抗青光眼眼表药物与人结膜成纤维细胞TGF-β、MMP的表达

目的:评估抗青光眼眼表药物对原发性开角型青光眼患者结膜成纤维细胞培养中转化生长因子β及基质金属蛋白酶表达水平的影响。方法:用逆转录-聚合酶链式扩增方法(RT-PCR)评估TGF-β的三种异形体(TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)以及MMP的三种异形体(MMP-2、MMP-3、MMP-9)在POAG患者的HTF中在mRNA水平上的表达;用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定经体内、体外抗青光眼眼表药物处理后的POAG患者的HTF细胞培养基中TGF-β1在蛋白水平上的表达。所有实验均以健康组作为对照。结果:TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3在mRNA水平上均被HTF表达,且青光眼组在TGF-β2和TGF-β3的mRNA水平上的表达均显著高于对照组。正常对照组在蛋白水平上未测定出转化生长因子β1的表达,青光眼组中转化生长因子β1的表达显著(P<0.01)。青光眼组与对照组的结膜成纤维细胞培养经过体外拉坦前列素滴眼液的处理后,条件培养基中的转化生长因子β1的表达水平相比较未被处理过的培养基中的表达水平显著提高约4倍(P<0.01),青光眼组与对照组相比较组间无差异。MMP-2和MMP-9在结膜成纤维细胞中均有表达,其中,青光眼组MMP-9的扩增产物中mRNA含量显著低于对照组,约为对照组的1/1000。结论:体内及体外实验中,青光眼组HTF细胞培养中在mRNA及蛋白水平上增高的TGF-β三种异形体的表达可能导致青光眼组HTF细胞增殖的提高;青光眼组HTF细胞培养中在mRNA水平上缺失的MMP-3和降低的MMP-9的表达可能导致POAG患者结膜下胶原增生,结膜瘢痕化;细胞增殖的提高以及变异的TGF-β与MMP的表达均可能与本研究中POAG患者至少1a的抗青光眼眼表药物的持续使用有关;而三者均会促进抗青光眼滤过术后的切口愈合,从而影响手术效果。     

TGF-β1对Tenon囊成纤维细胞增生和HSP47表达的影响

目的探讨转化生长因子B1（TGF-β1）对人Tenon囊成纤维细胞（HTF）增生和热休克蛋白47（HSP47）表达的影响。方法青光眼患者Tenon囊组织体外培养，用不同质量浓度0．01、0．1、1、5、10ng／mLTGF-β1处理细胞，继续培养24h，用MTT比色法检测吸光度值（A），用免疫细胞化学检测HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白含量，用实时荧光定量PCR检测HSP47和Ⅰ型胶原mRNA表达。结果TGF-β1能促进HTF的增生（P〈0．05），诱导HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白（P〈0．05），促进HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维mRNA（P〈0．05），其作用随TGF-β1质量浓度的增加而增强。结论TGF-β1通过促进HTF纤维增生，诱导下游介质HSP47和Ⅰ型胶原蛋白表达而促进HTF纤维化，可能是青光眼滤过手术后瘢痕形成的重要机制。     

转化生长因子—β与原发性开角型青光眼

转化生长因子－β（TGF－β）在人类几乎所有的细胞中均可发现，通过与受体结合，在细胞增殖、免疫、细胞外基质合成中，发挥着重要的生物学效应。本就TGF－β在原发性开角型青光眼的发病机制，滤过性手术术后瘢痕形成中所起作用的进展进行综述。     

转移生长因子-β2介导的小梁细胞纤维联结蛋白的mRNA及蛋白质的表达

目的探讨转移生长因子-β2（TGF—β2）对猪眼小梁细胞中纤维联结蛋白的mRNA及蛋白质表达的影响。方法经器官培养法（organ culture）2～3天后，分组的猪眼前段分别注入浓度为0．45ng／ml（原发性开角型青光眼前房水中TGF—β2的浓度）和0．18ng／ml（正常人眼前房水中TGF—β2的浓度）的活性TGF—β2，对照眼灌注不含TGF—β2的培养基，将猪眼前节经固定、石蜡包埋和切片，通过原位杂交和免疫组化的方法检测小梁网细胞中纤维联结蛋白的mRNA和蛋白质的表达，对照组采用同样的方法检测。结果在灌注含有0．45ng／ml活性TGF—β2的标本中，小梁细胞中纤维联结蛋白的杂交信号和免疫反应强度均呈强阳性，而在灌注含有0．18ng／ml TGF—β2的标本中，小梁细胞其杂交信号和免疫反应强度均较弱，在对照组中，杂交信号和免疫组化染色呈阴性。结论TGF—β2对灌注猪眼中小梁网的纤维联结蛋白的mRNA和蛋白质表达起正调节作用，表明猪眼小梁细胞合成的这种ECM（细胞外基质成分，即纤维联结蛋白）被房水中的TGF—β2调节，这个结论和我们以及其他研究者先前的假设是一致的，即浓度升高的活化TGF—β2可能在猪眼的小梁组织发生病理组织学改变中起着重要的作用。     

体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子—β2

目的：了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子－β2(Transforming growth factor-β2,TGF-β2)，以确定TGF-β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法：一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA，利用RT－PCR检测TGF－β2的m RNA, 用双链测序鉴定PCR产物，并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF－β2蛋白的表达。结果：RT－PCR扩增得到的单一产物，其序列与已知序列完全一致。TGF－β2免疫组化染色呈阳性。结论：小梁细胞自身产生的TGF－β2，是小梁网局部微环境和房水中TGF－β2的来源之一，TGF－β2不仅通过旁分泌式，也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF－β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关，值得进一步研究。     

TGF-β的生物学特性及其在青光眼中的作用

转化生长因子-β(TGF-β)是一种具有多种生物学效应的细胞因子,在眼中许多组织均可分泌及表达。人眼中主要表达TGF-β2。TGF-β可促进细胞外基质和成纤维细胞的增生,在原发性开角型青光眼的发病机制及青光眼滤过术后伤口愈合过程中均起重要作用。     

维拉帕米对牛眼小梁细胞表达转化生长因子-β的影响

目的　研究维拉帕米 (Verapamil)在抑制牛眼小梁细胞 (BTMC)合成细胞外基质 (ECM )的同时 ,对BTMC表达转化生长因子 β1(TGF β1)、TGFβ2 的影响。方法　采用半定量RT PCR和免疫组化结合计算机图像分析技术分别检测等于和低于 0 0 1mg/mLVerapamil对BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA。结果　 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/mLVerapamil可质量浓度依赖性抑制BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA(P <0 0 5 ) ,且 0 0 1mg/mLVerapamil可完全抑制TGF β1的蛋白合成 ,同样质量浓度的Verapamil对TGF β1的抑制程度要大于TGF β2 (P <0 0 5 )。结论　Verapamil抑制BTMC合成ECM的机制可能为抑制TGF β表达 ,这种抑制是在转录水平上 ,且对TGF β1的抑制可能在其中起主要作用。此外 ,TGF β可通过自分泌方式作用BTMC ,促进ECM的合成 ,进一步为Verapamil在发病学环节上防治原发性开角型青光眼提供实验依据。     

基质金属蛋白酶（MMP-3）及其抑制剂（TIMP-2）在长期使用抗青光眼药物的结膜TENON＇S囊中的表达

目的研究长期应用眼表抗青光眼药物后人的Tenon＇s囊的成纤维细胞中基质金属蛋白酶（MMP-3）及其抑制剂（TIMP-2）的表达,以了解长期局部应用抗青光眼药物后结膜下组织的病理改变。方法收集长期应用抗青光眼药物及无长期应用抗青光眼药物在小梁切除术中切除的结膜及结膜下组织各20例（20只眼）,进行HE染色和马松染色后,在光镜下观察组织学形态,筛选组织标本,进行免疫组织化学检查。结果两组在年龄、性别、诊断之间无差异。用药组A组：用药时间13年;未用药组B组：用药时间790 d。小梁切除术前用两种抗青光眼药的患者为15例,3种以上的患者为5例,未用抗青光眼药的患者20例,用药1年以上的患者20例。在光镜下观察HE和马松染色显示：长期应用抗青光眼药结膜上皮排列不规则,浅基质层为增生的胶原纤维和大量的新生血管伴有炎细胞浸润。在免疫组织化学染色切片,两种抗体染色阳性细胞浆呈程度不同、基本均色棕黄色粗大颗粒反应,反之则为染色阴性。MMP-3和TIMP-2在A、B两组间的表达有差异,P〈0.01,有统计学意义。结论长期应用眼表抗青光眼药物后人的Tenon＇s囊的成纤维细胞中MMP-3及其TIMP-2的表达异常,其临床意义在于长期应用局部抗青光眼药物可以增加组织的改变和增加滤过手术术后的瘢痕形成。     

曲古抑菌素A对人Tenon囊成纤维细胞作用的研究

目的：研究曲古抑菌素A( trichostatin A,TSA)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞( human Tenon capsule fibroblast, HTF)增殖能力以及组蛋白去乙酰化酶1( histone deacetylase 1,HDAC1)和HDAC2蛋白表达的影响。
　　方法：取青光眼滤过术中Tenon囊组织进行HTF体外培养。选取第3~6代细胞进行实验。设置空白对照组及TSA组(600nmol/L TSA加入培养液中),分别于培养后1,2,3 d应用 MTT法检测细胞活力变化;以600 nmol/L TSA处理 HTF 2 d 后, Western blot 法检测细胞中 HDAC1和HDAC2蛋白的表达。
　　结果：与对照组比较,TSA作用1d后HTF活力下降,呈时间依赖性,具有统计学差异( P<0.05)。 TSA处理HTF后2d,Western blot法检测HDAC1和HDAC2蛋白表达受到明显抑制。
　　结论：TSA可以通过抑制HDAC1和HDAC2的表达量,抑制人Tenon囊成纤维细胞增殖,从而减少术后结膜瘢痕形成可能。     

TGF-β2反义寡核苷酸抑制抗青光眼术后滤过泡瘢痕的实验研究

目的观察TGF-β2反义寡核苷酸对青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生的影响。方法制备兔青光眼滤过手术模型。右眼结膜下注射TGF—β2反义寡核苷酸（A组）；左眼分别注射TGF-β2错义寡核苷酸（B组）、PBS（C组），于造模后第4、7、14、28d取术区结膜囊标本进行免疫组织化学染色和电镜观察。结果A组眼压术后第14d和第21d比B组（P〈0．01）和C组（P〈0．05）显著降低；滤泡平均生存时间A组（17．2d）较B组（14．5d）、C组（13．5d）明显延长（P〈0．05）；A组α—SMA和PCNA阳性成纤维细胞数明显少于B、C组；成纤维细胞的超微结构A组和B、C组比较无明显区别。结论TGF-β2反义寡核苷酸可降低兔青光眼滤过术后眼压，延长滤泡生存时间，抑制兔青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生。     

曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞TGF-β1，2 mRNA表达的影响

目的观察曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞(human tenon fibroblast,HTF)TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达的影响.方法体外进行HTF细胞原代及传代培养.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),研究不同浓度和不同作用时间的曲尼斯特对HTF细胞TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达的影响.结果曲尼斯特作用24 h后,25.0、50.0、100.0 mg/L浓度曲尼斯特组与对照组相比均能够明显下调HTF细胞TGF-β1(P＜0.05、0.05、0.01)和TGF-β2(P＜0.01、0.05、0.01)mRNA表达.50.0 mg/L曲尼斯特处理12 h、24 h、48 h组相对于相应时间对照组,能够明显下调HTF细胞TGF-β1(P＜0.05、0.01、0.01)和TGF-β1(P＜0.01、0.01、0.01)mRNA表达.结论 曲尼斯特能够下调体外培养HTF细胞TGF-β1、TGF-β2 mRNA的表达,下调效应随药物浓度和作用时间的延长而加强.(中国眼耳鼻喉科杂志,2006,681～83)     

高度近视与原发性开角型青光眼关系的研究进展

临床和实验研究均发现,青光眼患者近视发生率高于非青光眼人群。反之,近视,尤其高度近视（high myopia,HM）人群较其它人群更常伴有青光眼。当HM与原发性开角型青光眼（primary open—angle glaucoma,POAG）并存时,病情变得尤其复杂。两者发病机制之间的关系,目前在分子和基因水平的研究重点是：胶原基因学说和升压基因学说。从病理学角度讲,高度近视与青光眼都是胶原病变;此外,二者的小梁网细胞在糖皮质激素诱导下易表达特异性蛋白,这可能与高度近视、原发性开角型青光眼的TIGR（trabecular meshwork induced glucocorticoid response protein）基因突变有关。本文从流行病学、发病机制、临床特征及诊断注意要点等方面对高度近视与原发性开角型青光眼的关系及研究进展进行综述。     

高度近视与原发性开角型青光眼

临床上发现高度近视与原发性开角型青光眼密切相关，其可能的机制有：（1）升压基因学说；（2）胶原基因学说。高度近视眼与原发性开角型青光眼对糖皮质激素反应增高表明，二的基因在糖皮质激素诱导下最易表达特异性蛋白，这可能与高度近视，原发性开角型青光眼的TIGR基因突变有关。本从流行病学、临床特征及诊断，遗传学说及机制等方面对高度近视与原发性开角型青光眼的关系及研究进展进行综述。     

人Tenon囊成纤维细胞的体外培养及增殖能力研究

目的:离体培养人Tenon囊成纤维细胞(HTF)并观察细胞增殖能力。方法:取斜视患者手术切除Tenon囊组织进行成纤维细胞原代培养,培养的细胞通过免疫荧光染色法进行鉴定。CCK-8法描述细胞生长曲线,测定细胞活力。流式细胞术分析细胞周期,计算增殖指数。结果:通过组织块法成功培养出HTF。不同代次原代培养的HTF之间增殖能力无明显统计学差异(P>0.05)。结论:HTF在体外易于培养,经过数次传代,增殖能力稳定,是进行Tenon囊抗纤维化研究的良好靶细胞。     

TGFβ/Smads信号传导通路与眼部疾病

转化生长因子β是目前公认的与创伤愈合和纤维化关系最为密切的生长因子,Smad蛋白家族是TGFβ细胞内信号传导的重要因子.TGFβ/Smads信号传导系统在角膜的形成发育、角膜和晶状体创伤后的修复、后发性白内障、原发性开角型青光眼、增生性视网膜病变以及青光眼滤过性手术后瘢痕化形成中均起着至关重要的作用.通过调节Smad蛋白可以影响眼部组织的创伤愈合和纤维化程度.本文就TGFβ/Smads信号传导通路与相关眼部疾病作一综述.     

自适应光学系统在青光眼视网膜毛细血管中的观察

目的以自适应光学系统观测青光眼患者的视网膜毛细血管特征。方法用37单元活体人眼视网膜高分辨率成像系统，对18岁以上原发性开角型青光眼患者和健康对照者的视网膜毛细血管，以中心小凹向下旁开1°的位置进行成像，比较其成像结果和数据，并进行统计学检验。结果健康对照组清晰成像者5例，原发性开角型青光眼组4例。健康对照组的平均毛细血管直径（5.39μm）大于原发性开角型青光眼组（3.9μm），差异有统计学意义（P=0．047）。两组的血管总长度及血管条数未见明显差别。结论黄斑区视网膜毛细血管在原发性开角型青光眼患者中变细，这可能是血管自我调节异常的一种表现。     

Ahmed青光眼阀植入术后早期低眼压的预防

近三年来对既往小梁切除术失败的青光眼患者31例（原发性开角型青光眼14例;原发性闭角型青光眼9例;先天性白内障术后继发性青光眼3例;外伤性青光眼2例;异色性虹膜睫状体炎继发性青光眼1例;新生血管性青光眼2例）行Ahmed青光眼阀（依据成人或儿童选择AGV-S2或AGV-S3型）植入术。手术方法：球周麻醉,于颞上象限做以穹窿为基底的结膜瓣,上、外直肌缝线牵引,     

反义c—myc寡核苷酸对培养的人结膜成纤维细胞增生的抑制作用的观察

目的：研究反义寡核苷酸能否对闭原癌基因c-myc的表达并抑制培养的人结膜成纤维细胞的增生，为青光眼滤过术后滤过泡的瘢退化探索新的治疗途径。方法：取人结膜下筋膜进行成纤维细胞的培养，脂质体Lipofectamine^TM 2000的介导下分别将正义c-myc,反义c-myc转入细胞中，MTT法检测其对细胞增生活性的影响，RT－PCR扩增检测其对细胞mRNA表达水平的影响。结果：反义c-myc能显抑制培养的人结膜成纤维细胞的增生，并抑制其c-myc mRNA的表达，而正义c-myc无此作用，反义c-myc的最适浓度为2uM。结论：反义c-myc通过阻断人结膜成纤维细胞中原癌基因c-myc表达来抑制细胞的增生。     

原发性开角型青光眼患者房水内皮素的检测

目的 探讨内皮素在原发性开角型青光眼发病中的作用。方法 应用放射免疫分析法对３０例原发性开角型青光眼患者和１５例对照组房水中ＥＴ含量进行测定。结果 青光眼患者组房水ＥＴ含量明显高于对照组房水ＥＴ含量（Ｐ〈０．０５）。结论 开角型青光眼患者的眼局部ＥＴ分泌过多。内皮素可能在原发性开角型青光眼的发病机制中起作用。     

体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子-β_2

目的 :了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子 β2 (Transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 ) ,以确定TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法 :一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA ,利用RT PCR检测TGF β2 的mRNA ,用双链测序鉴定PCR产物 ,并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF β2 蛋白的表达。结果 :RT PCR扩增得到的单一产物 ,其序列与己知序列完全一致。TGF β2 免疫组化染色呈阳性。结论 :小梁细胞自身产生的TGF β2 ,是小梁网局部微环境和房水中TGF β2 的来源之一 ;TGF β2 不仅通过旁分泌方式 ,也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关 ,值得进一步研究。