己酮可可碱对大鼠内毒素性急性肺损伤炎症反应的影响

目的探讨己酮可可碱对大鼠内毒素(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)炎症反应的影响。方法腹腔注射0.01%LPS1mg/kg,16h后在机械通气下气管内滴注1.5mg/kg(0.5ml)LPS建立大鼠内毒素性ALI模型。24只大鼠随机分为生理盐水对照组(C组)、急性肺损伤组(LPS组)和己酮可可碱组(PTX组),每组8只。7h后处死大鼠。酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BAL)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的含量,测肺湿/干重比,并观察BAL白蛋白浓度。结果与LPS组相比,PTX组大鼠BAL中TNF-α浓度、肺湿/干重比以及BAL白蛋白浓度显著降低(P<0.05),而IL-10显著升高。结论己酮可可碱能显著抑制内毒素性急性肺损伤大鼠的炎症反应,具有一定的肺保护作用。     

己酮可可碱对内毒素诱导的核因子kappa B及其炎性因子的影响

目的观察内毒素腹腔感染大鼠肠道炎性细胞因子及其核因子kappa B(NF-kappa B)的变化,探讨不同剂量己酮可可碱(PTX)的干预作用.方法腹腔注射内毒素(LPS)5mg/kg建立脓毒症模型.成年雄性Wistar大鼠被随机分为对照组,LPS组(5 mg/kg腹腔注射),LPS+PTX组(LPS 5 mg/kg腹腔注射,PTX 6.25、12.5、25、50、100 mg/kg静脉注射),PTX组(PTX 100 mg/kg静脉注射).2 h后放血处死动物,取肠道组织保存于液氮中备用.凝胶电迁移(EMSA)测定肠道的NF-kappa B活性,酶联免疫吸附(ELISA)测定肠道肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的水平.结果腹腔注射LPS可以增强肠道组织的NF-kappa B活性,升高组织TNF-α、IL-6、IL-10水平,各剂量PTX都可以抑制肠道的NF-kappa B活性,抑制TNF、IL-6的水平,但增强IL-10的释放,并与剂量相关.结论 PTX可以抑制LPS在体内的激活,其作用机制可能与对NF-kappa B的抑制有关.     

己酮可可碱对淡水淹溺后肺粘附分子表达的影响

目的　探讨己酮可可碱 (pentoxifylline ,PTX)对淡水淹溺肺损伤后肺组织细胞间粘附分子 (ICAM 1 )、血管间粘附分子 (VCAM 1 )表达的影响。方法　 1 8只普通杂种犬随机分为对照组、淹溺组和淹溺加己酮可可碱组三组。采用气管切开插入Carlen’s管分隔左右两肺 ,向右肺灌淡水2 0ml/kg ,左肺自主通气的方法模拟淡水淹溺造成直接和间接肺损伤模型。于淹溺后 1、2、4、6、8h五个观察时间点采集肺组织 ,逆转录 聚合酶链 (RT PCR)方法检测肺组织中粘附分子的表达 ,光镜下病检测中性粒细胞 (polymorphonuclearneutrophil,PMN)在肺组织的浸润情况。 结果　淹溺后各时相点肺组织中性粒细胞大量浸润 ,ICAM 1、VCAM 1mRNA表达均有显著的升高。ICAM 1mRNA淹溺后 4h达高峰为 (87 9± 6 1 ) % (P <0 0 1 ) ,6h后开始下降。PTX则可以明显抑制这种变化 (P<0 0 1 )。同样VCAM 1mRNA有微量表达 ,PTX组比淹溺组相应时相点表达减少 (P <0 0 1 )。结论　PTX可以通过降低肺淹溺后的ICAM 1、VCAM 1的表达 ,从而减轻PMN在肺内的聚集、活化 ,防止淡水淹溺后急性肺损伤     

己酮可可碱对内毒素休克家兔生物喋呤诱生的干预作用

目的　观察己酮可可碱 (PTX)对内毒素休克家兔休克时生物喋呤诱生的影响。　方法　 2 8只大耳白兔 ,随机分为 3组 ,对照组 (8只 )、内毒素休克组 (10只 )、PTX治疗组 (10只 )。制作内毒素休克模型 ,观察血浆生物喋呤、肿瘤坏死因子及组织三磷酸鸟苷环水解酶I活性的变化 ,同时监测全身血流动力学改变。　结果　内毒素休克大鼠早期给予PTX治疗 ,可显著降低血浆生物喋呤及肿瘤坏死因子水平 ,与对照组及休克组比较 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;不同程度地抑制肝、肺、心等组织三磷酸鸟苷环水解酶I活性 (P <0 0 5 ) ;与此同时 ,治疗组平均动脉压、心输出量及外周血管阻力均比休克组明显提高 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。　结论　PTX能有效抑制内毒素休克时体内生物喋呤的合成与释放 ,明显减轻全身血流动力学障碍。     

己酮可可碱对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及机理

目的：探讨己酮可可碱（PTX）对腹腔感染致脓毒症时急性肺损伤的保护作用及其机理。方法：采用盲肠结扎穿孔致脓毒症模型,将42只大鼠随机分为对照组6只,脓毒症组18只和PTX治疗组18只,检测肺组织生物喋呤（BH4）合成限速酶－三磷酸鸟苷环水解酶Ⅰ（GTP－CHI）,诱生型一氧化氮合酶（iNOS)和肿瘤坏死因子－α（TNF－α）mRNA的表达,同时测定肺组织BH4、一氧化氮（NO）的含量及髓过氧化物酶（MPO）活性的变化。结果：脓毒症早期给予PTX治疗可有效抑制腹腔感染后2、8h肺组织TNF－α mRNA表达和伤后2h MPO活性;同时,治疗组2h肺组织BH4,NO含量及GTP－CHI mRNA,iNOS mRNA表达均显著降低。结论：早期应用PTX对脓毒症后急性肺损伤具有明显保护作用,该效应与PTX抑制BH4,NO的诱生相关。     

己酮可可碱对人精子运动参数的影响

为探讨室温下己酮可可碱（ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｉｎｅ，ＰＦ）对人不同精子运动特性的影响，将正常精子（Ｉ组），少精及运动低下精子（ＩＩ组）和冷冻复苏精子（ＩＩ组）分别与ＰＦ培育３０分钟后洗涤，与对照组同时以计算机精液分析仪（ＣＡＳＡ）分析精子运动特性。结果：ＰＦ在室温下短时培育能提高各种精子的高活性运动（ＨＡ）。其作用在Ｉ、Ｉ组较明显；ＰＦ对平均轨迹速度（ＶＣＬ）、平均精子头摆动幅度（ＡＬＨ）及精子运动速度（ＶＡＰ）的升高作用和对平均直线性比值（ＬＩＮ）的降低作用经配对ｔ检验，具有显著和极显著意义（Ｐ＜０．０５及Ｐ＜０．００１），且持续至１５小时；室温下除ＬＩＮ以外的精子运动各参数与时间呈负相关，此变化大多于３小时后有统计学差异，以ＩＩ、ＩＩ组尤为明显。结果提示：室温下ＰＦ可提高精子高活性运动；在人工授精中精子准备时间以选择授精前３小时内进行为宜。     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的 探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法 采用大鼠３５％体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素Ｂ治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织ＴＮＦ－αｍＲＮＡ含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果 烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,８ｈ达高峰,２４ｈ则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素Ｂ     

谷氨酰胺对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的评价谷氨酰胺对内毒索性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法静脉注射脂多糖(LPS)5 mg·kg-1复制大鼠ALI模型。雄性SD大鼠50只随机分为5组(n=10):A组为对照组;B组为LPS组;C组、D组、E组为谷氨酰胺+LPS组,分别于LPS注射前1h时、LPS注射同时、LPS注射后1 h静脉注射谷氨酰胺0．75 g／kg。所有动物于注射LPS或生理盐水后4 h颈动脉放血处死,采用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织TNF-αmRNA表达,免疫组织化学方法检测肺组织TNF-α蛋白表达,HE染色,光镜下观察肺组织病理学变化。结果与A组相比,B组TNF-αmRNA表达上调(P<0．01),肺泡巨噬细胞、中性粒细胞、上皮细胞表达增强(P<0．01);与B组相比,C组和D组肺组织TNF-αmRNA及TNF-α蛋白水平均降低(P<0．01),肺组织的炎症反应减轻。结论在静脉注射LPS前或同时给予谷氨酰胺可通过抑制ALI大鼠肺组织TNF-α的过度生成,减轻肺损伤。     

大鼠供肝冷缺血再灌注损伤中TNF的作用及己酮可可碱预处理的效果

目的 探讨肿瘤坏死因子（TNF）与大鼠供肝冷缺血再灌注损伤中的关系及观察己酮可可碱（PTX）预处理的防护作用。方法 Wistar大鼠32只，随机分为受体组与供体组。两两随机配对后再随机分为对照组（C组）和实验组（即预处理组，E组）。E组供体大鼠预处理，开腹前1h腹腔注射PTX50mg/kg，对照组供体不进行预处理。供肝均保存6h后行原位肝移植。结果 （1）门静脉复流后30min及3h时血清中TNF水平E组显著低于C组（P＜0．05）；（2）30min及3h谷胱甘肽－S转换酶（GST－S）水平E组显著低于C组（P＜0．05）。（3）30min及3h血清中ALT，AST水平E组显著低于C组（P＜0．050。结论 TNF居大鼠供肝冷缺血再灌注损伤中起重要作用，己酮可可碱预处理可以减轻冷缺血再灌注损伤。     

Effects of pentoxifylline in Adriamycin-induced renal disease in rats

Tumor necrosis factor- (TNF-) is a mediator of inflammation in human and animal renal disease. Pentoxiphylline (PTX) is an inhibitor of TNF-. In this study we examined the effects of PTX on TNF-, proteinuria, nitrite production, and apoptosis in an experimental model of Adriamycin (ADR) nephropathy in rats. Rats were divided into four groups: untreated Wistar rats (controls), PTX treatment alone, ADR treatment alone to induce nephropathy, and ADR treatment followed by PTX. ADR treatment followed by PTX treatment prevented the increase in serum TNF- levels and proteinuria in rats with ADR-nephropathy (P<0.05). Urine nitrite levels were significantly increased in the ADR-induced nephropathy group and the increase was prevented in the ADR-induced nephropathy group when they also received PTX. The urine nitrite levels were not different between the PTX-treated group and the untreated control rats. PTX prevented the rise of serum TNF- in ADR nephropathy rats and a decrease in proteinuria, urine nitrite, and apoptosis in the renal tissue. These findings suggest a beneficial anti-inflammatory effect of PTX.     

内毒素活化和耐受的巨噬细胞差异表达基因分析

目的　分析内毒素活化的和内毒素耐受的巨噬细胞差异表达基因 ,以探讨内毒素耐受的分子机制。方法　分离小鼠腹腔巨噬细胞 ,活化组直接以 1mg/L脂多糖处理 2h ,耐受组先以脂多糖预处理 2 0h ,再以脂多糖处理 2h。利用含 1176个基因的小鼠cDNA表达芯片进行基因表达谱分析。结果　活化组与耐受组间的 3倍差异表达基因为 3 1个 ,其中耐受组有 8个基因的表达水平明显高于活化组 ,包括细胞表面抗原FcgammaRIIb、间隙连接蛋白 43、凋亡相关蛋白NIP3、iN OS、骨髓间充质细胞抗原 (BST) 1以及激活素和卵泡抑素等 ,有 2 3个基因的表达水平明显低于活化组 ,包括转录因子EPAS1、EGR2、IRF1,细胞周期素依赖性蛋白激酶 p2 1和p5 7,骨桥蛋白 ,尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体 ,以及多种生长因子受体和细胞因子。结论　这些差异表达基因多数未曾报道与内毒素耐受相关 ,可能在内毒素的发生中具有重要作用 ,并成为内毒素耐受的新的标志分子 ,对其进行干预有可能模拟内毒素耐受的保护效应。     

Therapy with antibody to tumor necrosis factor against endotoxin shock in rabbits

The purpose of this study was to determine the efficacy of treatment with anti-tumor necrosis factor (TNF) antibody in preventing the deleterious effects of endotoxin. Polyclonal anti-TNF antibody was produced by immunizing rabbits. Experiments were carried out on 16 rabbits intravenously infused with the lethal dose of lipopolysaccharide (LPS). Pretreatment with anti-TNF antibody resulted in protection from the development of hypotension and metabolic acidosis. The serum TNF level was significantly depressed in the antibody-pretreated group. Eighty-eight percent in the anti-TNF antibody-pretreated rabbits survived more than 48 h, whereas none of the rabbits who were given LPS alone survived over 24 h (LPS group). Prominent histopathological changes in the liver and kidney were evident in the LPS group. In contrast, pathologic changes in the tissue from the anti-TNF antibody group were considerably less prominent. These results support the idea that TNF plays a central role in mediating the pathophysiologic changes during endotoxin shock.     

老年骨关节炎患者软骨组织的基因芯片分析

目的观察老年骨关节炎(OA)患者软骨组织中细胞凋亡相关基因表达的差异,探讨相关基因与OA导致的软骨退变之间的关系。方法选择老年OA患者5例及对照者5例,应用基因芯片技术检测所获取的软骨组织中细胞凋亡相关基因的差异表达,并进行基因表达通路查询。结果与正常对照者相比,老年OA患者软骨组织中共有11个与细胞凋亡相关基因出现显著差异表达,其中IL-1、TNF-α、IGF、SMPD1及MMP-1表达上调,这些基因主要涉及MAPK信号通路。结论与免疫相关的多个基因的差异表达可能是老年人OA软骨退变发生的关键因素。     

硫喷妥钠对内毒素诱导小鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的研究硫喷妥钠对内毒素（LPS）诱导小鼠肺组织NF-κB的表达的影响。方法雄性昆明小鼠24只，随机分为4组（n=6）：对照组（C组）、LPS组（L组）、硫喷妥钠处理组（L＋T组）、单纯硫喷妥钠处理组（T组）。C组腹腔注射生理盐水1ml／ks；L组腹腔注射LPS5mg／kg；L＋T组腹腔注射LPS5mg／kg 20min时再注射1％硫喷妥钠注射液60mg/kg；T组单纯腹腔注射1％硫喷妥钠注射液60mg／kg。在注射LPS后3h放血处死小鼠，立即开胸取肺。免疫蛋白印迹法测定肺组织NF-κB p65的表达；酶联免疫吸附法测定肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）含量。结果与C组相比，L、L＋T组肺组织NF-κB p65表达增加，L、L＋T、T组肺组织，TNF-α、IL-1β含量上升（P〈0．05）；与L组相比，L＋T、T组肺组织NF-κB p65表达降低，肺组织TNF-α，IL-1β含量降低（P〈0．05）。结论硫喷妥钠通过下调小鼠LPS诱导的肺组织NF．KB065表达，降低了TNF-α及IL-1β的释放。     

家兔创伤休克后血浆内毒素,TNF和IL—6的动态变化

目的：探讨创伤休克对内毒素移位的影响及其与ＴＮＦ、ＩＬ－６产生的关系。方法：选用家兔１６只，随机分为创伤合并失血性休克（Ⅰ组）和单纯失血性休克组（Ⅱ组），采用鲎试验基质显色法，ＥＬＩＳＡ和细胞生物测定法分别测定血浆内毒素、ＴＮＦ和ＩＬ－６水平。结果：休克１．５小时，Ⅰ组血浆内毒素水平即明显高于伤前，至复苏后０．５小时达峰值，复苏后１小时仍明显高于伤前。休克后Ⅰ组血浆内毒素水平明显高于Ⅱ组；休克及复苏后，血浆ＴＮＦ、ＩＬ－６水平也先后显著升高，其中ＴＮＦ升高较早，Ⅰ组血浆细胞因子水平明显高于Ⅱ组；相关分析表明，创伤休克后血浆ＴＮＦ、ＩＬ－６均值分别与血浆内毒素均值呈显著正相关。结论：创伤休克可导致明显的内毒素血症及ＴＮＦ、ＩＬ－６等细胞因子过量产生，且较单纯休克时明显，创伤后细胞因子产生与内毒素移位有一定的内在联系。     

体外循环中抗肿瘤坏死因子抗体的肺保护作用

目的 探讨抗肿瘤坏死因子抗体(TNF-α Ab)对体外循环(CPB)肺损伤的保护作用。方法 选择CPB瓣膜置换病人20例，随机分为对照组和用药组各10例。用药组于CPB前和主动脉开放后即刻经气管插管注入TNF-αAb。测定两组围CPB期肺动态顺应性，左、右心房血中性粒细胞计数、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量等指标。结果 用药组CPB后各时点肺动态顺应性显著高于对照组；TNF—αAb明显抑制肺源性TNF(COB)-α的释放及中性粒细胞在肺内的聚集。结论 预防性应用TNF-αAb对体外循环肺损伤有明显的保护作用。     

内毒素结合肽及其突变体的表达纯化和抗内毒素/脂多糖活性研究

目的使内毒素结合肽（EBP）及其突变体mEBP在E．coli DH5α中表达，纯化后鉴定其抗内毒素／脂多糖（LPS）活性。方法（1）将含Pinpoint Xa3-EBP及其突变体Pinpoint Xa3-mEBP的工程菌DHSα活化，加入异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导其表达生物素融合蛋白。分离纯化表达产物，因子Xa酶切融合蛋白分离目的肽EBP和mEBP。采用亲和层析及反相高效液相色谱法纯化目的肽，用氨基末端10个氨基酸残基序列分析法鉴定突变体mEBP。（2）分离正常人外周血单核细胞（PBMC），用5mg／L异硫氰酸荧光素（FITC）-LPS＋不同浓度EBP或mEBP（均为2．0、5．0、12、5mg／L）刺激PBMC，检测其平均荧光强度。用1mg／L LPS＋3种浓度（同前）EBP或mEBP刺激PBMC，5h后取上清液，检测肿瘤坏死因子（TNF）α和白细胞介素（IL）6浓度。（3）将25只昆明小鼠分为正常对照组（5只）：腹腔注射等渗盐水0.2ml；模型组（5只）：小鼠造成20％TBSAHI度烧伤，伤后腹腔注射LPS（1mg／kg）；治疗组（15只）：小鼠同前致伤后，腹腔注射多黏菌素B（PMB，5mg／kg）或EBP或mEBP（后两者均为10mg／kg）。6h后检测各组小鼠血清TNF—α、IL-6浓度及肝组织中TNF—α mRNA的表达水平。结果（1）纯化后的目的肽EBP、mEBP纯度均达98％以上，mEBP氨基末端10个氨基酸残基序列分析符合预期结果。（2）随着mEBP或EBP浓度的增加，PBMC表面的平均荧光强度逐渐减弱；且在同一浓度下，加入mEBP后平均荧光强度的减弱程度较加入EBP明显。与用1mg／LLPS刺激PBMC比较，加入1mg／L LPS＋12．5mg／LEBP以及1mg／LLPS＋3种浓度mEBP刺激后，PBMC培养上清液中IL-6及TNF—α的水平均明显降低（P〈0．01）。（3）与模型组比较，治疗组小鼠血清IL-6、TNF-α水平均明显降低（P〈0．01），其中10mg／kg mEBP治疗组两指标低于等浓度EBP治疗组（P〈0．05）。（4）小鼠肝组织TNF—α mRNA表达水平：正常对照组相对灰度值为0．25，模型组为0．93，10mg／kg mEBP治疗组为0．51，10mg／kg EBP治疗组为0．77，5mg／kg PMB治疗组为0．43。结论具有抗LPS活性的小分子肽可通过原核表达获得：EBP及mEBP均具有抗LPS活性，其中mEBP拮抗作用更强。