适配体光子晶体传感材料的制备及初步应用

目的制备高度有序稳定的反蛋白石光子晶体材料,并将其应用于黄曲霉毒素B1的快速检测。方法以聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球为模板,基于溶液中胶体/模板共组装法制备SiO_2反蛋白石光子晶体材料。以黄曲霉毒素B1(AFB1)为靶标,以适配体作为识别元件,制备适配体光子晶体传感材料,采用间接竞争法,建立黄曲霉毒素B1的快速检测方法。结果该方法可控合成大面积高度有序的三维结构材料,并进一步制备了适配体光子晶体传感材料,初步实现了黄曲霉毒素B1的快速检测,最低检测限达10~(-3)ng/ml。结论该方法可防止硅溶胶过度覆盖和非均匀渗透,减少了随机缺陷,简化了制备步骤。此外,还可修饰某些官能团制备成传感检测材料,如修饰氨基后,可通过戊二醛连接适配体、蛋白、抗体以及受体等,极大地拓展了光子晶体的应用领域。     

反蛋白石光子晶体快速检测人心脏型脂肪酸结合蛋白的技术研究

目的 建立一种用于快速检测人心脏型脂肪酸结合蛋白（heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP）的光子晶体（photonic crystal,PC）水凝胶传感检测方法。方法 以甲基丙烯酸（methacrylic acid,MAA）为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯（ethylene glycol dimethacrylate,EGDMA）为交联剂制备掺杂金纳米颗粒的反蛋白石PC水凝胶。进一步修饰H-FABP抗体,制得反蛋白石PC传感材料,研究该传感材料对H-FABP的响应性能。结果 在最佳实验条件下,该方法的检测范围为100 pg/mL～1μg/mL,检出限为11.2 pg/mL,响应时间为8 min,且具有良好的特异性。模拟实际样品的加标回收实验结果表明,该方法具有良好的准确性。与酶联免疫吸附测定试剂盒方法相比,该方法灵敏度较高,检测范围较广。结论 该传感检测方法结合了PC的光学特性与水凝胶的响应特点,实现了对H-FABP的快速检测,为急性冠脉综合征的生物标志物的早期筛查提供技术支撑。     

基于双链特异性核酸酶触发滚环扩增的microRNA-21太赫兹超材料传感方法的构建

目的:构建一种太赫兹(THz)超材料传感方法用于microRNA-21(miRNA-21)的信号放大检测。方法:首先构建THz超材料传感方法,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳及zeta电位验证方法的可行性;对传感器检测条件进行优化之后,对不同浓度的miRNA-21以及其他不同的miRNAs进行检测,并与其他microRNA检测方法进行比较;最后,对该传感器的回收率进行了评价。结果:在最优实验条件下,通过双链特异性核酸酶(DSN)循环识别与滚环扩增(RCA)的双重信号放大策略,该THz超材料传感器对靶标miRNA-21的响应范围为10 fmol/L至10 nmol/L,检测限为8.49 fmol/L。并且该传感器具有较好的特异性,具备了从多种miRNAs中识别靶标miRNA-21的能力,并且在商业化人血清样本中的回收率可达94.33%到115.33%。结论:该THz传感器可以实现靶标miRNA-21的高灵敏、高特异性检测,具备了在miRNA相关疾病无标记诊断与早期预警的潜力。     

光子晶体传感技术在食品安全检测中应用进展

食品安全事件频频发生,严重威胁人们的饮食安全与身体健康。因此,加强对食品中污染物的检测就显得尤为重要。光子晶体是由不同介质材料周期排列而成的人工晶体,具有"光子禁带",周期性的结构使其具有独特的结构色,应用于食品安全检测领域,具有响应迅速、无需标记、有望实现可视化检测等优势,是理想的传感材料。文章重点介绍了光子晶体在食品安全检测中的应用进展。     

聚甲基丙烯酸反蛋白石光子晶体反应特性及其检测己烯雌酚的应用

目的 制备聚甲基丙烯酸(PMAA)反蛋白石光子晶体,观察其在不同环境因素刺激下的反应特性,并初步尝试将己烯雌酚(DES)印迹的PMAA光子晶体应用于检测小分子DES,为此类传感器检测小分子提供新的技术.方法 制备DES印迹的PMAA反蛋白石光子晶体.首先采用垂直沉积法制备二氧化硅蛋白石光子晶体模板,通过向模板中灌入预聚合液聚合形成薄膜,再除去二氧化硅模板和目标分子,得到印迹的反蛋白石光子晶体.在光纤光谱仪下观察pH等环境因素对光子晶体反射峰信号的影响.在体积比1∶1的甲醇和水中检测DES.结果 环境因素溶剂乙醇、离子强度、温度对光子晶体的反射峰信号影响较大,pH对其基本没有影响;印迹光子晶体对DES有明显的吸附反应,检测范围为1～500 ng/ml.结论 制备的DES分子印迹反蛋白石光子晶体对环境因素刺激反应灵敏,并且能够检测微量的DES.     

基于多色上转换纳米材料的适配体荧光传感器检测三种激素类污染物

目的制备上转换多色纳米颗粒,建立适配体荧光传感技术,实现17β-雌二醇、双酚A、孕酮等激素类污染物的快速检测。方法采用核诱导法合成具有核壳结构的上转换多色纳米颗粒,通过表面功能化修饰,将其与目标物适配体偶联,制备多色上转换的适配体纳米颗粒;将金纳米颗粒与互补链偶联,利用上转换纳米颗粒与金纳米颗粒之间的荧光内滤效应,建立了荧光传感方法,可快速定量检测三种激素类污染物残留。结果此方法可定量检测17β-雌二醇(E2)线性范围为120-200 ng/mL(y=703.74-2065.2ln(x-116.76),R^2=0.997),检出限为118.79 ng/mL;双酚A(BPA)线性范围为5-120 ng/mL(y=-2604.15+1138.94ln(x+11.22),R^2=0.985),检出限为4.78 ng/mL;孕酮(P4)线性范围为0.0001-1000 ng/mL(y=91.89+124.68ln(x+1.92),R^2=0.984),检出限为0.0001 ng/mL,特异性识别强,加标实验显示平均回收率较好,E2为100.21%~101.21%,BPA为92.65%~105.65%,P4为95.34%~108.23%,相对标准偏差小于5.54%。结论该方法可以实现三种激素类污染物的快速检测,特异性良好,具有较好的应用前景。     

相思子毒素抗原和抗体制备

[目的]研究一种相思子毒素抗原、抗体的制备技术。[方法]根据相思子毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术将相思子种子中大部分杂质除去;经凝胶过滤层析,进一步去除植物种子中与蛋白毒素并存的凝集素,获得电泳纯度天然相思子毒素纯品。[结果]利用大肠埃希菌表达重组相思子毒素A链蛋白,经金属螯合层析法纯化,得到重组相思子毒素A链蛋白抗原。重组抗原免疫大耳白兔、昆明小鼠,采用辛酸一硫酸铵盐析法和亲和层析法纯化兔血清和鼠腹水获得多抗;2种抗体与天然毒索特异性结合的活性效价均为10^6。[结论]抗原、抗体的制备为建立相思子毒索检测方法奠定了基础。     

超高效液相色谱-串联质谱同时测定生活饮用水及水源水中7种有机污染物残留量

目的建立生活饮用水及水源水中灭草松、莠去津、2,4-滴、呋喃丹、五氯酚、微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-RR残留量的检测的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。方法水样经微孔滤膜过滤后直接进样,采用超高效液相色谱-串联质谱电喷雾电离(ESI),多反应监测(MRM)模式检测7种有机污染物。结果灭草松、莠去津、呋喃丹、微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-RR在0.5~10μg/L范围内;2,4-滴、五氯酚在5~100μg/L范围内,均呈良好的线性关系,加标回收率在85.3%~103.9%,所测定的相对标准偏差在1.98%~4.78%之间。结论此方法灵敏快速,结果准确可靠,适用于生活饮用水及水源水中7种有机污染物残留检测。     

赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究

目的 建立敏感、特异和快速针对赭曲霉毒素A的酶联免疫吸附试验检测方法，研制具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 利用B细胞杂交瘤技术，建立能够分泌抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并获得抗赭曲霉毒素A单克隆抗体。结果 建立赭曲霉毒素A的间接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法(ELISA)。该方法的最低检出浓度为0.5ng/ml，线性范围2～500ng/ml，线性方程Y=0.272X 1.07(r=0.9978)。方法的加标回收率为79.0％～119.7％。利用该方法对北京市售的大米、小麦样品进行检测。结果表明．小麦样品的污染率为60.71％，最大值为8.26μg/kg；大米样品的污染率为17.86％，最大值为3.44μg/kg。结论 该方法简单、快速、灵敏。完全可以满足实际工作的需要。     

利用镧系荧光技术定量检测A型肉毒毒素

目的利用镧系荧光技术建立定量检测A型肉毒毒素方法,并验证该方法的检测效果。方法分别用A型肉毒毒素单克隆抗体和鸡IgY抗体标记镧系荧光纳米微球,在硝酸纤维素膜上包被A型肉毒毒素多克隆抗体作为检测线,包被山羊抗鸡IgY的IgG抗体作为质控线,建立A型肉毒毒素检测方法,分析方法的准确度、特异性、灵敏度和可重复性。结果建立的A型肉毒毒素镧系荧光法可在20 min内完成检测,灵敏度为5 IU/ml,与黄曲霉素B1、呕吐毒素、T2毒素、相思子毒素和蓖麻毒素无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论镧系荧光法的建立为A型肉毒毒素快速、高效检测提供了可靠保障。     

超高效液相色谱-三重四级杆线性离子阱-质谱联用法定量测定全血中杀鼠醚

目的 建立简便、灵敏、准确的全血中杀鼠醚的定量检测方法。
方法 采用超高效液相色谱-三重四级杆线性离子阱-质谱联用法建立全血中杀鼠醚的定量检测方法。样品经乙酸乙酯萃取,以乙酸铵（5 mmol/L）和甲醇为流动相进行梯度洗脱,在C₁₈色谱柱上进行色谱分离,质谱检测采用电喷雾负离子化模式、多反应监测及增强子离子扫描模式。
结果 方法的检出限为3.4 ng/mL,工作曲线在10~1 200 ng/mL范围内线性良好,三个浓度水平的样品平均加标回收率为92.5%、94.3%和101.0%,血中杀鼠醚在4℃冰箱中至少可以保存7 d。
结论 建立的全血中杀鼠醚的定量检测方法,能减少杂质干扰,具有简便、灵敏、准确的优点,可以满足血中杀鼠醚的定量检测要求。
     

毛细管气相色谱法测定工作场所空气中邻苯二甲酸酐

目的建立测定工作场所空气中邻苯二甲酸酐的毛细管气相色谱方法。方法用玻璃纤维滤纸采集空气中的邻苯二甲酸酐,用溶剂(丙酮)洗脱后,采用HP-5毛细管柱分离,氢火焰离子化检测器检测,以保留时间定性,峰面积定量。结果加标回收率为93.2%～102.5%,相对标准偏差为0.90%～4.84%,线性浓度范围为10～200μg/mL,检出限为1.2μg/mL,定量限为4.1μg/mL,最低检测浓度为0.08mg/m3(以采集30L空气样品计)。结论所建立的分析方法简便、灵敏、准确,可用于工作场所空气中邻苯二甲酸酐的测定。     

间氨基苯硼酸修饰磁性碳纳米管-超高效液相色谱串联质谱法测定太湖水体中9种微囊藻毒素残留

目的制备间氨基苯硼酸修饰磁性多壁碳纳米管复合纳米粒子,建立环境水样中9种微囊藻毒素的磁性固相萃取-HPLC-MS/MS检测方法。方法通过水热合成方法制备磁性多壁碳纳米管(Fe3O4/MWCNTs)复合纳米粒子,再利用化学氧化法将间氨基苯硼酸修饰在磁性碳纳米管表面形成功能化纳米材料(APBA@Fe3O4/MWCNTs),合成的纳米粒子在水中具有很好的磁响应度和分散能力。应用透射电子显微镜及红外光谱对材料进行表征。对影响萃取效率的一些因素如材料用量、水样p H值、萃取时间和解析条件等进行优化。结果 9种微囊藻毒素的质量浓度为5 ng/ml～200 ng/ml时,线性关系良好,相关系数(r)均 0. 998,在优化后的条件下,3种加标水平下9种微囊藻毒素回收率为79. 5%～88. 4%,相对标准偏差(RSD)为4. 1%～7. 9%,检出限(LOD)为0. 34 ng/L～4. 88 ng/L。结论间氨基苯硼酸修饰磁性碳纳米管材料对微囊藻毒素具有良好的吸附性能,结合HPLC-MS/MS,可用于富集、分离和测定环境水样中的9种微囊藻毒素。     

枸杞果酒中赭曲霉毒素A液相质谱串联法测定

目的 建立测定枸杞果酒中赭曲霉毒素A(OTA)的高效液相色谱-串联质谱法.方法 样品用免疫亲和柱净化,以Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm)分离;梯度洗脱流动相:水(含0.1％甲酸)和乙腈(含0.1％甲酸);流速:0.4 mL/min;进样量:10μL;电喷雾正离子多反应监测扫描模式(MRM)检测.结果 该方法的定量限为0.02 ng/mL,在0.02～ 20 ng/mL内线性关系良好,加样水平分别为0.2、2、20 ng/mL时,其回收率分别为71.0％、83.7％、86.0％,相对标准偏差(RSD)分别为8.0％、9.0％、6.1％;在随机购买的12份市售枸杞果酒中测得OTA的含量为0.03 ～0.18 ng/mL,检出率为50.0％.结论 赭曲霉毒素A在样品中的测定结果均低于欧盟限量;该方法简便、灵敏、准确,可应用于枸杞果酒中赭曲霉毒素A的测定.     

玉米中黄曲霉毒素B1等3种真菌毒素的高效液相色谱测定法

目的建立玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的高效液相色谱测定法。方法玉米样品经甲醇水溶液(V/V=80∶20)提取后,以提取液为分散剂,三氯甲烷为萃取剂,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素经液液分散式微萃取富集净化,以C18色谱柱为分离柱,以乙腈和1%乙酸水溶液为流动相梯度洗脱分离后,采用变波长的方法对三种毒素进行检测。结果黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的线性范围分别为:1.00~100 ng/ml(r=0.998 5)、5.00~1 000 ng/ml(r=0.999 6)和1.00~100 ng/ml(r=0.999 3),检出限分别为:0.1、1.0和0.3μg/kg,平均加标回收率范围:82.5%~99.3%,RSD10%(n=6)。结论该方法快速、灵敏、准确可靠,适用于玉米样品中黄曲霉毒素B1,玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的同时检测。     

蘑菇中5种蘑菇毒素的超高效液相色谱-串联质谱同时测定法

目的建立测定蘑菇样品中5种蘑菇毒素的超高效液相色谱-串联质谱法。方法样品经提取液涡旋、离心沉淀提取,固相萃取(SPE)柱富集净化,以HSS T3色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm)为分析柱,以2 mmol/L乙酸铵水溶液和乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,以电喷雾电离(ESI)正离子多反应监测模式进行定性及定量检测,外标法定量。结果目标化合物在50～500μg/L范围内线性良好,相关系数0.99。5种毒素(α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽)的检出限为0.07 mg/kg,3个加标水平的回收率为88.4%～115.0%,相对标准偏差(RSD)为1.7%～9.2%。结论该方法准确、快速、灵敏,适用于蘑菇样品中多种蘑菇毒素的同时测定。     

织纹螺毒素的液相色谱法测定

目的:建立高效液相色谱法检测织纹螺中毒素的方法.方法:取织纹螺肉20 g,用60 ml含1%醋酸的甲醇溶液分3次抽提,离心分离合并上清液,在40℃真空旋转蒸发器中浓缩至近干,加蒸馏水溶解,三氯甲烷脱脂,水层经过活性炭柱吸附,用1%醋酸乙醇洗脱,再经过Bio-Gal P-2(2×98 cm)柱中精制,精制液用Bio-Rex 70(1×100 cm)酸性凝胶柱控制流量在0.5 ml/min下采用线性为0～0.03 mol/L甲酸进行分割,收集的分割液经冷冻干燥,用1%醋酸定容,在高效液相色谱仪的反相色谱柱RP-18分离,荧光检测器定量检测.结果:本方法测定TTX的RSD为8.75%,平均样品加标回收率为82.5%,最低检出限2.1 μg;anh-TTX的RSD为5.25%,平均样品加标回收率为90.1%,最低检出限12.5 μg;GTX的RSD为7.23%,平均样品加标回收率为83.0%.最低检出限1.7 μg;STX的RSD为5.93%,平均样品加标回收率为101.3%,最低检出限4.2μg.结论:(1)采用活性炭吸附,经Bio-Gal P-2(2×98 cm)柱和Bio-Rex70(1×100 cm)柱处理的样品.在液相色谱检测时,可以有效消除来自样品基体背景的严重干扰,使样品待测组分分析图谱与加标方法制备的标准分析图谱具有同样的抗干扰性.(2)分别采用两种流动相可以准确分析TTX、anh-TTX、GTX和STX毒素.(3)使用改制的柱后衍生系统能够方便、价廉的满足检测工作需要.解决了样品前处理中有效排除样品基体干扰物质的问题,使净化的待测定毒素成分能够采用高效液相色谱仪的反相色谱柱定量检测.     

电感耦合等离子质谱法测定工作场所空气中氧化钕

目的检测稀土企业电解车间空气中氧化钕浓度。方法采用硝酸消化滤膜,电感耦合等离子质谱法测定车间空气中氧化钕浓度。结果在0～50 ng/mL范围内直线回归相关系数为0.9998,检测下限为0.0243 ng/mL,最低检出浓度为0.0081μg/m3(以采集75 L空气样品计),相对标准偏差为2.1%～3.3%,加标回收率为99%～104%。结论该法检出限低、灵敏、稳定。     

自动固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法测定太湖水和饮用水中9种微囊藻毒素

目的建立自动固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法测定太湖水和饮用水中9种微囊藻毒素的分析方法。方法水样和藻细胞提取液经HLB固相萃取柱净化浓缩,氮吹挥去溶剂,用甲醇-水(0.04%甲酸)(1∶1,V/V)溶解,0.2μm微孔滤膜过滤,梯度洗脱条件下经BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm)分离后,采用超高效液相色谱-串联质谱法多离子反应监测(MRM)双电荷模式检测。结果 9种微囊藻毒素的质量浓度为5 ng/ml~200 ng/ml时,线性关系良好,相关系数(r)均0.998,9种微囊藻毒素的检出限(LOD)为0.074 ng/L~1.65 ng/L,定量限为0.25 ng/L~5.51 ng/L。3种加标水平下的平均回收率为65.3%~102.3%,相对标准偏差(RSD)为1.4%~11.6%。结论该方法前处理效率高、选择性强、灵敏度高,可应用于太湖水和饮用水中9种微囊藻毒素的同时检测。     

检测霍乱弧菌的基因芯片的制备

目的研制快速、特异、灵敏的检测霍乱弧菌基因芯片.方法选择霍乱弧菌特异的编码外膜蛋白的ompW基因和毒素ctxA基因,设计引物和探针,并制备检测芯片,通过2次PCR扩增,制备荧光标记的靶序列,并与芯片进行杂交,检测霍乱弧菌和非霍乱弧菌病原体.结果所有霍乱弧菌菌株在采用单一和多重PCR2种方法制备的荧光标记靶序列与芯片杂交,均在芯片相应探针处出现阳性信号,非霍乱弧菌菌株杂交结果均为阴性.结论霍乱弧菌基因检测芯片的研制,为霍乱弧菌感染的诊断提供了准确、快速、灵敏的方法,还可选择更多的基因位点设计探针以提高检测的可靠性,可以达到高通量、集成化和自动化的要求.