微小RNA-4530通过靶向TRIB1抑制肝癌细胞增殖

目的探讨微小RNA(miRNA)-4530在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖的影响。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-4530在人正常肝细胞(LO2)和肝癌细胞系(SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7)的表达;转染miR-4530的模拟物,构建miR-4530过表达的Hep3B和Huh-7细胞;利用CCK-8实验和平板克隆实验检测miR-4530对细胞增殖的影响;利用生物信息学、荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western blot实验检测miR-4530对G蛋白偶联诱导蛋白2受体(TRIB1)蛋白的影响;在miR-4530过表达的Hep3B和Huh-7细胞中,转染TRIB1质粒,探讨过表达TRIB1对miR-4530介导的增殖抑制的影响。结果相比于正常肝细胞LO2,肝癌SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7细胞中miR-4530的表达均明显减少(均P<0.05),其中Hep3B和Huh-7较为显著;过表达miR-4530,明显抑制肝癌细胞Hep3B和Huh-7的增殖(均P<0.05);TRIB1被鉴定为miR-4530的靶基因,过表达miR-4530明显减少TRIB1的表达(均P<0.01);过表达TRIB1能够显著减少miR-4530介导的肝癌细胞增殖抑制(均P<0.05)。结论 miR-4530在肝癌中表达减少,miR-4530靶向抑制TRIB1的表达进而减少肝癌细胞的增殖。     

miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇药物敏感性中的作用

目的 研究miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇（PTX）药物敏感性中的作用。方法 构建稳定转染细胞株,根据细胞转染情况分为未转染组、miR-阴性对照（miR-NC）组和miR-574-3p过表达组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测不同浓度紫杉醇作用下细胞增殖情况（未转染组设置亚组：空白组和对照组）,实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测色素框同源物2(CBX2) mRNA的表达水平,Western blot法检测CBX2蛋白的表达水平,Transwell检测细胞侵袭迁移力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果 CCK-8法检测结果显示,紫杉醇对各组三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制呈一定的浓度依赖性,但不同浓度紫杉醇（0.05、0.15、0.45、1.35、4.05、8.10μmol/L）作用下,miR-574-3p过表达组生长抑制作用均高于对照组与miR-NC组（P<0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2 mRNA表达水平低于未转染组和miR-NC组（P<0.05）;Wes...     

miR-146a介导下的IGSF1对甲状腺乳头状癌侵袭转移的调控机制

目的 探讨miR-146a对人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)细胞侵袭转移的调控作用及内在机制。方法 采用流式细胞术、细胞活性检测试剂(CCK-8)检测TPC-1细胞活性及凋亡情况;Transwell实验和划痕实验检测TPC-1细胞侵袭和迁移能力;实时荧光定量PCR检测免疫球蛋白超家族成员1(Immunoglobulin super family member1,IGSF1)、miR-146a的mRNA表达水平;免疫组化法检测IGSF1的表达水平;Western-Blot检测β-连环蛋白(β-catenin)与骨桥蛋白(Osteopontin, OPN)表达水平;双荧光素酶基因检测IGSF1和miR-146a交互作用。结果 细胞增殖活性结果显示,与Control组(100.00±0.00)%比较,miR-146a mimics组TPC-1细胞增殖活性(84.77±3.71)%显著降低(P<0.05);而miR-146a inhibitor组TPC-1细胞增殖活性(119.20±5.81)%显著升高(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与Control组(6.37±0....     

circVRK1/miR-18b-5p轴调控结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡

目的 探讨circVRK1/miR-18b-5p轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应检测53例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中circ VRK1和miR-18b-5p表达。体外培养结直肠癌LoVo细胞,双荧光素酶报告基因实验验证circVRK1与miR-18b-5p的调控关系。分别转染pcDNA-circVRK1、miR-18b-5pinhibitor,或共转染pcDNA-circVRK1与miR-18b-5p mimic至LoVo细胞,采用CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验、流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、迁移、凋亡、蛋白（cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2）表达。结果 结直肠癌组织中的circVRK1表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）,miR-18b-5p表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。circ VRK1可靶向结合miR-18b-5p,且过表达circVRK1抑制LoVo细胞中miR-18b-5p的表达。过表达circVRK1或敲减miR-18b-5p后,LoVo细胞的抑制率、凋亡率、cleaved...     

miR-497促进肝癌MHCC97L细胞增殖和迁移

目的:探讨miR-497促进肝癌MHCC97L细胞增殖和迁移。方法:选取肝癌细胞系MHCC97L细胞转染miR-497和miR-zip后,CCK-8分析各组细胞增殖; Transwell实验分析各组细胞的迁移能力;Western blot和实时定量PCR分析各组RIPK1和NF-κB表达情况。结果:过表达miR-497细胞增殖活性和迁移能力明显提高;过表达miR-497细胞中的RIPK1mRNA和NF-κB mRNA表达增高; western blot分析得出过表达miR-497的MHCC97L细胞的RIPK1蛋白和NF-κB表达均上调。结论:miR-497通过调控RIPK1,从而激活NF-κB促进肝癌MHCC97L细胞增殖和迁移。     

MiR-586对胶质瘤细胞增殖及周期的影响

目的探讨miR-586对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-586在非肿瘤脑组织（NBT）及胶质母细胞瘤组织中的表达。同时检测miR-586在人正常星形胶质细胞（NHA）及4株胶质瘤细胞株（U87、U251、T98、LN229）中的表达。在胶质瘤细胞株中通过转染miR-586 inhibitor下调miR-586的表达后,采用CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测胶质瘤细胞周期阶段。结果 miR-586在胶质母细胞瘤组织中表达显著比非肿瘤脑组织中高（P<0.001）;在胶质瘤细胞系中,U87中的表达显著升高（P<0.01）。CCK-8实验结果显示:U87细胞转染miR-586 inhibitor后细胞增殖能力显著下降（P<0.01）。此外,miR-586 inhibitor转染U87后诱导细胞周期阻滞在G0/G1期（P<0.01）。结论 miR-586在胶质瘤组织和细胞中高表达,抑制miR-586的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖并诱导细胞周期阻滞。     

miR-181b-5p负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物 (miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p 明显降低野生型CYLD 的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论 miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

circ＿0092315通过调控微小RNA-1256/高迁移率族蛋白A2促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖和侵袭

目的 研究circ＿0092315对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR方法检测人甲状腺乳头状癌细胞中circ＿0092315的表达水平,CCK-8法和Transwell实验检测TPC-1细胞的增殖和侵袭能力,Western blot检测高迁移率族蛋白A2(HMGA2)蛋白表达水平。通过生物信息数据库、双荧光素酶报告基因检测、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法探讨circ＿0092315、微小RNA-1256(miR-1256)和HMGA2的靶向调控关系。结果 circ＿0092315在人甲状腺乳头状癌细胞中呈现高表达(P均<0.001)。circ＿0092315促进TPC-1细胞增殖和侵袭能力(P均<0.001)。转染circ＿0092315小干扰RNA可上调miR-1256的表达水平(P<0.001)。miR-1256抑制物上调HMGA2蛋白表达(P<0.001)。结论 circ＿0092315在人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中呈高表达,通过调控miR-1256/HMGA2轴促进TPC-1细胞的增殖和侵袭。     

miRNA-193a-3p靶向TGF-β2基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨微小RNA（microRNA,miRNA）-193a-3p在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞迁移及凋亡的影响和潜在分子机制。方法：利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测miR-193a-3p在肝癌及其癌旁正常组织中的表达;将miR-193a-3p mimic转染肝癌HepG2细胞系（NC为对照组）,利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验、Transwell实验以及流式细胞仪评估HepG2细胞的活性、迁移及凋亡情况;利用生物信息学分析、qRT-PCR及双荧光素酶报告实验确证miR-193a-3p对下游靶标转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β2的影响;在miR-193a-3p过表达的HepG2细胞中转染TGF-β2质粒,检测过表达TGF-β2对miR-193a-3p诱导HepG2细胞活性、迁移及凋亡的影响。结果：miR-193a-3p在肝癌组织中的表达显著低于正常肝脏组织,差异具有统计学意义（P< 0.01）;与NC组比较,miR-193a-3p组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（分别为：t = 6.11,8.90,11.53,均P< 0.05）,且以时间依赖性方式诱导HepG2细胞凋亡;miR-193a-3p与靶基因TGF-β2的互补结合序列在进化上高度保守,TGF-β2是miR-193a-3p的下游靶标;与miR-193a-3p+ 空质粒组比较,miR-193a-3p+ TGF-β2组肝癌细胞的增殖活性及迁移数量增多,细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义（分别为：t = 3.43,2.88,9.32,均P< 0.05）。结论：miR-193a-3p在肝癌组织中表达减少,miR-193a-3p通过靶向调控TGF-β2基因抑制HepG2细胞的活性和迁移,促进HepG2细胞的凋亡。     

miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

HBX在肝癌细胞中通过下调miR-199a增强AKT的表达

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)调节miR-199a的表达在HBV相关性肝癌发生中的分子机制.方法 重组HBX腺病毒(Ad-HBX)感染人肝癌HepG2细胞,HBX的siRNA转染稳定表达HBV基因的人肝癌HepG2.2.15细胞,荧光定量PCR方法检测HBV相关性肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、miR-199a、AKT的mRNA表达水平及运用Western blot检测肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、AKT的蛋白表达水平;分别用miR-199a mimics和miR-199a inhibitor的转染肝癌细胞后,荧光定量PCR方法检测肝癌细胞中AKT的mRNA表达水平及运用Westem blot检测肝癌细胞中AKT的蛋白表达水平.结果 miR-199a在HepG2.2.15细胞中表达水平显著低于HepG2细胞,并且证实其表达下调受到了HBX的调控(P＜0.05),HepG2.2.15细胞中AKT表达水平显著高于HepG2细胞(P＜0.05),在HepG2.2.15细胞中过表达miR-199a能明显下调AKT表达水平以及在HepG2细胞中抑制miR-199a能明显上调的AKT表达水平(P＜0.05),此外,miR-199a的表达量在HBV相关性肝癌组织比相应的癌旁组织表达降低.结论 HBX可以通过miR-199a调节AKT导致HBV相关性肝癌发生.     

miR-93反义核苷酸对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究miR-93在乳腺癌组织中的表达情况,并分析miR-93反义核苷酸（antisense oligonucleotide,ASO）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：运用荧光定量PCR定量检测120例乳腺癌组织及对应癌旁组织中miR-93的表达;通过miR-93ASO降低乳腺癌细胞中miR-93的表达,利用MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞仪观察miR-93 ASO对乳腺癌细胞产生的生物学效应。实验分为３组：空白对照组,无义干扰组和miR-93 ASO组。结果：在120例乳腺癌病例中,63.33%（76/120）的乳腺癌组织miR-93表达明显高于对应癌旁组织（P<0.05）;miR-93 ASO可以显著降低miR-93的表达（P<0.05）;MTT实验结果显示乳腺癌细胞转染miR-93 ASO 24、48 h和96 h后的细胞存活数量均明显低于空白对照组和无义干扰组（P<0.05）;克隆形成实验结果显示miR-93 ASO组克隆形成率比空白对照组和无义干扰组显著降低（P<0.05）;流式细胞仪检测结果显示转染miR-93 ASO组较2个对照组细胞凋亡指数明显增加（P<0.05）;另外,降低miR-93的表达后发现Bcl2的mRNA和蛋白均明显下降（P<0.05）。结论：miR-93在乳腺癌组织中表达上调,降低miR-93的表达可有效抑制乳腺癌细胞生长、促进细胞凋亡。miR-93有可能成为乳腺癌基因表达调控的新靶点。     

miR-148b参与调控弥漫性大B细胞淋巴瘤药物敏感性的机制

目的：探讨miR-148b是否通过调控Ezrin来调节弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞的药物敏感性。方法：诱导建立人DLBCL耐药细胞株CRL2631/CHOP,实时荧光定量PCR检测CRL2631细胞和CRL2631/CHOP细胞的miR-148b表达,Western blot检测2组细胞的Ezrin蛋白表达;采用双荧光素酶实验检测miR-148b与Ezrin的靶向结合情况;采用miRNA模拟/干扰技术和CCK-8方法检测CRL2631/CHOP细胞和CRL2631细胞对CHOP的敏感性。结果：CRL2631/CHOP细胞miR-148b表达水平显著低于CRL2631细胞（P=0.001）;CRL2631/CHOP细胞Ezrin蛋白表达水平显著高于CRL2631细胞（P＜0.05）;双荧光素酶实验结果显示,Ezrin是miR-148b的直接靶基因;转染miR-148b mimic后,CRL2631/CHOP细胞的Ezrin和MDR-1蛋白表达量下降（P＜0.05）,而CRL2631/CHOP细胞对CHOP敏感性增加（P＜0.05）;转染miR-148b inhibitor后,CRL2631细胞的Ezrin和MDR-1蛋白表达量上升（P＜0.05）,而CRL2631细胞对CHOP敏感性下降（P＜0.05）。结论：miR-148b通过调控Ezrin影响DLBCL细胞对CHOP的敏感性。     

miR-581在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌K30细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的检测miR-581在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况及对食管鳞癌细胞K30增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法收集33例食管鳞状细胞癌组织及其癌旁组织标本,应用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测miR-581的表达情况; 采用miR-581 mimic转染食管鳞癌细胞K30作为实验组,用阴性对照片段转染K30作为阴性对照组,qPCR检测miR-581的转染效率,CCK8检测细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测迁移和侵袭能力的变化。结果与食管癌旁组织比较,癌组织中的miR-581表达下调; CCK8结果显示,过表达miR-581能抑[JP2]制食管癌细胞的增殖能力; Transwell迁移及侵袭实验结果显示,过表达miR-581能显著减少食管癌细胞穿膜细胞数。结论miR-581与食管鳞癌的进展相关,其机制有待进一步研究。     

miR-137靶向Notch1调控人视网膜微血管内皮细胞的增殖、周期和凋亡

目的 探讨miR-137靶向Notch1调控对人视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)增殖、周期和凋亡的影响。方法 使用RT-qPCR检测我院20例高血压视网膜病变患者和20例高血压视网膜正常患者血清miR-137表达水平。将miR-137阴性对照(miR-NC)和miR-137过表达组(mimics)转染至HRCEC中,转染24 h后RT-qPCR检测miR-137和Notch1的RNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。运用生物信息学预测和荧光素酶报告实验验证miR-137与Notch1存在靶向性。Western Blot检测Notch1以及与周期和凋亡相关蛋白的表达。结果 RT-qPCR结果显示,高血压视网膜病变患者血清中的miR-137表达量显著高于高血压视网膜正常组患者(P<0.05)。细胞增殖实验结果表明,miR-137mimics组细胞增殖指数显著低于miR-NC组(P<0.05)。转染后24 h, miR-137mimics组过表达组的G0/G1期百分比(65.00±1.29)%相对于miR-NC组(56.52±0.81)%显著增加...     

MiR-26b通过下调COX-2表达抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移

目的：观察不同级别神经胶质瘤中miR-26b和环氧化酶(COX)-2的表达情况,研究miR-26b对于神经胶质瘤 细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：运用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测不同级别神经胶质瘤中 miR-26b和COX-2的表达情况;使用miR-26b mimic转染人神经胶质瘤细胞U87,上调miR-26b的表达;qRT-PCR检测miR- 26b mimic转染后miR-26b和COX-2 mRNA的表达变化情况;双荧光素酶报告基因系统检测miR-26b对COX-2转录活性的 影响;使用Transwell侵袭实验检测miR-26b对人神经胶质瘤细胞U87侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-26b对人 神经胶质瘤细胞U87迁移能力的影响;使用CCK-8(cell counting kit-8)检测miR-26对人神经胶质瘤细胞U87增殖能力的影 响;裸鼠体内成瘤实验检测过表达miR-26b后胶质瘤细胞成瘤能力的变化。结果：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加, miR-26b表达明显降低(P<0.05),而COX-2明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);双荧光素酶实验证实miR-26b可以 直接靶向调控COX-2的蛋白表达水平;使用miR-26b mimic明显上调miR-26b的表达(P<0.05);上调miR-26b可以显著降 低COX-2的表达(P<0.05);上调miR-26b可以抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05)。实验组和对照组相 比肿瘤的质量和体积都变小。结论：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加,miR-26b表达逐渐降低,而COX-2表达逐渐增 加。miR-26b可通过抑制COX-2表达从而抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移。     

miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3 促进肝癌细胞增殖

目的检测MicroRNA-128a（miR-128a）在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制。方法收
集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a 在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用
miR-128a mimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用
双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3’UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;
Western blot检测细胞周期蛋白变化。结果在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-128a
促进肝癌细胞增殖（P<0.05）;在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3’URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）;抑
制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1 和CDK4表达下调。结论miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控
RND3促进肝癌细胞增殖。
     

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞，将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达；CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达；生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较，miR-34a mi...     

circFOXK2靶向miR-409-3p调控肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circFOXK2对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 收集45例肺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中circFOXK2和miR-409-3p表达。体外培养肺癌细胞A549和H1299,双荧光素酶报告基因实验验证circFOXK2和miR-409-3p的调控关系。转染circFOXK2小干扰RNA、miR-409-3p模拟物、或共转染circFOXK2小干扰RNA与miR-409-3p抑制剂至A549和H1299细胞。细胞增殖、迁移和侵袭用CCK-8法、克隆形成实验和Transwell分析。蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 肺癌组织中circFOXK2水平明显上升(P<0.05),而miR-409-3p水平明显下降(P<0.05)。circFOXK2在A549和H1299细胞中靶向结合并负调控miR-409-3p。敲减circFOXK2或过表达miR-409-3p后,肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.05),N-cadherin水平降低(P<0.05),而E-...     

ZIC5在前列腺癌中的表达及意义

目的研究ZIC5（Zic family member 5）在前列腺癌中的异常表达及其对前列腺癌生物学表型的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time PCR）检测ZIC5在前列腺癌组织标本和对应癌旁正常组织、PC3和LNCaP细胞株及正常前列腺上皮中的表达水平。siRNA干扰ZIC5后,CCK-8法和Transwell试验检测前列腺癌细胞PC3和LNCaP的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析可能调控ZIC5的miRNA并进行验证。结果ZIC5在前列腺癌组织中表达水平上升（t=4.2,P<0.001）,并且与Gleason评分分级具有相关性（P<0.05）,在前列腺癌细胞株中表达水平显著高于正常前列腺癌上皮（P<0.01）。前列腺癌细胞株PC3和LNCaP中siRNA干扰ZIC5 24h后,细胞增殖减慢,迁移和侵袭能力被抑制。生物信息学及双荧光素酶报告显示,ZIC5受miR-449家族调控,ZIC5与miR-449家族在前列腺癌标本中表达水平呈负相关（ZIC5 vs miR-449a： r=-0.64,P<0.05,ZIC5 vs miR-449b,r=-0.52,P<0.05）,双荧光素酶报告基因检测显示miR-449家族结合ZIC5 3’UTR。异常表达的ZIC5可激活EMT通路,干扰ZIC5和过表达miR-449可抑制ZIC5蛋白表达,并逆转前列腺癌细胞中EMT状态。结论ZIC5受miR-449家族调控,促进前列腺癌生长和侵袭。