通痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的观察通痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清和滑膜组织中炎性因子表达及p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法 48只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、通痹胶囊不同剂量(375、750、1500mg·kg-1)组及雷公藤多苷片(10 mg·kg-1)组,除正常组外,其余各组均于右后足跖部注射弗氏完全佐剂造模。造模第8日,各组给予相应药物灌胃治疗,每日1次,连续4周。对大鼠关节炎指数进行监测,足容积法测量致炎侧足肿胀度;灌胃结束后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清及滑膜中白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠滑膜组织中p38MAPK、NF-κB/P65、IκBα蛋白表达的。结果与正常组相比,造模后大鼠血清及滑膜组织中IL-1、TNF-α含量明显升高,p38MAPK、NF-κB/P65、IκBα表达显著增多(P <0.01);与模型组相比,通痹胶囊能够有效降低大鼠血清及滑膜组织中IL-1、TNF-α的含量,并抑制滑膜组织中p38MAPK、NF-κB及IκBα的蛋白表达(P <0.05,P <0.01)。结论通痹胶囊具有明显的抗炎作用,其治疗类风湿关节炎的作用机制之一可能为抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的激活。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠NF-κBp65调控作用研究

研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠细胞因子、NF-κB p65蛋白表达的影响,探讨其治疗效果及作用机制。运用复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备细胞免疫反应性UC大鼠模型,大鼠随机分成正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组和黄芩汤高、中、低剂量组(20、10、5 g·kg-1)。治疗5天后评估各组大鼠饮食量、体重变化及组织损伤程度,采用Griess法测定血清中NO含量,ELISA法测定IL-6、TNF-α、PGE2含量,运用免疫组化法检测NF-κB p65蛋白表达情况。结果显示,模型组大鼠饮食量及体重显著低于正常组;血清中NO、IL-6、TNF-α、PGE2水平、结肠组织NF-κB p65蛋白表达量及组织损伤程度显著高于正常组。黄芩汤高、中剂量组大鼠上述指标均较模型组显著好转。黄芩汤对溃疡性结肠炎的治疗作用可能是通过抑制NF-κB P65通路活化,进而下调促炎细胞因子NO、IL-6、TNF-α和PGE2表达实现的。     

黄芩苷对胶原诱导性关节炎大鼠抗炎作用研究

目的研究黄芩苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的抗炎作用并探讨其对白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和核因子(NF)-κB信号通路的影响,为其应用于类风湿关节炎临床治疗提供实验依据。方法 Wistar雌性大鼠制备CIA模型,将关节炎评分>2的CIA大鼠采用随机数字表法随机分为模型对照组(0.9%氯化钠注射液)、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)、黄芩苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),每组6只持续处理30 d。另外选取6只正常大鼠作为正常对照(0.9%氯化钠注射液)。检测大鼠关节炎症状,关节组织进行放射评估和组织病理检测。定量检测血清中TNF-α和IL-1β水平,蛋白质印迹法检测关节滑膜组织中NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65(Ser536)和乙酰化-NF-κB p65(Lys310)蛋白表达。结果黄芩苷能减轻CIA大鼠的关节肿胀,明显抑制关节滑膜炎症和关节软骨及骨破坏,明显降低血清中TNF-α、IL-1β含量,抑制关节滑膜组织中NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65(Ser536)和乙酰化-NF-κB p65(Lys310)蛋白水平表达。结论黄芩苷抑制CIA大鼠炎症可能是通过抑制炎性细胞因子的产生和NF-κB信号转导途径而发挥治疗作用的。     

罗格列酮对百草枯致大鼠肺损伤的炎症抑制作用

目的：研究罗格列酮对百草枯致大鼠肺损伤过程中的炎症抑制作用机制。方法将72只SD雄性大鼠随机分成3组,每组24只。模型对照组：腹腔注射百草枯20 mg·kg-1;罗格列酮组：腹腔注射百草枯前1 h,腹腔注射罗格列酮10 mg·kg-1;空白对照组：腹腔注射0.9％氯化钠溶液1 mL。注射百草枯后4,8 h及1,3 d,收集各组大鼠血清和肺组织标本,组织切片苏木精-伊红( HE)染色进行肺损伤评分,采用酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清白细胞介素-1β( IL-1β)和肿瘤坏死因子-α( TNF-α)含量,采用免疫组化方法检测NF-κB蛋白在肺组织的表达,利用Western blot法检测肺组织核因子-κB (NF-κB)和激活蛋白(AP-1)蛋白表达水平。结果模型对照组大鼠血清炎性细胞因子IL-1β和TNF-α含量明显增加。罗格列酮组肺组织损伤程度明显降低,血清IL-1β和TNF-α含量减少,肺组织NF-κB和AP-1蛋白的表达降低。结论罗格列酮可以抑制百草枯中毒大鼠肺组织NF-κB和AP-1蛋白表达,减少IL-1β和TNF-α分泌,对百草枯所致大鼠肺损伤炎症有抑制作用。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠的保护作用及其影响NF-κB p65蛋白和相关炎症因子表达的机制研究

目的:研究黄芩汤对DSS所致溃疡性结肠炎大鼠细胞因子、NF-κBp65蛋白表达的影响,探讨其作用效果及机制。方法:运用右旋葡聚糖硫酸钠(Sodium dextran sulfate,DSS)制备UC大鼠模型,大鼠随机分成正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组和黄芩汤高、中、低剂量组。治疗7天后,取结肠组织,评估各组大鼠结肠长度、体重变化及组织损伤程度,采用ELISA法测定结肠组织中肿瘤坏死因子-α (Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白介素-6 (Interleukin6,IL-6)、白介素-1β (Interleukin1β,IL-1β)含量,运用Western blot法检测NF-κB p65蛋白表达情况。结果:模型组大鼠体重及结肠长度均明显低于正常组大鼠(P0.01);血清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平、结肠组织NF-κB p65蛋白表达量及组织损伤程度显著高于正常组(P0.01)。与模型组大鼠相比,柳氮磺胺吡啶组大鼠上述指标均减轻,黄芩汤高、中剂量大鼠上述指标较模型组显著改善(P0.01)。结论:黄芩汤能明显改善模型大鼠精神、体重、肠上皮损伤等,对溃疡性结肠炎的治疗作用可能是通过抑制NF-κB通路活化,进而下调促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达实现的。     

参附注射液对内毒素休克模型大鼠肺组织炎症的改善作用及抗炎机制研究

目的:研究参附注射液对内毒素休克模型大鼠肺组织炎症的改善作用及其抗炎机制。方法:将48只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(阳性对照,1 mg/kg)和参附注射液低、中、高剂量组(5、10、15 mL/kg),每组8只。除正常组外,其余各组大鼠腹腔注射脂多糖(LPS)复制内毒素休克模型,造模后各组大鼠腹腔注射给药1次。给药24 h后,苏木精-伊红(HE)染色后观察大鼠肺组织病理学变化并进行病理学评分;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定肺组织中核转录因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白P65、P50 mRNA的表达水平;Western blot法测定肺组织中P65、P50蛋白的表达水平,并检测肺组织细胞核和细胞浆中P65蛋白的表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺泡间隔增厚,血管明显充血,肺间质大量中性粒细胞浸润;肺组织病理学评分和P65、P50 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.001),细胞核、细胞浆中P65蛋白和血浆中TNF-α水平均显著升高(P<0.001)。与模型组比较,地塞米松组和参附注射液中、高剂量组大鼠肺泡结构完整,无明显出血,炎性细胞浸润程度明显改善;肺组织病理学评分和P65、P50 m RNA及蛋白的表达水平以及血浆中TNF-α水平均显著降低(P<0.05或P<0.01或P<0.001),地塞米松组和参附注射液低、中剂量组大鼠肺组织细胞核、细胞浆中P65蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论:参附注射液可通过降低肺组织中P65、P50 mRNA及蛋白的表达水平及血浆中TNF-α的水平,改善内毒素休克模型大鼠肺组织的炎症反应。     

Ghrelin通过核因子-κB抑制肿瘤坏死因子-α诱导的HepG2细胞PAI-1 mRNA表达

目的探讨Ghrelin对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HepG2细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)mRNA表达的影响及核因子-κB(NF-κB)在其中的作用.方法HepG2细胞培养,加入不同浓度TNF-α,采用逆转录-聚合酶链反应测定(RT-PCR)检测PAI-1 mRNA的水平;免疫印迹法检测胞浆胞核NF-κBp65和胞浆κB抑制蛋白(IκB)的表达.给予Ghrelin预处理1 h后,加入TNF-α检测NF-κKBp65和IκB表达的变化.结果TNF-α(0.1,1,10μg·L-1)浓度依赖地增高HepG2细胞PAI-1 mRNA的表达;Ghrelin组的PAI-1 mRNA表达减少.TNF-α组胞核NF-κBp65表达增加,胞浆IκBα的表达减少;Ghrelin组较TNF-α组胞核NF-κBp65减少,胞浆IκBα的表达增加.结论TNF-α通过NF-κB介导HepG2 PAl-1mRNA的表达;Ghrelin通过抑制NF-κB而抑制TNF-α诱导PAI-1mRNA的表达.     

蚤休薯蓣皂苷经Notch1/NF-κB p65信号转导途径抑制巨噬细胞损伤

目的研究蚤休薯蓣皂苷(rhizome dioscin,RD)对氧化损伤的小鼠巨噬细胞(Ana-1)炎症反应的影响及与Notch1/NF-κB p65信号转导途径的关系,探讨RD抗炎性效应的分子机制。方法体外培养Ana-1,RD 3个浓度预处理,加入氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导氧化损伤,MTT比色法检测细胞存活率,ELISA测定培养液中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、流式细胞术Annexin V/PI双染色以及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡率及凋亡的细胞形态变化,Western blot检测Notch1、NF-κB p65的表达。结果与正常对照组相比,经ox-LDL损伤后,细胞存活率降低(P<0.05、P<0.01)、而IL-6和TNF-α的释放量增加(P<0.05、P<0.01)、凋亡细胞数目增多并呈现典型的凋亡形态学改变、Notch1和NF-κB p65的表达与正常组比较均升高。而RD各剂量组预处理能提高细胞存活率(P<0.05、P<0.01)、降低细胞上清液IL-6和TNF-α含量(P<0.05、P<0.01)、降低细胞凋亡率、改善细胞的凋亡形态以及Notch1和NF-κB p65的表达。结论 RD可抑制ox-LDL炎性损伤和凋亡,提高细胞存活率,其作用机制可能是通过激活Notch1NF-κB p65途径而实现的。     

曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导U937细胞IκB-α蛋白降解的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株U937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用。方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于U937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化。结果:①荧光显微镜观察:分别作用45min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白。免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P<0.05);免疫印迹结果也显示,作用45min后,TNF-α处理组细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性。结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的U937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活。TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用。     

地塞米松对脓毒症大鼠急性肺损伤影响的实验研究

目的 观察急性肺损伤(ALI)肺组织核因子(NF)-κB的活性变化及地塞米松(Dex)的干预作用。方法 采用LPS诱导的急性肺损伤动物模型,将30只SD大鼠随机分为实验组(AU Dex,10只)、模型组(ALI NS,10只)和对照组(NS,10只)三组,实验组在建模成功后腹腔注射地塞米松,模型组在建模成功后腹腔注射相同剂量的生理盐水,对照组仅腹腔注射相同剂量的生理盐水。注药6小时后留取肺组织,用免疫组织化学法结合图像分析仪检测其NF-κBP65、IκB-α蛋白的相对含量,并进行病理学光镜检查。结果ALI大鼠肺组织可见大量出血和炎性细胞浸润,NF-κBP65的蛋白表达明显升高,IκB-α表达显著降低。Dex能明显下调NF-κBP65的蛋白表达,上调IκB-α表达,并能减轻肺组织的损伤程度。结论 NF-κBP65活化在ALI的发生、发展过程中起着重要作用。Dex具有明显的抗炎作用,减少了肺组织损害。     

乌司他丁对重症急性胰腺炎肠黏膜屏障保护作用机制的研究

目的本实验旨在通过动态观察重症急性胰腺炎小肠组织中多种细胞因子,包括:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、细胞间黏附因子1(ICAM-1)mRNA的变化,探讨乌司他丁(ulinas-tatin,UT)对炎性细胞因子的下调作用,及其对肠粘膜屏障的保护作用。方法SD大鼠40只,随机分成4组,即正常组(10只)、假手术组(SO)(10只)、SAP组(10只)、SAP+UT组(10只),建立假手术组、重症急性胰腺炎及治疗组模型。术后3h、6h、12h、24h应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α、IL-6、IL-10、CAM-1mRNA的表达,以及相应时段小肠组织NF-κB及血液中DAO的表达。结果SAP组大鼠肠黏膜TNF-α、IL-6、IL-10、ICAM-1mRNA表达较SO组增高,其中TNF-αmRNA表达于术后6h达峰值,ICAM-1表达于术后12h达峰值,IL-6、IL-10术后6小时表达增加,且随着时间的延长表达量增加,UT治疗组TNFα、IL-6、IL-10和ICAM-1表达均显著下调P<0.05。SO组大鼠肠黏膜少见NF-κB活化的细胞,而SAP组大鼠术后3h肠黏膜即出现大量核内NF-κB染色阳性细胞,UT治疗组肠黏膜NF-κB活化细胞明显少于SAP组。结论乌司他丁可以显著降低SAP组大鼠小肠NF-κB的表达以及细胞因子mRNA的表达,抑制炎症反应,从而起到保护肠黏膜屏障的作用。     

京尼平苷对LPS诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应的抑制作用

目的明确京尼平苷对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应的抑制作用。方法以LPS诱导原代培养的星形胶质细胞为细胞模型,随机分为对照组、LPS组、LPS+白藜芦醇组和LPS+不同浓度京尼平苷组,采用Western Blot法检测星形胶质细胞活化标记物GFAP水平及NF-κB p65水平,ELISA法检测致炎细胞因子水平。结果京尼平苷可显著抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,降低TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,同时NF-κB p65蛋白的表达也明显降低。结论京尼平苷能通过NF-κB途径抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,并抑制致炎细胞因子水平。     

异甘草酸镁对成纤维细胞NF-κB信号通路活性的影响

目的:研究异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)对成纤维细胞核因子-kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路活性的影响。方法:实验分6组,为空白对照组、TNF-α模型组、地塞米松(dexamethasone,DEX)阳性对照组和0.1、1、10mg/ml的MgIG组。DEX组和MgIG组分别给予DEX(1μg/ml)和MgIG(0.1、1、10mg/ml)预处理4h后,除对照组外,其余5组加入TNF-α(20ng/ml)作用1.5h。提取细胞核蛋白,以免疫印迹法检测NF-κB p65蛋白质表达。提取总RNA,用实时PCR技术检测细胞内IκBαmRNA表达。成纤维细胞经DEX和MgIG预处理4h后加入TNF-α作用24h(浓度同上),用报告基因技术检测NF-κB基因表达。结果:成纤维细胞经TNF-α作用1.5h后,细胞核内NF-κB p65蛋白质表达量明显增加,IκBαmRNA表达上调;TNF-α作用24h后,NF-κB基因上调。DEX预处理4h,可以明显减少TNF-α引起的核内NF-κB p65蛋白质表达和细胞内IκBαmRNA表达,明显降低与TNF-α共作用24h后NF-κB基因表达。MgIG处理成纤维细胞4h后,能够明显降低TNF-α作用1.5h后核内NF-κB p65蛋白质表达量,但对IκBαmRNA表达水平无明显影响。1、10mg/ml的MgIG能够明显降低与TNF-α共作用24h后NF-κB基因表达水平。结论:MgIG的抗炎作用与抑制NF-κB p65转位入核和NF-κB基因表达,从而抑制NF-κB信号通路活性相关,但与DEX不同的是MgIG不能改变IκBαmRNA表达水平。     

NF—κB、TNF—α在淹溺大鼠脑组织中的表达及其与脑损伤的相关性

目的:探讨淡水淹溺后大鼠脑组织中细胞因子NF-κB、TNF-α的表达及其与淹溺应激引起脑损伤之间的关系。方法:Wistar大鼠70只,其中正常对照(Ⅰ组)、溺水致死(Ⅱ组)、溺水后存活(Ⅲ组)3h、6h、12h、24h、40h各10只,剥取脑组织固定、切片,HE染色后光镜下观察形态学改变;SABC免疫组化法检测各组大鼠脑组织中NF-κB、TNF-α的表达。结果:Ⅰ组脑组织结构清晰,无水肿、出血、坏死病灶;Ⅱ组脑实质疏松,小血管周隙增宽,部分神经细胞体积增大变性;Ⅲ组随溺水后存活时间的推移,脑损伤程度逐渐加重,其中24h脑水肿最重,40h个别脑实质小灶性液化性坏死。Ⅱ组脑指数明显高于Ⅰ组(P<0.05),并高于Ⅲ组,与3h、6h、12h差异有统计学意义(P<0.05)。与Ⅰ组相比,Ⅲ组6h时NF-κB表达显著增加(P<0.05);12h时TNF-α表达显著增加(P<0.05)。结论:淡水淹溺后存活大鼠发生脑损伤时NF-κB和TNF-α高表达,提示NF-κB、TNF-α与淹溺应激所致脑损伤有关。     

瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠TLR4信号通路的影响

目的研究瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RSV)对压力负荷诱导心肌肥厚大鼠心肌中toll样受体4(TLR4)及其下游核转录因子NF-κB p65、IκBα、炎症因子TNF-α表达的影响。方法采用腹主动脉缩窄大鼠模型,♂Wistar大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(M)、RSV给药组(R,10 mg·kg~(-1)·d~(-1))每组10只。行心脏超声学检查,采用RT-PCR、Western blot、免疫组化、ELISA等方法检测心肌组织中心肌肥大基因ANP及TLR4、NF-κB p65、IκBα、TNF-α的表达。将TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平进行相关性分析。结果 M组与S组相比,心脏体积和心肌细胞横截面直径、ANP mRNA水平均明显增加(P<0.01),伴TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的水平明显增加及IκBα蛋白水平减少(P<0.05)。RSV抑制心肌肥厚,下调心肌组织中TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的表达及上调IκBα蛋白水平(P<0.05)。在M组和R组,TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平呈正相关。结论 RSV抑制心脏压力负荷诱导的心肌肥厚的作用可能与其抑制TLR4信号系统有关。     

原花青素二聚体B_2对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及炎症因子表达的影响

目的通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins di-mer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制。方法免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Western blot分析COX-2蛋白含量变化,ELISA测定各处理组细胞上清液中IL-1β、VEGF的含量变化。结果 TNF-α(10μg.L-1)诱导RSC-364细胞NF-κB从细胞质转运至细胞核,50μmol.L-1 PCB2明显抑制NF-κB/P65核转运;PCB2剂量依赖性抑制COX-2基因和蛋白的表达;PCB2下调了TNF-α诱导的IL-1β、VEGF的水平。结论 PCB2能有效抑制COX-2、IL-1β及VEGF的表达,其机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB核转运,抑制NF-κB活化有关。     

清开灵注射液对大鼠阳离子化牛血清白蛋白肾炎的作用机制研究

目的探讨清开灵注射液(QKL)对实验性大鼠肾炎的作用机制。方法采用牛血清白蛋白(C-BSA)建立肾炎大鼠模型,QKL腹腔注射治疗,分别取大鼠肾皮质和全血,检测NF-кB含量表达,IL-2、IL-6和TNF-α含量测定。结果与正常对照组相比,模型组的NF-кB表达显著增高(P<0.01),IL-2、IL-6和TNF-α含量显著增高(P<0.05);与模型组相比,清开灵治疗组NF-кB表达,IL-2、IL-6和TNF-α含量则明显降低(P<0.05)。结论清开灵注射液通过抑制NF-кB的活化,降低炎症免疫细胞因子表达,起到治疗肾小球肾炎的作用,因而从分子水平揭示了清热解毒药物治疗肾小球肾炎的部分机制。     

阿加曲班对脑出血模型大鼠脑损伤的改善作用

目的:研究阿加曲班对脑出血模型大鼠脑损伤的改善作用。方法:取50只SD大鼠随机均分为正常对照(等量生理盐水)组、模型(等量生理盐水)组和阿加曲班低、中、高剂量(0.75、1.5、3 mg/kg)组,除正常对照组外其余各组大鼠复制脑出血模型。复制模型30 min后各组大鼠ip给予相应药物,每天1次,连续给药3 d。处死大鼠,检测各组大鼠脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)含量,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达和核转录因子κB(NF-κB)p65、IκBα的磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β含量增加,Caspase-3活性和MMP-2、MMP-9、Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,NF-κB p65、IκBα磷酸化水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,阿加曲班低、中、高剂量组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β含量减少,Caspase-3活性和MMP-2、MMP-9、Bax蛋白表达减弱,Bcl-2蛋白表达增强,NF-κB p65、IκBα磷酸化水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且与剂量呈正相关。结论:阿加曲班呈剂量依赖性地抑制脑出血模型大鼠炎症因子分泌及脑组织细胞凋亡,其作用可能与NF-κB信号通路有关。     

机械通气大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白-1α及核因子-κB的表达

目的通过观察巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)和核因子-κB(NF-κB)在机械通气大鼠肺组织中的表达,探讨MIP-1α及NF-κB在呼吸机所致肺损伤(VILI)发生中的作用。方法 32只雄性健康Wistar大鼠随机分为对照组、小潮气量组、常规潮气量组和大潮气量组。分别采用原位分子杂交技术和免疫组织化学染色方法检测各组大鼠肺组织MIP-1α mRNA及NF-κB p65蛋白表达水平,测定其支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及中性粒细胞计数。结果大潮气量组和常规潮气量组大鼠BALF中白细胞和中性粒细胞计数,以及细支气管上皮MIP-1α mRNA和NF-κB p65蛋白阳性表达细胞百分比均明显高于小潮气量组和对照组(P<0.01)。对照组与小潮气量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关分析结果表明,各组大鼠细支气管上皮MIP-1α mRNA阳性表达细胞百分比与BALF中性粒细胞计数和NF-κB p65蛋白阳性表达细胞百分比之间均呈正相关(r=0.546,r=0.482,均P<0.05)。结论在VILI发生过程中,MIP-1α是导致中性粒细胞在肺内募集、活化的重要细胞因子;肺组织细胞表达MIP-1α在一定程度上可能受NF-κB的调控;机械刺激→NF-κB→MIP-1α信号通路可能是VILI发生过程中细胞内信号传导途径之一。     

以调节硫化氢为策略的抗阿尔茨海默病研究

目的炎症在中枢神经系统退行性变疾病如阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)等的发病机制中起重要作用。硫化氢(H2S)是近年来在继一氧化氮、一氧化碳后被认为是第3个气体信号分子。本研究旨在首先观察外源性H2S供体硫氢化钠(Na HS)对双侧脑室注射脂多糖(LPS)诱导的大鼠神经炎症模型的影响,再观察内源性H2S供体炔丙基半胱氨酸(SPRC)对该模型的影响,最后观察SPRC对右侧脑室注射淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性的影响,并分别探索其可能的作用机制,旨在研究有效的AD治疗药物。方法 (1)双侧脑室注射LPS诱导大鼠的神经炎症模型,以布洛芬(IBU)灌胃为阳性对照,Morris水迷宫观察腹腔注射Na HS对大鼠学习记忆功能的影响;行为学检测结束后,测定大鼠海马的H2S水平;透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构;实时RT-PCR法测定大鼠海马肿瘤坏死因子α(TNF-α)及TNF-α受体1(TNFR1)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测大鼠海马TNF-α及TNFR1蛋白表达、IκB-α的降解以及NF-κB p65的磷酸化;(2)双侧脑室注射LPS诱导大鼠的神经炎症模型,以IBU灌胃为阳性对照,Morris水迷宫观察腹腔注射不同剂量的SPRC对大鼠学习记忆功能的影响;行为学检测结束后,测定大鼠海马的H2S水平;透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构;实时RT-PCR法测定大鼠海马TNF-α,TNFR1及淀粉样前体蛋白(AβPP)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测大鼠海马TNF-α,TNFR1及AβPP蛋白表达、IκB-α的降解以及NF-κB p65的磷酸化;(3)通过右侧脑室注射Aβ25-35的大鼠神经毒性模型,以多奈哌齐(DON)灌胃为阳性对照,Morris水迷宫观察腹腔注射不同剂量的SPRC对大鼠学习记忆功能的影响;行为学检测结束后,透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构;实时RT-PCR法测定大鼠海马TNF-α、AβPP及环氧合酶-2(COX-2)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测大鼠海马TNF-α,AβPP和COX-2蛋白表达、IκB-α的降解以及NF-κB p65,ERK和AKT的磷酸化。结果 (1)双侧脑室注射LPS可引起大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,海马的H2S水平明显降低,且海马TNF-α,TNFR1和AβPP的m RNA及其蛋白表达明显增加,海马IκB-α的降解增多并加重NF-κB p65的磷酸化;(2)腹腔注射Na HS明显减轻LPS诱导的大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,增加海马的H2S水平,降低海马TNF-α和TNFR1的m RNA及其蛋白表达,阻遏海马IκB-α的降解及NF-κB p65的磷酸化,对假手术大鼠未见明显影响;(3)腹腔注射SPRC(40和80 mg·kg~(-1))明显减轻LPS诱导的大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,增加海马的H2S水平,降低海马TNF-α,TNFR1和AβPP的m RNA及其蛋白表达,阻遏海马IκB-α的降解及NF-κB p65的磷酸化;(4)右侧脑室注射Aβ25-35引起了大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,增加TNF-α,AβPP和COX-2的m RNA表达及其蛋白表达,促进ERK的磷酸化,增加IκB-α的降解以及NF-κB p65的激活,降低AKT的磷酸化;然而,腹腔注射SPRC(40和80 mg·kg~(-1))明显减轻Aβ25-35诱导的大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,降低TNF-α,AβPP和COX-2的m RNA及其蛋白表达,抑制ERK的磷酸化,抑制IκB-α的降解以及NF-κB p65的激活,增加了AKT的磷酸化水平。结论 (1) H2S可减轻LPS诱导的大鼠学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,其机制至少与抑制NF-κB信号通路而抑制促炎介质的产生有关;(2) SPRC可减轻LPS诱导的大鼠学习记忆功能减退及神经元的超微结构损伤,其机制至少与调节内源性H2S生成,抑制NF-κB信号通路而抑制促炎介质及AβPP的产生有关;(3) SPRC可减轻Aβ25-35诱导的大鼠学习记忆功能减退及神经元的超微结构损伤,其机制与抑制海马TNF-α,AβPP和COX-2的m RNA及其蛋白表达,抑制ERK的磷酸化水平,抑制IκB-α的降解以及NF-κB p65的激活,增加AKT的磷酸化等有关。