延迟整流性K^＋通道在人肝癌细胞增殖中的作用

目的：研究延迟整流性Ｋ＾＋通道在人肝癌细胞增殖中的作用。方法：采用膜片钳技术的全细胞记录方式记录入肝癌细胞在不同浓度ＥＧＦ中延迟整流性Ｋ＾＋通道的跨膜电流。利用氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入技术观察ＥＧＦ和Ｋ＾＋通道阻断剂（ＴＥＡ）对人肝癌细胞ＤＮＡ合成的影响。结果：发现表皮生长因子（ＥＧＦ）促进肝癌细胞增殖的同时使肝癌细胞膜离子通道的跨膜Ｋ＾＋电流增加。Ｋ＾＋通道阻断剂四乙胺（ＴＥＡ）能显著抑制ＥＧＦ     

人肝癌细胞膜离子通道特性研究

目的：研究人肝癌细胞系ＢＥＬ７４０２细胞膜离子通道特性。方法：膜片钳技术的全细胞记录方式。结果：人肝癌细胞系ＢＥＬ７４０２细胞获得稳定高阻封接的最佳培养时间是细胞传代培养７２ｈ，细胞的静息膜电位为（－２２．２±－２．８）ｍＶ，几乎每一次记录都发现相似的跨膜电流，该跨膜电流具有电压依赖及不失活特性，翻转电位在－８０～－６０ｍＶ，能被已知的Ｋ＋通道阻断剂阻断。结论：在人肝癌细胞系ＢＥＬ７４０２细胞膜上存在类似于神经元和肌肉细胞的延迟整流性Ｋ＋通道。     

辐射增敏剂AK2123和辐射防护剂WR2721对受照人肝癌细胞DN…

目的：探讨辐射增敏剂ＡＫ２１２３和辐射防护剂ＷＲ２７２１对肝癌组织ＤＮＡ损伤与修复的影响。方法：用脉冲交变电泳法（ＰＦＧＥ）和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，测定上述两药物对受照人肝癌细胞ＤＮＡ双链断裂与修复及ＤＮＡ合成的影响。结果：在０￣８０Ｇｙ剂量范围内，随着辐射剂量增加，肝癌细胞ＤＮＡ残留率逐渐降低（１００％￣５７．０％），ＤＮＡｄｓｂ量亦逐渐增多，照前给ＡＫ２１２３或ＷＲ２７２１，均能显地降低ＤＮ     

人B淋巴细胞电压依赖性K^＋通道及ATP敏感性Cl^—通道的膜片钳研究

研究人Ｂ细胞电压依赖性钾通道（Ｋｖ） 及ＡＴＰ敏感性Ｃｌ－ 通道的存在及其调节。以人Ｂ细胞（Ｄａｕｄｉｃｅｌｌｓ）为研究对象,膜片钳技术做全细胞记录。结果表明,①全细胞ｖｏｌｔａｇｅｒａｍｐｐｒｏｔｏｃｏｌ 证实有Ｋｖ 通道的存在,该Ｋｖ 通道对钾通道阻断剂ｑｕｉｎｉｎｅ １００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 及ｃｈａｒｙｂｄｏｔｏｘｉｎ（ＣＴＸ）１００ｎｍｏｌ·Ｌ－ １ 敏感。②灌流液中加入ＡＴＰ１ｍｍｏｌ·Ｌ－ １ 后,Ｋｖ 失活,并激活一外向性整流电流。在有ｑｕｉｎｉｎｅ 或ＣＴＸ存在时,该外向性电流仍然存在,但可被Ｃｌ－ 通道阻断剂ＤＩＤＳ１００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 及Ｐ２ 受体阻断剂ｓｕｒａｍｉｎ １００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 阻断。③电极液中加入ＰＩＰ２ ５μｍｏｌ·Ｌ－ １ ,也可明显削弱该外向性电流。提示人Ｂ细胞膜上有Ｋｖ 通道及ＡＴＰ敏感性Ｃｌ－ 通道的表达,Ｐ２ 受体及ＰＩＰ２ 可能参与其信息转导过程。     

尼可地尔在抑制内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨丝裂素活化的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）,在ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制内皮素（ＥＴ－１）诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法：将１０~（－７）～１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ的尼可地尔导于培养血管平滑肌细胞,ＥＴ－１诱导培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法测定磷酸化 ＭＡＰＫ蛋白表达。［~３ Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞 ＤＮＡ合成。结果：ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞［~３Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入并同时剂量依赖性下调 ＭＡＰＫ蛋白表达。结论： ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔可通过下调ＭＡＰＫ的表达从而抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

G蛋白对血管紧张素Ⅱ抑制ECV304钙激活通道的调节效应

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）对人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ３０４大电导钙激活钾通道（ＢＫＣａ）的影响及Ｇ蛋白在此过程中的作用。方法 用细胞贴附式膜片箝技术记录ＢＫＣａ的活动电流。结果 １０＾－７ｍｏｌ／ＬＡⅡ可抑制ＥＣＶ３０４细胞膜上ＢＫＣａ的活动,表现为电流幅值下降,开放概率减小,通道开放时间缩短,关闭时间延长;Ｇ蛋白稳定激动剂ＧＴＰγＳ可对抗ＡⅡ的抑制效应,Ｇ蛋白稳定抑制剂ＧＤＰβＳ则增强ＡⅡ的     

HEK—293细胞α1B—肾上腺素受体引起的Ca^2＋依赖性K^＋电流 …

目的：研究ＨＥＫ－２９３细胞上α１Ｂ－肾上腺素受体亚型引起向外Ｋ＾＝电流和Ｃａ＾２＋内汉的特性。方法：细胞贴附式单通道记录Ｋ＾＋通道的Ｆｕｒａ－２荧光测定胞浆游离Ｃａ＾２＋浓度。结果：肾上腺素或苯肾上腺素可引发一电导为１６０ｐ;Ｓ的外向Ｋ＾＋电流。该电流可被５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１氯乙醛可乐定（ＣＥＣ）,５ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１依他本酸（ＥＧＴＡ）或２ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１四乙铵抑制。     

人外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道电流的记录及其特性

目的：观察人外周血淋巴细胞膜上电压依赖性通道的特性，方法：膜片钳记录方法。结果：观察到该 最小激活电压为－３８．６±２．１ｍＶ。复极过程中通道关闭常数为１０９．２５±８．５ｍｓ，并可被１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＴＥＡ所阻断。结论：人外周血淋巴细胞膜上存在着电压依赖性钾电流，其特性与神经和肌肉细胞膜上的延迟整流性钾电流相类似。     

辐射增敏剂AK2123和辐射防护剂WR2721对受照人肝癌细胞DNA双链断裂与修复的影响

目的：探讨辐射增敏剂ＡＫ２１２３和辐射防护剂ＷＲ２７２１对肝癌细胞ＤＮＡ损伤与修复的影响．方法：用脉冲交变电泳法（ＰＦＧＥ）和￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，测定上述两药物对受照人肝癌细胞ＤＮＡ双链断裂（ｄｓｂ）与修复及ＤＮＡ合成的影响．结果：在０～８０Ｇｙ剂量范围内，随着照射剂量增加，肝癌细胞ＤＮＡ残留率逐渐降低（１００％～５７．０％），ＤＮＡｄｓｂ量亦逐渐增多，照前给ＡＫ２１２３或ＷＲ２７２１，均能显著地降低ＤＮＡ残留率，使ＤＮＡｄｓｂ量增多，加重ＤＮＡ损伤（Ｐ＜０．０５）；２０Ｇｙ受照细胞保温０～１２０ｍｉｎ，在６０ｍｉｎ时ＤＮＡｄｓｂ开始被修复（Ｐ＜０．０５），而ＡＫ２１２３组为１２０ｍｉｎ（Ｐ＜０．０５），ＷＲ２７２１在３０ｍｉｎ后有修复的趋势；ＡＫ２１２３在６２．５～５００μｇ／ｍｌ内其参入率显著升高（Ｐ＜０．０５），呈促进ＤＮＡ合成作用，ＷＲ２７２１则随药物浓度增加其参入率降低（Ｐ＜０．０５），抑制ＤＮＡ合成．结论：ＡＫ２１２３和ＷＲ２７２１显著加重受照肝癌细胞的辐射损伤，促进ＤＮＡｄｓｂ量增加，抑制其修复过程．     

A COMPLEX OF INTERMEDIATE FILAMENT PROTEIN－DNA：A TARGET FOR AUTOANTIBODIES IN SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS？

ＡＣＯＭＰＬＥＸＯＦＩＮＴＥＲＭＥＤＩＡＴＥＦＩＬＡＭＥＮＴＰＲＯＴＥＩＮ－ＤＮＡ：ＡＴＡＲＧＥＴＦＯＲＡＵＴＯＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＩＮＳＹＳＴＥＭＩＣ　ＬＵＰＵＳＥＲＹＴＨＥＭＡＴＯＳＵＳ？ＹａｎＸｉｙｕｎ（阎锡蕴）；Ｓ．ＫｕｈｎａｎｄＰ．Ｔｒａｕ...     

钾离子通道在EGF引起细胞增殖中的作用

目的 :研究表皮生长因子 (EGF)对大鼠成骨肉瘤细胞钾离子通道活动的影响 ,探讨这种钾通道活动与细胞增殖的关系。方法 :采用膜片钳技术 ,在细胞贴附方式下用内面向外的方法记录。在含有EGF(10ng/ml)的无血清培养液中培养 2 4h后记录钾通道 ,同时用3 H -TdR掺入法及流式细胞仪测定DNA合成的变化并进行细胞周期分析。结果 :含有EGF的培养液培养细胞的钾通道电流较对照实验有明显增加 ,通道开放概率也增加。同时 ,EGF加入使细胞的3 H -TdR掺入率增加 6 4 91% ;进入S期细胞增加 35 %。在EGF作用的不同时期加入钾通道阻断剂 ,可以不同程度的抑制DNA合成 ,并且阻断剂加入时间越早 ,对DNA合成的抑制越强。结论 :钾通道在细胞进入S期或在S期的活动中起重要作用。阻断钾通道可以较明显地抑制DNA合成 ,揭示出钾通道的活动与DNA合成和细胞增殖有密切关系。     

IGF-1在成骨样细胞增殖中的作用及与钾离子通道的关系

目的 :研究胰岛素样生长因子 - 1(IGF - 1)促大鼠成骨样肉瘤细胞 (UMR10 6 )增殖作用及与钾离子通道活动的关系。方法 :采用磺基罗丹明 (SRB)染色法观察细胞增殖并用膜片钳技术记录细胞膜钾离子通道电流的变化。同时用3 H -TdR掺入测定DNA合成的改变。结果 :IGF - 1可以明显地促进UMR10 6细胞的增殖 ,且使3 H -TdR掺入率增加 93.5 7%。在含有生长因子IGF - 1(10 -8M)的培养液中培养 12h后 ,钾通道电流比对照有明显增加 ,而且用钾通道阻断剂后 ,3 H -TdR掺入率下降。结论 :IGF - 1可促进大鼠成骨样肉瘤的DNA合成和细胞增殖。且细胞膜钾通道的活动与此促增殖活动密切相关     

应用膜片钳制技术对豚鼠耳蜗外毛细胞高电导钾通道电生理特性的研究

为了研究耳蜗外毛细胞的基本电生理特性，应用细胞膜片钳制技术对豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜的高电导的钾通道进行了初步研究。结果显示，其高电导钾通道有以下典型特征：①具有明显的电压依赖性。在膜去极化时，通道被激活，其去极化程度越高，通道活动越强。在非对称性钾浓度梯度下，其反转电位为－３０ｍＶ，斜率电导约１３３±３ｐＳ（ｎ＝５）；②通道活动能被特异性阻断剂四乙胺（ＴＥＡ）在较高浓度下（＞１０ｍｍｏｌ／Ｌ）阻断，ＴＥＡ的阻断效应呈浓度依赖性；③胞浆内钙浓度的增高，能显著激活该通道，增加其开放概率和平均开放时间。上述结果表明：豚鼠耳蜗外毛细胞存在着高电导的电压依赖的钙激活的钾通道。该研究为进一步开展通道活动的调控，以及药物等因素对通道活动影响的研究，提供了有价值的资料。     

下调PI3K/Akt信号通路对抑制喉癌细胞生长的影响

目的 探讨钾通道阻断剂四乙胺(TEA)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对人喉癌上皮细胞(Hep-2)增殖与凋亡的影响.方法 将TEA作用于Hep-2,用噻唑蓝(MTT)法测定Hep-2细胞活性,计算出TEA对Hep-2的增殖抑制率;采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,用流式细胞仪(FCM)法测定Hep-2凋亡率.结果 5、10、20 mmol/L TEA接种后,Hep-2细胞增殖抑制率分别达到12.573%、31.385%和56.132%,Hep-2作用96 h后细胞凋亡率分别为(41.64±2.67)%、(58.76±4.32)%和(72.65±6.54)%,TEA处理组抑制率和凋亡率都高于未用TEA处理的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TEA可抑制Hep-2的增殖及体内生长,促进Hep-2的凋亡.     

Effect of Calmodulin and Voltage-dependent Ca~(2+) Channel on the Proliferation of Heptoma Cells Induced by Epidermal Growth Factor

Epidermal growth factor(EGF) has been impli-cated as a hepatotrophic factor during liver regenera-tion.EGF plays a role in the proliferation of hep-atoma cells.In general,EGF induces tumor cells di-vision and proliferation through a series of signaltransduction by binding with EGF receptor(EGFR)and activate its thyrosine protein kinase and therebyinducing phosphoration of itself and its protein sub-strate[1] .This postreceptorsingnal transduction isas-sociated with phosphoylinositolpathw…     

老年SD大鼠前列腺上皮细胞膜钾离子通道变化及意义

目的探讨雄性SD大鼠前列腺上皮细胞膜钾离子通道电流的变化和对钾通道阻断剂的反应。方法分别取3个月龄成年和12个月龄的老年SD大鼠的背外侧叶前列腺组织,剪成1—2mm^3大小,经消化、培养、免疫组鉴别,将形态正常、贴壁良好的腺上皮细胞用全细胞膜片钳模式记录钾通道电流。结果成年和老年SD大鼠的前列腺上皮细胞膜＋80mV钾电流密度分别为（10．84±1．54）pA／pF vs（18．48±1．7）pA／pF（n=20,P〈0．01）;钙激活型钾通道抑制剂（KCa通道）四乙胺（TEA）对老年大鼠峰电流阻断从19．1±2．9到7．2±3．2,KCa电流被抑制约63％;成年大鼠为9．5±1．8到5．4±3．1,KCa通道电流被抑制约44％。电压依赖型钾通道抑制剂4-AP（四氨基吡啶）对大鼠前列腺上皮细胞膜钾电流有显著阻断效应。结论老年大鼠的前列腺上皮细胞膜钾通道电流比成年大鼠显著增强,同时老年大鼠KCa通道电流对TEA更敏感。由此结果可推论老年大鼠的前列腺上皮细胞分泌功能是降低的。     

钾通道阻滞剂对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonia,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)的影响,并探讨人肺腺癌细胞株凋亡的机制.方法体外细胞培养法培养人肺腺癌细胞株,采用MTT法检测不同浓度4-AP、TEA对细胞增殖的影响.透射电镜、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况.比色法检测细胞内Caspase-3活性改变.结果不同浓度的4-AP、TEA作用于细胞48h后,与对照组相比各组吸光度值(A490)均明显降低(n=10,P＜0.001),并且呈浓度依赖关系.4-AP、TEA组的IC50为3.59mmol/L和3.97mmol/L.4-AP及高浓度的TEA使人肺腺癌细胞株细胞凋亡率增加.经4-AP、TEA处理48h的AGZY-83-a细胞内Caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(n=6,P＜0.001).结论钾通道阻滞剂4-AP、TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率与药物浓度正相关.诱导人AGZY-83-a细胞凋亡,4-AP和TEA诱导AGZY-83-a细胞凋亡的过程中细胞内Caspase-3活性增加.     

Effects of proglumide, a gastrin receptor antagonist, on human large intestine carcinoma SW480 cell line

OBJECTIVE To explore the effects of proglumide, a gastrin receptor antagonist, on the amount of viable cells, synthesis of DNA and protein, and cell proliferation cycle in human large intestine carcinoma SW480 cell line in order to provide experimental basis for treatment of large intestine carcinoma using proglumide.

METHODS Large intestine carcinoma SW480 cells at logarithmic growth stage were cultivated with different concentrations of proglumide for different periods of time, then the amount of viable cells was determined by MTT colorimetric analysis. The SW480 cells were cultivated with proglumide, pentagastrin, proglumide + pentagastrin for the same period of time, then the contents of DNA and protein and the cell proliferation cycle were determined by flow-cytometry.

RESULTS The amount of viable cells, synthesis of DNA and protein, distribution of cell cycle, and proliferation index (PI) in the proglumide group did not differ significantly from those in the pentagastrin group (P > 0.05). The amount of viable cells in the pentagastrin group was significantly higher than that in the pentagastrin group (P < 0.01). In the proglumide + pentagastrin group the amount of viable cells, synthesis of DNA and protein, amount of S and G2M phase cells, and PI were all significantly lower than those in the pentagastrin group (all P < 0.01), and the amount of G0/G1 phase cells was significantly higher than that in the pentagastrin group (P < 0.01), but none of the above differed from those in the control group (all P > 0.05).

CONCLUSIONS Proglumide has no obvious effect on the growth of human large intestine carcinoma SW480 cell line, but can inhibit the growth-promoting effect of pentagastrin on large intestine carcinoma cells. The mechanism may be that proglumide inhibits the promoting effect of pentagastrin on the synthesis of DNA and protein of carcinoma cells, and then inhibits carcinoma cell growth from G0/G1 phase to S and G2M phase.

     

血清饥饿和表皮生长因子上调人肝癌细胞表皮生长因子受体的研究

目的探讨血清饥饿以及EGF对人肝癌细胞EGFR表达的影响。方法用免疫组化方法研究血清饥饿、5ng／mlEGF和25ng／EGF对人肝癌细胞EGFR表达的影响。结果撤血清培养组、5ng／mlEGF和25ng／mlEGF刺激组人肝癌细胞EGFR的表达阳性细胞分别为(5.66±0.86)％、(10.67±1.26)％和(16.83±1.66)％,与正常对照组(1.81±0.75)％相比较差异显著(P<0.01),EGF刺激组比血清饥饿组明显增高(P<0.01)、25ng／mlEGF组比5ng／mlEGF组增高(P<0.01)。结论血清饥饿和EGF能明显增强人肝癌EGFR的表达,且EGF上调EGFR表达的作用具有剂量依赖效应。     

原代培养猪冠状动脉平滑肌的电压依赖和钙激活钾通道

目的：研究原代培养的猪冠状动脉平滑肌电压依赖性和钙激活外向钾通道的特性。方法：离子通道电流采用膜片钳技术进行记录。结果：在内面向外式膜片构型,当膜内外K^ 浓度梯度类似生理状态时,该通道单位电导值约为100pS,而当膜内外K^ 浓度为对称的140mM浓度时,该通道单位电导值约270pS。其平均电流显示该通道具时间和电压依赖性激活特性,而无任何时间和电压依赖性失活特性。另外,通道的开放时间常数和开放概率随除极及胞内Ca^2 的增加而显著增加。通过用EGTA降低胞浆内Ca^2 浓度,可使外向电流抑制。动力学分析显示通道激活时存在一种开放状态和至少两种关闭状态。四乙胺（TEA）可在胞外侧阻断该电流,但高达15mM的4－氨基吡啶（4－AP）在胞内外都对通道无影响。在全细胞构型,对细胞膜进行除极可引出宏观外向电流。随着细胞的除极,该电流的激活时间常数逐渐缩短,并显示快速激活动力学特性。结论：在原代培养的猪冠状动脉平滑肌上存在有电压依赖和Ca^2 激活的K^ 选择性离子通道。该类通道具有非常高的单位电导值,除极时快速开放,对胞内Ca^2 高度敏感,但无失活等特性。