中药复方对辐射损伤小鼠脾细胞凋亡及mRNA表达的影响

目的探讨中药复方地甘口服液(DGOL)对辐射损伤小鼠脾细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达的作用.方法建立辐射损伤模型(一次性7.0Gy的X射线照射),喂饲100%地甘口服液每次0.2 ml/10 g小鼠,每日2次.第10天用原位末端标记的TUNEL技术检测脾组织细胞凋亡和原位杂交法检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达.结果地甘口服液组与对照组比脾脏的细胞凋亡率和bax mRNA表达显著减少(P＜0.01),bcl-2 mRNA的表达显著增强(P＜0.01).结论中药复方地甘口服液可能通过促进bcl-2和降低bax mRNA的表达,促进造血细胞的增生,提高机体免疫力.     

地甘口服液对辐射损伤小鼠外周血TNF、SOD和微核的影响

在临床应用地甘口服液减轻放、化疗毒副作用较好疗效的基础上 ,为进一步探讨该药的作用机理 ,我们曾进行过系列的实验研究 ,包括免疫功能和造血干祖细胞集落的形成等[1 ,2 ] 。笔者主要就该药对辐射损伤造血系统负调控因子 肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ) ,超氧化物歧化酶 (ＳＯＤ)活性及骨髓细胞染色体突变损伤的微核 (ＭＮ)率等进行研究 ,现报道如下。一、材料和方法1 实验动物 :清洁级昆明种小鼠 ,7～ 8周龄 ,体重 (2 0±2 )ｇ ,雌雄兼有 ,由湖北省医学科学院动物中心提供。动物质量合格证号及饲养设施合格证号分别为 19 0 82和 19 0 74。2 药…     

地甘口服液对肿瘤患者辐射损伤血液和免疫功能的影响

地甘口服涟能促进辐射损伤小鼠造血干细胞CFU、CFUGM集落的形成．改善骨髓造血功能，提高自由基的清除能力，修复受损细胞。外周血象及细胞微核率的变化是辐射损伤评价的常用指标。为此，我们观察了40例进行故疗的肿瘤患者，服用地甘口服液后外周血象、淋巴细胞微核率及体液免疫指标等的变化，进一步了解该药在临床上的作用。     

地甘口服液对放、化疗小鼠骨髓白细胞共同抗原及血管内皮黏附分子的影响

以往的研究发现，地甘口服液(DGOL)能以促进干／祖细胞和基质细胞集落形成来达到保护造血的目的。白细胞共同抗原cDd，与血管细胞黏附分子VCAM-1—样对造血细胞的增殖分化、细胞的信号传递和免疫效应的发挥起着十分重要的作用。测定骨髓细胞CD。抗原和VCAM-1的表达既能了解机体造血的功能状态又能体现机体免疫功能的强弱。笔者以小鼠骨髓细胞CD^45抗原和骨髓微环境中VCAM-1表达为指标，采用流式细胞术、免疫组织化学法进行测定，观察DGOL对辐射和化学损伤致白细胞减少症的作用。     

茶多酚对荷瘤小鼠辐射损伤的影响

由于放射治疗副作用大，许多肿瘤患者难以坚持而影响治疗，辐射损伤的机理主要是产生大量的活性自由基攻击生物大分子，因此自由基清除剂在抗辐射损伤方面日益受到关注。茶多酚(tea polyphenols．TP)主要成分为儿茶素是一种有效的自由基清除剂，其抗辐射和抗肿瘤作用已有大量研究。而TP对肿瘤放射治疗损伤保护方面的报道相对较少。笔者研究了TP对小鼠及荷瘸小鼠辐照损伤影响.     

复方鱼腥草口服液对辐射损伤小鼠免疫功能及细胞遗传学的影响

目的：观察复方鱼腥草口服液对辐射损伤后小鼠免疫功能和细胞遗传学的影响。方法：将小鼠随机分为空白对照组,模型组,刺五加阳性对照组,复方鱼腥草口服液21．50,10．75g.kg^-1组,ig,15d,^60Coγ射线致伤,通过迟发型细胞免疫SRBC－DTH试验和体外溶血空斑（PFC）形成功能试验,观察辐射对小鼠免疫功能的影响;通过观察小鼠骨髓细胞染色体畸变和骨髓嗜多染红细胞微核率,研究对小鼠细胞遗传学的影响。结果：复方鱼腥草口服液21．50,10．75g.kg^-1均能显著提高小鼠细胞免疫SRBC－DTH（P＜0．05）,和溶血空斑形成能力（P＜0．01）;显著降低辐射诱发的染色体畸变率（P＜0．01）,和细胞微核率（P＜0．05）。结论：复方鱼腥草口服液对小鼠的辐射损伤有很好的防治作用。     

细胞周期和细胞凋亡的改变在X线辐射损伤后皮肤愈合延迟中的作用

目的：探讨细胞周期紊乱和凋亡在X线辐射损伤后创伤愈合延迟中的作用。方法：选用局部软X线辐射损伤合并创伤大鼠模型，应用病理形态观察、流式细胞术等方法观察不同时相点创面组织的病理改变、细胞周期及细胞凋亡的变化。结果：组织病理观察表明，肉芽组织的结构不规则，胶原组织排列紊乱，胶原合成减少，创伤愈合延迟。在伤后3d--9d时间段内，辐射侧G0／G1期细胞增加，S期和G2／M期细胞减少，表明软X线局部照射后细胞发生了严重的G1期阻滞。在伤后13d--22d时间段内，辐射侧S期细胞逐渐增加，6d时达到峰值，大量的细胞停留在S期，S期显著延长。在3d--9d时间段内，辐射侧伤口组织细胞凋亡增加，6d时达到峰值，之后逐渐减少。在创伤愈合的整个过程中，辐射侧的细胞凋亡呈由低到高再到低的时相变化。对照例伤口组织细胞凋亡百分数在整个愈合过程中变化并不显著。结论：提示细胞周期紊乱和细胞凋亡增加可能是导致愈合延迟的重要机制。     

苯甲酸雌二醇对辐射诱导免疫细胞凋亡的影响

目的 观察苯甲酸雌二醇对＾６０Ｃｏγ射线引起的小鼠胸腺,脾脏细胞凋亡率的影响及脾脏Ｔ、Ｂ淋巴细胞表面分子表达的改变,探讨其对小鼠免疫细胞凋亡的调节作用及其作用机理。结论 苯甲酸雌二醇可阻断免疫细胞的激活进而阻断Ｆａｓ（ＣＤ９５）系统介导的细胞凋亡途径。     

钩吻对小鼠急性辐射损伤的保护作用

钩吻 (ＧＥＢ)是一种主要含多种吲哚类生物碱的剧毒植物。具有消炎、镇痛、抗肿瘤、调节免疫功能和保护骨髓选血功能等作用[1 3] 。ＧＭ ＣＳＦ是公认的造血细胞生长因子 ,它对放射损伤有较好的治疗作用 ,ｒｈＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 3融合蛋白同时具有ＧＭ ＣＳＦ和ＩＬ 3的功能 ,作用效果优于ＧＭ ＣＳＦ[4 ] 。笔者旨在比较ＧＦＢ和ｒｈＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 3融合蛋白对小鼠急性放射损伤的治疗效果 ,现报道如下。一、材料和方法1 药物 :钩吻乙醇粗提物为广西产钩吻茎乙醇粗提物 ,提取和制备方法见文献 [3],配成浓度 6 0ｍｇ ｍｌ,过滤除菌备用。…     

红细胞分化相关基因敲除小鼠对低剂量辐射损伤敏感性的研究

目的：构建红细胞分化相关基因（ EDAG）敲除小鼠并研究其对低剂量辐射损伤的敏感性。方法利用锌指核酸酶技术（ ZFNs）建立EDAG敲除小鼠模型;通过外周血细胞计数、骨髓细胞的DNA损伤和集落形成能力评价低剂量辐射损伤。对野生型及EDAG敲除小鼠进行剂量率为0．31 Gy／min的X线照射,1 min／d,连续照射7 d,小鼠累计照射剂量为2．17 Gy。在X线照射后第1、3、5、7天称重并进行血常规检测（n＝7）;照射后第3天分离小鼠骨髓细胞,利用免疫荧光实验检测DNA损伤标志物p-H2A．x的表达水平（ n＝3）;照射后第5天分离小鼠骨髓细胞,接种集落并于7 d后进行集落计数（ n＝3）。结果成功建立了EDAG敲除小鼠模型并在蛋白水平进行了敲除效果的鉴定;X线照射后第3天,与野生型相比,EDAG敲除小鼠白细胞明显减少,敲除小鼠骨髓细胞DNA损伤标志物p-H2A．x表达水平增加;X线照射7 d后骨髓细胞的集落形成能力降低。结论研究发现EDAG敲除小鼠对低剂量辐射诱导的损伤更加敏感,表现为血细胞数量减少,骨髓细胞成集落能力下降,DNA损伤增加。表明EDAG敲除小鼠作为一种对辐射高度敏感的动物模型,可作为低剂量辐射损伤生物学效应评价的有力工具。     

放射损伤和放烧复合伤影响小鼠脾脏T细胞IFN-γ和IL-4基因表达的实验研究

目的 阐明机体免疫功能的放烧复合效应，为放烧复合伤免疫功能障碍的调控提供依据。方法 于不同时相点测定放烧复合伤小鼠（5Gy γ射线照射合并12％Ⅱ度烧伤）的脾体比，脾脏组织学观察，分离脾脏T细胞，RT－PCR检测其IFN－γ和IL－4的基因表达水平。结果 ①伤后放烧组的脾脏指数和组织结构的恢复明显快于单放组；②放射损伤后T细胞IFN－γ和IL－4的基因表达均受到抑制，但与IL－4比较，IFN－γ表达量的降幅小、恢复快；③放射损伤后脾脏指数和T细胞IL－4的基因表达呈双向变化；④放烧组IFN－γ表达量明显高于单放组，而两伤组IL－4表达量无区别。结论 ①放射损伤是放烧复合伤的主导损伤因素；②IL－4的辐射敏感性高于IFN－γ；③烧伤因素能促进放烧复合伤后脾脏淋巴细胞的增殖及IFN－γ的表达，不能促进IL－4的表达；④受照机体内仍然存在着促进IL－4表达恢复的有效机理。     

U-74389G对大鼠脑创伤后细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨脂质过氧化反应与脑损伤后细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系。方法在大鼠液压颅脑损伤模型中,观察其运动神经功能;脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征;伤后bcl-2基因表达情况;比较伤前给予U-74389G对上述指标的影响。结果治疗组的颅脑伤大鼠伤后行走功能、平衡功能障碍程度明显低于未治疗组（P<0.01）。治疗组大鼠不同脑区各个时间点凋亡细胞数均显著减少,DNA电泳未见凋亡带谱。Bcl-2免疫反应阳性细胞主要位于伤侧大脑半球皮质、皮层下白质、海马及齿状回的神经细胞。表达Bcl-2蛋白的神经细胞很少见到凋亡或坏死的形态特征。Bcl-2早期改变出现在伤后6h,比细胞凋亡出现早。注射U-74389G能阻止bcl-2蛋白下调。结论U-74389G能阻止大鼠液压脑损伤后bcl-2基因表达下调,抑制脑创伤所致细胞凋亡,具有明显的神经保护作用。     

X射线对人肺腺癌A549细胞增殖及线粒体DNA基因表达的影响

目的 研究X射线辐射对人肺腺癌A549细胞增殖及线粒体DNA(mtDNA)基因表达的影响。方法 8 MV X射线以4 Gy的吸收剂量照射A549细胞,照射后不同时间检测细胞周期分布和凋亡率,电镜下观察细胞超微结构,人mtDNA基因表达谱芯片检测靶基因的表达变化。结果 照射后12 h即出现G₂/M期的阻滞,凋亡率在照射后48 h达到峰值,透射电镜下可见凋亡的形态改变。X射线照射后mtDNA编码基因表达呈普遍下调,包括12 h组的1种tRNA和4种mRNA基因、24 h组的2种tRNA和4种mRNA基因、48 h组的13种mRNA和2种rRNA及4种tRNA基因、72 h组的11种mRNA和2种rRNA基因。结论 X射线辐射可导致A549细胞G₂/M期阻滞,mtDNA编码基因的普遍低表达可能和辐射诱导凋亡相关。     

低剂量电离辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：观察低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的基本规律。方法：实验用X射线照射昆明雄性小鼠,其诱导剂量（D1）及其后攻击剂量（D2）分别是75mGy和1．5Gy。D1和D2间隔时间分别是3、6、12、24和60h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔3、6和12h ,D1 D2组胸腺细胞凋亡百发数明显低于D2组（P＜0．05）,G0／G1和G2＋M期细胞百分数也不同程度地低于D2组,而S期是分数却明显高于D2组（P＜0．0．5或P＜0．01）。结论上述结果指出,D1在75mGy,吸收剂量率为12．5mGy／min,D2在1．5Gy,吸收剂量率为0．287Gy／min;D1和D2间隔3－12h,可在全身照射条件下诱导小鼠胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

p53和bcl-2表达与BT325细胞辐射性凋亡的关系

目的探讨癌基因表达的变化与辐射诱导肿瘤细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化技术检测人多形性胶质母细胞瘤细胞系，经Ｘ射线处理前后ｐ５３、ｂｃｌ－２基因表达的变化；原位杂交方法检测ｐ５３基因在ｍＲＮＡ水平表达的变化。结果①凋亡组内ｐ５３蛋白表达率明显高于对照组，ｂｃｌ－２表达显著减弱，ｐ５３与ｂｃｌ－２蛋白表达呈显著性负相关。②凋亡组内ｐ５３在ｍＲＮＡ水平表达量明显高于对照组，ｐ５３基因在蛋白水平与ｍＲＮＡ水平表达呈显著性正相关。结论ｐ５３和ｂｃｌ－２基因在Ｘ射线诱导的细胞凋亡过程中具有重要作用     

血管内皮生长因子在放射损伤小鼠骨髓基质细胞中的表达

目的 探讨辐射对小鼠骨髓基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及凋亡率变化。方法 采用RT—PCR和Western blot方法，初步检测了昆明小鼠经6．0Gy^60Coγ射线全身照射后小同时间骨髓基质细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平的变化；并用流式细胞术检测相应时间的骨髓基质细胞凋亡率。结果 辐射损伤后，小鼠骨髓基质细胞VEGF表达在mRNA水平和蛋白水平均显著降低，骨髓基质细胞凋亡率显著升高；随时间延长，骨髓基质细胞VEGF表达有所恢复，凋亡率也逐渐降低，但14d时仍未恢复正常。结论 6．0Gy^60Coγ射线可抑制骨髓基质细胞VFGF表达，引起细胞凋亡。说明辐射所致骨髓微环境损伤与基质细胞中VEGF表达异常有关。     

放烧复合伤后白细胞介素-3基因的表达

为了进一步探讨放射损伤和放烧复合伤引起造血功能障碍的机理，研究了作为造血调控的重要细胞因子——白细胞介素－３（ＩＬ－３）基因在放射损伤、烧伤、放烧复合伤后不同时相点基因表达的变化。方法ｍＲＮＡ抽提、分子杂交、细胞培养、ＩＬ－３生物活性测定、３Ｈ－ＴｄＲ参与实验等生物技术方法。结果放射损伤后ＩＬ－３基因的表达受到明显抑制，照射后第３，１４天表达的ＩＬ－３ｍＲＮＡ减少了７７％，２１％；ＩＬ－３蛋白减少了８３％，３６％。烧伤对ＩＬ－３基因表达的影响呈双相性，烧伤后第３天ＩＬ－３表达受到抑制；烧伤后第１４天ＩＬ－３的表达增强；放烧复合伤后ＩＬ－３的表达受到抑制，其抑制程度介于放射损伤与烧伤之间，各观察组ＩＬ－３基因表达的变化与骨髓有核细胞数的变化呈平行关系。结论放射损伤、放烧复合伤后ＩＬ－３基因表达被抑制可能是急性放射病引起造血功能障碍的原因之一。     

低剂量辐射对肿瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白bcl-2的影响

目的　探讨低剂量辐射对小鼠移植肿瘤细胞的凋亡、细胞周期以及相关蛋白bcl 2表达的影响。方法　昆明种雄性小鼠左后肢腹股沟皮下接种S1 80肉瘤细胞 ,接种后 7dγ射线全身照射 75mGy,照射后 2 4 ,48h分别处死 ,直接测量肿瘤大小变化 ,并取肿瘤组织分别进行流式细胞仪分析凋亡、细胞周期 ,以免疫组化染色半定量分析凋亡相关蛋白bcl 2表达的变化。结果　与直接荷瘤组相比 ,低剂量照射组肿瘤生长缓慢 (P <0 0 5) ,2 4h后肿瘤细胞阻滞于G1 期 ,bcl 2蛋白表达下降 ,48h后肿瘤细胞凋亡增加 (P <0 0 0 1 )。结论　低剂量辐射可使机体肿瘤细胞阻滞于G1 期 ,并通过凋亡相关蛋白表达变化导致肿瘤细胞凋亡增加 ,明显提高机体抗肿瘤的作用 ,具有肿瘤治疗和辅助放化疗的实际临床意义     

137Cs γ射线对体外培养成骨细胞形态与几种细胞因子基因表达的影响

目的　观察1 37Csγ射线照射对体外培养成骨细胞的形态、核浆比与几种细胞因子基因表达的影响。方法　取第 1代新生SD大鼠头盖骨成骨细胞传代后 2 4h一次接受1 37Csγ射线照射 ,吸收剂量分别为 10 ,2 5 ,5 0cGy和 1,3,6 ,9,12Gy。观察各组成骨细胞形态与超微结构改变 ;Giemsa染色后进行显微形态计量 ,计算核浆比 ;细胞培养至 14d抽提细胞内总RNA ,RT PCR方法半定量检测各组细胞IGF 1,OPG ,ODF基因mRNA表达量。结果　 3Gy以上γ射线照射的细胞 ,胞体变大、变薄 ,细胞数减少 ,细胞内细胞器减少 ,溶酶体增多 ,核浆比降低 ,其改变随吸收剂量增加而突出。基因IGF 1、OPG、ODF与OPG ODFmRNA表达量在 1Gy以上组随吸收剂量增加逐渐降低 ,与吸收剂量呈明显相关 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　1 37Csγ射线照射引起成骨细胞形态明显改变 ,增殖能力降低 ,核浆比降低 ,基因IGF 1、OPG、ODF与OPG ODFmRNA表达量降低。