应用RAPD技术对溪黄草基原植物分类鉴定

目的:用分子标记技术对中药溪黄草的基原植物分类鉴定。方法:用离心柱法提取5种溪黄草基原植物基因组DNA,用85个10 bp的寡核苷酸随机引物进行PCR(聚合酶链式反应),将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,分析电泳图谱。结果:从85条随机引物中筛选出了12条多态性较好的引物,其中7个引物的扩增图谱表现较好的多态性,且重复性较好。结论:RAPD技术可以成功鉴定溪黄草药材基原。     

黑龙江省不同产地满山红遗传多样性的RAPD分析

目的:分析不同产地满山红遗传背景与遗传关系,建立中药满山红的RAPD分析方法。方法:CTAB法提取不同产地满山红的基因组DNA;琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物,SPSS17.0软件进行聚类分析,NTSYS2.10e软件进行遗传距离计算。结论:从100条随机引物中筛选出10个随机引物,其扩增产物谱带多,特征好,共扩增出806条条带,多态性条带数710条,多态性比例为88.1%。结论:不同产地间的满山红存在丰富的遗传多样性,RAPD分析技术可用于鉴定满山红。     

马蓝种质资源的RAPD分析

目的:探讨马蓝种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法:利用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对收集到的不同居群马蓝资源进行分析。结果:从104条10个碱基的随机引物筛选出有差异的有效引物,筛选出的12条有效引物,扩增共获得422条DNA带,多态性程度为55.69%。聚类分析表明,马蓝种质资源的遗传差异与地理位置无密切联系,而与形态特征有一定联系,但并不十分紧密。结论:不同自然居群的马蓝资源在分子水平上存在着较明显的遗传差异。     

不同薯蓣皂苷元的盾叶薯蓣遗传关系的RAPD分析

目的从DNA水平分析鉴定不同薯蓣皂苷元盾叶薯蓣的遗传关系。方法从40个10 bp随机引物中筛选出12个引物,进行RAPD分析,应用POPGENE 1.31软件对扩增结果进行聚类分析。结果共扩增出73条DNA片段,其中多态性片段64条,占87.67%,盾叶薯蓣类型间具有明显的多态性差异。结论DNA分子多样性差异与薯蓣皂苷元量差异具有相关性,说明盾叶薯蓣的遗传基础可能对薯蓣皂苷元的形成和积累有显著的影响。     

佛手种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析

目的 研究佛手种质资源多样性和遗传关系.方法 采用随机扩增多态性随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析了佛手13份种质材料的亲缘关系.结果 从110条引物中筛选出16条多态性高的引物,共扩增出185条DNA带,其中多态性带有168条,多态率为90.8%.通过聚类分析,在相似系数0.67的水平上将13份材料分为3类.结论 佛手种质间存在较丰富的遗传多样性,聚类结果与以产地为依据对佛手进行品种类群划分较为一致.     

老鹳草属植物遗传多样性的RAPD分析

目的:分析8种老鹳草属植物遗传多样性和亲缘关系。方法:利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析遗传多样性,UPGMA类平均法聚类分析。结果:筛选出的11个随机引物供试材料DNA随机扩增,共得到145条带。其中多态性条带114条,多态性为78.62%。经聚类分析,可将供试材料分为3类,与传统分类方法差异不大。结论:RAPD技术用于老鹳草属的遗传多样性和分类研究是可行的。     

菝葜RAPD扩增条件优化

目的研究菝葜的RAPD-PCR扩增体系最适宜的条件。方法采用CTAB提取方法,从菝葜的嫩叶中提取总基因组DNA,以此为模板,优化菝葜RAPD-PCR的反应条件。结果 最适宜的PCR扩增体系为:反应体积30μL,内含0.20μmol/L引物、200μmol/L dNTP4、0 ng模板DNA、2 UTaqDNA聚合酶、2μmol/L Mg2+。结论通过扩增条件优化实验,建立了重复性好、稳定性高的药用植物菝葜RAPD-PCR扩增体系最适宜的条件,筛选出条带清晰多态性好的14条随机引物,共扩增得到144条电泳带,其中有多态性带62条,检测到了62个多态性位点,多态率为43%。     

罗汉果性别的RAPD标记研究

采用随机扩增多态性DNA(Random Amp lified Polymorph ism DNA,RAPD)技术,运用集群分离分析法(Bu lked SegregantAnalysis,BSA)研究与罗汉果性别连锁的分子标记。从90条随机引物的扩增产物中筛选出18条可能与性别连锁的RAPD标记。利用雌雄个体对这18条RAPD标记进行验证,发现引物S1431所扩增的约400bp谱带在8个雌性单株中都不出现,而在8个雄性单株中都出现,表明这是一条与雄性连锁的RAPD标记。     

不同产地连翘的DNA指纹图谱构建与聚类分析

目的以不同产地的14批连翘Forsythia suspensa为材料,运用RAPD技术对其进行遗传多样性研究并构建DNA指纹图谱。方法采用RAPD技术,从45条RAPD随机引物中进行筛选,以14批连翘进行DNA指纹图谱的分析研究。结果从45条RAPD随机引物中筛选出11条多态性好的引物,利用这11条RAPD引物进行PCR扩增,共获得80条谱带,平均每个引物扩增出7.27条谱带,其中多态性谱带67条,多态性条带比率为83.8%,是连翘药材资源研究的一种有效分子标记。14批连翘药材间的遗传相似系数(genetic similarity,GS)在0.487 5~0.962 5,表明遗传多样性比较丰富。聚类结果显示遗传多样性与连翘药材来源地有明显的相关性,而且与其亲缘关系较近有关,符合植物种群分布的一般规律。结论以14批不同产地连翘药材资源的RAPD扩增谱带为基础,构建连翘药材资源的DNA指纹图谱并进行聚类分析。     

不同产地石斛属种质资源的ISSR遗传多样性分析

目的 对24份不同产地石斛属样品的遗传多样性和亲缘关系进行分析.方法 采用ISSR分子标记技术和非加权平均距离法(UPGMA)对24份石斛属样品进行遗传多样性和聚类分析.结果 从100条ISSR引物中共筛选出6条多态性稳定、清晰的引物,24份石斛样品共扩增出847个DNA片段,平均每个引物扩增出141个DNA片段,其多态性为100％.结论 24份不同产地石斛样品被划分为6个类群,遗传多样性非常丰富.     

蛇床子地理分布与叶绿体matK基因序列的相关性分析

 目的探讨中药蛇床子 Cnidium monnieri(L.)Cuss.居群间的DNA序列变异与地理分布的关系,为蛇床子品质评价提供分子依据。方法采用PCR直接测序技术对蛇床子6个居群6个个体样品的叶绿体matK基因进行测序分析研究。结果蛇床子6个居群的matK基因核苷酸序列长1268 bp,编码422个氨基酸成熟酶。根据排序比较,蛇床子6个居群间的matK基因序列存在12个变异位点,氨基酸序列10个变异位点。邻接法构建的系统分支树表明：蛇床子居群间的亲缘关系与地理分布及所含香豆素化学型呈良好的相关性。结论结合香豆素分析数据,基因测序分析技术可以成为蛇床子品质评价的有力工具。     

蛇床子地理分布与叶绿体matK基因序列的相关性分析

目的 :探讨中药蛇床子Cnidiummonnieri(L .)Cuss .居群间的DNA序列变异与地理分布的关系 ,为蛇床子品质评价提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术对蛇床子 6个居群 6个个体样品的叶绿体matK基因进行测序分析研究。结果 :蛇床子 6个居群的matK基因核苷酸序列长 12 6 8bp ,编码 4 2 2个氨基酸成熟酶。根据排序比较 ,蛇床子 6个居群间的matK基因序列存在 12个变异位点 ,氨基酸序列 10个变异位点。邻接法构建的系统分支树表明 :蛇床子居群间的亲缘关系与地理分布及所含香豆素化学型呈良好的相关性。结论 :结合香豆素分析数据 ,基因测序分析技术可以成为蛇床子品质评价的有力工具。     

Qualitative Analysis and Quality Evaluation of Cnidium monnieri Using UHPLC-ESI-Q-TOF/MS

Objective To identify the coumarins constituents in Cnidium monnieri and classify ten samples into three groups and this helpful chemical information could be used for the further pharmacological and clinical study on C. monnieri. Methods Qualitative analysis of coumarins in C. monnieri was detected by UHPLC-ESI-Q-TOF/MS. Quadrupole TOF/MS in either full scan mode or extracted ion mode was used for the qualitative analysis of the constituents. Relative peak area of each component was used for the hierarchical cluster analysis. Results According to UHPLC-ESI-QTOF-MS data, chemical structures of 28 coumarins in the fruits of C. monnieri were identified, including 19 simple coumarins, seven linear coumarins, and two angular coumarins. Among these constituents, ten coumarins were firstly identified in C. monnieri. In addition, hierarchical cluster analysis suggested that C. monnieri from different regions could be classified into four groups, and this clustering was correlated to the distribution significantly, Xuzhou could be regarded as the genuine producing area. Conclusion UHPLC-ESI-Q-TOF-MS is a viable method for qualitative analysis and quality evaluation of coumarins from the fruit of C. monnieri. Coumarins in C. monnieri exists intra-species variance, which indicates significant meaning for the quality control and choice of famous region drug for C. monnieri in the clinic medication.     

不同产地蛇床子中的蛇床子素的含量测定

目的:对不同产地蛇床子的成分分析与比较。方法:运用高效液相色谱法,ODS2C18柱,流动相为甲醇-水(75∶25),柱温为22℃,流速0.8mL/m in,检测波长为322nm。结果:蛇床子素在0.14~1.43μg/mL呈良好线性关系,r=0.9998。平均回收率为99.92%,RSD=1.7%(n=6)。不同产地的蛇床子中的蛇床子素的含量在1.67%~2.88%之间,以河北产的蛇床子中蛇床子素的含量最高。结论:本法简便快捷,回收率及重现性良好,适用于蛇床子素的定量分析。     

苦参碱、氧化苦参碱与蛇床子提取物联合抗菌作用研究

目的:探讨苦参碱、氧化苦参碱和蛇床子提取物单独以及联合使用时对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念球菌的抑制作用。方法:以苦参碱、氧化苦参碱和蛇床子提取物为研究对象,通过纸片扩散法测试其单独使用及联合使用时对上述菌种的抑菌圈直径。结果:苦参碱、氧化苦参碱单独使用时对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念球菌均没有抑菌效果,蛇床子提取物对金黄色葡萄球菌有微弱的抑制作用,而苦参碱、氧化苦参碱与蛇床子提取物联用对金黄色葡萄球菌和白色念球菌均有很好的抑制作用。结论:本实验中苦参碱和氧化苦参碱与蛇床子提取物联合使用对测试菌种产生增效作用。     

蛇床子挥发油成分的气相色谱-质谱联用分析

目的用气相色谱-质谱法对江苏产蛇床子挥发油化学成分进行分析。方法采用水蒸气蒸馏法从蛇床子挥发油中提取挥发油,研究其分离分析的条件,对分离的物质用GC-MS鉴定,归一法确定其相对百分含量。结果鉴定了27个主要成分。结论此方法稳定可靠,重现性好,适用于中药挥发油的化学成分分析。     

蛇床子挥发油化学成分的GC-MS分析

目的:用气相色谱-质谱法对蛇床子挥发油化学成分进行分析。方法:采用水蒸气蒸馏法从蛇床子中提取挥发油。用气相色谱-质谱法对化学成分进行鉴定。用归一化法确定其相对百分含量。结果:共鉴定了50个成分,占挥发油总成分的86％以上。结论:本方法稳定可靠,重现性好,适用于中药挥发油的化学成分分析。     

蛇床及其近缘物种的ITS2分子鉴定

目的：对传统中药蛇床子基原植物及其近缘物种的ITS2条形码序列进行分析,探讨药用植物蛇床子的分子鉴定方法。方法：采用PCR技术扩增蛇床ITS2基因片段,进行双向测序,运用CodonCodeAligner拼接后,用MEGA5．0软件进行相关数据分析,构建NJ树。应用Schuhz等建立的ITS2数据库及其网站预测ITS2二级结构。结果：蛇床与其近缘物种ITS2序列间存在明显差异,基于ITS2序列的NJ树及其ITS2二级结构均可以将蛇床及其近缘物种区分开。结论：ITS2可有效地鉴别蛇床及其近缘物种。     

Studies on the quality of fructus Cnidii--comparison of antibacterial action]

Comparative studies on antibacterial and antifungal action of the fruits of C. monnieri from four habitats and two other species of Cnidium showed they had inhibitory potency to some bacterial and fungi in vitro. C. monnieri and C. salium were more effective than C. dahuricum in antibacterial activities. C. monnieri had higher antifungal effect than C. salium and C. dahuricum.     

至宝三鞭酒的薄层色谱鉴别及马钱苷的含量测定

目的:建立有效控制至宝三鞭酒质量的薄层色谱鉴别及含量测定。方法:用薄层色谱法(TLC)鉴别处方中的当归、蛇床子、何首乌、补骨脂、白芍、山茱萸、枸杞子、白术。用高效液相色谱法(HPLC)测定至宝三鞭酒中马钱苷的含量:色谱柱:Hypersi柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:四氢呋喃-乙晴-甲醇-0.05%磷酸溶液(1:8:4:48);检测波长:236nm;进样量:对照品进样10μL,样品进样20μL。结果:在薄层色谱上可检出当归、蛇床子2种药材的特征斑点并且无阴性干扰,可收入质量标准中。HPLC法测定中,在此色谱条件下,马钱苷在进样量为0.0185-0.7380μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999,n=6)。平均加样回收率为99.6%,RSD为1.55%(n=9)。结论:TLC法鉴别至宝三鞭酒中当归、蛇床子准确,重现性好,可用于至宝三鞭酒的质量控制。HPLC法可控制至宝三鞭酒中马钱苷的含量,准确度高,重现性好,操作简便。