马兜铃酸致肾小管上皮细胞损伤中p53和Caspase-3活性的变化

目的：研究马兜铃酸（AA）对人近端肾小管上皮细胞（HK-2）毒性作用中053和Caspase-3活性的改变,对其在AA肾毒性作用中的意义进行探讨．方法：用乳酸脱氢酶（LDH）释放试验测AA对HK-2的直接毒性作用,相差显微镜观察细胞形态学改变,Hoechsd3258染色法观察细胞凋亡形态的改变,流式细胞技术测细胞凋亡百分率,RT-PCR法测p53mRNA的表达水平,分光光度法测细胞Caspase-3活性改变．结果：AA浓度为80,160mg／L时,LDH释放率显著增高（P〈0．01）;10mg／LAA可诱导HK-2细胞凋亡百分率显著增高,AA为40mg／L时,细胞凋亡形态改变最明显和细胞凋亡比例最高（P〈0．01）;各组HK-2细胞053mRNA表达水平有统计学差异;40mg／LAA诱导HK-2细胞凋亡时,细胞内Caspase-3活性显著升高（与正常组比较,P〈0．01）．结论：AA能诱导HK-2细胞凋亡,其凋亡途径可能是非053依赖途径;凋亡过程中存在Caspase-3酶的激活．     

大黄素诱导人肾上皮HK-2细胞凋亡及内质网应激的介导作用

目的 研究大黄素诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡的作用及其机制是否与内质网应激有关。方法 不同浓度大黄素处理HK-2细胞不同时间。MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、转录激活因子3（ATF3）和X盒结合蛋白1（XBP1）的基因表达,Western blotting法检测caspase-3、GRP78、CHOP、真核生物启动因子2α（eIF2α）的蛋白表达。结果 大黄素以浓度相关方式降低HK-2细胞存活率,诱导caspase-3剪切。RT-PCR检测表明,大黄素能诱导内质网相关基因GRP78、CHOP、ATF3基因表达,Western blottinh检测结果进一步证实大黄素能诱导GRP78、CHOP的蛋白表达。大黄素还明显诱导eIF2α磷酸化和XBP1 mRNA剪切。在大黄素给药之前给予内质网应激干扰药4-苯基丁酸和salubrinal,能增加HK-2细胞的存活率。结论 大黄素能诱导HK-2凋亡,内质网应激参与了大黄素诱导HK-2细胞凋亡的作用。     

半胱氨酸蛋白酶在EPA和DHA抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的探讨ω3多不饱和脂肪酸抑制HL60细胞增殖与半胱氨酸蛋白酶(caspases)之间的关系。方法用6.0×10-5mol/L二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸处理HL60细胞,运用MTT比色法、流式细胞仪分析ω3脂肪酸对HL60细胞增殖能力和凋亡的影响,RTPCR和免疫印迹技术分析细胞caspase3、caspase8基因的表达变化,激酶活性分析检测caspase8活性。并观察caspases特异性抑制剂对ω3脂肪酸引起的HL60细胞生长抑制的拮抗作用。结果HL60细胞经ω3多不饱和脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并检测到约6%的凋亡率,caspase3、caspase8基因表达增加,caspase8活性升高。caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸对HL60细胞的增殖抑制作用。结论ω3脂肪酸可以抑制HL60细胞增殖,并诱导细胞凋亡,而上调caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。     

PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.     

Caspase3在哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的 探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用；应用DNA片段分析、流式细胞术观察细胞凋亡；半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)基因表达水平；应用westernblot测定caspase3的活性亚单位；比色法检测caspase3活性。结果 哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，在细胞凋亡过程中，caspase3活性明显升高。结论 caspase3活化参与了哇巴因诱导Jurkat细胞的凋亡过程。     

抑制端粒酶活性引起肝癌细胞凋亡的caspase机制探讨

目的 本文探讨hTERTp-TK/GCV系统诱导HepG2细胞凋亡的caspase分子机制.方法 hTERTp-TK/GCV转染HepG2,免疫印迹技术检测caspase-3,8,10,survivin活化裂解情况;MTT法检测caspase-8,3,10抑制剂对hTERTp-TK/GCV诱导HepG2细胞调亡的抑制作用.结果 免疫印迹技术结果显示随时问延长,caspase-8、3酶原逐渐减少、活化片断增多,caspase-10酶原无明显改变,survivin则逐渐减少;caspase-8抑制剂能明显抑制hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡,其抑制作用大于caspase-3抑制剂.结论 hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡主要是激活了细胞凋亡死亡受体途径上游的caspase-8引起的,同时还涉及caspase家族其它成员,caspase-10没有参与此调亡过程,此外还涉及survivin的活性减少.     

ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α对MCF-7细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨半胱氨酸蛋白酶(caspase)在ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α诱导MCF-7细胞凋亡过程中的作用.方法带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNF-α表达载体转染MCF-7细胞,经ω-3脂肪酸处理后,MTT比色法检测细胞增殖能力, DNA梯形带分析ω-3脂肪酸对细胞凋亡的影响,RT-PCR和Western blot方法检测细胞caspase-1、8和9基因的表达变化,应用caspase特异性底物检测肿瘤细胞caspase-8活性变化,观察caspase特异性抑制剂Ac-IETD-CHO对ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的拮抗作用.结果与MCF-7细胞相比,MCF-7转染细胞经ω-3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,检测到明显的DNA梯形带,caspase-1、8、9基因表达增加,caspase-8活性增高,caspase抑制剂可以部分拮抗ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的发生.结论ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α可以更有效地诱导MCF-7细胞凋亡,而上调caspase的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用.     

大黄素增强砷剂对食道癌细胞的促凋亡作用

目的 在体外培养的食道癌细胞株和食道癌细胞的体内移植瘤动物模型上,考察天然物质大黄素通过提高活性氧水平增强砷剂(As2O3)诱导凋亡的作用,同时探讨大黄素造成的氧化还原状态改变对凋亡与抗凋亡信号转导机制的影响.方法 在食道癌细胞株上联合应用大黄素与As2O3,检测细胞凋亡率、线粒体细胞色素C释放、生存相关转录因子NF-κB活性及下游抗凋亡蛋白survivin表达;在食道癌移植瘤动物模型上应用不同剂量大黄素与As2O3腹腔注射化疗,化疗后检测瘤体质量,瘤组织切片上检测凋亡、NF-κB入核和下游抗凋亡蛋白survivin表达.结果 大黄素增强As2O3诱导的凋亡,促进线粒体细胞色素C释放,抑制NF-κB促转录活性;大黄素与As2O3合用增强裸鼠移植瘤凋亡,抑制NF-κB入核,并下调survivin表达.结论 大黄素能够促进体内外食道癌细胞的凋亡,机制涉及增强促凋亡信号转导和抑制抗凋亡信号转导,提示了大黄素的作用机制和应用的可行性.     

大黄素增强砷剂对食道癌细胞的促凋亡作用

目的在体外培养的食道癌细胞株和食道癌细胞的体内移植瘤动物模型上,考察天然物质大黄素通过提高活性氧水平增强砷剂(As2O3)诱导凋亡的作用,同时探讨大黄素造成的氧化还原状态改变对凋亡与抗凋亡信号转导机制的影响。方法在食道癌细胞株上联合应用大黄素与As2O3,检测细胞凋亡率、线粒体细胞色素C释放、生存相关转录因子NF-κB活性及下游抗凋亡蛋白survivin表达;在食道癌移植瘤动物模型上应用不同剂量大黄素与As2O3腹腔注射化疗,化疗后检测瘤体质量,瘤组织切片上检测凋亡、NF-κB入核和下游抗凋亡蛋白survivin表达。结果大黄素增强As2O3诱导的凋亡,促进线粒体细胞色素C释放,抑制NF-κB促转录活性;大黄素与As2O3合用增强裸鼠移植瘤凋亡,抑制NF-κB入核,并下调survivin表达。结论大黄素能够促进体内外食道癌细胞的凋亡,机制涉及增强促凋亡信号转导和抑制抗凋亡信号转导,提示了大黄素的作用机制和应用的可行性。     

抑制端粒酶活性引起肝癌细胞凋亡的caspase机制探讨

目的本文探讨hTERTp-TK/GCV系统诱导HepG2细胞凋亡的caspase分子机制。方法 hTERTp-TK/GCV转染HepG2,免疫印迹技术检测caspase-3,8,10,survivin活化裂解情况;MTT法检测caspase-8,3,10抑制剂对hTERTp-TK/GCV诱导HepG2细胞凋亡的抑制作用。结果免疫印迹技术结果显示随时间延长,caspase-8、3酶原逐渐减少、活化片断增多,caspase-10酶原无明显改变,survivin则逐渐减少;caspase-8抑制剂能明显抑制hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡,其抑制作用大于caspase-3抑制剂。结论 hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡主要是激活了细胞凋亡死亡受体途径上游的caspase-8引起的,同时还涉及caspase家族其它成员,caspase-10没有参与此凋亡过程,此外还涉及survivin的活性减少。     

大黄素对HCT116结肠癌细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究大黄素促进人结肠癌细胞HCT116细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 通过CCK8法检测大黄素对细胞活力的影响,并计算出IC₅₀。Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和荧光探针DCF-DA细胞内活性氧(ROS)的水平,Western blot法检测Bax、Bcl-2、p-ERK1/2、ERK1/2和c-Myc的表达。结果 不同浓度的大黄素抑制HCT116细胞的活力,并且具有浓度依赖性。大黄素将HCT116细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),并且能够明显诱导ROS的产生(P<0.01),Western blot结果显示大黄素能够引起Bax/Bcl-2表达的上调,p-ERK1/2和c-Myc表达的降低(P<0.05)。结论 大黄素可以通过上调Bax/Bcl-2,下调c-Myc和p-ERK/ERK的表达从而促进结肠癌细胞的凋亡,阻滞细胞周期和增加ROS的产生。      

大黄素通过BMP-9途径促进前体成骨细胞的分化

目的 研究大黄素对前体成骨细胞MC3T3-E1增殖与分化的影响及其作用机制。方法 采用不同浓度（0.05、0.1、0.5、2.0和5.0 μmol/L）大黄素处理MC3T3-E1细胞（给药组）,以不加大黄素为对照组。分别采用MTT法检测细胞的增殖率;对硝基苯基磷酸二钠（PNPP）法定量检测碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色观察矿化结节数目;RT-PCR法检测骨形态发生蛋白（BMPs）途径相关信号分子的表达。采用BMPs抑制剂（Noggin）处理细胞后检测ALP活性,观察BMP-9在大黄素促成骨分化中的作用。结果 大黄素对MC3T3-E1细胞的增殖无影响,大黄素浓度为0.5~5.0 μmol/L时可促进细胞ALP表达及矿化结节形成,其中浓度为5 μmol/L时效果最显著。大黄素可增强细胞BMP-9的表达,与BMP-9信号途径相关的上下游信号分子mRNA的表达亦有相应改变;Noggin预处理后,大黄素促成骨分化的功能受到明显抑制。结论 大黄素可通过激活BMP-9信号通路促进前体成骨细胞的分化。     

大黄素诱导白血病KG-1a细胞凋亡及对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的本研究观察大黄素(emodin)对人急性髓系白血病KG-1a细胞的增殖及凋亡影响,探讨Bcl-2/Bax基因在其中的作用。方法采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化与凋亡情况;RT-PCR法检测大黄素作用后细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的变化。结果大黄素能抑制KG-1a细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)约为171.8μmol/L流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰),将细胞阻滞于G0/G1期,大黄素作用后KG-1a细胞Bcl-2基因表达下调,而Bax基因表达上调,并呈量效关系。结论大黄素可诱导KG-1a细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax基因表达水平有关。     

大黄酸及大黄素对人肾小管上皮细胞增殖及TGF—β1启动子活性的调控作用

目的：观察大黄酸和大黄素对人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖及对人转化生长因子-β1（TGF-β1）基因启动子活性的作用。方法：应用MTT法观察不同浓度大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml）对人肾小管上皮细胞增殖的作用;将人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因组成重组体phTGF2．14,采用脂质体法转染至人肾小管上皮细胞中,分别加入不同浓度的大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml和50μg/ml）进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性。结果：大黄酸和大黄素各浓度组对人肾小管上皮细胞均具有明显的抑制HK-2细胞增殖的作用（P〈0．01）,且呈剂量依从性;大黄酸和大黄素浓度为lμg/ml和10μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性无影响,当增大其浓度为50μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性有抑制作用,其抑制率分别为38．0％和36．0％,与对照组比较均有显著差异（P〈0．01）。结论：大黄酸和大黄素能够抑制人肾小管上皮细胞增殖,当浓度为50μg/ml时对人TGF-β1基因启动子活性具有一定的抑制作用。     

大黄素抑制食管癌EC-109细胞增殖的机制探讨

目的：探讨大黄素对人食管癌细胞株EC-109增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法：不同浓度（0．0,2．5、5．0、10．0、20．0μg/mL）大黄索作用食管癌细胞EC-109,应用噻唑蓝比色法检测大黄素对食管癌细胞增殖的影响;用Annexin V-FTTC碘化丙啶双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果：不同浓度大黄素可明显抑制EC．109细胞增殖,并且呈浓度-时间依赖性;在作用EC-109细胞2h后,细胞内活性氧明显增加;12h后可见细胞凋亡率分别为8．1％、15．6％、24．0％、36．5％。结论：大黄素能明显抑制EC-109细胞的增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生引起食管癌细胞EC-109凋亡。     

丝裂原活化蛋白激酶在大黄素收缩大鼠胃平滑肌细胞中的作用

[目的]研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩信号转导途径中的作用机制。[方法]酶解法分离的大鼠胃平滑肌细胞经过培养后分为3个实验组:空白对照组、大黄素组、蛋白激酶C(PKC)抑制剂组(Calphostin C 大黄素)。通过Western blotring方法分析p44／42 MAPK在不同实验组中的表达量变化。[结果]磷酸化p44／42 MAPK的表达量在对照组最少,大黄素组最多,抑制剂组表达量较大黄素组少;三组表达量的差别具有显著性(P值均<0．01)。[结论]磷酸化p44／42 MAPK的表达量变化说明,在相同实验条件下,PKC受抑制后,磷酸化p44／42 MAPK的表达明显低于未受抑制的试验组。本实验结果提示, PKC到p44／42 MAPK信号转导通路参与了大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩活动的调节。     

大黄素对内皮细胞一氧化氮合成的影响

目的观察大黄素对内皮细胞一氧化氮及一氧化氮合酶合成的影响。方法通过选用新生儿脐静脉,采用灌注消化法建立内皮细胞模型,分别取10．0mg／L、37．5mg／L、75．0mg／L大黄素作用于细胞模型,测定细胞培养液中NO、NOS含量。结果大黄素在75．0mg/L浓度时NO、NOS合成明显增加,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,且其合成是脉冲式的。结论大黄素可以通过调控NOS的合成,促进NO的生成,对内皮细胞具有促进其功能的作用。     

大黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及脂肪代谢的影响

目的　探讨大黄素对 3T3 L1小鼠前脂肪细胞增殖分化和对脂肪代谢的影响 ,以及探讨大黄素可能的减肥作用的药理机制。方法　MTT法测定细胞的增殖速度 ,油红O染色法测定细胞的分化速度 ,分光光度法测定脂肪酸合成酶活性。结果　大黄素在较低浓度下对 3T3 L1小鼠前脂肪细胞的增殖有一定的促进作用 ,但当浓度升高时 ,转化为剂量依赖性抑制作用 ;大黄素对 3T3 L1小鼠前脂肪细胞向脂肪细胞的分化以及对脂肪酸合成酶活性有剂量依赖性抑制作用。结论　本研究在国际上第一次报道大黄素对 3T3 L1小鼠前脂肪细胞增殖与分化及脂肪代谢有影响 ;大黄素可能具有潜在的减肥、降脂作用。     

大黄素对脂多糖诱导的角膜基质细胞表达细胞因子的影响

目的 观察大黄素对脂多糖(LPS)诱导的角膜基质细胞表达细胞因子的影响.方法 原代培养角膜基质细胞,选取第4代细胞进行实验.根据在LPS刺激角膜基质细胞前是否先用40μmol/L大黄素培养细胞30min,将细胞分为大黄素+LPS组和LPS组,分别在10μg/L LPS刺激角膜基质细胞前以及刺激后1、2、4、8 h收集细胞;或先用0、5、10、20和40 μmol/L的大黄素培养细胞30 min后,再用10μg/L LPS刺激8 h.Western blot检测角膜基质细胞κB抑制因子-α(IκB-α)蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测角膜基质细胞白细胞介素(IL)-6和IL-8的mR-NA表达.结果 LPS刺激角膜基质细胞后1、2、4、8h,细胞表达IκB-α蛋白均较刺激前明显下降(P<0.01);大黄素对LPS引起的角膜基质细胞IκB-α蛋白的降解有不同程度的抑制作用,且该作用呈一定的浓度依赖性(P<0.05).LPS刺激引起角膜基质细胞IL-6和IL-8 mRNA表达升高,刺激后各时间点IL-6和IL-8 mRNA表达均较LPS刺激前明显升高,呈一定时间依赖性(P<0.01);大黄素对LPS诱导的角膜基质细胞IL-6和IL-8 mRNA表达有明显抑制作用,且该作用呈一定浓度依赖性(P<0.05).结论 大黄素能抑制体外培养的角膜基质细胞表达IL-6和IL-8,可能与其抑制IκB-α降解、促进NF-kB活化有关.