131株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床特征分析

目的回顾性分析131株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床特征,通过改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM试验)与EDTA改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM试验)分析其产酶类型,为院内感染防控和优化临床用药提供依据。方法收集2017年1月1日至2018年12月31日分离的131株CRE,分析其菌种构成、标本来源、科室分布等临床特征,采用mCIM试验对其进行快速表型分析,并通过eCIM试验确定其产酶类型。结果收集到的131株CRE菌株中,以肺炎克雷伯菌(86.2%)为主,其次分别为大肠埃希菌(7.6%)、弗劳地枸橼酸杆菌(2.3%)等。标本来源以痰液(36.6%)为主,其次为尿液(17.5%)、血液(13.0%)等。科室分布以重症监护病房(37.4%)为主,其次分别为神经外科(16.8%)、特诊病房(6.2%)等。mCIM试验阳性率为84.73%,以肺炎克雷伯菌为主(91.89%),eCIM试验分析其产酶类型,其中肺炎克雷伯菌主要以产丝氨酸酶为主(80.39%),大肠埃希菌以产金属碳青霉烯酶为主(88.89%)。结论 CRE临床感染现状较为严峻,应加强监测,防止并控制传播;mCIM试验与eCIM试验检测快速简便,有较高的应用价值。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因及同源性分析

目的 对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)进行耐药基因和同源性分析,了解其流行病学特征,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据.方法 对本院临床分离的60株CRE进行改良Hodge试验的表型鉴定,并对KPC、IMP、VIM、NDM与OXA?48五种常见的碳青霉烯酶基因进行检测;对17株产KPC酶的肺炎克雷伯菌(CRKP)进...     

CIM，mCIM 和MHT 筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的方法评价

目的 评估碳青霉烯类抑制法(carbapenem inactivation method,CIM)、改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和改良Hodge试验(modified hodge test, MHT )对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选能力。方法 以PCR检测碳青霉烯酶基因作为金标准,对120株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterbacteriaceae,CRE)和50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌,分别进行CIM,mCIM和MHT表型筛选试验,评估三种方法的表型筛选能力。结果 120株CRE中,93株携带碳青霉烯酶耐药基因,表型筛选试验显示,CIM,mCIM和MHT的敏感度分别是95.6%,96.8%和95.8%,特异度分别为72.7%,92.3%和50%。三种方法筛选碳青霉烯酶,差异有统计学意义(χ²=12.796,P<0.05)。与PCR结果相比较,CIM,MHT和mCIM的一致率分别为90%,95%和77.4%,Kappa值分别为0.898,0.949和0.771。mCIM和CIM试验与PCR高度一致。50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌PCR检测和三种方法均为阴性。结论 三种表型筛选方法均有较高的敏感度,但mCIM较CIM,MHT具有更高的特异度和一致率,是筛选CRE的有效方法。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌表型检测及其耐药性研究

目的了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)感染状况及其产酶类型。方法采用最低抑菌浓度(MIC)法分析肠杆菌科细菌的耐药情况。采用厄他培南纸片扩散法初筛产碳青霉烯酶菌株,对初筛阳性菌株分别采用改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验、EDTA亚胺培南复合纸片法进行表型确证。结果肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为2.7%、2.3%。厄他培南纸片扩散法初筛阳性菌株11株,其中改良Hodge确证试验阳性(或弱阳性)菌株3株,包括产金属酶菌株1株,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)或AmpC酶菌株2株。2株改良Hodge确证试验弱阳性菌中未检出碳青霉烯酶基因,但检出AmpC、TEM、CTX-M基因,改良Hodge试验阳性菌中检出blaIMP基因。结论改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林改良Hodge试验及EDTA亚胺培南复合纸片法相结合进行碳青霉烯酶检测,在暂无条件开展基因分型的医院具有很好的应用前景。     

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌分子流行病学分析

目的研究西部战区总医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的流行病学特征及耐药机制。方法收集2015年1月-2018年12月临床各种标本分离出的CRE 121株,采用VITEK 2-Compact全自动微生物分析仪进行鉴定和体外药敏试验,聚合酶链反应(PCR)法及测序检测碳青霉烯酶、ESBL酶、AmpC酶和膜孔蛋白基因;肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)进行同源性分析。结果121株CRE中碳青霉烯酶阳性96株,其中65株产blaKPC、25株产blaNDM-1、7株产blaOXA-48、2株产blaVIM,有2株同时产blaKPC和blaNDM-1,1株同时产blaKPC和blaVIM;未检测到blaIMP、blaGES基因;blaSHV、blaTEM和blaDHA检出率分别为46.3%、47.1%和37.2%;OMPF、OMPC缺失/突变率分别为48.1%、84.6%,OMPK35、OMPK36缺失/突变率分别为35.7%、91.1%。药敏结果分析发现121株CRE对青霉素、头孢菌素类抗生素耐药率高,对阿米卡星耐药率最低。ERIC-PCR结果显示56株碳青霉烯类耐药克雷伯菌有5种基因型;26株碳青霉烯类耐药大肠埃希菌有3种基因型;23株碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌有3种基因型。结论该院临床分离的CRE以blaKPC为主要耐药基因,其次为blaNDM-1;部分CRE既携带碳青霉烯酶基因,同时合并膜孔蛋白基因缺失/突变。从分型结果得出,部分菌株同源性非常高,存在克隆传播现象。     

常见革兰阴性杆菌临床分离株对碳青霉烯类等抗菌药物的耐药性分析

目的 调查常见革兰阴性杆菌临床分离株对碳青霉烯类等抗菌药物的耐药性,为临床治疗提供依据。 方法 采用回顾性分析方法,调查2009年1月至2011年12月从温州医学院附属第一医院住院患者分离的2361株革兰阴性杆菌对碳青霉烯类等抗菌药物的耐药性,其中肠杆菌科细菌1832株,非发酵菌529株。 结果 肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药较低。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、粘质沙雷菌、摩根摩根菌和产酸克雷伯菌对亚胺培南的耐药率分别为0.2%(2/1053)、3.0%(15/504)、2.9%(3/102)、9.5%(7/74)、21.7%(10/46) 、10.7%(3/28)和16.0%(4/25);对美罗培南的耐药率分别为0.4%(4/1053)、3.4%(17/504)、3.9%(4/102)、8.1%(6/74)、19.6%(9/46)、14.3%(4/28)和16.0%(4/25)。非发酵菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率高,鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌对亚胺培南的耐药率分别为76.8%(209/272)、37.2%(55/148)和73.4%(80/109);对美罗培南的耐药率分别为73.9%(201/272)、33.8%(50/148)和69.7%(76/109)。肠杆菌科细菌和非发酵菌对其他10种抗生素均呈较高的耐药率。 结论 碳青霉烯类抗菌药物对检测的肠杆菌科细菌具有很好的体外抗菌活性,但对非发酵菌的体外抗菌活性较差。     

75株碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的检出及药敏分析

目的 探讨碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的耐药性及分布状况.方法 对本院2009年1～8月送检标本中共分离到的946株病原菌,进行细菌培养和药敏试验结果分析.结果 946株病原菌中铜绿假单胞菌有171株,占18.1％,其中碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌75株,其对碳青霉烯类抗生素的耐药率为43.9％.痰标本中检出碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌43株,占57.3％.75株碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的病区分布以重症监护病房为主,占33.3％.结论 铜绿假单胞菌感染的标本以呼吸道痰液为主,病区分布主要集中在重症监护病房和神经外科等病室.     

mCIM 与eCIM 筛选肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的效果评价

目的评价改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,m CIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(EDTAcarbapenem inactivation method,e CIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型的筛选能力。方法分别收集碳青霉烯类耐药和敏感肠杆菌科细菌102株和53株,采用m CIM和e CIM进行碳青霉烯酶表型筛选试验,PCR法检测blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48耐药基因,并对表型筛选试验结果与基因检测结果的一致性进行统计分析。结果 102株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中97株检出耐药基因,包括51株blaKPC-2基因、38株blaNDM-1基因、5株blaIMP-4基因以及3株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因;m CIM检出阳性98株,阴性4株。98株m CIM阳性菌中,e CIM阳性46株,阴性52株。53株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌耐药基因检测及m CIM试验均为阴性。m CIM试验筛选碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶产生的敏感性为99.0%,特异性为96.6%,与PCR结果一致性Kappa值为0.959;e CIM筛选金属酶敏感性为93.5%,特异性为94.6%,Kappa值为0.881;e CIM筛选丝氨酸碳青霉烯酶敏感性为92.6%,特异性为95.8%,Kappa值为0.882。结论 m CIM试验与e CIM试验联合检测,不仅可以有效筛选碳青霉烯酶产酶株,而且可同时区分碳青霉烯酶类型,对流行病学调查研究及疾病治疗有重要意义。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的检测

目的调查本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的情况。方法收集2010年1～5月临床分离的肠杆菌科细菌,采用K-B纸片法进行药敏试验,以三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南为检测药物,筛选出可能产碳青霉烯酶的菌株120株,采用改良的Hodge试验进行确证。结果在120株耐一种或多种三代头孢菌素,提示可能产生碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌中,通过表型确证试验确证为阳性的细菌有4株,肺炎克雷伯菌2株,大肠埃希菌1株,弗劳地枸橼酸杆菌1株。结论表型确证试验阳性的细菌中,如需准确辨别亚型,最好用分子生物学方法检测基因序列。     

抑制剂增强碳青霉烯类灭活法对革兰阴性杆菌碳青霉烯酶初步分类的评价

目的评价抑制剂增强碳青霉烯类灭活法(ieCIM)对革兰阴性杆菌碳青霉烯酶检测及初步分类的可靠性。方法分别以他唑巴坦和乙二胺四乙酸作为碳青霉烯酶抑制剂,对CIM进行改良。选取临床分离的198株肠杆菌科细菌和35株非发酵菌,采用ieCIM检测碳青霉烯酶并进行初步分类,以PCR方法检测碳青霉烯酶基因作对比。结果 198株肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阳性101株,CIM检测阳性99株;碳青霉烯酶基因阴性97株,CIM检测均阴性。35株非发酵菌中碳青霉烯酶基因阳性25株,CIM检测阳性24株;碳青霉烯酶基因阴性10株,CIM检测均阴性。使用ieCIM初步分类碳青霉烯酶,87株产A类酶菌株中检出85株(97.7%),25株产B类酶菌株中检出22株(88.0%),12株产D类酶菌株和2株同时产A、B类酶菌株全部检出,ieCIM检测敏感性为96%,特异性100%。结论 ieCIM与基因检测结果一致性高,适合临床微生物常规工作中对碳青霉烯酶的检测及初步分类。     

不同底物在CIM试验检测革兰阴性杆菌碳青霉烯酶中的应用评价

目的评价不同碳青霉烯类抗生素作为指示底物对碳青霉烯类抗生素不活跃检测方法(CIM)结果的影响。方法分别用美罗培南、亚胺培南和厄他培南作为指示药物,对90株肠杆菌科细菌和105株非发酵菌进行CIM试验来检测碳青霉烯酶,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因。结果肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阳性菌株用美罗培南检出率为91.0%(71/78),亚胺培南检出率为92.3%(72/78),厄他培南检出率为85.9%(67/78),3种药物检出率差异无统计学意义(χ2=1.95,P=0.377);肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阴性菌株CIM试验用美罗培南、亚胺培南和厄他培南检测均阴性。非发酵菌碳青霉烯酶基因阳性菌株用美罗培南检出率为94.0%(63/67),亚胺培南检出率为74.6%(50/67),厄他培南检出率为70.1%(47/67),美罗培南检出率均高于厄他培南和亚胺培南的检出率,差异有统计学意义(P0.05)。32株碳青霉烯酶基因阴性鲍曼不动杆菌菌株中有2株美罗培南CIM试验阳性,而亚胺培南和厄他培南检测均阴性。结论应用美罗培南作为反应底物进行CIM试验与基因检测的一致性最高。此方法操作简单,成本低廉,结果易判断,适合在临床实验室开展。     

CIM和Carba NP筛选铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶比较

目的评估碳青霉烯类抑制法(carbapenem inactivation method,CIM)和Carba NP对铜绿假单胞菌碳青霉烯酶表型的筛选能力。方法选取河北省医学微生物菌种保藏库(Hebei Provincial Bank for Medical Culture Collections,HBMCC)保存的碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌146株,分别用CIM和Carba NP法检测碳青霉烯酶活性,采用PCR方法检测VIM-1、KPC-2、IMP-4、NDM-1基因。结果 146株铜绿假单胞菌中有11株Carba NP阳性,阳性率为7.5%(11/146);13株CIM阳性,阳性率为8.9%(13/146)。9株碳青霉烯酶编码基因阳性,其中6株VIM-1阳性,1株VIM-1和IMP-4同时阳性,2株KPC-2阳性;碳青霉烯酶编码基因阳性的菌株Carba NP和CIM均阳性;5株基因检测阴性菌株中1株仅Carba NP阳性,3株仅CIM阳性,1株Carba NP和CIM均阳性。结论 CIM能够准确快速筛选铜绿假单胞菌碳青霉烯酶活性,是一种经济高效的表型筛选方法。     

Evaluation of the modified carbapenem inactivation method for the detection of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae

Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae (CPE) are increasing worldwide. Rapid and accurate detection of CPE is necessary for appropriate antimicrobial treatment and hospital infection control. However, CPE contains some strains that are difficult to detect depending on genotype and MIC value of carbapenem, and a detection method has not been established. The recently reported modified carbapenem inactivation method (mCIM) has been developed in CLSI M100-S27 as a phenotypic technique for detecting carbapenemase activity. In the present study, we examined mCIM as a new CPE detection method using 207 Enterobacteriaceae isolates in comparison with the three existing screening methods of modified Hodge test, Carba NP test and carbapenem inactivation method and evaluated its performance. Consequently, both the sensitivity and specificity of mCIM were 100%, indicating better results than the conventional screening methods. The mCIM is a useful tool for microbiology laboratories due to its simplicity, clear criteria, cost-effectiveness and availability at any laboratory.     

某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床分布特点及药物敏感性分析

目的分析该院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布特点及药物敏感性,为临床合理有效治疗CRE菌株提供理论依据。方法收集医院2019年全年临床标本中分离的肠杆菌科细菌(共计2435株),采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行细菌鉴定、药敏试验,对筛选出的CRE菌株采用K-B药敏纸片扩散法对亚胺培南进行复核,并采用改良碳青霉烯灭活(mCIM)试验和EDTA改良碳青霉烯灭活(eCIM)试验进行碳青霉烯酶表型分析。所有实验数据采用WHONET5.6和SPSS17.0软件进行统计分析处理。结果共分离出213株CRE菌株,以肺炎克雷伯菌为主(161株);标本来源以呼吸道痰液标本为主(41.3%);54.5%的标本分离自重症监护室(ICU),CRE菌株在ICU的分离率明显高于普通病房(χ^2=81.00,P<0.01)。药敏结果显示,CRE菌株除对替加环素比较敏感(耐药率为2.8%),对阿米卡星(51.6%)和四环素(52.0%)的耐药率低一些外,对其余大多数抗菌药物的耐药率均在80%以上。与碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌(CSE)的耐药率相比,CRE菌株对除四环素以外的其他抗菌药物的耐药率均明显高于CSE菌株(P<0.01)。mCIM和eCIM试验结果显示,213株CRE菌株中,170株为丝氨酸酶阳性,43株为金属酶阳性,且43株产金属酶的CRE菌株中,22株都来源于ICU,占比超过50%。不同细菌种类的CRE菌株中,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌和耐碳青霉烯类大肠埃希菌产金属酶的比例均≥50%。结论CRE菌株对多种抗菌药物高度耐药,其临床分离率逐年增高,给临床治疗带来困难。因此应加强抗菌药物的管理,合理选择和使用抗菌药物,注重医院感染的预防和监测,防止医院内感染的传播和流行。     

Evaluation of phenotypic tests for detection of carbapenemases: New modifications with new interpretation

IntroductionThe emergence and spread of carbapenemase-producing Enterobacterales (CPE) is a worldwide public health threat. Rapid and accurate detection of CPE is essential to prevent their dissemination within health care settings. The aim of this study was to evaluate the performance of CIM, mCIM and mCIM with ammonium bicarbonate (mCIM-A) methods by using different interpretation criteria for detection of carbapenemases.MethodsOne hundred and fifty-three Klebsiella pneumoniae isolates previously characterized by molecular tests, including 133 carbapenemase producers and 20 non-carbapenemase producers, were collected in this study. CIM and mCIM tests were performed as described previously. mCIM-A by adding 50 mM ammonium bicarbonate to the bacterial suspension prepared in tryptic soy broth. The inhibition zone diameter of around meropenem disc was measured and interpreted as positive according to i) Pierce and colleagues (<19 mm), ii) EUCAST meropenem susceptibility breakpoint (<22).ResultsCIM, although seems to be good for carbapenemases other than OXA-48-like and NDM, is not satisfactory (42.3% and 83.4%, respectively) for those enzymes with any of the interpretation criteria. OXA-48-like and NDM were detected with a better performance (88.7% and 92.8, respectively) with mCIM when results were interpreted according to <22 mm zone diameter for OXA-48-like and NDM. The best results were obtained with mCIM-A using <22 mm criteria without any difference in the results of other enzymes and negative strains.Conclusions: mCIM-A method interpreted with <22 mm meropenem zone diameter seems to be preferable compared to CIM and mCIM. mCIM-A is simple and useful tool for identification of CPEs in clinical microbiology laboratories.     

应用改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的研究

目的应用改良Hodge试验(MHT)检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的应用价值。方法应用MHT检测对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的24株肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的情况。同时利用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶的基因,包括KPC、NDM、IMP、SIM和VIM,PCR阳性的产物测序结果与Gen Bank数据库进行比对。综合分析MHT和PCR检测碳青霉烯酶的效率。结果对碳青霉烯酶抗菌药物敏感性降低的24株肠杆菌科细菌应用MHT检测碳青霉烯酶的阳性菌株共为13株,而PCR检测出碳青霉烯酶基因的只有5株。且PCR产物测序结果经比对后证实1株为KPC-2和4株为IMP-4。对比分析MHT和PCR的检测结果可知有4株肠杆菌科细菌的MHT和PCR同时检测出碳青霉烯酶;有9株肠杆菌科细菌的MHT为阳性,但PCR没检测出碳青霉烯酶的基因;有1株肠杆菌科细菌MHT为阴性,但PCR检测出碳青霉烯酶的基因。结论 MHT作为筛查碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的准确性值得继续探讨。