透明质酸促进人肺腺癌A549细胞体外增殖、黏附和侵袭

目的 研究透明质酸（hyaluronan,HA）对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖、黏附和侵袭能力的影响。方法 体外培养的A549细胞被随机分为3组：对照组（C组）：无血清培养基（free serum medium,FSM）培养;HA1和HA2组：分别用含不同浓度HA（HA1组：10μg／ml,HA2组：20μg／ml）的FSM培养,一段时间后,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较A549细胞增殖能力,用平板黏附模型和Boyden小室模型比较A549细胞黏附侵袭能力。结果 和C组相比,HA1和HA2组细胞增殖数量、软琼脂细胞集落、黏附于平板和穿过Boyden小室隔膜的细胞数皆显著增加,差异有统计学意义（P〈0．01）（呈剂量依赖）。结论 HA能呈剂量依赖性地增强A549细胞体外增殖、黏附和侵袭能力。     

安罗替尼对肺癌A549细胞增殖、迁移侵袭的影响

目的 研究安罗替尼对肺癌A549细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法 采用不同浓度的安罗替尼作用于肺癌A549细胞,利用CCK8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测A549细胞凋亡情况;通过划痕实验测定各组细胞的迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 安罗替尼处理后,CCK8结果显示A549细胞的增殖能力降低（P＜0.05）;划痕实验表明A549细胞迁移率降低（P＜0.05）;Transwell实验观察到穿过Transwell小室膜的A549细胞数减少（P＜0.05）,侵袭能力受抑制;凋亡双染法发现A549细胞凋亡比例增高（P＜0.05）。结论 安罗替尼能够抑制肺癌A549细胞增殖、迁移侵袭,促进肺癌A549细胞凋亡。     

CD44v3的表达对肺腺癌A549细胞侵袭行为的影响

目的 研究肺腺癌细胞A549的侵袭能力和黏附分子CD44v3的关系.方法 用pRNAT-H 1.1/Neo(6.1 kb)质粒构建一个能够稳定转录短发卡RNA(shRNA)并干扰CD44v3分子表达的表达载体,将其转染A549细胞,用荧光免疫组织细胞化学法和免疫印溃(Western Blot)检测A549细胞表达CD44v3的变化.用Boyden室和人工基底膜构建癌细胞的离体侵袭模型,计数并比较各实验组穿过人工基底膜的细胞的细胞数.结果 实验中发现肺腺癌细胞A549表达CD44v3分子,分子量为130 kd.质粒表达载体能够有效的干扰A549细胞表达CD44v3,在转染率为34%时,蛋白表达下降46%.癌细胞的离体侵袭模型中发现干扰组癌细胞侵袭能力为(4.0±1.22),空载对照组为(13.20±4.92),前者的癌细胞侵袭能力较后者下降70%,两者比较差异有显著性,P＜0.01.抗CD44v3单克隆抗体(阳性对照组)也可降低A549细胞的侵袭能力,干扰组和阳性对照组比较,两者差异无显著性,P＞0.05.结论 肺腺癌细胞A549表达CD44v3分子,用RNAi技术可降低其表达.CD44v3表达降低的A549细胞侵袭能力受到抑制.     

腺苷对人肺腺癌细胞A549增殖和细胞周期的影响

目的：探讨腺苷对人肺腺癌细胞株A549增殖和细胞周期的影响。方法：体外培养肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测腺苷受体mRNA在A549细胞中的表达情况。以0、1、10、100和1 000μmol/L的腺苷分别作用A549细胞24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析不同时间、不同浓度的腺苷对A549细胞存活率的影响。以100μmol/L的腺苷作用A549细胞24 h,采用流式细胞术检测其细胞周期。对上述所得数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果：四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3在A549细胞中均有表达。MTT结果显示,作用时间24 h,各腺苷处理组（1、10、100和1 000μmol/L）细胞存活率分别为91%、84%、80%、73%;作用时间48 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为82%、69%、58%、55%;作用时间72 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为86%、56%、52%、38%,表明腺苷对A549细胞具有生长抑制效应,抑制率随着腺苷浓度升高而增强。与对照组相比,100μmol/L腺苷作用于A549细胞24 h后,能增加G1期细胞比例（对照组：59.07±0.70;100μmol/L：65.05±0.62,t=-11.04,P〈0.01）,并减少G2期细胞比例（对照组：6.67±0.95;100μmol/L：1.29±0.43,t=8.89,P〈0.01）。结论：腺苷能够抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并改变其细胞周期分布。     

microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响

目的研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs（miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a）表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR) 处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0 h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力（计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率）;作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加。经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高（P<0.05）。由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低（P<0.05）,并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少（P<0.05）。结论人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。     

莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:观察莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及潜在的作用机制。方法:细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测莪术醇对A549细胞活性的影响;EdU检测细胞增殖;体外侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测上皮间质转化和Wnt通路相关蛋白的表达水平,细胞免疫荧光检测vimentin光点的水平。结果:莪术醇浓度低于60μmol·L~(-1)时对A549细胞的活性无显著影响;不同浓度莪术醇作用于A549细胞后,细胞增殖倍数显著降低;侵袭细胞数目显著减少;划痕闭合率显著降低;细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平显著升高,而Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、snail、β-连环蛋白(β-catenin)、T细胞因子4(T-cell factor 4,TCF4)和细胞周期蛋白1(Cyclin-D1)的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞中vimentin光点水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:莪术醇可抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化,其作用机制与Wnt/β-catenin通路相关。     

常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的 常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.方法 采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.结果 ①常春藤皂苷元有抑制人结肠癌细胞LoVo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P＜0.01),呈浓度依赖性.②常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,细胞的粘附能力明显降低(P＜0.01),随着浓度的增大和时间的推移,呈现抑制率递增的结果.③常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P＜0.01),浓度越高,侵袭的细胞数量越少.④常春藤皂苷元作用人肠癌LoVo细胞后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响.结论 常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo的增殖具有抑制作用;常春藤皂苷元能抑制人结肠癌细胞LoVo的粘附能力、侵袭能力和迁移能力.     

化痰消瘤方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探讨化痰消瘤方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,分为化痰消瘤方低剂量组、中剂量组、高剂量组,环磷酰胺组,空白组。分别于含药血清中培养24 h、48 h、72 h后,进行观察和检测,独立重复实验3次。采用MTT法检测细胞增殖情况,显微镜下观察细胞形态学变化。结果:各药物干预组吸光度在同一时段内与空白组比较,差异均有统计学意义(P0.05);化痰消瘤方各剂量组吸光度同一时段内与环磷酰胺组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。化痰消瘤方含药血清对A549细胞增殖的抑制率随药物浓度的增加不断提高。除化痰消瘤方低剂量组外,其余各组随着时间的延长,对A549细胞增殖的抑制率不断提高。显微镜下可见化痰消瘤方各剂量组肺腺癌A549细胞出现胞膜皱缩内陷的细胞凋亡征象。结论:化痰消瘤方含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的浓度及时间依赖性,同时可诱导细胞凋亡。     

健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭的影响研究

目的:研究健脾消癌方含药血清对HCT116细胞迁移、侵袭的影响,并初步探讨其机制.方法:10％、15％、20％的健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞,划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测细胞内基质金属蛋白酶2( matrix metalloproteinase -2...     

大麻受体激动剂对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响

目的研究大麻受体激动剂(delta9-tetrahydrocannabinol,THC)对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法 MTT法测定THC对A549细胞增殖的影响;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察细胞的形态学变化;Western blot法分析大麻受体CB1、CB2的蛋白表达;DNA梯度电泳检测A549细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化。结果 THC预处理后,MTT检测表明THC对A549细胞增殖有明显抑制作用,随着药物浓度增大,抑制作用更加明显;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察显示:肺癌A549细胞有典型的细胞凋亡形态;Western blot检测显示:A549细胞大麻受体CB1、CB2水平较正常气道上皮细胞株16HBE升高;DNA梯度电泳法及流式细胞仪检测显示:THC能抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,并具有剂量依赖性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肺癌细胞的增殖,并诱导肺癌细胞凋亡,此效应可能与大麻受体CB1、CB2作用有关。     

miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭能力,以及对化疗药物敏感性的影响。方法采用流式细胞边缘群分选技术从人肺癌细胞系A549中分离出肺癌干细胞。应用脂质体分别介导成熟miR-21的阻遏物(inhibitors)和模拟物(mimics)来抑制和增强肺癌干细胞miR-21的表达;实时荧光定量PCR检测肺癌干细胞中miR-21表达水平的变化;噻唑蓝(MTT)法检测转染干预前后肺癌干细胞的增殖情况和对化疗药物的敏感性;Transwell小室检测肺癌干细胞迁移能力。结果抑制组肺癌干细胞miR-21表达水平明显低于非转染组和阴性对照组,而增强组肺癌干细胞miR-21表达水平则显著高于非转染组和阴性对照组(P<0.05);抑制组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组明显降低,而增强组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组显著升高(P<0.05);Transwell实验显示抑制组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(29.55±5.48)个,明显少于非转染组和阴性对照组,而增强组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(74.47±8.63)个,明显多于非转染组和阴性对照组(P<0.05);顺铂(DDP)和吉西他滨(GEM)对抑制组转染后48 h肺癌干细胞的IC₅₀值明显低于非转染组和阴性对照组(P<0.05);DDP和GEM对增强组转染后48 h肺癌干细胞的IC₅₀值则明显高于非转染组和阴性对照组(P<0.05)。结论下调miR-21的表达可以抑制肺癌干细胞的增殖和侵袭能力,增强其对化疗药物的敏感性。     

硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP和TPC-1的增殖、迁移及侵袭的影响。方法 用不同浓度（0、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L）硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞,采用MTT法和克隆形成实验观察硝呋齐特对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色及流式分选技术观察对细胞凋亡的影响;通过Western blot法检测硝呋齐特处理后BCPAP细胞凋亡相关蛋白及迁移侵袭相关蛋白的表达情况;采用Transwell小室观察细胞迁移和侵袭能力。结果 硝呋齐特0、1.25、2.5 μmol/L处理BCPAP细胞,0、1.25 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均未受到明显抑制（ P>0.05）;硝呋齐特5、10、20 μmol/L处理BCPAP细胞,10、20 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均受到明显抑制（ P<0.05）,且随浓度增加和时间延长其抑制作用逐渐增强;此外,2.5、5 μmol/L硝呋齐特对TPC-1细胞的增殖抑制作用分别从72 h和48 h起效（ P<0.05）。暴露于10 μmol/L硝呋齐特10 d后,BCPAP和TPC-1细胞的克隆形成均受到抑制（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理48 h后,BCPAP和TPC-1细胞均出现细胞核改变,凋亡小体出现;流式分析显示BCPAP及TPC-1凋亡细胞增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP细胞48 h,促凋亡蛋白CC-3、Bax的表达增加（ P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少（ P<0.05）;促迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达减少（ P<0.05）,MMPs家族抑制剂——金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2表达增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞48 h,BCPAP细胞及TPC-1细胞迁移率与侵袭率均下降（ P<0.05）。结论 硝呋齐特于体外抑制人甲状腺癌细胞系BCPAP和TPC-1的增殖,通过上调CC-3和Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,通过降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达阻断细胞的迁移与侵袭。     

GANT61对Hela细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:研究Gli抑制剂GANT61作用于Hela细胞后Gli1、FoxM1及Cyclin D1的表达变化及细胞的增殖活力与侵袭迁移能力的影响,并分析其相关分子机制,以期为宫颈癌的治疗提供新的靶点。方法:采用CCK-8法检测不同浓度GANT61对Hela细胞增殖活力的影响;流式细胞仪检测Hela细胞的细胞周期的分布变化;RTPCR、Western Blot分别检测Gli1、FoxM1、Cyclin D1相应的mRNA水平及蛋白表达水平;Transwell小室模型及Matrigel基质胶实验分别检测Hela细胞的迁移与侵袭能力。结果:(1)GANT61可剂量依赖性的降低Hela细胞的增殖活力,其抑制Hela细胞的IC_(50)值约为36.337μmol/L,且细胞周期主要被阻滞在G2/M期(P<0.01);(2)随着GANT61浓度的增加,Gli1、Cyclin D1、FoxM1相应mRNA的表达水平逐渐降低(P<0.01),其相应蛋白的表达水平也降低;(3)Transwell实验显示,实验组Hela细胞穿膜数量明显低于对照组(P<0.01)。结论:(1)GANT61可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭及迁移能力,且该作用是通过抑制Gli1的表达,进而影响FoxM1的转录活性从而阻断细胞周期的进展来实现的;(2)FoxM1很可能是Gli1下游的直接作用靶点。