耐碳青霉烯类抗生素不动杆菌的β内酰胺酶研究

目的了解不动杆菌属细菌对碳青霉烯类药物的耐药机制,耐药菌株的基因同源性和传播机制。方法采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选耐亚胺培南不动杆菌碳青霉烯酶,等电聚焦电泳(IEF)测定产β内酰胺酶等电点,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-Ga-Gc,blaPER-1,blaOXA-23,blaMBL等,引物的PCR进行β内酰胺酶的基因分型,并对PCR产物进行测序;Southern印迹进行苯唑西林酶OXA-23的基因定位脉冲场电泳(PFGE)研究耐亚胺培南不动杆菌同源性。结果6株耐碳青霉烯类不动杆菌均产OXA-23型酶,其中5株同时产PER-1型ESBLs。6株菌blaOXA-23均定位于染色体。3株琼氏不动杆菌属于同一PFGE分型,3株鲍曼不动杆菌分别属于2种PFGE分型。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是导致不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要原因,同时存在blaOXA-23的克隆传播。     

乌鲁木齐地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及同源性分析

目的 探讨乌鲁木齐地区临床分离的对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌耐药性、同源性和碳青霉烯酶型.方法 收集42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法测定亚胺培南耐药菌对18种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法扩增碳青霉烯酶基因型包括OXA-23,OXA-24,OXA-58,IMP和VIM型.采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析同源性.结果 42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌对阿米卡星耐药率最低(28.5%),左氧氟沙星、庆大霉素、头孢他啶耐药率均为53.6%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率为39.3%,其余抗菌药物耐药率均大于80.0%;RAPD分型发现42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌属于6个型,其中以A型(8株)、D型(20株)和F型(6株)3个型为主.42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌有33株携带 OXA-23组基因,未检测到金属酶基因.结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药现象非常严重,临床应根据药敏结果合理选用抗生素,克隆播散是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌最主要的传播方式,OXA-23型是最主要的碳青霉烯酶基因型.     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的 对临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,以指导临床合理应用抗生素.方法 用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP和VIM碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序.结果 鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为36.9%,且亚胺培南耐药组菌株对12种抗菌药物耐药率与敏感组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在24株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中21株PCR扩增出OXA-23基因,2株扩增出VIM基因,检出率分别为87.5%和8.3%,OXA-24、OXA-58、IMP基因均未检出;PCR产物测序表明与Genbank相关基因同源性为100%.结论 该院亚胺培南耐药鲍不动杆菌耐药现象严重;OXA-23碳青霉烯酶基因的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一.     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶基因型研究

目的了解安徽省铜陵市人民医院耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药特性及产碳青霉烯酶基因型。方法用纸片扩散法检测该院2008年1～12月临床分离的31株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对19种常用抗菌药物的敏感性。结果用WHONET5.3软件进行数据统计;应用聚合酶链反应(PCR)检测IMP、VIM-1、VIM-2、SIM-1、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58等碳青霉烯酶基因型。结果 31株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌有23株分离自重症监护病房;对19种临床常用抗菌药物除米诺环素耐药率为9.7%、头孢哌酮/舒巴坦为51.6%外,其余都在90.0%以上;碳青霉烯酶基因型检测除1株单产OXA-23型外,其余30株均同时产OXA-23型和OXA-66型碳青霉烯酶。结论该院耐亚胺培南鲍曼不动杆菌在重症监护病房有小范围暴发流行的可能;耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物耐药率极高;同时产OXA-23、OXA-66型碳青霉烯酶可能是其对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因。     

北京和广州地区四家医院不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的调查北京、广州地区不动杆菌属对碳青霉烯类的耐药性，确定其耐药株产生的碳青霉烯酶的基因型。方法用WHONET-5软件分析1999—2002年北京、广州两地不动杆菌的耐药性；从北京、广州4家医院收集对亚胺培南耐药且具有多重耐药性的不动杆菌39株；等电聚焦电泳测定酶的等电点；碱裂解法提取质粒；脉冲场凝胶电泳(PFGE)确定耐药株的亲缘关系；对TEM、SHV型基因及碳青霉烯酶基因OXA-、IMP-、VIM-进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)及序列分析。结果近4年北京协和医院分离的鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性在1．8％～8．5％之间。多重耐药(即3种以上的抗生素耐药)的菌株从1995年的5％升至2002年的67％，最常见的多重耐药模式为同时对头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦及环丙沙星耐药的菌株(占44％)。广州中山医科大学附属第一医院多重耐药株从1998年的20％升至2002年的57％，同时对上述4～5个药耐药的达35％。39株亚胺培南耐药株均不含质粒，接合试验证实亚胺培南的耐药基因不能转移。所有测定菌产多种B内酰胺酶：TEM-1酶、高产AmpC酶、SHV型酶及pI为6．7，6．0的2个酶。PCR及序列分析证实35株菌产生0xA-23型碳青霉烯酶(pI为6．7)，有3株携带PER-1型酶。PFGE发现在4家医院均有耐药株的克隆传播，并且常见于医院呼吸机相关肺炎及外科术后感染。结论北京、广州丽地对亚胺培南耐药的不动杆菌，绝大多数产生OXA-23型碳青霉烯酶，亚胺培南耐药株的增加主要由耐药克隆株播散所致。     

应用碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌

目的评估碳青霉烯酶失活法(carbapenem inactivation method,CIM)试验检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌产生碳青霉烯酶的能力。方法收集121株鲍曼不动杆菌,应用全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,CIM检测鲍曼不动杆菌所含碳青霉烯酶,应用PCR方法检测OXA-23型碳青霉烯酶基因。结果 121株鲍曼不动杆菌中68株对亚胺培南和美罗培南耐药,其中65株菌PCR显示携带OXA-23基因,66株菌CIM试验为阳性。52株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,其中49株菌OXA-23阴性,52株菌CIM试验全为阴性。1株菌对亚胺培南耐药、对美罗培南敏感,CIM试验阴性,OXA-23阳性。CIM试验的敏感性和特异性分别为94.2%和98.1%。结论与PCR方法相比较CIM试验操作简便,成本小,结果易读,易于在实验室开展。应用CIM试验可以检测鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶,     

鲍曼不动杆菌OXA-23基因和ISAba1基因检测和耐药性关系

目的 了解鲍曼不动杆菌的耐药现状及OXA-23型碳青霉烯酶介导的耐药性。 方法 收集临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用K-B(Kirby-Bauer)法进行常见药物的敏感性实验;通过PCR(polymerase chain reaction)扩增、克隆测序等分析OXA-23基因及ISAba1基因。 结果 温州医学院附属第一医院分离的200株鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多粘菌素等保持相对较高的敏感性,对其余常见抗生素的耐药率均已超过了80%;200株鲍曼不动杆菌中共检到155株携带OXA-23基因,168株携带ISAba1基因。 结论 温州医学院附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,大多带有OXA-23基因,该基因编码的碳青霉烯酶应为其耐药的主要原因,ISAba1常伴随OXA-23型出现。     

鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药机制研究

目的了解鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性及耐药机制。方法琼脂稀释法对62株鲍曼不动杆菌进行药敏检测,对其中20株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌进行耐药机制研究。酶三维试验检测ESBLs和AmpC酶,PCR扩增和测序分析检测碳青霉烯酶VIM、IMP、OXA-23和OXA-24,SDS-PAGE方法研究外膜蛋白表达情况,利血平协同抑制试验检测膜外排机制。结果62株鲍曼不动杆菌中,亚胺培南耐药25株,占41%;20株亚胺培南耐药菌中,ESBLs和AmpC酶阳性株分别为10株(50%)和20株(100%),PCR扩增VIM、IMP和OXA-24均阴性;OXA-23基因扩增显示19株(95%)阳性,PCR产物并经序列分析证实为OXA-23;与敏感株相比,部分菌株存在22、29、33kD的外膜蛋白缺失;利血平不能降低亚胺培南对鲍曼不动杆菌的MIC值。结论产OXA-23型β-内酰胺酶是本院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药的重要原因,产AmpC酶合并外膜蛋白缺失与鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药有密切关系。     

琼氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药分子机制研究

目的研究琼氏不动杆菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法对耐亚胺培南琼氏不动杆菌临床分离株ZN3858．采用琼脂对倍稀释法进行药敏试验，协同抑制试验，质粒接合试验。Southern blot等电聚焦电泳。PCR扩增OXA、IMP、VIM型碳青霉烯酶基因及整合子编码序列及其分子克隆和测序。采用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法研究其外膜蛋白表达情况，阐述其对碳青霉烯类分子耐药机制。结果受试琼氏不动杆菌具有多重耐药性；耐药基因分子克隆、测序并结合等电聚焦分析证实均产OXA-23型碳青霉烯酶。质粒接合试验、Southern blot显示其编码基因定位在染色体上；与敏感株相比，该菌22、35、47kDa外膜蛋白表达不同程度降低。飞行时间质谱显示：它们与一些耐药相关的外膜蛋白有一定的相似性。结论表达OXA-23型碳青霉烯酶伴外膜蛋白下调是琼氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药重要分子机制。     

革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生与细菌耐药性关系的研究

目的 研究耐亚胺培南革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生及流行情况.方法 采用琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对199株革兰阴性杆菌的MIC,采用乙二胺四乙酸(EDTA)协同实验筛选金属β内酰胺酶表型.PCR扩增耐药菌株碳青霉烯酶基因,并测序分析.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析产酶菌株同源性.结果 141株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具有3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药为主94株(66.7%)、亚胺培南耐药和美罗培南敏感46株(32.6%)、亚胺培南敏感和美罗培南耐药仅1株(0.7%).但其他耐碳青霉烯类的鲍曼小动杆菌、洛菲不动杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌和黏质沙雷菌均对亚胺培南和美罗培南同时耐药.EDTA协同试验结果显示,仅4株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为EDTA协同试验阳性(2.8%),其余菌株均为EDTA协同试验阴性.PCR扩增碳青霉烯酶基因结果显示,4株EDTA协同试验阳性的铜绿假单胞菌产VIM-2型金属酶;34株鲍曼不动杆菌菌株中30株(88.2%)产OXA型碳青霉烯酶,其中OXA23型27株(79.4%),OXA24型13株(38.2%),OXA66型23株(67.6%).并且22株(64.7%)细菌同时产生一种以上的OXA型碳青霉烯酶.7株洛菲不动杆菌全部产OXA-23型碳青霉烯酶;11株弗劳地柠檬酸杆菌、5株肺炎克雷伯菌和1株黏质沙雷菌均产KPC-2型碳青霉烯酶,其中6株弗劳地柠檬酸杆菌同时具有IMP-8新亚型金属酶.PFGE结果显示,34株鲍曼不动杆菌中PFGE谱型共有15种,其中有14株属于A型,7株属于B型;7株洛菲不动杆菌不属于同一克隆;4株产VIM-2型金属酶铜绿假单胞菌不属于同一PFGE谱型;11株柠檬酸杆菌属于同一PFGE谱型;5株肺炎克雷伯菌属于同一PFGE谱型.结论 耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对12种抗生素的耐药率均高于碳青霉烯类敏感革兰阴性杆菌的耐药率,而且产生多种碳青霉烯酶,并在弗劳地柠檬酸杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌中有产酶克隆株的流行.     

儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和产OXA酶的研究

目的研究儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和OXA酶基因存在情况。方法收集2010年1—12月北京儿童医院住院患儿中分离多重耐药鲍曼不动杆菌42株。用美国BD公司Phoenix100微生物分析仪,进行菌株鉴定和13种抗菌药物的药敏试验,按照CLSI 2010年推荐标准判断结果。用多重PCR方法检测OXA酶OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58 4组基因。PCR产物测序结果通过GenBank进行比对分析,确定其基因型别。结果多重耐药鲍曼不动杆菌42株对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为76.2%和78.6%。未发现对多黏菌素耐药的菌株。42株菌中41株(97.6%)扩增出特异性条带,为OXA基因阳性。其中,OXA-51组基因阳性38株(90.4%);OXA-23组基因阳性28株(66.7%);OXA-58组基因阳性2株(4.8%)。未扩增出OXA-24组基因。有27株(64.2%)OXA-51和OXA-23组基因同时阳性。携带OXA-23基因鲍曼不动杆菌均为对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株。结论儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药情况严重。以同时产OXA-51和OXA-23型OXA酶为主。OXA-23基因是导致鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的OXA酶基因研究

目的 研究广东省中山市中医院分离耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)耐药性、苯唑西林(OXA)酶基因及流行特性。方法 收集广东省中山市中医院2012年7月至2013年12月临床分离40株CRAB,采用纸片扩散法(K-B法)药敏试验,改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;用聚合酶链式反应(PCR)法对β-内酰胺酶基因oxa-23、oxa-24、oxa-51和oxa-58进行扩增、序列分析。结果 40株CRAB对16种药物中,对多黏菌素和米诺环素敏感性最高,耐药率小于或等于5.0%;改良Hodge试验阳性29株(占72.5%);所有菌株均被检测到含有oxa-51基因(占100.0%),oxa-23基因为38株(占95.0%),未检出oxa-24和oxa-58基因。结论 oxa-51及oxa-23基因是广东省中山市中医院流行CRAB的主要基因型。     

医院分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因的研究

目的研究多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-Ab)的耐药性及相关耐药基因,为临床抗菌药物的合理选择提供依据。方法采用MicroScan WalkAway96全自动微生物鉴定/药敏测试系统筛选鲍曼不动杆菌(Ab)98株;采用聚合酶链式反应检测MDR-Ab携带相关耐药基因OXA-23、OXA-24、IMP、VIM、TEM、SHV;并对耐药基因扩增阳性的产物进行DNA序列分析。结果 98株MDR-Ab对青霉素类和头孢类抗菌药物的耐药率均为100.0%;对氨苄西林/舒巴坦的耐药率为73.5%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为55.1%和54.1%,对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素的耐药率分别为100.0%、100.0%和87.8%,对环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星的耐药率分别为89.8%、91.8%和77.6%,对磺胺甲噁唑和利福平的耐药率分别为91.8%和100.0%,对多黏菌素和多黏菌素B的耐药率分别为14.3%和11.2%,对四环素、米诺环素、替加环素的耐药率分别为100.0%、6.1%、4.1%;98株MDR-Ab耐药基因检测,各有70株携带OXA-23和TEM基因,53株携带VIM基因,41株携带IMP基因,未检测到OXA-24、SHV基因;DNA序列分析结果显示OXA-23、TEM、IMP和VIM 4种基因分别与NCBI序列的同源性为98%、98%、99%和99%。结论该地区临床分离MDR-Ab耐药情况比较严重,耐药基因的携带以OXA-23和TEM为主,携带多种耐药基因是导致MDR-Ab耐药的重要原因,临床医务人员对Ab感染患者应尽量根据药敏试验结果合理使用抗菌药物。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药表型和碳青霉烯酶基因型分析

目的检测广州市第一人民医院20株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药性,研究并分型其碳青霉烯酶基因。方法用法国生物梅里埃公司VITEK2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用6种碳青霉烯酶特异性基因引物进行PCR扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对哌拉西林-他唑巴坦、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率分别为85%、50%和25%。对其他所测抗菌药的耐药率均在90%以上。扩增结果显示17株(85%)细菌携带碳青霉烯酶OXA-23基因,16株(80%)携带OXA-51基因,1株(5%)携带OXA 58基因。OXA-24、VIM、IMP基因引物PCR扩增均为阴性,随机抽取OXA-23基因阳性株进行双向测序后在网上GenBank比对与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-66标准株99%同源,OXA-58基因阳性株与OXA-58标准株99%同源。结论我院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药现象,对阿米卡星的耐药率最低,OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,OXA-23/OXA-51类基因占60%,应引起临床高度重视,防止在医院内广泛传播。     

OXA (beta)-lactamases in Acinetobacter: the story so far

The emergence of carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii has become a global concern since these beta-lactams are often the only effective treatment left against many multiresistant strains. A recent development has been the discovery of a novel group of narrow-spectrum OXA beta-lactamases in carbapenem-resistant strains, some of which have acquired the ability to hydrolyse the carbapenems. The first of these was found in a strain isolated in Edinburgh before imipenem was in use in the hospital. Whether these carbapenemases have been acquired or are part of the genetic make-up of this species has yet to be determined. More importantly, however, they represent an important stage in the evolution of antibiotic resistance in Acinetobacter. This paper discusses the emergence of these unusual enzymes over the past decade.     

鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型检测分析

目的了解鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型的存在状况。方法应用聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因,对PCR产物进行DNA直接测序,同时采用PCR对ISAba1和ISAba3插入序列进行检测,对PCR产物进行直接测序。除分别对OXA-23和ISAba1进行检测外,在两个基因之间再设计一对引物进行扩增,获得ISAba1与OXA-23之间的全长DNA序列。结果收集温州医科大学附属第一医院住院患者临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用PCR方法共检到OXA-23基因阳性菌株155株,阳性率为77.5%,其中与插入序列ISAba1同时阳性143株,阳性率为71.5%,本次试验未检到OXA-24基因阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,阳性率为100%,其中和OXA-23基因同时阳性155株,阳性率为77.5%;OXA-58基因阳性菌株共检出8株,阳性率为4.0%,插入序列ISAba3阳性共检出12株,阳性率为6.0%,其中有8株ISAba3和OXA-58同时阳性,阳性率为4.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。     

2004-2005年我院临床常见细菌耐药性监测

目的调查中国细菌耐药性监测协作网(CHINET)重庆工作组2005年1—12月临床常见细菌对各种抗菌药物的耐药性现状。方法药物敏感性试验采用纸片扩散法,耐药性数据分析采用WHONET5软件。结果1年间我院共收集患者首次分离株690株。肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率最低,产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株的检出率分别为37.5%和31.4%。所有产ESBLs株对亚胺培南和美罗培南均敏感,铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为37.2%和39.4%,对头孢他啶的耐药率达48.9%,且出现对所有药物耐药的泛耐药株。鲍曼不动杆菌对头孢哌酮-舒巴坦的耐药率为37.7%。耐药组合分析显示,对头孢哌酮-舒巴坦不敏感株中有29株为完全相同的耐药模式。脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,这些菌株主要来源于2个克隆株。结论我院细菌耐药性监测结果发现一些监护病房存在耐头孢哌酮-舒巴坦鲍曼不动杆菌流行株,对头孢哌酮-舒巴坦的耐药率有明显增高。     

铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌感染分布特征及耐药性分析

目的 探讨铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的分布特征及对多种抗菌药物的耐药性变迁。方法 收集2012年1月至2014年12月该院分离的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,采用琼脂扩散法做药物敏感试验,比较其对抗菌药物的耐药性变迁。结果共分离出病原菌3 710例,铜绿假单胞菌分离214株(5.8%),鲍曼不动杆菌分离347株(9.4%)。铜绿假单胞菌3年感染率分别为7.3%、6.6%、4.7%,呈逐年减少趋势,鲍曼不动杆菌感染率分别为7.6%、8.8%、10.3%,呈逐年增加趋势。标本来源主要以痰液、创面分泌物、尿液为主。铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌感染菌株以重症监护室(ICU)检出率最高,分别为27.6%和34.9%。铜绿假单胞菌对头孢他啶、阿米卡星、亚胺培南的耐药率均有逐年增高趋势;鲍曼不动杆菌对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南耐药率逐年增高;多粘菌素B耐药率逐年下降。结论 铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对抗菌药物耐药率逐年增高,尤其对碳青霉烯类耐药情况日趋严重,因此需加强对铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌的耐药性监测,指导临床合理应用抗菌药物。     

儿童产IMP-4及KPC-2型碳氢霉烯酶肺炎克雷伯菌分子流行病学分析

目的 调查碳氢霉烯类非敏感肺炎克雷伯菌中获得性碳氢霉烯酶的分布情况,探讨其在医院感染流行病学中的作用.方法 收集2008年11月至2009年3月武汉市儿童医院住院患儿临床分离的非重复的碳青霉烯类抗生素非敏感肺炎克雷伯菌20株,使用生物梅里埃公司生产的GNS-142检测菌株的MIC值,PFGE技术分析耐药菌株间的同源性,改良的Hodge试验筛选产碳青霉烯酶阳性菌株,亚胺培南-EDTA,美罗培南-EDTA及头孢他啶-EDTA协同试验筛选产金属酶菌株,PCR扩增常见获得性碳氢霉烯酶及整合酶基因并进行基因测序,质粒接合转移试验研究细菌耐药的传播方式和Southern杂交定位耐药基因.结果 PFGE共检出4种细菌基因型,包括A型5株(A1型3株、A2型2株)、B型2株、C型12株、D型1株.A型及C型为主要克隆株.8株细菌同时携带KPC-2及IMP-4两种碳氢霉烯酶基因,10株只携带IMP-4基因,2株只携带KPC-2基因.未检出NDM-1、GIM、SPM、SIM、OXA-23、VIM型碳氧霉烯酶基因.所有20株菌株均携带Intl基因,Southern 杂交提示Intl及IMP-4基因均定位于染色体.结论 IMP-4及KPC-2基因是武汉地区肺炎克雷伯菌中最主要的获得性碳氢霉烯酶基因,Intl介导IMP-4耐药基因的水平传播及C型耐药克隆株在武汉市儿童医院临床多个科室间的传播是肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药性传播的主要方式.

Abstract：

Objective To investigate the distribution of acquired carbapenemases in carbapenemresistant strains of Klebsiella pneumoniae, and explore its role in epidemiology of nosocomial infection. Methods From November 2008 to March 2009, twenty clinical isolates of carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae were collected from children hospitalized in Wuhan children's hospital. MICs of antibiotics were tested by DNA of Klebsiella pneumoniae. Modified Hodge test was used to screen strains producing carbapenemases,combined imipenem(IPM)-EDTA , meropenem(MEM)- EDTA and ceftazidime(CAZ) - EDTA double-disk synergy test (DDST) were used to detect metallo-β-lactamase-producing. PCR amplification of the carbapenemase and integrase genes, and sequencing were performed. Plasmid conjugation transfer experiments and Southern hybridization were applied to study the mode of drug resistance transmission. Results Four types of Klebsiella pneumoniae were detected by PFGE, type A consisted of 5 strains, including 3 strains of type Al and 2 strains of type A2), type B (2 strains), type C (12strains) and type D (1 strain). Type A and C were the main drug resistant clones. Eight strains of Klebsiella pneumoniae carried both KPC-2 and IMP-4 genes, 10 strains carried IMP-4 gene, 2 strains carried KPC-2 gene. None of NDM-1 ,GIM, SPM, SIM, OXA-23, and VIM carbapenemase genes was detected in 20 isolates. All of 20 isolates carried lntl which were found to be located on bacterial chromosome by Southern blot. Conclusions KPC-2and IMP-4 genes are the major carbapenemase genes in Klebsiella pneumoniae isolated in Wuhan.Transmission of drug resistance is mainly through vertical transmission of type C resistant clone and horizontal transmission of Intl on bacteria chromosome.