慢性压力负荷性心衰大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的探讨慢性心衰时是否有心肌细胞凋亡。方法利用末端转移酶介导的切口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）及ＴＥＭ法,检测慢性压力负荷性心衰大鼠左、右心室心肌的凋亡细胞。结果在心衰大鼠的左、右心室心肌组织中存在有凋亡的心肌细胞,而在对照组大鼠心肌组织中未见到心肌细胞调亡。结论慢性心衰与心肌凋亡之间有紧密联系。     

慢性压力负荷性心衰大鼠心肌细胞肌动蛋白的免疫组化研究

目的：探讨慢性心衰时心肌细胞肌动蛋白的变化情况。方法：采用ＳＰ免疫组化方法,对升主动脉缩窄慢性心衰大鼠心肌细胞肌动蛋白进行定性及半定量分析。结果：慢性心衰时左心室心衰时左心室心肌细胞肌动蛋白免疫反应活性显著降低,反应产物排列不规则,而右心室心肌细胞肌动蛋白免疫反应活性无显著变化。结论：肌动蛋白活性降低是引起收心肌收缩力降低的原因之一。     

慢性缺氧致大鼠右心室心肌细胞凋亡及其机制研究

目的：通过建立大鼠慢性缺氧心肌肥大模型,探讨慢性缺氧致大鼠心肌细胞凋亡的发生规律及其机制。方法: 将大鼠随机分为慢性缺氧组和正常对照组,每组30只,慢性缺氧组置于氧浓度为(10.0±0.5)％的大型玻璃舱中,分别持续缺氧14、21、28 d,分别于第14、21、28 d处死大鼠,取心脏称重,留右心室,进行形态学观察,分析心肌细胞凋亡形态及计量,检测肌球蛋白β重链(β-MHC)、原癌基因B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）、Bad 等mRNA及Bcl-2、Bad蛋白的表达水平。结果: (1)慢性缺氧14、21、28 d组大鼠右心室/（左心室+室间隔）［RV/(LV+S)］、右心室/体重（RV/BW）比值及右心室β-MHC mRNA和蛋白表达均明显高于正常对照组(均Ｐ<0.01),并且随时间延长而增高(均Ｐ<0.01)。(2) 慢性缺氧心肌细胞凋亡指数14、21、28 d组大鼠均明显高于正常对照组(均Ｐ<0.01),且随着时间的延长而增加(均Ｐ<0.01)。（3）慢性缺氧14、21、28 d组大鼠右心室bcl-2 mRNA表达和Bcl-2蛋白表达均明显低于正常对照组(均Ｐ<0.05),缺氧28 d组bcl-2 mRNA表达和Bcl-2蛋白表达较缺氧14 d组显著降低 (均Ｐ<0.05)。慢性缺氧14、21、28 d组大鼠右心室bad mRNA表达和Bad蛋白表达与正常对照组比较无明显改变 (均Ｐ>0.05)。（4）慢性缺氧14、21、28 d组大鼠右心室bcl-2/bad比值均明显低于正常对照组(均Ｐ<0.05),缺氧28 d组bcl-2/bad比值较缺氧14 d组显著降低 (Ｐ<0.05)。结论: 慢性缺氧可以诱导大鼠右心室心肌细胞凋亡和心肌肥大,且大鼠右心室心肌细胞凋亡和心肌肥大程度随着缺氧时间的延长而增加。慢性缺氧通过抑制大鼠右心室心肌细胞抗凋亡基因bcl-2表达,使bcl-2/bad比值下调,打破原有的平衡,导致心肌细胞凋亡。     

心梗后心衰大鼠心肌细胞凋亡时相变化特点观察

目的 :观察分析心梗后心衰大鼠心肌细胞凋亡及相应调控基因蛋白表达的时相变化特点。方法 :以左冠状动脉穿线结扎的方法造成大鼠急性心梗 ,经阻抗法评价心功能 ,制成心衰动物模型 ,持续喂养 8周。并设假手术组 (穿线不结扎 )作为对照。在此过程中 ,选取 3ｄ、5ｄ、1 0ｄ、4周、8周 5个时间点 ,分别以原位末端标记法 (ＴＵＮＥＬ)检测模型大鼠梗塞边缘区 (梗塞和非梗塞区交界处 )、健存区和假手术组心肌组织中的凋亡细胞 ,Ｓ -Ｐ免疫组化法检测心肌细胞中的ｂｃｌ- 2、Ｂａｘ基因蛋白表达的变化。结果 :模型组边缘区各个时间点之间比较 ,早期…     

骨髓间充质干细胞改进心衰大鼠心肌细胞的收缩性

背景：骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死已被证明能明显改善心功能。 目的：观察骨髓间充质干细胞对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞收缩舒张功能的影响。 方法：开胸结扎10只SD大鼠左前降支冠状动脉,制备心肌缺血模型,随机抽签法分为2组,实验组造模4周后在梗死心肌内注射荧光标记的5×10¹⁰ L^-1骨髓间充质干细胞,对照组单纯注射PBS。 结果与结论：与左前降支冠状动脉结扎前相比,造模4周后两组大鼠心功能明显下降(P < 0.01);经骨髓间充质干细胞治疗后实验组的心功能得到明显改善(P < 0.05)。实验组心肌细胞收缩幅度较对照组显著增加,收缩速度显著增快(P < 0.01)。且荧光显微镜发现有经骨髓间充质干细胞分化而来具有收缩功能的心肌细胞。提示经骨髓间充质干细胞治疗后的大鼠心肌细胞其收缩舒张功能显著增强,是骨髓间充质干细胞治疗心衰大鼠导致心功能改善的主要机制之一。     

黄芪总皂苷对心衰大鼠心肌细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

目的研究黄芪总皂苷(ASTs)对心衰大鼠心肌细胞凋亡和线粒体膜电位的影响和机制。方法将大鼠分成对照组(normal)、心衰组(model)、AST低、中、高剂量干预组(10、20、40 mg/kg灌胃),每组12只,检测大鼠心功能指标。取大鼠心肌组织,TUNEL法检测细胞凋亡;黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性;二硫代二硝基甲基苯法检测GSH-PX活性;硫代巴比妥酸法检测MDA含量;JC-1法检测线粒体膜电位;Western blot检测c-caspase-3、c-caspase-9、p-AKT、p-p38MAPK蛋白和线粒体、胞质中cyt-c蛋白表达水平。结果与对照组比较,model组大鼠LVSP、+dp/dt_max和-dp/dt_max降低(P<0.05);细胞凋亡率和c-caspase-3、c-caspase-9蛋白水平升高(P<0.05);SOD、GSH-PX活性降低(P<0.05);MDA含量升高(P<0.05);线粒体膜电位降低(P<0.05);线粒体中cyt-c蛋白水平降低(P<0.05);胞质中cy...     

慢性心衰时心肌细胞的形态学特点

为探讨升主动脉缩窄慢性心衰大鼠左、右心室心肌细胞形态学特点 ,利用游离心肌细胞技术 ,对心衰大鼠左、右心室心肌细胞进行常规 HE染色及电镜 ( TEM,SEM)观察。结果发现心衰时左、右心室心肌细胞的长度、宽度及面积都显著增加 ;右心室心肌细胞成比例肥大 ,心肌细胞超微结构改变不显著 ,而左心室心肌细胞超微结构改变明显。在心衰组及对照组左心室心肌中有两条毛细血管压迹的细胞。本研究分析了上述改变与心衰间的关系     

过氧化氢诱导心肌细胞凋亡性和非凋亡性死亡的研究

目的:探讨活性氧过氧化氢(H₂O₂)对心肌细胞损伤作用。方法:用不同浓度的H₂O₂作用于新生鼠培养心肌细胞,通过琼脂糖凝胶电泳、Giemsa染色和流式细胞仪等方法观察H₂O₂对心肌细胞的凋亡性损伤作用,同时检测培养介质中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)等生化指标的改变。结果:5 mmol/L H₂O₂作用于培养心肌细胞6 h,在琼脂糖凝胶电泳上出现梯状DNA带;Giemsa染色细胞涂片可见到染色体浓聚或边缘化,成新月型聚集在核膜周边,并有凋亡小体的存在;流式细胞仪可检测出亚二倍体峰的出现。结论: H₂O₂具有浓度和时间依赖关系诱导心肌细胞的凋亡,在低浓度H₂O₂(＜1 mmol/L)导致培养心肌细胞的早期生物化学改变,自由基含量升高,膜通透性增加,同时伴有少量心肌细胞凋亡;而在高浓度H₂O₂(＞10 mmol/L)时会造成培养心肌细胞的坏死性死亡,细胞膜崩塌,脂质过氧化物(MDA)大量产生,LDH大量泄漏,DNA琼脂糖凝胶电泳出现弥散(smear)泳带;5~10 mmol/L H₂O₂诱导大量心肌细胞凋亡性死亡,同时伴有LDH和MDA含量升高等生物化学的改变。     

氯沙坦降低心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡

目的 观察氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响,方法 选8周龄雄性SD大鼠,分为对照组（C组）、心衰组（HF组）和治疗组（LS组）。采用腹腔注射阿霉素造模,LS组同时氯沙坦灌胃。透射电镜观察心肌超微结构, 检测血清中CPK、CK-MB及LDH的含量。用原位脱氧核糖核酸酶未端标记法（TUNEL法）检测大鼠心肌细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 HF组与C比,心肌细胞损伤明显,并可见凋亡小体,血清中CPK、CK-MB和LDH升高,LS组与HF组比,心肌细胞凋亡指数下调(P<0.01),心肌细胞Bc1-2表达增加、Bax表达减少。结论 氯沙坦可有效抑制心力衰竭过程中发生的心肌细胞凋亡,逆转心肌损伤,改善心衰进程。     

大鼠急性心肌缺血再灌注的心肌细胞凋亡研究

目的　为证实急性心肌缺血再灌注过程中存在着不同程度的心肌细胞凋亡现象 ,初步研究心肌细胞凋亡与Bcl 2 /Bax蛋白表达的关系。　方法　透射电镜观察心肌细胞的超微结构变化 ,抽提心肌组织DNA琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞 ,免疫组织化学技术和图像分析技术检测心肌细胞内Bcl 2 /Bax蛋白表达。　结果　缺血及再灌注组电镜观察心肌细胞出现典型凋亡超微结构特征 ,TUNEL染色可见不同程度的心肌细胞凋亡阳性反应 ,DNA电泳显示在缺血再灌注 2h出现明显的DNA条纹图像 ,再灌注组较缺血组心肌细胞中Bcl 2表达明显降低 (P <0 0 5 ) ,而Bax表达显著增高 (P <0 0 1)。　结论　急性心肌缺血及再灌注能诱导不同程度的心肌细胞凋亡 ,Bcl 2 /Bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的调控作用     

心衰大鼠心肌核因子-κB活化及其与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)活化与充血性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞凋亡发生、发展的关系及其对Fas和Fas配体(FasL)表达的调控作用。方法:以假手术组为对照,观察雄性Wistar大鼠心肌梗死(MI)后2周、4周及8周的血流动力学指标、心肌细胞凋亡指数、Fas、FasL、Bcl-2和κB抑制蛋白的表达及NF-κB核结合活性的改变。结果:MI后心肌细胞凋亡指数、Fas及FasL表达水平进行性升高,Bcl-2的mRNA表达下调;κB抑制蛋白水平逐渐降低,而NF-κB活性逐渐增高。结论:心肌细胞凋亡在MI后CHF发生、发展过程中起着重要作用,NF-κB活化启动Fas和FasL基因转录,Fas和FasL表达上调、Bcl-2表达下降介导大鼠MI后心肌细胞凋亡的发生。     

卡维地洛与压力负荷心衰大鼠心室重塑和Rho激酶表达的关系

目的研究卡维地洛(α1肾上腺素受体阻断剂、β肾上腺素受体非选择性阻断剂)对升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠心室重塑、RhoA、Rho激酶表达的影响,探讨卡维地洛改善心力衰竭的新机制。方法将升主动脉缩窄术后心力衰竭Wistar雌性大鼠随机分为2组,一组为心力衰竭组,给予生理盐水灌胃,每日2次(n=10);一组为卡维地洛组,12.5mg/Kg卡维地洛灌胃,每日2次(n=10),治疗12周。同时制备模型设置假手术组作为对照(n=10),不予处置。观察各组大鼠各项指标变化。结果与假手术组相比,心力衰竭大鼠心肌肥厚指数增加,HE染色心肌排列紊乱,血液动力学指标明显异常,心肌细胞RhoA、Rho激酶表达显著升高(P<0.05);药物治疗12w后,与心力衰竭组对比,卡维地洛治疗组心肌肥厚指数降低,HE染色示心肌重塑不明显,血液动力学参数改善,RhoA、Rho激酶表达显著降低。结论卡维地洛可通过对心肌细胞α-Gq-RhoA/Rho激酶通路表达干预,明显缓解心力衰竭症状、改善心室重塑,卡维地洛这种α1肾上腺素受体阻断剂可能对心力衰竭更有利。     

活血注射液对心衰大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白 表达影响的实验研究

目的 :探讨以丹参为主组成的活血注射液对心梗后心衰大鼠心肌细胞凋亡及Ｂａｘ、Ｂｃｌ- 2蛋白表达影响。方法 :( 1 )药物 :活血注射液　由丹参、川芎等组成 ,比例为丹参 2 ,川芎等为 1 ;由北京中医药大学东直门医院制剂室按注射剂工艺制成注射液 ,每毫升相当于生药 2ｇ。卡托普利　购于常州制药厂 ,卡托普利原料药溶于无菌蒸馏水中 ,每毫升含卡托普利 3ｍｇ。 ( 2 )采用麻醉后开胸结扎大鼠左冠状动脉造成急性心肌梗塞 ,常规喂养一个月后经心阻抗法检测心功能 ,ＣＩ值≤ 1 80ｍＬ·ｍｉｎ- 1 ·ｋｇ- 1 者列入观察对象 ,并开始药物干预实验…     

慢性心衰对心肌细胞结构和皮肤微循环的影响

目的我们用本研究室自己制作的Ｗｉｓｔａｒ大鼠升主动脉缩窄模型,经检测达到心衰标准后,制备游离心肌细胞,对其超微结构及三维构筑进行了观察。不仅发现了心肌细胞线粒体规律排列的原因在干线粒体有其特有的固定装置,而且复制出线粒体凹的三维构筑特点;证明在心衰时线粒体的形态学改变、移位、核周围聚集以及Ｚ线扭曲等形态学变化;而且还发现有肌原纤维排列紊乱、断裂、缺失和移位等特征。用激光多普勒血流监测仪,检测的结果证明;慢性心衰时皮肤微循环血流速度明显减慢（手术组１．１８±０．４６ｍｍ／ｓｅｃ;对照组１．６４±０．５７ｍｍ／ｓｅｃ）;组织血流量明显减少（手术组１７．４１±７．４４ｍｌ／ｍｉｎ,对照组２４．７４±７．７２ｍｌ／ｍｉｎ）;左心房游离心肌细胞出现以宽度显著增加为主的特点,手术组游离心房肌细胞宽度为 ４３．９３±１８．４２μｍ,对照组的则为２８．４４±７．６７１μｍ,而心房肌细胞长度的增加相对较小,手术组为１１１．７８μ３０． １０１μｍ,而对照组则为９４．５３±１６．４０μｍ。同时作者对慢性后负荷心衰模型制作,心衰的确定,心衰时不同部位心肌细胞的改变进行了详细的描述。     

米屈肼对心衰大鼠心肌细胞凋亡和心脏射血功能的影响及可能机制

目的 探讨米屈肼(THP)是否通过调控沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路抑制充血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及改善心脏射血功能。方法 将60只清洁级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、米屈肼组以及卡托普利组，每组15只。建模成功后，超声心动图检测各组大鼠心功能；HE染色观察各组大鼠心脏组织结构；TUNEL法检测各组大鼠心肌凋亡；Western blot与RT-PCR方法检测各组大鼠心肌组织内Sirt1、NF-κB蛋白与mRNA的表达；酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清IL-6、TNF-α水平。结果 米屈肼能够上调心力衰竭模型大鼠心脏EF、FS水平、减轻心肌细胞水肿与炎性细胞浸润程度、降低心肌细胞凋亡指数、血清IL-6以及TNF-α水平。米屈肼能够上调心力衰竭模型大鼠心肌组织Sirt1蛋白与mRNA的表达水平，下调NF-κB蛋白与mRNA的表达水平。结论 米屈肼可能通过上调SIRT1/NF-κB信号通路抑制充血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡、改善心脏射血功能。     

吗啡对培养新生大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的利用体外原代培养的新生大鼠心肌细胞，研究吗啡对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法体外原代培养新生大鼠心肌细胞，分组给药后，用MTr法测心肌细胞的活力；用流式细胞仪分析心肌细胞周期；用Annexin V—FITC／PI双标记法测心肌细胞的凋亡率；用Westernblot法测Caspase-3蛋白的表达；用Fura-2双波长荧光法测心肌细胞内游离钙。结果体外原代培养的新生大鼠心肌细胞经无血清饥饿作用48h后，心肌细胞可出现明显的凋亡现象；给予不同浓度的吗啡作用于心肌细胞后，心肌细胞的这种凋亡现象可被抑制，其在1umol·L^-1处最为明显，表现为：心肌细胞凋亡率降低、Caspase-3蛋白表达减少、细胞内Ca^2＋离子浓度降低；给予10umol·L^-1纳洛酮（Naloxone）后，吗啡的这种抑制心肌细胞凋亡作用可被完全阻断；并且给予1umol·L^-1纳曲吲哚（Naltrindole）后，吗啡抑制心肌细胞凋亡的作用亦在一定程度上降低。结论吗啡可激活心肌细胞膜上的阿片受体，对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用，且可被Naloxone阻断。     

过表达ODC抑制氧化应激诱导大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的构建过表达鸟氨酸脱羧酶（ODC）基因慢病毒载体,并研究其对氧化应激诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠ODC基因pHIV-ODC过表达质粒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其侵染效率;包装慢病毒并侵染H9C2心肌细胞;72 h后观察其侵染效率,RT-PCR法检测细胞ODC mRNA的表达,利用CCK-8、Hochest33258染色检测ODC对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果酶切及测序鉴定ODC序列正确插入慢病毒过表达载体。侵染H9C2细胞72 h后ODC mRNA水平较阴性慢病毒感染组显著升高。过表达ODC能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较差异均有统计学意义（P〈0.001）。结论成功构建的过表达ODC慢病毒,上调H9C2细胞中ODC的表达,过表达ODC能显著抑制氧化应激诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

姜黄素预处理减轻急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨姜黄素预处理减轻急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的机制。方法大鼠随机分为假手术组、心肌缺血2 h组及姜黄素预处理组,采用冠状动脉结扎的方法建立大鼠心肌缺血模型。用TUNEL法观察各组大鼠的心肌细胞凋亡情况;采用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠心肌细胞凋亡相关因子mRNA和蛋白表达水平,并探讨它们之间的关系。结果与心肌缺血组相比,姜黄素预处理组BCL-2/β-actin/mRNA和蛋白表达相对值水平明显升高(P<0.05),心肌细胞凋亡数与BCL-2/β-actin蛋白表达相对值之间成明显的负相关(P<0.05);姜黄素预处理组caspase-3/β-actin mRNA和蛋白的表达相对值降低(P<0.05),心肌细胞凋亡数与caspase-3/β-actin mRNA和蛋白表达相对值之间成明显的正相关(P<0.05)。结论姜黄素对心肌缺血大鼠模型心肌梗死有明显保护作用,其作用机制可能与调节心肌细胞凋亡相关因子作用有关。     

去窦弓神经大鼠心肌细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的:研究去窦弓神经(SAD)大鼠心肌组织重构中的细胞凋亡及其相关基因的表达。方法:10周龄SD大鼠行SAD术或假手术(Sham),术后16周对SAD及Sham组大鼠的心肌连续切片,采用末端标记TUNEL法检测细胞凋亡;采用ABC法检测Bcl-2、Bax、Fas和Fas-L蛋白的表达,并用计算机图像分析技术进行观察和比较;采用RT-PCR技术检测bcl-2、bax、fas和fas-L的mRNA的表达。结果:SAD大鼠心肌细胞凋亡率高于Sham组;Bcl-2蛋白表达少于Sham组,Bax、Fas、Fas-L蛋白表达高于Sham组,Bcl-2/Bax比率低于Sham组;RT-PCR结果显示,SAD大鼠心肌组织bcl-2mRNA表达明显少于Sham组,而bax、fas、fas-LmRNA表达多于Sham组。结论:心肌细胞凋亡及其相关基因表达失调参与SAD大鼠的心肌重构。     

机械创伤升高大鼠心肌细胞凋亡蛋白表达

目的观察钙蛋白酶(calpain)对机械创伤大鼠心肌细胞凋亡蛋白caspase-3和caspase-12表达的影响。方法将大鼠分为对照组、创伤组和calpain抑制剂(MDL28170)干预组(i. p.,24 mg/kg);用Western blot检测caspase-3、caspase-12、calpain-1和calpain-2蛋白表达;用试剂盒检测caspase-3和caspase-12的活性;用real-time PCR检测calpain-1和calpain-2 mRNA表达。结果与对照组相比,大鼠创伤后心肌细胞caspase-3和caspase-12蛋白表达和活性均升高(P0. 01),calpain-2表达上调(P0. 01);与创伤组相比,给予抑制剂MDL28170干预后,心肌细胞calpain-2表达下降(P0. 05),caspase-3和caspase-12蛋白表达和活性均明显降低(P0. 05)。结论机械创伤所引起的心肌细胞calpain-2表达上调可能是导致凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-12表达和活性升高的重要原因。