人胚肺成纤维细胞复制性衰老的基因表达变化

目的检测人胚肺成纤维细胞(2BS细胞)复制性衰老过程中的基因表达变化,并试图寻找细胞衰老的标志性基因。方法利用cDNA芯片对比检测28代龄和64代龄的2BS细胞基因表达谱,通过RT-PCR对挑选的9个差异基因在7个不同代龄2BS细胞中的表达进行验证分析。结果和年轻细胞相比,衰老2BS细胞有117种基因的变化幅度在2倍以上,46种基因在2.5倍以上;细胞衰老过程中下调的基因主要是细胞周期相关基因,上调基因主要参与细胞应激反应和蛋白分泌等过程;9个差异基因的RT-PCR验证结果与芯片结果基本一致。结论基因芯片是研究细胞衰老基因表达和调控网络的重要工具,可用于衰老特征性基因的筛选。     

氨基胍延缓人胚肺二倍体成纤维细胞复制性衰老的实验研究

目的探讨人工合成单体抗氧化剂氨基胍（2-AG）对人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）复制性衰老的影响及其分子机制。方法观察2-AG对2BS细胞衰老表型、细胞代龄、传代速度、细胞周期、细胞增殖能力、晚期糖基化终末产物（AGEs）水平及衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）阳性率的影响。结果2-AG可维持细胞的非衰老表型，增加2BS细胞代龄19～20代，MTT法分析发现用2-AG孵育细胞84h，细胞增殖能力较对照组升高36％～40％。2-AG显著加快了细胞的增殖速度，其培养细胞S期的比例较对照细胞升高约1倍。另外，2-AG连续培养的细胞在老龄阶段AGEs、SA-β-Gal阳性率均显著低于老年对照细胞，而与年轻2BS细胞相似。结论2-AG可有效延缓2BS细胞的复制性衰老。     

抑制性消减杂交筛选细胞衰老相关基因

目的 研究人胚肺二倍体成纤维细胞2BS在衰老过程中的基因表达变化。方法 对年轻2BS细胞[低于30PD(population doubling)]和衰老2BS细胞(高于55PD)样品进行双向抑制性消减杂交，并筛选分析。结果 构建了2个抑制性消减文库，分别代表年轻细胞和衰老细胞高表达基因，点杂交筛选获得30个差异表达片断(差异比例大于2)包含多种细胞功能的变化。部分差异基因表达在新生儿脐带血和老年人外周血样中差异也有显著性。结论首次报道了RBM4、FBXO7、TOM1等基因在2BS细胞衰老时的表达变化，并表明体外培养细胞与个体的衰老变化过程有一定相似性。     

细胞周期抑制因子p16可诱导人成纤维细胞发生衰老样变化

目的 探讨细胞周期抑制因子p16在细胞衰老中的作用。方法 利用逆转录病毒载体将p16基因转染入人胚肺二倍体成纤维细胞2BS中,获得高表达,检测其对2BS细胞衰老的影响。结果 与对照组细胞相比,p16基因转染后,2BS细胞生长速度下降了约50％,细胞周期阻滞于G1期,细胞对生长因子刺激的反应性下降了79．4％,细胞形态呈衰老细胞样变化。结论 p16在人二倍体成纤维细胞的衰老过程中起促进作用。     

α-2-巨球蛋白在人胚肺二倍体成纤维细胞衰老过程中的作用

目的了解α-2-巨球蛋白（A2M）对人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS细胞）衰老过程的影响. 方法将正、反义真核表达载体,经脂质体（lipofectin）介导,转染年轻2BS细胞,分别获得正、反义转染细胞.经Southern及Northern印迹验证后,测定正、反义转染细胞的衰老相关指标,再用Western印迹法检测转染细胞中p16、p21的变化. 结果转染的外源性A2M cDNA片段已完全整合到基因组中.与对照2BS/neo（空载体）细胞和正常细胞相比,正义A2M表达载体转染2BS细胞得到的稳定细胞（2BS/A2Ms细胞）生长更为迅速,S期和M期的比例略高于对照2BS/neo细胞和正常细胞组.衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色阳性率约为55.4%,而且细胞寿限较正常细胞和对照细胞组略有延长,但无统计学意义（P＞0.05）.与之相反,反义A2M表达载体转染2BS细胞得到的稳定细胞（2BS/A2Ma细胞）较对照和正常细胞组生长更为缓慢,S期和M期的比例略低,SA-β-Gal染色阳性率约为72.3%,细胞形态扁平、增大,表现为衰老细胞的特征,细胞寿限略短于对照和正常细胞组,但也无统计学意义（P＞0.05）.此外发现2BS/A2Ms细胞的生长速率、S期和M期的比例、细胞寿限均明显高于2BS/A2Ma细胞（P＜0.01）.比较正、反义转染细胞最大传代次数差异有统计学意义（P＜0.05）.转染细胞中p16、p21的表达变化并无统计学意义. 结论α-2-巨球蛋白延缓2BS细胞衰老作用甚微,且不经过p16、p21基因起作用.     

人衰老二倍体成纤维细胞对烷化剂损伤的应答

目的　观察衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞 (2BS)对烷化剂甲磺酸甲酯 (MMS)诱导的DNA损伤的应答。　方法　以体外培养的不同代龄的人胚肺 2BS为对象 ,以MMS诱导DNA损伤 ,以年轻细胞 (<30代 )为对照 ,观察衰老细胞 (>5 5代 )经MMS处理后的细胞形态、增殖特性、细胞周期的改变 ,并分别检测 gadd4 5、p2 1和p5 3等基因转录水平的表达变化 ,同时以非程序性DNA合成(UDS)和单细胞凝胶电泳试验测定DNA修复能力。　结果　经MMS诱导DNA损伤后 ,衰老细胞的细胞形态、生长曲线和细胞周期的变化均不及年轻细胞明显 ;gadd4 5、p2 1和 p5 3等基因的可诱导性表达均低于年轻细胞 ;同时 ,衰老细胞总的及单个细胞的修复能力较年轻细胞明显下降。　结论　衰老 2BS细胞对MMS诱导的DNA损伤后的细胞应答变化能力下降 ,且其修复能力的减退可能与基因的可诱导性表达下降有关。     

植物血凝素与抗衰老

已发现并在临床证实,植物血凝素(PHA)具有抗衰老的作用。随着增龄,构成人体的细胞均会不断地发生衰老变化。 PHA是一种丝裂原,它具有促进细胞分裂作用,而细胞分裂本身就是一种复壮,并且PHA在增加功能细胞数目方面也是有     

CFSE标记人T细胞亚群增殖反应及其在病毒感染性疾病中的应用

目的探讨应用流式细胞术和活体染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记人T细胞亚群增殖反应的方法学及其在病毒感染性疾病中的应用价值。方法用不同浓度的CFSE标记新鲜分离的人外周血单个核细胞(PBMC),分为未刺激组及刺激组。未刺激组加入CD28,刺激组加入CD28及不同浓度PHA,将细胞培养5～7d后进行染色,采用流式细胞仪检测,观察CFSE、PHA标记的最佳浓度及最佳培养时间,采用CellQuest软件及ModFit软件分析T淋巴细胞各亚群的增殖情况,并对两种分析方法进行比较,在上述最佳实验条件下,采用相同的实验方法分析CMV-pp65肽刺激CMV-IgG( )HLA-A2( )者外周血单个核细胞(PBMC)后T细胞亚群增殖情况;结果CFSE标记人外周血单个核细胞(PBMC)的最佳浓度是0.5μmol/L,PHA的最佳刺激浓度为2μg/ml,在此浓度下,最佳培养时间为6d,PHA刺激培养6d后T细胞各亚群出现典型的增殖不同步现象,经CMV-pp65肽刺激后CD8 T细胞出现明显的增殖反应,采用CellQuest及ModFit软件联合分析,可实现淋巴细胞增殖分析的可视化及数量化。结论CFSE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术是分析淋巴细胞增殖的有力工具,可以有效检测出病毒抗原刺激后T淋巴细胞各亚群的增殖反应及增殖动力学,在探讨病毒感染性疾病的发病机制中具有重要价值。     

实验性布鲁氏菌病的细胞免疫反应

用 PHA 淋转、E-RFC(测定 T 淋巴细胞)、IgG 致敏羊血球的花环实验(测定细胞表面的 Fc 受体)等方法,检查了豚鼠感染布鲁氏菌后一年期间的细胞免疫反应。感染后1个月,血液中 E-RFC 下降,3 1/2月回升,9 1/2月恢复正常。感染后半个月,PHA 淋转下降,3 1/2月恢复,1年又有下降趋势。血液中 T_γ细胞(IgG-Fc 受体阳性 T 细胞)在3 1/2月及1年出现二次高峰。证明强毒布鲁氏菌感染后1个月时,各种细胞反应均受到不同程度的抑制。我们测重讨论了细胞反应与抗原的关系。     

系统性红斑狼疮患者T细胞、B细胞减少

早已知道活动性全身性红斑狼疮患者(简称SLE)白血细胞减少,但其临床和发病学意义有待进一步研究。作者研究了16例活动型SLE、11例非活动型SLE患者及16例健康人末稍血液淋巴细胞。以羊红细胞攻瑰花结试验检查T细胞数;以羊红细胞在补体和介体存在时形成玫瑰花结的方法计算B细胞数。另外,对大部分患者及对照组用PHA反应进行了淋巴细胞转化试验。实验结果表明,在活动型SLE患者,T细胞、B细胞均明显减少,与正常对照组比较,差异显著(P<0.025),非活动型患者与对     

失代偿期乙型肝炎肝硬化患者骨髓间充质干细胞对自体外周血淋巴细胞及调节性T细胞亚群增殖的影响

目的研究乙型肝炎肝硬化失代偿期患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)对其外周血中淋巴细胞、调节性T细胞亚群(Tregs)增殖的影响。方法 12例乙型肝炎肝硬化失代偿期患者骨髓分离培养出间充质干细胞,采用倒置显微镜观察培养后的贴壁细胞形态、采用流式细胞仪技术观察间充质细胞免疫表型;在植物血凝素(PHA)刺激下、自体血清作为培养基,实施BMSCs和患者自体外周血淋巴细胞共培养,分为A组(BMSCs+淋巴细胞+PHA接触培养)、B组(BMSCs+淋巴细胞+PHA非接触培养)、C组(淋巴细胞+PHA培养)、D组(淋巴细胞),均72 h后观察BMSCs对外周血淋巴细胞增殖及Tregs细胞表达的影响。结果流式细胞仪分析结果显示:培养3代后的间充质干细胞主要高表达T细胞亚群(Tregs)中的CD44(95.26%)、CD29(92.18%),低表达CD34(1.27%)、CD25(1.33%)。C组淋巴细胞增殖率显著高于A、B、D组(P0.05),A、B两组显著高于D组(P0.05),但A、B两组差异无统计学意义(P0.05)。A、B、C组Tregs细胞表达率显著高于D组(P0.05),A、B两组显著高于C组(P0.05),A、B两组差异无统计学意义(P0.05)。结论乙型肝炎肝硬化失代偿期患者BMSCs对其外周血中淋巴细胞增殖具有抑制作用、同时调上调T细胞亚群表达,BMSCs可能具有免疫抑制作用。     

Treg细胞和Th17细胞的研究进展

正CD+4T淋巴细胞是一类在免疫反应中发挥重要作用的细胞,它在激活后可分化为辅助性T细胞1(T helper cells,Th细胞)、Th2细胞、辅助性滤泡T细胞(Follicular T helper cells)、Th17细胞和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg细胞)。不同类型CD+4T淋巴细胞有不同的功能,如激活细胞免疫和非细胞免疫、直接溶细胞活性和抑制免疫反应     

乙肝病人T细胞亚群、mIL-2R的变化及意义

目的检测乙型病毒性肝炎病人外周血T细胞亚群和膜白介素-2受体(mIL—2R)表达水平并探讨其在乙肝发病机制中的作用。方法采用生物素-链霉亲和素法对188例乙肝病人外周血单个核细胞(PBMC)进行T细胞亚群及植物血凝素(PHA)诱导前后mIL—2R水平测定。结果乙肝病人T淋巴细胞亚群中CD3~+、CD4~+降低,CD8~+升高,CD4~+/CD8~+比值降低,外周血单个核细胞mIL—2R表达水平在PHA诱导前后均降低,与正常对照相比,差异有显著意义(P<0.01);另外,乙肝病人PBMC中HBV—DNA(+)病人与PBMC内HBV—DNA(-)病人相比,mIL—2R表达水平亦存在较大差异(P<0.01)。结论乙肝病人体内存在明显的细胞免疫功能紊乱,T细胞活化障碍,并与肝病的慢性化相关。     

抑癌基因p33ING1b对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老进程影响的机制研究

目的 探讨衰老相关基因p33^ING1b对p16^INK4a以及细胞衰老进程影响的内在分子机制。方法 以人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）为对象，采用RT—PCR、Western blot、结构域分析、启动子分析以及相关衰老生物学指标检测等手段对p33^ING1b对细胞衰老进程的影响进行研究。结果 在2BS细胞中，无论在mRNA水平还是蛋白质水平，p33^ING1b的表达均随代龄俱增，老年细胞p33^ING1b蛋白表达水平是青年细胞的10倍；而且该基因具有促进p16^INK4a表达的作用；通过结构域分析发现，C端的植物同型结构域（PHD）删除体（p33ΔC）较野生型p33^ING1b具有更为明显的促进p16^INK4a表达以及诱导细胞衰老的作用。具体表现在p33ΔC使p16^INK4a表达上调，细胞生长曲线变缓（P〈0．05），细胞传代次数减少10代以上。结论 p33^ING1b具有诱导衰老的作用，而且p33^ING1b的不同结构域的作用也有所不同，PHD结构域似有延缓衰老、约束或拮抗分子内其他部分的作用。     

天然杀伤细胞和抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性的年龄相关性

老龄大鼠和小鼠睥细胞的天然杀伤细胞(NK)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)活性有下降趋势。与此相反,有关人类淋巴细胞功能的研究发现,NK和ADCC活性在衰老过程中可能降低,但也可能增强或无变化。之所以出现上述种种相互矛盾的结果。可能与实验对象的选择标准和细胞毒试验中所用靶细胞种类的不同有关。本文检查了青年和老年健康人群的NK及ADCC活性。有报道指出,NK和ADCC反应特点之一是水解酶(包栝酸性磷酸酶)的活化,这可能是细胞毒反应重要机制之一。最近作者亦证明,随着衰老的发生,人外周血淋巴细胞的酸性磷酸酶(AP)活性下降。据此推测,AP活性的变化可引起NK和ADCC活性的相应改变,本文结果亦证实这一     

衰老相关的T细胞生物学研究进展

T细胞衰老是导致机体衰老、衰老相关疾病以及和寿命直接相关的重要因素。T细胞在免疫系统中处于核心地位 ,参与各种免疫应答 ,执行各种免疫功能 ,抵抗疾病 ,直接或间接地参与细胞免疫和体液免疫。所以 ,研究T细胞衰老是研究人体衰老的重要内容。目前 ,人们在进行衰老生物学研究时 ,常用T细胞作为模型研究基因表达、细胞间通讯及体内平衡调节等 ,其他多细胞生物很少具有T细胞的优点。我们在此主要讨论引起T细胞衰老的因素 (机制 )、由衰老而引起的T细胞功能的相关变化及检测衰老T细胞的常用方法。　　一、引起T细胞衰老的因素　　 1.复制…     

应用同位素双标记法测定人二倍体细胞的DNA修复功能

自Hayflick证明了人胚肺二倍体细胞可以作为体外衰老的模型以来,有关细胞的遗传稳定性与衰老之间关系的研究引起了许多研究者的注意。本研究应用同位素双标记法与单标记法比较,探讨由化学诱变剂MMC诱导的DNA损伤(UDS)与衰老细胞的修复能力之间的关系。 对象和方法 一、对象 人胚肺二倍体成纤维细胞(HELF2BS)由北京生物制品所提供,在本实验室条     

T细胞衰老及分子机制的研究进展

衰老是机体代谢过程中的一个必然阶段，此时免疫系统发生了复杂的重塑，其中T淋巴细胞的变化最明显。通过对衰老时T淋巴细胞表面分子、T淋巴细胞亚群数量和功能的变化以及T细胞衰老分子基础的研究探讨，可为找到有效延缓免疫衰老的方法提供理论依据。     

肉苁蓉总苷对D-半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响

目的　研究肉苁蓉总苷对 D-半乳糖致衰老小鼠抗衰老作用的免疫学机制。方法　通过 3H- Td R掺入法测定淋巴细胞转化能力、中性红试验测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、免疫荧光法进行淋巴细胞亚群的检测、放免法测定外周血 IL- 2含量、微量 NAG酶释放法测定 NK细胞活性。结果　 D-半乳糖致衰小鼠免疫功能明显下降 ,表现为淋巴细胞转化能力、外周血 IL - 2含量、CD4 T细胞和 CD8 T细胞含量、腹腔巨噬细胞吞噬功能和 NK细胞活性均明显降低 (P<0 .0 5) ;肉苁蓉总苷能提高模型小鼠淋巴细胞转化能力、外周血 IL - 2含量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性、CD4 T和 CD8 T细胞含量 (P<0 .0 5)。结论　肉苁蓉总苷明显增强 D-半乳糖致衰老小鼠的免疫机能 ,使其恢复或接近了青年小鼠状态 ,具有延缓衰老的作用     

白藜芦醇对JurcatT细胞分化为Th1/Th2细胞作用的影响及机制

目的探讨白藜芦醇调节Jurkat T细胞分泌为Th1/Th2型细胞作用的影响。方法将不同浓度的白藜芦醇作用于受植物血凝素（PHA）刺激的Jurkat T细胞,于不同时间点分别用ELISA法检测Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-10;RT-PCR法检测T-bet和GATA-3 mRNA表达。结果白藜芦醇作用后IFN-γ、IL-10及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达均明显降低,具有浓度和时间依赖性。结论白藜芦醇对受PHA刺激的JurcatT细胞由Th0向Th1、Th2细胞分化起抑制作用。