多于对照组（P<0.05）;TNBS灌肠后28d,实验组中仍有部分大鼠（2/7）腹肌收缩明显增多。TNBS灌肠后7d和14d,脊髓背角NMDAR1和NMDAR2A/B阳性细胞数明显多于对照组（P<0.05）;TNBS灌肠后28d,部分大鼠（4/7）脊髓背角深层仍有多量的NMDAR1和NMDAR2A/B阳性细胞,其计数明显多于对照组（P<0.05）。结论：NMDAR在内脏伤害性信息转导中起作用;结肠炎恢复后脊髓背角NMDAR1和NMDAR2A/B的同步上调是导致内脏敏感性持续增高的原因。     

N- 甲基-D- 天冬氨酸受体在记忆网络中的作用

N- 甲基-D- 天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate，NMDA）受体属于谷氨酸离子型受体，其与突触的可塑性和学习记忆密切相关。中枢神经系统中与学习记忆相关的，如以胆碱受体、腺苷A1 受体等为代表的诸多受体及递质，以谷氨酸（glutamate，Glu）为代表的氨基酸能神经通路，以长时程增强（long-term potentiation，LTP）等为代表的脑内神经电活动，以脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）等为代表的基因蛋白遗传信息改变，甚至许多神经退行性疾病中Glu 的神经毒性等，都与NMDA 受体相关，通过NMDA 受体功能的改变调控学习记忆功能，进而对整个中枢神经系统产生影响。换句话说，如果把学习记忆的信息传递系统看做一个庞大的信息网络，那么NMDA 受体就是学习记忆相关神经网络中一个相对中心的关键位点。因此，以探讨NMDA 受体在学习记忆错综复杂网络中的关联为切入点，以微观深入研究为基础、以宏观视野分析为引领，全方位评价NMDA 受体在学习记忆网络中的作用，或许可以引领未来脑功能及相关疾病系统的研究。     

脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-NR2B信号通路参与小鼠骨癌痛的形成

目的 探讨鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKII)抑制剂KN93对骨癌痛小鼠脊髓NR2B蛋白表达的影响及机制.方法 SPF级雄性C3 H/HeJ小鼠36只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组n=8)、骨癌痛组(BP组n=8)和KN93组(K组n=20).BP组和K组采用股骨远端骨髓腔注射20μl含NCTC 2472纤维肉瘤细胞的α-MEM的方法制备骨癌痛模型,S组骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的同体积α-MEM.K组于接种肿瘤细胞后14d鞘内注射溶于20％ DMSO的KN93 60 nmol/5μl,BP组和S组鞘内注射20％ DMSO 5μl.分别于肿瘤细胞接种前1d、鞘内注射KN93或溶媒前1 h、注射后1,2,4,24h(T0～5)时各组随机取8只小鼠,采用von Frev丝测定机械痛阈,并于各时点随机取3只小鼠处死取脊髓L3～5节段,采用Western blot法测定NR2B蛋白的表达.结果 与S组[机械痛阈(1.78 ±0.31)g、NR2B(0.33 ±0.04)]相比,除K组T3时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05)外,BP组[(0.50±0.11)g]和K组[ (0.52 ±0.10)g]机械痛阈均降低(P＜0.05),BP组(1.78±0 34)和K组T2～5[分别为(1.11±0.14)、(0.73±0.03)、(1.11±0 15)、(1.89±0.32)]脊髓组织NR2B蛋白表达均上调(P＜0.05);与BP组相比,K组T2～4机械痛阈升高,NR2B蛋白表达下调;与给药前T1相比,除K组T2～4机械痛阈升高外,各组各时点该指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射KN93缓解小鼠骨癌痛的同时降低小鼠脊髓NR2B蛋白表达,CaMKII-NR2B信号通路可能参与了骨癌痛的形成.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体与抑郁症

抑郁症(major depressive disorder,MDD)是一类以心境抑郁、兴趣减退为主要临床表现的精神障碍疾病。其病因机制不清,具有高发病率、高复发率及高自杀率特点。当下主流的单胺类假说不能充分阐明其病理学特征,部分抑郁症患者对现有抗抑郁药治疗应答不佳。N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-as...     

N-甲基-D-天冬氨酸受体及其调控在麻醉镇痛中的研究进展

N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)是目前研究最为深入的兴奋性氨基酸受体之一,其兴奋性在生理及病状态下都具有重要临床意义。已有研究表明NMDAR对诱发和维持疼痛状态中的中枢敏感性及疼痛记忆意识具有重要作用,研究发现在许多环节上可调控NMDAR。如何选择NMDA的调控与理想疼痛治疗效果是研究的重要课题,本文就NMDAR及其调控在麻醉镇痛中的研究进展进行综述。     

炎性痛大鼠脊髓和背根节P2X_3受体的表达变化

目的观察足底皮下注射角叉菜胶致炎后大鼠行为学及脊髓背角和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)P2X3受体表达的变化。方法通过热辐射刺激法及von Frey纤维丝测定大鼠痛阈,应用免疫组化技术观察足底皮下注射角叉菜胶后不同时间其相应节段(L4～L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化。结果足底皮下注射角叉菜胶后动物出现热痛敏和机械性痛敏,热痛阈和机械痛阈均下降,于12 h达最低,72 h后恢复至正常水平。免疫组化显示相应节段(L4～L6)脊髓背角P2X3受体免疫反应在注射角叉菜胶24 h后明显增强(P<0.01),72 h表达强度最高,168 h恢复至正常,并且相应节段背根神经节P2X3受体阳性神经元数12 h开始明显增加(P<0.01),持续至72 h,168 h恢复至正常。结论角叉菜胶所致炎性痛大鼠,脊髓背角和背根神经节P2X3受体活化,表达明显上调,表明P2X3受体在炎性痛的发生、发展中起重要作用。     

Expression changes of parvalbumin and microtubule-associated protein 2 induced by chronic constriction injury in rat dorsal root ganglia

Background  Parvalbumin (PV), as a mobile endogenous calcium buffer, plays an important role in affecting temporospatial characteristics of calcium transients and in modulating calcium homeostasis. PV is expressed in neurons in the dorsal root ganglion (DRG) and spinal dorsal horn and may be involved in synaptic transmission through regulating cytoplasm calcium concentrations. But the exact role of PV in peripheral sensory neurons remains unknown. Microtubule-associated protein 2 (MAP-2), belonging to structural microtubule-associated protein family, is especially vulnerable to acute central nervous system (CNS) injury, and there will be rapid loss of MAP-2 at the injury site. The present study investigated the changes of PV expressing neurons and the MAP-2 neurons in the DRG after an operation for chronic constriction injury to the unilateral sciatic nerve (CCI-SN), in order to demonstrate the possible roles of PV and MAP-2 in transmission and modulation of peripheral nociceptive information.

Methods  Seventy-two adult male Sprague-Dawley (SD) rats, weighing 180–220 g, were randomly divided into two groups (36 rats in each group), the sham operation group and chronic constriction injury (CCI) group. Six rats in each group were randomly selected to receive mechanical and thermal sensitivity tests at one day before operation and 1, 3, 5, 7, and 14 days after surgery. After pain behavioral test, ipsilateral lumbar fifth DRGs were removed and double immunofluorescence staining was performed to assess the expression changes of PV and of MAP2 expressing neurons in the L5 DRG before or after surgery.

Results  The animals with CCI-SN showed obvious mechanical allodynia and thermal hyperalgesia (P <0.05). Both the thermal and mechanical hyperalgesia decreased to their lowest degree at 7 days after surgery compared to the baseline before surgery (P <0.01). In normal rats before surgery, a large number of neurons were MAP-2 single labeled cells, and just a small number of PV-expressed neurons were found. PV-positive neurons, PV-positive nerve fibers and PV-negative neurons, formed a direct or close contact for cross-talk. We used immunocytochemical staining to quantify the time course of changes to PV and MAP-2 expressing neurons in tissue, and found that the number of PV expressing neurons began to slightly decrease at 3 days after surgery, and had a significant reduction at CCI day 5, day 7 (P <0.05). But MAP-2 neurons significantly decreased on just the 3rd day after CCI (P <0.05). No changes in PV and MAP-2 expression were almost found in sham operated rats. The number of PV positive neurons, was positively correlated with the hyperalgesia threshold.

Conclusions  A sharp decline in MAP-2 neurons may be the early response to surgical injury, and PV positive neurons were much more effective at affecting the changes of pain behaviors, indicating that the down-regulation of PV protein could participate in, at least in part, the modulation of nociceptive transmission.

     

骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓STAT3的表达及其意义(英文)

目的观察骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓STAT3的表达,探讨其在骨癌痛中的作用机制。方法选择雌性SD大鼠20只,随机分为2组(n=10):模型组,为左侧胫骨上段骨髓腔注入3μLMADB-106大鼠乳腺癌细胞(4.8×103/μL);对照组,为左侧胫骨上段骨髓腔注入3μLHank液。第14天,采用免疫组织化学方法和荧光双标法观察两组大鼠患侧腰段脊髓STAT3和GFAP免疫反应阳性产物的变化和关系。结果对照组大鼠对机械痛刺激的缩爪阈值在术后各时间点组内相比差异无显著性;模型组大鼠在术后缩爪阈值与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。左侧胫骨上段骨髓腔注入癌细胞后第14d,骨癌痛模型大鼠患侧脊髓STAT3、GFAP免疫反应阳性产物表达明显增加(P<0.05);荧光双标免疫组化显示患侧脊髓STAT3与星形胶质细胞标志物GFAP有共表达。结论脊髓背角STAT3参与了骨癌痛的发生和发展,脊髓星形胶质细胞在骨癌痛中可能通过JAK/STAT3信号通路发挥作用。     

背根神经节在疼痛机制和治疗中的作用

背根神经节作为痛觉传入的第一级神经元在痛觉的外周机制中起着极为重要的作用。对背根神经节中特有的或者主要在背根神经表达的受体、离子通道的认识,对于阐明疼痛的机制和治疗有重要意义。本文对感觉神经元特有的Nav1.8通道,主要在背根神经节表达的Nav1.7,Nav1.9,TRPV1,TRPA1,TRPM8通道及P2X₃受体的分布、生理特点及在疼痛机制和治疗中的作用进行了详细的阐述。     

鞘内注射驱动蛋白17反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10和NR2B蛋白表达的影响

目的 探讨鞘内重复注射驱动蛋白17（Kinesin superfamily 17,KIF17）反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10（mammalian orthologue of the caenorhabditis elegans LIN-10,mLin10）和NR2B（the 2Bsubunits of N-methyl-D-aspartate Receptor,NR2B）蛋白表达的影响.方法 56只雄性C3H/HeJ小鼠,4～6周龄,体质量20～25 g,随机数字表法分为假手术组（S组,n=20）和骨癌痛组（T组,n=36）.T组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射约含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的最小必须培养基（α-MEM）20μl制备骨癌痛模型,S组小鼠注射不含肿瘤细胞的α-MEM 20μl.各组于接种前（base）、接种后第4,7,10,14天行痛行为学测试并在相应时间点取24只小鼠用western blot法测定脊髓KIF17、mLin10和NR2B蛋白含量.再将T组剩余24只小鼠随机分为T1,T2,T3组,每组8只.接种后第14天起,连续6d同一时间行鞘内穿刺给药,S组和T1组注射5μl生理盐水,T2组和T3组分别注射KIF17正义、反义寡核苷酸5μg/5μl.连续给药,第2～6天行痛行为学测试,第6天再次测定脊髓相关蛋白含量.结果 接种后7～14d,与S组和基础值相比,T组小鼠自发抬足次数增多,机械缩足阈值降低（P＜0.05）,与基础值[（0.65±0.15）、（1.06±0.06）、（1.01±0.14）]相比,T组小鼠脊髓水平KIF17、mLin 10和NR2B蛋白表达[14 d：（1.13±0.06）、（2.17±0.37）、（1.85±0.32）]增多（P＜0.05）;给药期间,与T1和T2组相比,T3组小鼠自发抬足次数减少,机械缩足阈值升高（P＜0.05）,给药后脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达[（0.88±0.08）、（0.96±0.11）、（1.03±0.08）]减少（P＜0.05）.结论 重复鞘内注射KIF17反义寡核苷酸能明显改善骨癌痛小鼠的痛行为,并抑制了脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达上调.     

艾芬地尔重复鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的影响

目的 观察艾芬地尔重复鞘内注射对小鼠骨癌痛的影响.方法 96只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为肿瘤给药组(T组)、肿瘤对照组(C组)和假手术组(S组).将含2 ×105个纤维肉瘤NCTC2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.T组在术后第14天开始,鞘内注射艾芬地尔5μl(10μg),每天1次,连续3天.C组和S组在相同时间点分别给予相同体积的溶媒.各组于接种前l天,接种后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天、第17天、第19天和第23天检测痛行为学指标,包括小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).按照分组在相应时间点处死小鼠,用Western-blotting方法检测脊髓腰膨大NR2B蛋白表达水平.结果 肿瘤细胞接种后第14天,和S组及术前基础值相比,T组小鼠自发性抬足[ (12.88 ±1.64)次]显著增加,PWMT(0.39 ±0.17)g和PWTL( 11.59±1.67)s明显下降(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白(2.12 ±0.13)显著增加(P＜0.05).肿瘤细胞接种后第17天,第19天,第23天,和第14天及C组相比,T组自发性抬足[(5.13±1.38)次,(4.70±1.58)次,(5.64±1.17)次]明显减少,PWMT[ (1.10 ±0.65)g,(0.95 ±0.56) g,(1.05 ±0.26)g]和PWTL[ (15.17±1.27)s,(15.93 ±2.18)s,(16.28±1.48)s]显著增加(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白[(1.42±0.17),(1.67±0.53),(1.14±0.79)]显著减少(P＜0.05).结论 重复鞘内注射艾芬地尔能显著改善骨癌痛小鼠的痛行为,降低脊髓NR2B蛋白.     

Microsurgical dorsal root entry zone coagulation for chronic neuropathic pain due to spinal cord and/or cauda equina injuries

Chronic pain is a major problem for patients suffering from spinal cord injury （SCI）.The prevalence of SCI-related pain ranges from 48% to 94% depending on the method of data acquisition and type of pain considered.1 SCI-related neuropathic pain is classified into three subtypes：above-,at-,and below-lesion-level pain.After SCI,it is believed that the dorsal horn of the injured spinal cord expressed increased electrical activity.2 Thus,the neurosurgical procedures for coagulation in the dorsal root entry zone （DREZ） have proved to be most effective in chronic neuropathic pain due to SCI.The aim of this study was to describe the effect and safety ofmicrosurgical DREZ coagulation in treating chronic SCI-related neuropathic pain.