大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。     

孤啡肽对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的研究孤啡肽对白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法选择人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60为实验模型,应用MTT比色法、形态学观察及流式细胞术(FCM)等方法对孤啡肽诱导其凋亡情况进行研究。结果孤啡肽能显著抑制HL-60细胞增殖,使细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率增加,FCM DNA直方图上G_0/G_1峰前有明显的亚二倍体凋亡峰,表明孤啡肽能明显抑制HL-60细胞的生长,诱导其发生凋亡,且存在时间依赖性,而剂量依赖性不明显。结论孤啡肽对HL-60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用。     

熊果酸对HL-60细胞株凋亡及Bcl-2和bax表达的影响

目的探讨熊果酸(UA)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡作用,并观察Bcl-2和bax基因表达的影响。方法体外培养HL-60细胞。MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期分布;Western Blot分析Bcl-2和bax基因表达。结果 UA显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性;UA呈浓度依赖性诱导HL-60细胞凋亡,明显阻滞于细胞周期G1期;UA以浓度依赖方式下调Bcl-2蛋白表达和上调bax蛋白表达。结论 UA抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制与下调Bcl-2上调bax蛋白表达相关。     

四嗪二甲酰胺对白血病细胞株HL-60体外作用的研究

目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化。结果:ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力,10 ng.ml-1ZGDHu-1作用HL-60细胞24~72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率分别为(7.3±0.3)%、(15.8±1.0)%和(21.3±1.2)%,均显著高于对照组(P<0.01);48 h、72 h的IC50分别为180、180 ng.ml-1。HL-60细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;出现典型的细胞形态改变,DNA片端化,经50~1 000 ng.ml-1的ZGDHu-1作用后,SubG1由(3.2±1.6)%上升至(67.7±5.9)%,与对照组(0.7±0.5)%比较,具有显著性差异(P<0.05),Annexin-V/PI标记升高,TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡。HL-60细胞经10~100 ng.ml-1ZGDHu-1作用3 d后,细胞发生部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加。ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas表达增强,而P53表达无变化。随ZGDHu-1作用的浓度增加,ΔΨm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论:ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力,低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化,高浓度时促进细胞凋亡,其机制可能与Bax表达上调,线粒体膜电位下降等有关。     

人参皂甙Rg1诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的探讨人参皂甙Rg1对急性早幼粒细胞性白血病细胞HL-60的增殖抑制作用以及对细胞周期和凋亡的影响。方法采用MTT法测定药物对细胞的抑制率,通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡,应用流式细胞仪进行细胞周期分析。结果人参皂甙Rg1呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖,48 h后抑制50%细胞生长的药物浓度(IC50)为85μg±25μg。流式细胞仪分析结果显示25~400μg/m l人参皂甙Rg1作用于HL-60细胞24-72 h后,呈剂量依赖性的将细胞阻滞于G1期,使G1期不能运行到S期,从而影响了肿瘤细胞的有丝分裂,并且在低于G0/G1期出现典型的凋亡峰。细胞形态学观察可见分裂细胞以及凋亡细胞。结论人参皂甙Rg1能够抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞的增殖,诱导G1期阻滞及细胞凋亡。     

人参皂甙Rg1诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的探讨人参皂甙Rg1对急性早幼粒细胞性白血病细胞HL-60的增殖抑制作用以及对细胞周期和凋亡的影响.方法采用MTT法测定药物对细胞的抑制率,通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡,应用流式细胞仪进行细胞周期分析.结果人参皂甙Rg1呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖,48 h后抑制50%细胞生长的药物浓度(IC50)为85 μg±25 μg.流式细胞仪分析结果显示25～400 μg /ml人参皂甙Rg1作用于HL-60细胞24-72 h后,呈剂量依赖性的将细胞阻滞于G1期,使G1期不能运行到S期,从而影响了肿瘤细胞的有丝分裂, 并且在低于G0/G1期出现典型的凋亡峰.细胞形态学观察可见分裂细胞以及凋亡细胞.结论人参皂甙Rg1能够抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞的增殖,诱导G1期阻滞及细胞凋亡.     

G-CSF对VP16诱导白血病细胞凋亡及Survivin mRNA表达的调控作用

目的：探讨粒细胞集落刺激因子（G—CSF）对足叶乙甙（VP16）诱导白血病细胞凋亡以及Survivin基因表达的影响。方法：用HL-60白血病细胞株进行传代培养，通过DNA凝胶电泳和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，用RT—PCR方法检测Survivin基凶表达。结果：VP16可诱导HL-60细胞凋亡，下调Survivin表达：G—CSF可上调SurvivinmRNA表达，与VP16联合应用时，细胞凋亡率低于单独应用VP16组（P〈0．01），Survivin mRNA表达水平高于单用VP16组（P〈0．01）。结论：VP16诱导白血病细胞凋亡可能与其抑制Survivin表达有关；G—CSF能抑制VP16的促凋亡作用。     

8-硝基白杨素诱导HL-60细胞凋亡和抑制增殖与PTEN-Akt途径的相关性研究

目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡的作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养HL-60细胞;MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术定量分析细胞凋亡程度;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.Western Blot分析HL-60细胞PTEN、P-Akt蛋白表达的影响.结果 NOChR可显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性,IC50为1.34 μmol;NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,且呈浓度和时间依赖性.NOChR以浓度和时间依赖方式上调HL-60细胞PTEN蛋白的表达和抑制P-Akt蛋白的表达,其作用可被PPARγ特异性阻断剂GW9662(10μmol)预孵育拮抗.结论 NOChR诱导HL-60细胞凋亡作用与其活化PPARγ、上调PTEN蛋白表达、抑制Akt磷酸化相关.     

异十三基二乙胺诱导HL-60细胞凋亡及其作用机制

目的探讨异十三基二乙胺(D-108)体外诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡及其作用机制。方法应用生长曲线法检测D-108对HL-60细胞生长抑制作用;相差显微镜观察药物对HL-60细胞促凋亡形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期改变;DNA琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡"梯状"DNA;比色法测定caspase-3,8,9酶活性:结果D-108显著抑制HL-60细胞生长,作用呈浓度及时间依赖性。HL-60细胞经D-108处理后,呈典型凋亡形态学改变,出现亚二倍体细胞峰及DNA梯状条带。caspase-3,9酶活性显著升高(P<0.01),而对caspase-8酶活性无明显影响。结论D-108在体外能有效诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能通过线粒体凋亡途径。     

大蒜素对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的通过观察中药大蒜素(allicin)对人髓系白血病细胞株HL-60增殖、凋亡及bcl-2mRNA表达的影响,探讨大蒜素的作用机制。方法采用MTT法绘制细胞生长曲线;TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR法检测大蒜素作用后不同时间段bcl-2mRNA表达水平的变化。结果大蒜素对HL-60细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性,并能抑制HL-60细胞集落形成。较低浓度大蒜素即可抑制HL-60细胞增殖。作用24hTUNEL法检测到凋亡细胞;细胞凋亡率呈药物浓度依赖性且使bcl-2/bax下调。大蒜素作用HL-60细胞后,bcl-2mRNA表达水平有不同程度下调,并呈剂量依赖性。结论大蒜素能够有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡;bcl-2表达水平下调可能参与了该过程。     

毛兰素诱导人白血病HL—60细胞的凋亡

目的：研究毛兰素对HL－60细胞增殖的抑制作用,探讨其诱导细胞凋亡的机制。方法：用MTT比色法测定了毛兰素对HL－60细胞增殖的抑制作用：应用荧光显微镜、透射电镜、DNA电泳及流式细胞仪观察了药物对细胞凋亡的诱导作用,并用免疫组化的方法从基因水平阐述了凋亡的发生。结果：毛兰素20－81．9nmol/L在72h内显著抑制HL－60细胞增殖,作用24h后,对HL－60细胞的IC50为38nmol/L,而阳性对照药长春新碱对HL－60细胞的IC50为101nmol/L,前者明显优于后者;形态学观察可见凋亡的特征性改变;琼脂糖电泳出现典型的DNA“ladder”;流式细胞仪结果表明细胞被阻滞于G2／M期;免疫组化可见bcl-2表达下降,bax表达升高。结论：毛兰素显著抑制HL－60细胞的生长,该抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡和改变HL－60细胞bcl-2和bax基因的表达而实现的。     

Cell cycle phase specificity in the potentiation of etoposide-induced DNA damage and apoptosis by KN-62, an inhibitor of calcium-calmodulin-dependent enzymes

The cell cycle phase-dependent induction of DNA damage and apoptosis by etoposide (VP-16) and its modulation by 1-[N,O-bis(1, 5-isoquinolinesulfonyl)-N-methyl-l-tyrosyl]-4-piperazine (KN-62), an inhibitor of calcium-calmodulin-dependent enzymes, were examined in sensitive (HL-60/S) and VP-16-resistant (HL-60/DOX0.05) HL-60 cells. Cells from exponential-phase cultures were enriched by centrifugal elutriation into G(1), S, and G(2)+M fractions. Modulation of VP-16-induced apoptosis by KN-62 in HL-60/S cells was apparent only in the S phase at the IC(50) concentration. However, in the HL-60/DOX0.05 cells, significant (P < 0.001) potentiation of VP-16-induced apoptosis by a non-cytotoxic concentration of 2 microM KN-62 was apparent in cells in the G(1), S, and G(2)+M phases, as well as over the entire concentration range tested. VP-16-induced apoptosis and its potentiation by a non-cytotoxic concentration of 2 microM KN-62 were correlative with drug-stabilized DNA cleavable complex formation based on a band depletion assay. In agreement with the results on apoptosis in the resistant HL-60/DOX0.05 cells, the enhanced depletion of the alpha and beta isoforms of topoisomerase II by VP-16 + KN-62 was observed in G(1), S, and G(2)+M cells. Results suggest that the effects of KN-62 in reversing resistance are based on its role as a potent sensitizer of VP-16-induced DNA damage and apoptosis in a cell cycle phase-independent manner.     

Preparation and evaluation of tributyrin emulsion as a potent anti-cancer agent against melanoma

Histone deacetylase inhibitors such as butyrate are known to exhibit anti-cancer activities in a wide range of cancer including melanoma. In spite of these potencies, butyrate is not practically used for cancer treatment due to its rapid metabolism and very short plasma half-life. Tributyrin, a triglyceride analog of butyrate, can act as a pro-drug of butyrate after being cleaved by intracellular enzymes. The present study sought to investigate a possibility to develop tributyrin emulsion as a potent anti-cancer agent against melanoma. Mixture of Tween80 and 1, 2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine as a surfactant to disperse tributyrin produced homogeneous emulsions with nanometer sizes, even without a harsh homogenization procedure. Tributyrin emulsion was more potent than butyrate in inhibiting the growth of B16-F10 melanoma cells. Accumulation of cells at sub G(0)/G(1) phase and the DNA fragmentation induced by tributyrin emulsion treatment revealed that tributyrin emulsion inhibited the growth of B16-F10 cells by inducing apoptosis. Treatment with tributyrin emulsion suppressed the colony formation of melanoma cells in a dose-dependent manner. Furthermore, after intraperitoneal administration into mice, tributyrin emulsion inhibited the formation of tumor colonies in the lung following intravenous injection of melanoma cells. Taken together, our data suggests that tributyrin emulsion may be developed as a potent anti-cancer agent against melanoma.     

Tartary buckwheat flavonoid activates caspase 3 and induces HL-60 cell apoptosis

It has been proposed that flavonoids may have potential as anticancer agents. In this study, we showed that tartary buckwheat flavonoid (TBF) obviously inhibits the growth of human acute myelogenous leukemia (AML) HL-60 cells by MTT assay. The inhibitory effect of TBF on the proliferation of HL-60 cells is related to the induction of apoptosis, which is confirmed by DNA ladder formation on gel electrophoresis and apoptosis morphological changes under light microscope. Furthermore, HL-60 cells undergo rapid apoptosis upon treatment with TBF, as indicated by increased annexin V binding capacity and caspase 3 activation with flow cytometric analysis. Thus, our data provide a potential mechanism for the chemopreventive activity of tartary buckwheat flavonoid and suggest that it may have a potentially therapeutic role for human leukemia.     

中华眼镜蛇毒诱导HL-60细胞凋亡及其机制探讨

目的　观察中华眼镜蛇毒体外对白血病细胞凋亡的影响 ,并探讨其可能的作用机制。方法　本研究采用血清药理学方法 ,以人白血病细胞HL 60细胞为靶细胞 ,通过流式细胞仪分析、DNA片段凝胶电泳、免疫组织化学 (S P法 )观察中华眼镜蛇毒兔血清体外对细胞凋亡的诱导作用及癌基因表达的影响。结果　经DNA电泳、流式细胞仪分析显示 :中华眼镜蛇毒兔血清与HL 60细胞共同培养 48h可诱导其细胞凋亡增加 ,bcl 2、c myc基因蛋白表达下调。结论　中华眼镜蛇毒兔血清体外抑制HL 60细胞增殖可能与其诱导细胞凋亡及使细胞bcl 2、c myc基因蛋白表达下调密切相关     

Chromene induces apoptosis via caspase-3 activation in human leukemia HL-60 cells

In this study, the potent anti-tumor effects of brown algae on human leukemia HL-60 cells were investigated. The Sargassum siliquastrum extract among the 14 species of brown algae exhibited profound growth inhibitory effect on HL-60 cells in the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, therefore, S. siliquastrum was selected for use in further experiments. The highest inhibitory activity of S. siliquastrum on HL-60 cells was detected in the chloroform fraction, and the active compound was identified as a kind of chromene, sargachromanol E (SE). SE treatment showed significant growth inhibitory effects on HL-60 cells in a dose-dependent manner by inducing apoptosis, as evidenced by the formation of apoptotic bodies, fragmented DNA ladder, and the accumulation of DNA in the sub-G₁ phase of cell cycle. SE induced apoptosis was accompanied by downregulation of Bcl-xL, upregulation of Bax, activation of caspase-3, and cleavage of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP). Moreover, z-DEVD-fmk, a caspase-3 inhibitor, significantly inhibited cell cytotoxicity, apoptotic characteristics such as apoptotic bodies, sub-G₁ DNA content, and cleavage of PARP induced by SE. These results suggest that SE exerts its growth inhibitory effects on HL-60 cells through caspase-3-mediated induction of apoptosis. Therefore, SE offers promising chemotherapeuric potential to prevent cancers such as human leukemia.     

3''取代吲哚类衍生物诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：研究3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺诱导HL-60细胞凋亡的作用机制。方法：用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺对HL-60细胞的凋亡诱导作用,检测天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8和Caspase-3活性来研究其对HL-60细胞的凋亡诱导途径,并通过间接免疫荧光技术检测其对Bcl-2表达的影响。结果：1．8％DNA琼脂糖凝胶电泳可观察到清晰的“DNA ladder”,流式细胞仪检测3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺对HL-60细胞具有明显的凋亡诱导作用。Caspase活性检测表明,Csapase-3活性明显升高而Caspase-8活性无明显变化。流式细胞仪分析表明Bcl-2的表达随着受试物浓度的升高而下降。结论：3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺可诱导HL-60细胞凋亡,其诱导凋亡与Bcl-2表达及Caspase-3活性有关。     

梁金菇多糖促人急性早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)细胞凋亡研究

目的 :观察梁金菇多糖对人类早幼粒细胞白血病细胞系 (HL 6 0 )是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究半胱天冬酶 3(Caspase 3)基因在此过程中的作用。方法 :四氮唑蓝比色法 (MTT法 )观察梁金菇多糖对HL 6 0细胞的抑制率 ,应用形态学、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测凋亡相关基因Caspase 3mRNA表达的变化。结果 :梁金菇多糖对HL 6 0细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡 ;在HL 6 0细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Caspase 3转录水平比用药前增强。结论 :梁金菇多糖促HL 6 0细胞凋亡 ,且与Caspase 3基因表达有关