Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞中的表达

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法：分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，同时用蛋白印迹杂交（Western blot）检测Rho激酶的表达情况。结果：PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大，24h最高，48h下降但仍高于常氧对照组；流式细胞术分析细胞周期，G2／M期细胞缺氧组均显著高于常氧组；Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论：缺氧诱导PASMC增殖，促使细胞进入有丝分裂期，同时，Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。     

牛磺酸对肺动脉内皮和肺动脉平滑肌细胞增殖的双向调节作用

目的探讨肺动脉高压发生发展的细胞机制和牛磺酸对缺氧性肺动脉高压的防治作用。方法体外培养新生雄性小牛肺动脉内皮细胞(PAECs)及肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),用3H-TdR掺入法比较缺氧时PASMCs与PAECs的增殖情况,同时测定在培养液中加入牛磺酸后其增殖的改变。结果2.5%O2和<1%O2条件下培养6~24 h,PAECs的3H-TdR掺入量均显著低于常氧对照组(降低15%~48%,P<0.05);而PASMCs于缺氧12 h后3H-TdR掺入量均显著高于常氧对照组(增加19%~34%,P<0.05)。牛磺酸对细胞增殖的影响与浓度有关,高浓度(10~20 mmol/L)的牛磺酸抑制缺氧的内皮及平滑肌细胞的3H-TdR掺入,而低浓度的牛磺酸促进缺氧时PAECs的3H-TdR掺入(P<0.05),抑制缺氧时PASMCs的3H-TdR掺入(P<0.05)。结论缺氧抑制内皮细胞的增殖而促进平滑肌细胞的增殖,适当的牛磺酸可以对抗缺氧对PAECs和PASMs的作用,减弱缺氧对PAECs的增殖抑制作用,抑制缺氧的促PASMCs增殖作用,使之接近常氧水平。     

TG2对缺氧条件下骨肉瘤MG－63细胞凋亡的影响

目的：探讨TG2对缺氧型骨肉瘤MG－63细胞凋亡的影响。方法构建骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,共分为4组,单纯缺氧组：细胞培养在缺氧培养箱中;常氧组：细胞培养在常规氧浓度下;TG2 siRNA缺氧组：细胞先转染TG2 siRNA,接着培养于缺氧培养箱中;对照siRNA缺氧组：细胞先转染对照siRNA,接着培养于缺氧培养箱中。各组骨肉瘤MG－63细胞培养6、12、24、48和72 h,观察在缺氧培养条件下TG2对骨肉瘤MG－63细胞caspase－3表达和活性的影响,细胞浆和细胞核中细胞色素C含量的变化和细胞凋亡情况。 TG2活性使用微量滴定板法检测,TG2的mRNA转录水平使用qPCR检测,并采用免疫印迹（western blot）检测胞浆和胞核内caspase－3、TG2以及细胞色素C表达和分布情况;采用免疫组化（ SP法）分析细胞内TG2蛋白的分布情况,细胞凋亡率通过流式细胞仪检测。结果与常氧组比较,对照siRNA缺氧组和单纯缺氧组的TG2 mRNA、蛋白表达以及活性均显著提高（P＜0.01）,在不同时间点差异有统计学意义;但caspase－3活性并未显著提高。然而胞浆内细胞色素C蛋白以及caspase－3的表达显著提高,细胞凋亡率轻度提高。与对照siRNA缺氧组比较,TG2 siRNA缺氧组的胞浆内细胞色素C蛋白表达水平以及caspase－3的活性显著改善（P＜0.01）,细胞凋亡率也相应提高（P＜0.01）。结论缺氧环境下,MG－63骨肉瘤细胞的TG2 mRNA、蛋白表达以及活性水平均显著上升,并随缺氧时间延长而逐步升高。 TG2可以阻止细胞核内细胞色素C向胞浆释放,进而抑制caspase－3的表达及活性,降低肿瘤细胞的凋亡率。     

缺氧对人乳腺癌MCF－7细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究缺氧对人乳腺癌MCF－7细胞增殖和凋亡的影响,探讨缺氧与癌细胞增殖及凋亡的关系。方法以人乳腺癌MCF－7细胞为研究对象,分为常氧组、缺氧12 h组、缺氧24 h组、缺氧48 h组,各缺氧组通过含1％氧气、5％二氧化碳、94％氮气的三气水套式培养箱来模拟肿瘤缺氧微环境。采用iCELLigence系统检测细胞的增殖活性并绘制细胞生长曲线;四甲基偶氮唑盐比色法（ MTT）检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 iCELLigence系统测定显示：在初始缺氧（12 h）细胞出现快速增殖的现象;随着缺氧时间的逐步延长约24 h后,细胞增殖明显受到抑制。 MTT法检测表明：各缺氧组细胞的增殖能力显著低于常氧组,差异有统计学意义（ P＜0.05）。缺氧24 h组细胞较缺氧12 h组仍有增殖,但抑制率随着时间的延长而增加。流式细胞仪检测细胞周期显示：细胞随着缺氧时间的延长,S 期细胞比例下降,G0／G1期明显阻滞,长时间的缺氧可抑制细胞增殖。细胞凋亡率显示：各缺氧组细胞的凋亡率与常氧组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论人乳腺癌MCF－7细胞可在缺氧一定时间内生长,但随着缺氧时间的延长,缺氧可抑制细胞的增殖,同时缺氧可诱导细胞凋亡率的增加。     

低氧对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的 探讨二氯化钴(CoCl2)诱导的化学性低氧对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖的影响.方法 采用密度梯度离心法分离、培养hBMSC;用流式细胞仪检测其表面标志物;用CoCl2建立化学性缺氧模型,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测hBMSC在不同CoCl2浓度(0、100、150、300 μmol/L)和不同时间(0,12 h及1、2、4、6、7 d)的增殖情况,0 μmol/L CoCl2组为常氧组,后3个浓度组为低氧组.结果 化学缺氧12 h内,hBMSC增殖被抑制;1、2、4 d时各低氧组细胞增殖均高于常氧组,但300 μmol/L CoCl2组与常氧组比差异无统计学意义(P＞0.05);而100μmol/L CoCl2组(0.139±0.003、0.178±0.005、0.224±0.005)和150 μmol/L CoCl2组(0.202±0.020、0.224±0.019、0.263±0.004)增殖明显高于常氧组(0.134±0.005、0.167±0.004、0.206±0.005),其中150μmol/L CoCl2组1 d时增殖最显著(均P＜0.05).6 d时100、150 μmol/LCoCl2组细胞增殖(0.258±0.020、0.264±0.008)仍高于常氧组(0.248±0.004),但优势逐渐减弱(P＜0.05).7 d时这种低氧促增殖的效应消失.结论 CoCl2诱导的化学性缺氧可以促进hBMSC增殖.     

原代大鼠肺动脉平滑肌细胞的提取和鉴定以及缺氧对其增殖的影响

目的提取SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）并原代培养,为研究肺血管疾病提供体外模型,研究缺氧对大鼠PASMCs增殖的影响。方法组织贴壁法分离大鼠PASMCs,光镜观察细胞形态、透射电镜、α肌动蛋白（α-SM-actin）细胞免疫化学和细胞免疫荧光法进行鉴定。原代培养的PASMCs分别于常氧和/或低氧下培养2、6、12、24及48 h,用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和增殖细胞核抗原（PCNA）细胞免疫化学法检测细胞增殖情况。结果光镜下PASMCs细胞为长梭形,呈典型的＂峰-谷＂状结构。免疫学检测显示胞浆被染成棕黄色,阳性率达96%以上。透射电镜下细胞呈长梭形,胞浆内有密斑、密体和大量肌丝,细胞器较少。MTT检测结果示各时间点缺氧组PASMCs吸光度（A值）均高于相对应的常氧组;与常氧组比较,低氧组A值在12 h时开始增加（P〈0.05）,24 h时增加最显著（P〈0.01）。与缺氧2 h组比较,A值在缺氧12 h开始增高（P〈0.05）,缺氧24 h增高最显著（P〈0.01）,而缺氧48 h与缺氧24 h基本一致。PCNA免疫学结果与MTT结果基本一致。结论用组织块贴壁法提取PASMCs,简单易行,且能得到纯度高、稳定生长的PASMCs。缺氧可以促进PASMCs的增殖。     

缺氧应激对HepG-2增殖活性和HIF-1α、MMP-2表达的影响

目的研究缺氧应激对人肝癌细胞HepG-2增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白-2(MMP-2)表达的影响。方法将缺氧(5%O2、5%CO2、90%N2)和常氧环境中培养的HepG-2细胞,在相差显微镜下观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定常氧组和缺氧4、12、24h组HepG-2细胞HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA的表达量;用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定常氧和缺氧12、24h组细胞培养上清MMP-2蛋白含量。结果同时相缺氧组HepG-2细胞增殖活性与常氧组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。常氧下HepG-2细胞不表达HIF-1αmRNA,缺氧4h时HIF-1αmRNA表达量最高,随后下降(P<0.01),但仍高于常氧组;缺氧4h时MMP-2mRNA表达量最高,随后下降,但仍高于常氧组(P<0.01);缺氧组HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA呈高度正相关关系。缺氧24h组HepG-2细胞培养上清液中的MMP-2蛋白含量与常氧24h组含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧应激(5%O2)促进人肝癌细胞HepG-2的增殖作用并上调HIF-1α和MMP-2的表达量。     

不同氧环境对滋养细胞增殖活力的影响

目的：建立不同氧环境的滋养细胞模型,探索氧含量变化对滋养细胞增殖活性的影响。方法：随机选择妊娠8～10周人工流产的健康妇女20例,通过滋养细胞的原代培养后分为正常组、缺氧组及缺氧后复氧组进行处理。以氮蓝四唑盐（MTT）自动化比色法测定以上各组滋养细胞的增殖能力水平。结果：①本研究发现缺氧组滋养细胞1、4h至48h时段与正常组、缺氧后复氧组相比差异均有统计学意义（P〈0．01）。72h缺氧组滋养细胞数值虽稍高于正常组,但相比差异无统计学意义（P〉0．05）;②缺氧后复氧组和单纯缺氧组两两相比差异有统计学意义（P〈0．05）。另外,缺氧后复氧组滋养细胞的增殖力于初期（1～4h）与正常组相比差异无统计学意义（P2〉0．05）,但在12～72h均低于正常组滋养细胞的增殖活力（P〈0．05）。结论：①缺氧初期可导致滋养细胞增殖活力增强,后期缺氧细胞的增殖活力与正常氧下滋养细胞相比无区别;②缺氧后复氧环境下滋养细胞增殖能力低于缺氧滋养细胞。其增殖活力在12h后低于常压氧下滋养细胞。     

线粒体膜电位对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内细胞色素C分布及细胞增殖的影响

目的 从线粒体ATP敏感性钾通道(MitoKATP)入手,研究在缺氧影响大鼠肺动脉平滑肌细胞内细胞色素C的分布及其引起细胞增殖变化中线粒体膜电位(Δψm)的作用.方法 获取大鼠正常肺组织,分离出肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)进行常氧或慢性缺氧培养.将标本分为6组:①正常对照组;②MitoKATP开放剂Diazoxide组;③MitoKATP阻断剂5-hydroxydecanoate (5-HD)组;④慢性缺氧(CH)组;⑤CH Diazoxide组;⑥CH 5-HD组.利用激光共聚焦显微镜成像检测线粒体膜电位, Western blot法检测线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT法检测细胞增殖情况.结果 ①Diazoxide作用24 h后,细胞R-123荧光强度明显增强,线粒体膜电位去极化,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显降低,细胞明显增殖,凋亡减少,与正常对照组比较均P＜0.05;而5-HD作用24 h与正常对照组比较,上述指标无明显变化,均 P＞0.05;②慢性缺氧24 h,结果与Diazoxide组相似,各项指标与正常对照组比较均P＜0.05;CH Diazoxide组与CH组比较,细胞R-123荧光强度明显增强,线粒体膜电位去极化,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显降低,细胞明显增殖,凋亡减少,与CH组比较均P＜0.05; CH 5-HD组与CH组比较,细胞R-123荧光强度明显减弱,线粒体膜电位部分消失,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显升高,细胞增殖减少,凋亡增多,与CH组比较均P＜0.05.结论 缺氧可以引起MitoKATP的开放以及线粒体膜电位去极化,进而抑制了细胞色素C从细胞线粒体释放到细胞质,抑制线粒体凋亡途径,从而参与并影响了肺动脉高压的发生发展.     

罗格列酮对Hep-2细胞核因子-κB和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的:通过检测罗格列酮(ROS)作用前后人喉癌Hep-2细胞核因子(NF-κB)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的变化情况,探讨其抑制Hep-2增殖的机制.方法:采用MTT法检测12.5、25.0、50.0和100.0μmol/L ROS处理12、24、36、48、60和72h后Hep-2细胞的增殖抑制率.RT-PCR方法检测50 μmol/L的ROS处理0、24、48和72h后Hep-2细胞NF-κB和VEGF mRNA表达的变化.结果:ROS对Hep-2细胞的生长具有增殖抑制作用,其作用表现为剂量依赖性(12、24、36、48、60和72h各浓度组相比,F为117.584、98.241、92.352、117.228、148.458和124.900,P均<0.001)和时间依赖性(12.5、25.0、50.0和100.0 μmol/L各时间组相比,F为140.949、123.335、148.325和176.590,P均<0.001).RT-PCR检测结果显示50 μmoL/L的ROS处理Hep-2细胞0、24、48和72 h后,NF-κB相对表达量分别为(0.854 ±0.066)、(0.653 ±0.059)、(0.489 ±0.027)和(0.336 ±0.031),差异有统计学意义(F=111.357,P<0.001);VEGF相对表达量分别为(0.756 ±0.057)、(0.628 ±0.039)、(0.482 ±0.044)和(0.318 ±0.035).差异有统计学意义(F=89.796,P<0.001).结论:ROS具有抑制Hep-2细胞增殖的作用,其机制与下调NF-κB和VEGF mRNA表达有关.     

慢性重型肝炎患者血浆对HEPG2细胞增殖及解毒功能的影响

目的:观察慢性重型肝炎患者血浆(CSHP)对HEPG2细胞增殖及解毒功能的影响.方法:分别用100%正常人血浆(NHP)和100%CSHP培养HEPG2细胞.培养24、48、72、96和120h,MTT法检测细胞活力;培养24、48 h,姬姆萨染色,倒置显微镜下观察2组HEPG:细胞的形态;培养48 h,扫描电镜观察2组细胞的生长状态,并检测HEPG2细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量.结果:连续5 d,100%CSHP培养的HEPG2细胞活力均高于100%NHP组(t=5.424、4.714、3.834、3.781和6.106,P均<0.001).培养24、48 h,可见100%CSHP培养的HEPG2细胞生长较密.培养48 h.电镜下可见2组细胞生长状态均良好,但100%CSHP组处于分裂前期的细胞数多于100%NHP组,且分裂较活跃;100%CSHP组HEPG2细胞内还原型GSH含量为(306.7±16.2)mg/g,低于100%NHP组的(492.3±15.7)mg/g(t=9.18,P<0.001).结论:CSHP可促进HEPG2细胞的增殖,并使HEPG2细胞内还原型GSH消耗明显增加,导致其解毒功能下降.     

活性氧对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 研究和探讨缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)内活性氧(reactive oxygen species,ROs)对细胞凋亡的影响及其调控机制.方法 原代培养正常大鼠PASMCs,选用第2～4代用于实验.分别在常氧及低氧条件下使用ROS清除剂Tiron进行分组干预.通过四唑硝基蓝(NBT)还原法、2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内ROS水平,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 ①缺氧组细胞ROS水平[NBT:(0.214±0.024),DCFH-DA:(39.33±3.27)]明显高于对照组[NBT:(0.114±0.017),DCFH-DA:(15.84±2.86)](均P<0.01);②缺氧组细胞凋亡指数(2.42±0.74)显著低于对照组(4.50±0.45)(P<0.01),Tiron+缺氧组细胞的凋亡指数(5.75±0.94)与缺氧组比较则明显升高(P<0.01);③与对照组[Bcl-2:(0.098±0.017),Bax:(0.210±0.031),Bcl-2/Bax:(0.465±0.021)]相比较,缺氧组Bcl-2蛋白表达(0.141±0.024)增强(P<0.05),Bax蛋白表达(0.074±0.020)减弱(P<0.05),Bcl-2/Bax比值(1.973±0.283)升高(P<0.01);④和缺氧组比较,缺氧+Tiron组Bcl-2蛋白表达(0.124±0.018)降低(P<0.05),同时Bax蛋白表达(0.182±0.019)增强(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(0.678±0.071)(P<0.01).结论 缺氧状态时大鼠PAsMCs内ROS生成增多,ROS可通过促进Bcl-2/Bax蛋白表达比值升高来抑制PASMCs凋亡,从而在缺氧性肺动脉重建的发病机制中发挥重要作用.     

Akt3基因在低氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞体外增殖中的作用

目的 通过观察缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(Akt3)mRNA及其蛋白表达水平变化与低氧PASMC增殖的关系,探讨Akt3在低氧肺血管重建中的调控作用.方法 组织块法培养PASMC.采用半定量RT-PCR技术检测常氧组(N组)和低氧2、8、12、24h组Akt3基因mRNA表达水平;采用Western blot技术检测相应蛋白表达水平.采用MTT法、3H-TdR掺入法检测PASMCs增殖改变.结果 低氧诱导PASMCs不断增殖.各组均检测出Akt3基因mRNA以及蛋白表达变化,图像定量分析光密度值显示各组表达mRNA以及蛋白表达与细胞增殖改变密切相关.结论 Akt3基因可能在低氧肺动脉高压中调节PASMC增殖.     

异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达的影响。方法:取新生2~3 dW istar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组,乳剂对照组,缺氧4 h后复氧12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组,加异丙酚250μmol/L缺氧4 h后复氧12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组。分别于各时间点检测每组细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达变化。结果:与正常对照组比较,缺氧复氧组细胞随着时间延长凋亡不断增加,Bc l-2蛋白24 h时间点表达最高,随后逐渐降低,Bax蛋白24 h表达低,随着时间延长不断增加,72 h时间点最高,Bc l-2/Bax蛋白比值于24 h、48 h和72 h时间点分别为1.4、0.8和0.6。与缺氧复氧组比较,异丙酚处理组凋亡明显减少,Bax蛋白表达降低,Bc l-2蛋白24 h内表达升高达峰值,此后有所降低但仍维持较高水平,且Bc l-2蛋白表达持续高于Bax蛋白,Bc l-2/Bax蛋白比值保持在1.6~1.8之间。结论:异丙酚可抑制缺氧复氧后海马反应性星形胶质细胞表达Bc l-2和Bax蛋白的动态变化,使Bc l-2/Bax蛋白比值持续保持较高水平而发挥良好的保护作用。     

三乙醇胺对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞生物特性的影响

目的 观察三乙醇胺(TEOA)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞生物特性的影响,旨在为DLBCL的临床治疗策略提供依据。方法 DLBCL细胞株OCI-LY3源于中国科学细胞库,随机数字表法简单随机分为对照组和观察组,每组分别设置5个复孔,观察组加入不同浓度(5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μmol/L)的TEOA于细胞培养箱培养12 h,采用Graph Pad Prism 5软件计算2组DLBCL细胞存活率,流式细胞术检测DLBCL细胞的凋亡和侵袭情况,MTT法检测DLBCL细胞的增殖情况,Western blotting检测蛋白相对表达量,比较2组细胞活性氧(ROS)水平,收集2组研究数据并录入SPSS 20.0统计学软件进行分析。结果 TEOA作用后24、48、72 h观察组细胞增殖率为(39.24±3.95)%、(57.08±5.87)%、(114.08±14.69)%,明显低于对照组的(49.49±5.02)%、(95.12±9.64)%、(210.45±25.62)%,差异有统计学意义(均P<0.05);观察组穿膜细胞数[(38.14±3.7...     

低氧微环境对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响

目的观察低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响;探索不同时间梯度和细胞密度在低氧微环境下对HIF-1α表达的影响。方法 (1)构建脑胶质瘤细胞(T98G)生长的缺氧微环境,将细胞设为低氧组(1%氧气含量)和常氧组(21%氧气含量),在不同氧浓度下培养4～72 h后观察细胞生长情况;利用western blot印迹法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达情况;(2)将低氧组T98G细胞设计为四组不同细胞密度,在1%O2的低氧浓度下培养24 h,通过Western blot检测四组细胞HIF-1α表达情况。结果 (1)倒置显微镜和Hoechest染色均未见低氧组和常氧组细胞发生明显的细胞凋亡,MTT法检测二组细胞均呈增殖状态。与常氧组相比,低氧组细胞HIF-1α蛋白明显高表达(P <0.001)。低氧组细胞在4、6、12、24 h (<24 h) HIF-1α蛋白表达量快速升高(P <0.05),24、48、72 h (> 24 h) HIF-1α蛋白表达量逐渐下降;(2)低氧微环境下四组不同细胞密度中,24 h后高密度组(8.5万个细胞/cm2)细胞的HIF-... 更多     

间歇性缺氧通过内质网途径诱导滋养层细胞凋亡

目的 分析间歇性缺氧对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)内质网应激及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 选用人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo),间歇性缺氧-24 h组和间歇性缺氧-48 h组分别进行24 h和48 h的间歇性缺氧处理,空白对照组始终置于常氧中培养。观察间歇性缺氧对细胞凋亡与增殖,以及内质网应激相关分子、细胞凋亡相关蛋白、细胞周期相关蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。结果 与空白对照组比较,间歇性缺氧组CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、X-盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA和蛋白表达水平显著增加,早期凋亡率显著增加,Caspase-3蛋白、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)mRNA和蛋白表达水平显著增加,HIF-1αmRNA和蛋白表达水平显著增加,并随缺氧时间延长而增加(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧可显著抑制HTR8/SVneo细胞增殖,并随缺氧时间延长而细胞活力降低(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧组细胞周期蛋白D1(C...     

AQP4在新生大鼠实验性星形胶质细胞缺氧损伤模型中的表达变化及意义

目的 探讨水通道蛋白4（AQP4）在原代培养新生大鼠星形胶质细胞（AC）缺氧和缺氧后再复氧损伤模型中的表达改变及其意义。方法 原代培养成熟的AC随机分成常氧培养组（对照组）、缺氧组和复氧组。缺氧组AC在缺氧条件下分别培养3h、6h、12h和24h,复氧组AC缺氧培养12h后更换为常氧培养,分别培养3h、6h、12h和24h。各组样品采用Real Time PCR和免疫荧光染色分别测定AQP4 mRNA和蛋白表达水平。结果 随着缺氧时间延长,AQP4 mRNA和蛋白表达水平进行性降低,复氧时则先降低,后回升。结论 AQP4表达下降可能与脑水肿的发生有关,AQP4可能对脑内渗透平衡重建起重要作用。     

低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素-6表达的影响

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素6（IL－6）表达的影响。方法：低氧处理与肺微血管内皮细胞复合培养的鼠肺动脉平滑肌细胞，采用RT－PCR方法检测常氧组、低氧2、6、12h组IL－6基因的表达水平，并测定细胞培养上清中IL－6的活性。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中IL－6　mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，低氧12h组有所降低，但与常氧组比较有明显差别。低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞上清中IL－6的活性明显升高，6h组细胞上清中IL－6的活性水平最高，12h组的活性降低，24h组的水平低于2h组。IL－6活性水平与其基因表达的水平一致。结论：低氧可以增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中IL－6基因的表达，使细胞培养上清中IL－6活性升高，进有可能激活其它一些信号转导相关基因调节细胞的低氧反应。