建立监测核酸检测系统趋势变化方法的探讨

目的探讨罗氏核酸检测试剂在多台核酸检测设备应用时建立室内质量控制措施,监测核酸检测设备试验的稳定性。方法应用罗氏核酸检测试剂在罗氏Cobas S201核酸检测系统上对无偿献血标本、核酸检测试剂盒阳性对照品、核酸弱阳性室内质控品进行检测,记录每台检测设备的阳性对照品和弱阳性室内质控品的各检测项目通道的Ct值。应用Excel绘制质量控制图,以检测日期为横坐标,各个项目检测Ct值为纵坐标,形成每台检测设备的各检测项目的质控分析图,通过对各检测设备阳性对照品和弱阳性室内质控品的Ct值标准差、均值,评价各检测设备检测的稳定性。结果各检测设备的阳性对照品及室内质控品的CV值均在5%以内,1A检测设备与1B检测设备比较时,各检测项目P0.05,1B检测设备与2号检测设备比较时,各检测项目P0.05,1A检测设备与2号检测设备比较时,各检测项目P0.05,均无显著性差异。结论各检测设备间检测性能无明显差异,本实验室参照定量数据模式所建立的室内质量控制措施用以监测核酸检测系统趋势变化的方法具有一定的意义。     

一种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能验证

目的　评估一种国产新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒是否满足临床SARS-CoV-2 核酸检测要求。 方法　采用15 例SARS-CoV-2 核酸阳性和15 例SARS-CoV-2 核酸阴性的临床样本,1 支SARS-CoV-2 RNA 干粉标准 品,5 支阳性定值参考品和5 支阴性定值参考品,对该试剂盒检测SARS-CoV-2 阴性和阳性符合率、精密度、检出限和 交叉反应进行验证。结果　20 例阴性和20 例阳性样本的N 基因和ORF1ab 基因阴阳符合率均为100%。2 例阳性样本 ORF1ab 基因重复性CV 为0.41%~0.56%,优于N 基因重复性,N 基因和ORF1ab 基因重复性、实验室总不精密度CV 均＜ 5%。检出限重复20 次的检出率为100%,SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体、与SARS-CoV-2 同种属病毒（人副 流感病毒1 型、鼻病毒、MERS,SARS,甲型流感病毒、乙型流感病毒、冠状病毒HKU1,NL63,229E 和OC43）之间不 产生交叉反应。 结论　该试剂盒阴阳性符合率一致,重复性好。SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体,与SARS-CoV-2 同 种属病毒不会产生交叉反应,适用于临床实验室和检测机构进行SARS-CoV-2 核酸筛查。     

不同核酸提取方法SARS-CoV-2核酸检测性能比较

目的比较磁珠吸附法和样本释放剂法对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测结果的符合率、重复性及检出限,优选出提取效率高、耗时短、成本低的核酸提取方法。方法采用2种核酸提取方法的3种商品化核酸提取试剂,分别对阴性样本、阳性样本及不同浓度(稀释度20～28)的SARSCoV-2 RNA标准品进行RNA提取及实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测,以Ct值评价不同核酸提取方法的性能。结果 3种核酸提取试剂的阴性和阳性样本结果符合率均为100%。使用磁珠吸附法进行核酸提取的变异系数(CV)(CV为0.89%～1.58%)低于样本释放剂法,样本释放剂B的CV(CV为0.83%～2.73%)次之,样本释放剂A的CV最大(CV为1.62%～4.90%)。磁珠吸附法及样本释放剂B提取核酸的检出限均为156.3拷贝/mL,样本释放剂A的检出限为625.0拷贝/mL。结论磁珠吸附法核酸提取试剂核酸提取效率高、重复性好,适合大批量样本的集中操作。     

化学发光和酶免2种检测系统检测HBsAg情况分析

目的通过对日常献血者标本(3 031份)和血清盘的平行检测,评估化学发光(CLIA)和酶免(ELISA)2个检测系统检测HBsAg各项性能指标。方法分别采用ELISA(国产A试剂)、ELISA(进口B试剂)和CLIA(国产)对3 031份日常献血者标本进行HBsAg的检测,将阳性标本送卫生部临检中心进行确认实验;分别采用ELISA2种厂家试剂和CLIA(国产)对HBsAg血清盘进行平行检测,将上述数据汇总整理分析,比较ELISA和CLIA2种检测体系的灵敏度、特异性、阳性预期值、批内与批间精密度以及不同血清型标本和突变株的检出能力等指标。结果 ELISA与CLIA平行检测日常献血者标本(3 031份)复检符合率CLIA(国产)为83.33%、ELISA(进口B试剂)为33.33%、ELISA(国产A试剂)为14.28%,CLIA高于ELISA(2种试剂)且P0.01。ELISA和CLIA平行检测HBsAg血清盘情况:CLIA本中心实验室与其它实验室整体检测的灵敏度、特异性、阳性预期值,P0.05。ELISA(国产A)和CLIA(国产)的灵敏度分别为77.39%和89.17%,P0.05,阳性预期值和特异性,P0.05;ELISA(进口B)和CLIA(国产)的灵敏度、特异性、阳性预期值,P0.05。A盘弱阳性质控批内CV:CLIA(4.869%)A(7.269%)B(8.428%);H盘弱阳性质控批内CV:CLIA(4.949%)B(7.157%)A(13.712%);H盘强阳性质控批内CV:CLIA(4.486%)B(11.543%)A(46.454%)。弱阳性质控批间CV:CLIA(8.108%)B(15.288%)A(33.585%);强阳性质控批间CV:CLIA(6.410%)A(10.285%)B(12.673%)。血清盘HBV 3种血清型ayw1、adw2和adrq+的检出下限分别为:CLIA(国产)0.09 IU/mL、0.05 IU/mL、0.05 IU/mL;ELISA(进口B试剂)均为0.05 IU/mL;ELISA(国产A试剂)为0.18 IU/mL、0.09 IU/mL、0.05 IU/mL。针对HBsAg突变类型的检测能力多家血站整体数据显示,应用进口试剂的ELISA检测系统要优于应用国产试剂的CLIA检测系统。结论对于HBsAg的检测虽然从方法学上化学发光要优于酶联免疫,但是从我们的评估情况看其各项性能指标的检测水平2种检测系统却各有优劣,由此可见我们认为针对HBsAg的检测,各实验室应通过综合分析选择最适合自己的筛查策略。     

4种SARS-CoV-2核酸检测试剂一致性评价

目的评估4种严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)诊断中的一致性。方法收集2020年2月18—24日武汉亚心总医院204例COVID-19住院患者临床资料,利用检测剩余标本,对4家通过应急注册审批的SARS-CoV-2核酸检测试剂盒进行一致性评价。在临床诊断为COVID-19的基础上,以任一试剂检出阳性为参考,分别比较4种试剂盒检测SARS-CoV-2ORF1ab基因、N基因的敏感性和特异性。采用Kappa一致性分析和χ~2检验对检测结果的一致性进行统计学分析。结果 4种试剂对SARS-CoV-2的整体检出率分别为72.4%、78.0%、59.3%和72.4%,差异有统计学意义(P=0.011)。A、B、C、D试剂对SARS-CoV-2 ORF1ab基因的检出率分别是47.7%、31.8%、68.2%和83.2%(P0.000 1);A、B、C试剂对SARS-CoV-2 N基因的检出率分别是79.0%、90.5%和16.2%(P0.000 1)。结论SARS-CoV-2核酸检测试剂盒存在一定比例的假阴性结果,不同品牌SARS-CoV-2核酸检测试剂检测性能差异有统计学意义,多试剂联合检测有利于提高病毒检出率。     

广西地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症检测实验室室间质量评价分析

目的分析评价广西地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的实验室检测情况,以提高G6PD检测质量。方法 2015年3月和10月向广西地区197家开展G6PD检测的实验室发放两批冻干品和新鲜血质控品,分别用于定量与定性试剂检测。所有数据通过Clinet EQA网络回报,并按照规定格式上报定量结果,根据各实验室建立的参考范围上报定性结果及方法学、试剂、仪器等相关信息。按照试剂分组,采用Clinet EQA程序、Microsoft Excel 2007软件对各参评实验室检测结果进行统计分析。结果目前该地区G6PD定量试剂盒检测内容、检测单位及同种方法学的参考范围不一致。定量试剂检测G6PD缺乏质控品及正常质控品符合率均为100.0%,定性试剂检测缺乏质控品平均符合率为77.1%。各定量试剂组检测缺乏质控品变异系数(CV)较大,平均CV为17.06%,检测正常质控品CV较小,平均CV为10.10%。第2次室间质量评价各试剂组平均CV(10.81%)均低于第1次(14.89%)。结论通过参加广西地区G6PD室间质量评价计划,能帮助实验室减少误差、改进质量,更好地为G6PD缺乏症高发区的临床诊断服务。     

5种梅毒酶联免疫吸附实验试剂性能比较

目的 比较梅毒酶联免疫吸附实验试剂盒的检测性能,优选适宜于献血者梅毒螺旋体检测的试剂盒.方法 应用中国药品生物制品检定所提供的梅毒螺旋体国家参考品血清盘、卫生部临床检验中心提供的梅毒螺旋体血清盘、相关部门确认的标本,对5种试剂盒进行性能评价.结果 5个厂家生产的试剂特异性均为100.00%,灵敏度93.44%～100.00%,总符合率96.92%～100.00%,精密度5.30%～16.70%,A、B、C 3种试剂最低检出限低于D和E试剂.结论 不同厂家生产的试剂性能存在差异,各采供血机构应选择灵敏度高、特异性强的试剂,以提高献血者梅毒螺旋体抗体的检测质量.     

国产HBsAg、抗-HCV ELISA诊断试剂盒质量的初步评估

目的 对国产HBsAg、抗-HCV ELISA诊断试剂盒质量进行初步评估,为试剂选用提供参考依据,以期寻求高质量适合实验室的ELISA诊断试剂,确保临床输血安全.方法 用"批批检定"合格的试剂对阳性、弱阳性和阴性血清考核盘进行检测.结果 各厂家试剂在灵敏度、特异性、孔间变异系数、阴性及阳性符合率各指标有差异,质量有一定...     

5种抗-HIV ELISA试剂的质量比较

现对5家试剂厂提供的抗-HIVELISA试剂(其中3家国产的、2家进口)质量进行比较分析如下。1　材料和方法1.1　材料　1检测产品:抗-HIV阳性血清共20份,其中阴性对照20份;2抗-HIV诊断试剂:5种厂家抗HIVELISA诊断试剂分别用大写字母A、B、C、D、E,其中D、E为进口试剂。3芬兰产酶标仪:WellscanMK-3;4芬兰产酶标洗板机:WellwashMK-2。1.2　方法　均按各试剂使用说明书操作,用OD值检测各试剂的灵敏度,用血清参考品检定各厂家试剂的阴阳符合率。2　结果表1　各厂家试剂20份抗-HIV阳性血清OD平均值比较批号OD值A200401152.856B20040…     

河流弧菌核酸检测试剂国家参考品的建立

目的 建立河流弧菌核酸检测试剂国家参考品并制定质量标准。方法 收集并筛选河流弧菌核酸阳性和阴性临床分离株样本,建立河流弧菌核酸检测试剂国家参考品。使用不同试剂对参考品进行协作标定,并对参考品稳定性和均匀性进行考核。结果 河流弧菌核酸检测试剂国家参考品由20份样本组成,包括8份阳性参考品P1～P8、10份阴性参考品N1～N10、1份检测限参考品L和1份重复性参考品R,L经菌落计数法测定浓度为1×108CFU/mL。国家参考品的质量标准为阳性符合率8/8,阴性符合率10/10,检测限要求1∶104稀释或更高浓度时应均为河流弧菌阳性,重复性要求对稀释后的两个浓度水平的Ct值的变异系数（CV,%）均不大于5.0%。经过随机抽样检测,参考品均匀性符合要求,在2～8℃冷藏条件、室温放置7天均未影响参考品稳定性。结论 本研究研制了河流弧菌核酸检测试剂国家参考品,并制定了其质量标准,可用于相关定性检测试剂的质量评价。     

新型冠状病毒核酸非配套检测系统性能确认方法的建立

目的 对实验室新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸非配套检测系统性能进行确认,以确定其是否满足临床需要。方法 根据ISO15189要求,对北京大学深圳医院实验室SARS-CoV-2核酸达安提取试剂与伯杰扩增试剂组成非配套检测系统的符合率、精密度、检出限及交叉反应进行性能确认。结果 非配套检测系统在实验室内不同的荧光定量PCR扩增仪上检测,方法符合率为100.00%;精密度确认试验ORF1ab基因和N基因变异系数(CV)均<5%。检出限能力ORF1ab基因为98.33%(118/120),N基因为91.67%(110/120),有效检出率为100.00%(120/120);与感染部位相同或感染症状相似的病原体无交叉反应。结论 实验室需对非配套检测系统进行性能确认,确保SARS-CoV-2核酸检测结果质量。     

血站抗-HCV试剂参考品的建立及应用

目的 通过建立抗-HCV试剂参考品以用于评价血站使用的抗-HCV批批鉴定试剂.方法 收集自2009年11月～2010年9月北京市红十字血液中心复检报废的抗-HCV阳性及阴性血浆各150份,所有样品均用确证试剂进行检测.根据确证结果挑选组成参考盘的阳性、阴性及精密度参考品,灵敏度参考品是通过用正常阴性血浆将阳性血浆倍比稀释后,挑选合适样品再用确证试剂检测后获得,以上样品组成该室内部抗-HCV参考品.用A,B,C和D四种国产及进口试剂检测该室制备参考品后与国家标准参考品进行比较.结果 该室内部抗-HCV试剂参考品组成包括20份阳性参考品、20份阴性参考品、4份灵敏度参考品、1份精密度参考品.用A,B,C和D四种国产及进口试剂经ELISA检测后与国家参考品比较符合率100％.结论 本套参考品与国家参考品实验符合度高,灵敏度检测结果更适宜本实验室应用,稳定性良好,适合该血站内部使用.     

新型冠状病毒核酸检测的性能验证及评价

目的验证实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测系统的主要性能。方法参考《医学实验室质量和能力的要求》第1部分通用要求GB/T22576.1-2018和第10部分分子生物检验学领域的要求GB/T22576.10-2018对该实验室RT-qPCR检测SARS-CoV-2核酸的检测系统的符合率、重复性、检出限、抗干扰能力、交叉反应等性能特征进行验证及评价。结果该实验室与国家卫生健康委临床检验中心2020年第1、2次SARS-CoV-2室间质评标本的阳性符合率为92%,阴性符合率为100%,总符合率为95%,其中有1例阳性标本未检出阳性,系标本浓度低于最低检测限;弱阳性标本检测的靶基因ORF-1ab和N的Ct值的批内变异系数(CV)分别为1.38%和1.16%,批间CV分别为1.84%和1.72%,均小于5%;检测限浓度(500 copies/mL)标本5次重复检测SARS-CoV-2核酸结果均为阳性;在加入严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、磷酸盐缓冲液(PBS)、人冠状病毒NL63(NL63)、人冠状病毒HKU1(HKU1)、人冠...     

7家ELISA法HBsAg诊断试剂的质量评价分析

目的对7家ELISA法HBsAg诊断试剂(国产5家进口2家)进行质量考核和分析,为实验室选择高质量试剂提供参考。方法应用临床科研血清盘、HBsAg弱阳性定值质控血清,对7家ELISA法HBsAg诊断试剂盒的灵敏度阴阳样总符合率以及亚型最低检出限进行质量评价分析。结果 7家试剂对HBsAg弱阳性0.2IU/mL定值质控血清、adr、adw亚型的最低检测限,检测的S/CO比值的差异很大;3国产试剂对ay血清型的出现漏检现象。结论 7家HBsAg ELISA诊断试剂的灵敏度总符合率均有较大的差异,实验室在选择试剂时应当进行考核,进口试剂相对质量较好。     

4种丙型肝炎病毒荧光定量试剂可比性分析

目的了解不同厂家HCV-RNA定量检测试剂盒测定结果的可比性。方法采用RT-PCR技术对4种HCV-RNA试剂精密度(批内、批间)、线性、阳性检出率、试剂间可比性进行评价。结果本方法评价表明各厂家试剂盒批内变异系数(CV)均小于10%、批间变异系数(CV)均小于12%、线性r>0.97、阳性检出率均大于81%、试剂间结果相关性均r<0.60。结论不同试剂盒检测结果稳定,但不同厂家试剂盒间可比性差,不利于丙型肝炎患者在不同医院诊治,各试剂厂家需建立溯源体系,统一标准。     

三种化学发光法检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体试剂盒的临床应用评价

目的 评价三种新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体化学发光试剂盒的检测性能,研究SARS-CoV-2 抗体检测的临床应用价值。方法 采用37 例临床确诊新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者恢复期血清样本和100 例对照患者血清样本,对三个不同厂家的化学发光新型冠状病毒抗体检测试剂盒进行评估。绘制ROC 曲线分析三种试剂的检测性能。利用Kappa 统计分析三种试剂的检测一致性。结果 对于IgM 抗体检测,试剂A 和试剂B 具有非常好的检测性能,尤其是试剂B 性能最优,临床敏感度为56.76%,临床特异度为99%;对于IgG 抗体检测,三种试剂均具有非常好的检测性能,三种试剂的临床特异度均为97.00%,而试剂C 的临床敏感度最高,为97.29%。对于IgM 抗体检测,试剂A 与试剂B 检测结果具有中度一致性（Kappa=0.508,P<0.05）,试剂C 与试剂B 检测结果仅具有微弱一致性（Kappa=0.065,P ≥ 0.05）;对于IgG 抗体检测,试剂A 与试剂C 检测结果具有高度一致性（Kappa=0.654,P<0.05）,试剂A 与试剂B 检测结果为弱一致性（Kappa=0.102,P ≥ 0.05）。结论 三种化学发光法SARS-CoV-2 IgM 和IgG 抗体检测试剂盒均具有一定的临床敏感度和特异度,但各厂家产品的检出一致性相差较大,因此产品性能的标准化和工艺标准化亟待解决。     

三种国产抗-HCV酶联免疫诊断试剂检测结果与电化学发光法比较

目的探讨A、B和C三种不同国产酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂检测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）结果的差异性,并将检测结果与电化学发光法检测结果进行比较。方法随机挑选临床检测样本94例。所有样本再使用B、C和Roche电化学发光法试剂盒进行检测。ELISA试剂都使用各自的试剂盒S/CO值进行阴阳性判断,电化学发光检测结果判断以仪器的COI作为判断标准,结果〉1为检测有反应性。结果 A、B、C和电化学发光检测的阳性率分别为84.04%（79/94）、35.11%（33/94）、25.53%（24/94）和39.36%（37/94）,A试剂显著高于电化学发光法,而C试剂显著低于电化学发光法。A、B、C和电化学发光检测的结果一致性分别为55.32%（52/94）、95.74%（90/94）和86.17%（81/94）。将A试剂盒检测的结果分为阴性组（〈1）、弱阳性组（1~8）、阳性组（〉8）三个组,阴性和阳性组四种试剂检测结果符合率较好,而弱阳性组符合率较低。结论 3种国产试剂对阴性和阳性标本与Roche电化学发光法检测符合率很高,弱阳性标本符合率则存在差异,对于弱阳性标本建议使用确诊试验。     

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。     

1种新型冠状病毒核酸检测试剂的性能验证

摘要：目的?验证一种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的检测性能。方法?依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》，使用2019-nCoV RNA液体性能验证参考品，依次对实时荧光RT-PCR试剂的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力进行验证及评价。结果?实时荧光RT-PCR试剂检测2019-nCoV RNA的符合率为100%，检出限为125 copies/mL。该试剂检测人冠状病毒HCoV-OC43、人冠状病毒HCoV-HKU1、人冠状病毒HCoV-229E、人冠状病毒HCoV-NL63、SARS冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、EB病毒、人巨细胞病毒和结核分枝杆菌无交叉反应；2.0×103?copies/mL和2.0×105?copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内变异系数(CV)为0.70%及1.36%，批间CV为1.17%及1.72%；ORF1ab基因的批内CV为0.48%及0.52%，批间CV为1.36%及2.39%；加入内源性干扰物血红蛋白及清蛋白、外源性干扰物利巴韦林及阿奇霉素对2019-nCoV RNA的检测结果无影响。结论?该试剂检测2019-nCoV RNA的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力均符合临床分子生物学扩增检验的要求，可为临床提供可靠依据。     

一种新型肠道病毒核酸检测试剂的初步评价

目的评价新型磁珠法肠道病毒核酸检测试剂(以下简称"磁珠法试剂")的灵敏度和精密度。方法对204份标本分别用磁珠法试剂和Trizol法试剂进行肠道病毒RNA定性检测,评价其一致性和等效性,并比较两种试剂的灵敏度和精密度。结果磁珠法试剂与Trizol法试剂的阳性符合率为97.58%,阴性符合率为100.00%,总符合率为98.53%,Kappa值为0.969 4。磁珠法试剂的灵敏度高于Trizol法试剂。对两个中、低浓度标本各重复检测10次,磁珠法试剂的变异系数(CV)为0.84%、0.96%,Trizol法试剂为2.01%、1.43%。结论新型磁珠法试剂盒与Trizol法试剂盒具有较高的一致性,其灵敏度、精密度优于Trizol法试剂盒,可以用于临床肠道病毒核酸检测。