E3泛素连接酶TRIM65通过调控NLRP3炎症小体的活化改善DSS诱导的结肠炎

目的 TRIM65对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎的作用及机制探讨。方法 Trim65^+/+和Trim65^-/-小鼠连续5d给予含3%(w/v)DSS的饮用水,然后给予无菌水2d。每天监测小鼠结肠炎的临床症状(体重、粪便稠度和直肠出血评分),第7d处死小鼠。测量结肠长度,收集结肠远端组织,HE染色和免疫组化判定组织损伤和炎症程度;匀浆结肠组织,评估MPO活性,免疫印迹法(western blotting)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测成熟caspase-1和IL-1β的变化。Trim65^-/-小鼠腹腔注射NLRP3炎症小体抑制剂MCC950,同时给予上述处理,以判断TRIM65对小鼠结肠炎的影响是否通过NLRP3炎症小体来实现。结果 在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠的结肠炎模型中,Trim65基因的缺失可显著增强DSS诱导的小鼠的体重减轻和结肠缩短,促进疾病活动指数和组织病理学评分增加,促进结肠MPO活性和F4/80+免疫细胞浸润增加、caspase-1激活和成熟IL-1β分泌增加。NLRP3炎症小体抑制剂M...     

交通相关PM2.5及其水溶成分诱导哮喘大鼠脾脏自噬及NLRP3炎症小体活化的机制研究

目的 探讨交通相关PM2.5及其水溶成分是否可诱导哮喘大鼠脾脏自噬,及NLRP3炎症小体的活化,导致脾脏损伤.方法 SD雄性大鼠25只,随机分为5组,分别为生理盐水组(NS组)、哮喘组(OVA组)、PM2.5混悬液组(PM2.5组)、PM2.5水溶成分低组(WSL组)和PM2.5水溶成分高组(WSH组);以OVA和氢氧...     

双酚A暴露与肥胖患者脂肪组织NLRP3炎症小体激活的相关性

  目的  通过临床病例样本检测分析探讨双酚A(bisphenol A, BPA)暴露与肥胖患者脂肪组织NLRP3炎症小体激活的相关性。  方法  纳入代谢减重手术的肥胖患者102例,收集临床资料及人口统计学数据,并采集血、尿和手术切除的内脏脂肪组织标本。液相色谱-质谱联法(liquid chromatography mass spectrometry, LC-MS)检测尿BPA浓度(肌酐校正BPA,简称BPAcr),ELISA检测血清、脂肪组织炎性细胞因子白细胞介素(interleukin, IL)-1β和IL-18含量,免疫荧光法检测脂肪组织NLRP3表达,qRT-PCR和免疫印迹法检测脂肪组织NLRP3激活相关分子的mRNA和蛋白表达水平,分析尿BPAcr与血清和脂肪组织炎性因子水平,以及脂肪组织NLRP3激活的相关性。  结果  肥胖患者尿BPAcr与BMI、血清IL-1β、血清IL-18、脂肪组织炎性因子IL-1β和IL-18水平呈正相关(r_s值分别为0.784、0.852、0.737、0.509及0.471,均有P < 0.001)。肥胖患者脂肪组织巨噬细胞(adipose tissue macrophages, ATMs)中NLRP3表达,NLRP3、ASC mRNA表达水平,以及IL-1β、caspase-1蛋白表达水平与尿BPAcr均相关(均有P < 0.05)。  结论  BPA暴露可能通过激活脂肪组织ATMs中NLRP3炎症小体,上调促炎细胞因子的分泌,导致肥胖患者炎症状态。     

矽肺患者支气管肺泡灌洗液肺泡巨噬细胞NLRP3炎症小体表达的临床意义

收集20例不同期别矽肺患者的支气管肺泡灌洗液(BALF)和培养后的肺泡巨噬细胞(AM),用实时定量PCR法检测AM的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β及IL-18 m RNA表达水平。贰期和叁期矽肺患者NLRP3、ASC、Caspase-1炎症小体及其下游分子IL-1β及IL-18较壹期表达增高,差异有统计学意义。提示NLRP3炎症小体的活化在矽肺进行性纤维化发展中可能发挥重要作用。     

维生素E对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的观察糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(MIR)时细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和自由基代谢的变化及维生素E对其的影响。方法通过腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,造模成功后4w进行MIR处理。糖尿病大鼠30只分为假手术对照(sham)组,MIR组和维生素E(VE)治疗组。免疫组织化学法检测心肌ICAM-1蛋白表达。检测血清、心肌组织SOD、GSH-Px活性、MDA含量和活性及心肌线粒体Na+,K+-ATP酶、Mg++-ATP酶、Ca++-ATP酶活性。结果与sham组相比,MIR组心肌线粒体Na+,K+-ATP酶、Mg++-ATP酶、Ca++-ATP酶活性明显下降;血清、心肌MDA明显升高,血清、心肌SOD和GSH-Px活性明显降低用,心肌ICAM-1蛋白表达明显升高;用VE4w后与MIR组比,心肌线粒体Na+,K+-ATP酶、Mg++-ATP酶活性明显升高;血清、心肌MDA降低,血清、心肌SOD和GSH-Px活性升高,心肌ICAM-1蛋白表达降低。结论维生素E可通过减轻脂质过氧化和自由基损伤,下调ICAM-1蛋白表达,拮抗糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤中TNF基因表达状况

目的检测在心肌缺血再灌注损伤中TNF的表达,并初步探讨其机制。方法采用Langendorff模型及大鼠离体心脏灌注模型,心肌组织缺血30min后、再灌注30、60、120min时,用原位杂交、免疫组化和酶联免疫法检测心肌细胞中TNFrnRNA、蛋白的表达。结果缺血再灌注实验组心肌组织中的TNF蛋白水平比对照组明显升高;实验组心肌细胞中的TNFmRNA和蛋白表达明显,染色呈强阳性或极强阳性（t=2．689,P〈0．05）,并且呈阳性表达的细胞是心肌细胞。结论缺血再灌注可刺激心肌细胞大量表达TNF,并且心肌组织中的TNF主要由心肌细胞表达产生。     

基于NLRP3炎症小体通路探究调控miR-223对脓毒症大鼠急性肺损伤的干预作用

目的 探究基于NOD样受体家族3(NLRP3)炎症小体通路探究调控miR-223对脓毒症大鼠急性肺损伤的干预作用。方法 将55只雄性8周龄SD大鼠采用公认的盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症肺损伤模型,造模成功后将其分为假手术组、模型组、miR-223 mimics control组、miR-223 mimics组各10只,同时另取15只大鼠作为对照组。HE染色观察各组大鼠肺组织结构排列及损失情况,血气分析仪检测各组大鼠动脉血气并计算肺组织W/D比,酶联免疫吸附试验法检测大鼠血清、肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平,Western blot检测各组大鼠Caspase-1、NLRP3、ASC的表达情况,同时采用RT-PCR检测大鼠miR-223表达情况。结果 相比正常对照组、假手术组,模型组、miR-223 mimics组、miR-223 mimics control组大鼠病理学评分、W/D、BE、IL-1β、IL-18、Caspase-1、NLRP3、ASC水平显著升高(P<0.05),而miR-223 mimics组大鼠则较模型组、miR-223 mimics...     

丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤与抑制细胞凋亡的关系

目的 观察丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤与抑制细胞凋亡的关系.方法 建立大鼠在体缺血再灌注模型,健康成年雄性大鼠24只,随机分为三组:假手术组(只穿线,不结扎;Sham)、缺血再灌注组(缺血30分钟,再灌注120分钟;I/R)组,以及丙泊酚预处理组(B组).于再灌120分钟末提取心肌组织蛋白,采用Caspase-3活性分光光度法检测试剂盒检测其活性,采用氯化三苯基四氮唑染色法计算心肌梗死面积.结果 Caspase-3:与Sham组相比,I/R组Caspase-3活性增加了40%(P<0.05);和I/R组相比,B组减低了30%(P<0.05).TTC染色:Sham组缺血与梗死面积均为0;与I/R组(48±2.40)相比B组(27±1.84)的缺血面积显著降低(P<0.05),同时与I/R组(47±2.84)相比,B组(32±2.46)的梗死面积明显减少(P<0.05).结论 丙泊酚预处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与抑制细胞调亡有关.     

糖尿病大鼠心肌缺血再灌注血管紧张素变化

目的探讨菊苣多糖对链脲菌素糖尿病大鼠心肌缺血再灌注血管紧张素影响。方法应用链脲菌素复制大鼠糖尿病模型,12周后,腹腔注射戊巴比妥钠麻醉下气管插管安装呼吸机,开胸结扎冠状动脉左室降支60 min后松开结扎线再灌注60 min;标Ⅱ导联全程记录心电图,并于再灌注60 min取血、心脏;检测肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)。结果糖尿病模型对照组血清CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ值分别为5.98 U/mL、10.03 U/mL、790.4 ng/L、1 773.7 ng/L,而菊苣多糖干预组血清CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ值分别为1.39 U/mL、7.35 U/mL、443.9 ng/L、 1 552.2 ng/L,均低于糖尿病模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论菊苣多糖通过抑制AngⅠ、AngⅡ的产生对链脲菌素糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

细胞凋亡与心肌缺血——再灌注损伤的关系

自1972年澳大利亚昆士兰大学的Kerr和Curry等首次提出细胞凋亡以来，凋亡一直是近年来医学研究热点。目前，细胞凋亡用以表示人体正常细胞死亡及维持形态上动态平衡过程的概念已为人们所接受，并且因其与感染、肿瘤和免疫心血管疾病等有密切关系而备受瞩目。随着分子心血管病学的研     

糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤变化及Cyt C和Caspase-3的表达

目的探索高血糖状态下，急性心肌缺血诱导心肌细胞凋亡的程度变化及其可能机制。方法TUNEL法检测糖尿病大鼠IRI心肌细胞凋亡的程度，应用免疫组化染色技术检测大鼠心肌细胞色素C（Cyt C）和Caspase-3的表达。结果随心肌缺血再灌注时间的延长，糖尿病（DM）组AI呈逐渐上升的趋势，非糖尿病（NDM）组AI呈先上升再下降的趋势；缺血30min后再灌，6h内DM组大鼠Cyt C和Caspase-3的阳性表达率或阳性强度均明显低于NDM组；24h时DM组大鼠Cyt C和Caspase-3的阳性表达率或阳性强度均明显高于NDM组；Cyt C和Caspase-3的表达与AI值呈正相关。结论DM组大鼠心肌IR后24h内，心肌细胞Cyt C和Caspase-3阳性表达增加发生延迟，持续时间长；相同时相，糖尿病大鼠心肌IRI细胞凋亡较非糖尿病大鼠减轻的可能机制为细胞色素C释放和Caspases激活的生物化学途经发生耐受。     

白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的 研究白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并进一步阐明其机制.方法 建立心肌缺血再灌注损伤模型,持续观察标准Ⅱ导联心电图变化,测定乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,确定心肌损伤程度.心肌细胞凋亡的检测采用逆转录聚合酶链反应检测bcl-2和bax mRNA的表达;Western blot检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 白藜芦醇能降低大鼠心肌冠脉结扎后ST段抬高,降低LDH和 MDA水平,升高SOD水平,抑制bax而增强bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡.结论 白藜芦醇对冠脉结扎诱发的大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与上调bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达抑制心肌细胞凋亡有关.     

白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的研究白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并进一步阐明其机制。方法建立心肌缺血再灌注损伤模型,持续观察标准Ⅱ导联心电图变化,测定乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,确定心肌损伤程度。心肌细胞凋亡的检测采用逆转录聚合酶链反应检测bcl-2和bax mRNA的表达;Western blot检测bcl-2和bax蛋白表达。结果白藜芦醇能降低大鼠心肌冠脉结扎后ST段抬高,降低LDH和MDA水平,升高SOD水平,抑制bax而增强bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论白藜芦醇对冠脉结扎诱发的大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与上调bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达抑制心肌细胞凋亡有关。     

鞘内注射miR-125b mimic抑制小胶质细胞NLRP3炎症体激活减轻缺血再灌注损伤后的炎症反应

目的:观察和探讨鞘内注射miR-125b mimic对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后小胶质细胞活化和神经炎症反应的影响及机制。方法:120只SD大鼠随机分为4组：假手术组(Sham组,鞘内注射生理盐水)、损伤组(IR组,鞘内注射生理盐水)、mimic组(IR+鞘内注射miR-125b mimic)和contro...     

白芍总苷对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞焦亡机制的研究

目的 观察白芍总苷(total glueosides of paeony,TGP)对缺血后再灌注乳鼠心肌细胞细胞焦亡的影响。方法 乳鼠心肌细胞随机分为正常对照组、模型组及低、中、高剂量TGP组(TGP终浓度分别为25,50,100mg/L）,测定收集细胞上清液中LDH 含量;以MTT法检测每组活细胞数目;流式细胞仪检测各组心肌细胞焦亡率;Western Blotting检测心肌细胞焦亡相关斑点样蛋白（ASC）、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1(caspase-1)以及白细胞介素1β（IL-1β）表达。结果 与缺血再灌注组相比,随白芍总苷浓度提升,心肌细胞缺血再灌注后的细胞活力升高,而LDH分泌量,焦亡率,NLRP3、ASC、caspase-1 、IL-1β的表达均下降,结论 白芍总苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用明显,可通过caspase-1途径来抑制缺血再灌注心肌细胞的焦亡。     

miR-204对小鼠心肌缺血再灌注损伤后的作用机制研究

目的 探讨miR-204对小鼠心肌缺血再灌注损伤后的影响.方法 采用左冠状动脉结扎建立小鼠心肌缺血再灌注损伤模型(I/R),假手术组(Sham组)采用同样的开胸手术方式,但不结扎左冠状动脉.将I/R小鼠随机分为I/R组、mimics-NC组、miR-204 mimics组,每组10只.实验结束后,检测各组小鼠心肌损伤指...     

白藜芦醇抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡信号通路改善肥胖小鼠认知功能

目的 观察白藜芦醇(RES)对肥胖小鼠认知功能的保护作用,并探讨其海马组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体—细胞焦亡信号通路机制。方法 50只小鼠随机均分为：正常对照组、模型组和白藜芦醇高(100 mg/kg)、中(50 mg/kg)、低(25 mg/kg)剂量组,喂养6个月后,检测小鼠认知功能,海马组织细胞焦亡水平,海马组织沉默信息调节因子1(SIRT1)、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等蛋白表达情况。采用单因素方差分析或重复测量方差分析进行结果分析。结果 与模型组比较,白藜芦醇高剂量组小鼠终体质量降低(t=-14.453,P=0.021),海马组织细胞焦亡水平降低(t=-17.328,P=0.011),学习记忆能力改善,海马组织SIRT1蛋白表达升高(t=32.812,P<0.001),NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18和TNF-α蛋白表达均下降(t=-28.462,P=0.003;t=-38.148,P<0.001;t=-...     

MiR-223-3p通过靶向NLRP3对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠组织的炎症反应和细胞损伤的影响

目的 探究microRNA-223-3p(MiR-223-3p)对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠肠组织的炎症反应和细胞损伤的影响及可能的机制。方法 构建新生大鼠NEC模型,随机分为NEC组、阴性对照组、MiR-223-3p过表达组,每组20只。另取相同数量正常大鼠作为正常组。苏木精-伊红(HE)染色、TUNEL染色检测肠组织病理学变化和细胞凋亡情况;ELISA法检测血清和肠组织中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测肠组织中MiR-223-3p表达;Western Blot检测肠组织中NLRP3和caspase-1蛋白表达情况。双荧光素酶报告基因实验验证MiR-223-3p与NLRP3是否存在靶向关系。结果 与正常组比较,NEC组和阴性对照组大鼠血清及肠组织中IL-6、IL-1β、IL-18含量明显升高(F=215.525、276.499、354.826、204.410、261.474、280.667,P<0.05),肠组织中NLRP3和caspase-1蛋白表达及细胞凋...     

ATZ-216抗大鼠心肌缺血再灌注损伤作用的机制探讨

目的:探讨ATZ-216(抗心肌缺血中药复方制剂)抗大鼠心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)作用机制.方法:结扎冠状动左前降支30分钟,再灌注120分钟制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.采用NBT染色计算心肌梗死范围,测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)的含量探讨其可能的机制.结果:ATZ-216(40、80、160mg·kg-1)均有减轻心肌梗死范围、清除血清氧自由基、减少肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介-8(IL-8)分泌的作用.结论:ATZ-216对大鼠MI/RI有一定的保护作用.其机制可能与清除血清氧自由基、减少肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介-8(IL-8)分泌的作用有关.     

糖尿病大鼠岛状皮瓣再灌注损伤的治疗研究

目的 研究verapamil、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)局部灌注能否提高缺血再灌注皮瓣的成活率.方法 制作糖尿病大鼠腹壁浅动脉岛状皮瓣再灌注模型,采用verapamil、bFGF及二者联合,皮瓣蒂部局部灌注,观察术后皮瓣成活率.结果 本组资料中,使用verapamil、bFGF、verapamil+bFGF各组与使用生理盐水的对照组比较,皮瓣成活率有显著性差异,前三组的皮瓣成活面积均高于生理盐水对照组,但verapamil、bFGF、verapamil+bFGF各组间的皮瓣成活率间无显著差异.结论 verapamil、bFGF及二者联合均能提高再灌注皮瓣的成活率.