检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立

目的 建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。 方法 利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果 用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到10^{2拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。 结论 本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。}     

检测柯萨奇病毒A组6、10、16型的多重荧光RT-PCR建立及应用

目的建立检测手足口病(HFMD)肠道病毒的多重荧光RT-PCR方法。方法用多重荧光RT-PCR技术对引起HFMD的3种常见人肠道病毒[柯萨奇病毒A组(CVA)6、10、16型]进行检测,用基因测序法进行验证,并以灭活的CVA6、CVA10、CVA16病毒标准株以及引起临床相似症状的病原体样本进行特异性和灵敏度分析。结果 322例临床疑似HFMD标本,经本多重荧光RT-PCR法检测出CVA16、CVA10和CVA6型阳性样本分别为81、16和9份(总阳性率32.9%),且与基因测序法结果完全符合。将多重PCR体系中c-MMLV逆转录酶的量增至5 U,Hot-Taq酶的量增至8.5 U,可使其扩增效率提升至单重PCR扩增水平。优化后的体系可扩增出CVA6、CVA10和CVA16型阳性病毒标准RNA的检测下限分别是10,5和1 TCID50/mL。结论建立了一种灵敏、特异、高效和高通量的检测HFMD肠道病毒的多重荧光RT-PCR法,为其快速诊断提供了新的实验方法。     

实时荧光RT-PCR快速检测肠道病毒RNA及其临床意义

目的应用实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法快速检测肠道病毒RNA,为手足口病的早期诊断提供临床依据。方法采用实时荧光RT-PCR法检测手足口病患儿粪便、脑脊液中肠道病毒通用型、柯萨奇病毒A组16(CA16)和肠道病毒71型(EV71)RNA。结果 234份粪便标本中肠道病毒通用型阳性214例,检出率为91.45%;CA16阳性56例,阳性率为23.50%;EV71阳性87例,阳性率37.17%,其中有4例同时检出CA16和EV71。2份脑脊液标本中3种肠道病毒核酸结果均为阴性。结论实时荧光RT-PCR能对肠道病毒RNA进行快速检测,为手足口病的早期诊断提供诊断依据,并对手足口病患儿的病情分析、治疗及预后观察起到指导作用。     

肠道病毒71型感染

1 引言 新型肠道病毒指的是1969年以后鉴定的,除脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒以后,陆续发现符合肠道病毒的理化特性的小RNA病毒.新型肠道病毒感染即由新型肠道病毒所引起的感染.     

病毒性肝炎（一）

一、病毒性肝炎的抗原特点是什么? 世界卫生组织将常见病毒性肝炎命名为甲型、乙型、丙型三种. (一)甲型肝炎病毒(HAV)为核糖核酸(RNA)病毒,直径27毫微米,现已被归类于微小RNA病毒科中的肠道病毒属,并命名为肠道病毒72型,在外界环境中异常稳定,抵抗力强,56℃30分钟     

应用一种新的RT-PCR法快速诊断肠道病毒感染

作者对临床上有中枢神经症状的患者103例脑脊液，平行地用培养法和RT－PCR法进行检测，培养法检出肠道病毒的有27例，而用RT－PCR法检出肠道病毒RNA者为34例，充分表明后者比培养法更为敏感和特异。应用一种新的RT-PCR法快速诊断肠道病毒感染     

核酸扩增技术在献血者血液HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA筛查中的应用研究

目的探讨在我国无偿献血者的血液筛查中引进核酸扩增技术(NAT)的必要性,了解献血者血清学病毒标志物检测阴性、NAT检测阳性的感染状况。方法应用Roche PCR、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法对深圳市131 174人(次)血清学检测病毒标志物阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA检测,对NAT阳性献血者追踪检测并做定量分析。结果HBV DNA阳性22例,阳性率为1/5 962,其中15例为抗-HBc阳性,阳性率为1/8 745;HCV RNA阳性1例,阳性率1/131 174;HIV-1 RNA未检出阳性。对14名HBV DNA阳性者的追踪发现,8人发生了血清转换现象。结论采用高灵敏度的NAT筛查献血者血液中的HBV和HCV,有助于提高输血及血液安全。     

病毒核酸检测在献血者血液筛查中的应用

目的　建立献血者血液混合核酸检测方法 ,调查北京现有检测体系下血液的残余风险度 ,评估核酸检测 (NAT)的必要性和可行性。方法　用世界卫生组织标准品对国产丙型肝炎病毒(HCV)和人免疫缺陷病毒 (HIV)荧光 聚合酶链反应核酸扩增检测试剂进行灵敏度、重复性和精密度试验 ;对 2 0 0 2年 2～ 10月 34373份常规血清学检测 (ALT、HBsAg、抗 HCV、抗 HIV、梅毒抗体 )合格的献血者血样进行HCVRNA和HIV 1RNA核酸扩增分析。采取 2 4人份混合血样测定 ,超离心浓缩病毒 ,Roche核酸提取柱提取病毒核酸。结果　扩增系统能 10 0 %检出 5 0IU/mlHCV及 5 0IU/mlHIV 1标准品核酸 (n =16 ) ;常规血清学检测合格的献血者血液中 ,没有检出HCV或HIVNAT阳性。结论　该核酸检测体系适用于献血者血液病毒筛查 ;北京市血液的病毒安全性已有相当高的保障。为更准确地评估NAT检测项目的可行性和必要性 ,检测标本量尚待增加。     

文摘

<正> 作者研究了以肠道病毒为重点的神经亲和性病毒对某些消毒剂的抗性,以改进新生儿室内无菌性脑膜炎预防中的消毒工作。试验用毒株有:柯萨奇病毒A_9与B_5型、ECHO病毒11型、脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、肠道病毒70     

核酸检测技术在无锡市献血筛查中的应用分析

目的：评估核酸检测技术（Nucleic Acid Technology ,NAT）应用于献血者血液筛查的必要性和可行性。方法采用美国罗氏诊断公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型＋2型）核酸联合检测试剂盒（PCR‐荧光法）,对2013年4月～7月本血站ELISA检测合格的献血者9418例血液标本进行 HBV DNA、HCV RNA和 HIV RNA1＋2联合检测,先对6人份混样标本进行检测,如为非反应性,则该合并检测池中的标本均为非反应性,如合并检测呈反应性,再进行拆分检测。本试剂盒合并和拆分检测使用相同的复合PCR扩增系统,单管实时荧光 PCR检测3种病原体,通过将探针标记不同的荧光信号分辨HBV、HCV、HIV‐1＋2反应性病原体种类。结果对9418人份ELISA检测 HBsAg、抗‐HCV、抗‐HIV均为阴性的合格血液标本共检测出HBV DNA阳性6例,阳性率为0．06％;HCV RNA阳性1例,阳性率为0．01％,HCV RNA阳性血液病毒定量为4．27×106 IU／mL ;未检测出HIV RNA。结论 NAT能在ELISA检测阴性的献血者血液标本中筛查到HBV、HCV反应性的标本,常规开展NAT能进一步提高血液及输血安全。     

用以评价光敏剂介导的血液中病毒灭活效果的模型系统的建立

为了保证血液制品的安全性,进行血液制品的病毒灭活很有必要。由光敏剂介导的光动力学处理方法,可以选择性地灭活血液中的被膜病毒,而对血液成分无影响,先前已有数篇报道。本文作者采用疱疹性口炎病毒(VSV,一种RNA被膜病毒)为模型病毒,以中性红染料攝入试验和标准空斑检查法测定病毒浓度,建立了一个用以评价光敏剂介导的血液中病毒灭活效果的模型系统。并用这个模型系统对一类新的光敏剂——苯并卟啉衍生物一元酸环A(BPD-MA)及其类似物介导的血液中病毒灭活效果、光照强度、保温时间、光敏剂浓度和VSV在血液中的分布对灭活效果的影响进行了     

多重定量PCR法同步检测HBV、HCV和HIV-1在血液筛查中的优化及应用

目的 初步探讨多重定量聚合酶链反应（PCR）同步检测乙型肝炎病毒（HBV） DNA,丙型肝炎病毒（HCV） RNA及人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 RNA在血液筛查中的应用前景.方法 选择2012年8月至12月,于孝感市中心血站志愿献血的合格献血者血样中,经2次酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV表面抗原（HBsAg）、抗HCV及抗HIV-1,检测结果均呈阴性的4 800份血样为研究对象.采用全自动核酸混合提取仪对该4 800份血样进行核酸提取,然后利用多重定量PCR方法对血样中HBV、HCV及HIV-1进行同步扩增检测.采用中国药品和生物制品检定所提供的HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA标准参考品,检测多重定量PCR的灵敏度,并与单重定量PCR的灵敏度进行比较.在HBV、HCV及HIV-1 3者中任意1种病毒基因组浓度较高的条件下,对多重定量PCR检测另2种低浓度病毒基因组的能力进行评估.结果 增加多重定量PCR中c-MMLV逆转录酶和Hot Taq酶的用量,并适量加入单链结合蛋白（SSB）,可使其扩增效率提升至单重定量PCR扩增水平.本组4 800份血样中,经多重定量PCR检测出3份HBV DNA阳性样品,ELISA漏检率为0.062 5％,未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样品;多重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为115 IU/mL、376 IU /mL和232 IU /mL;单重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为51 IU /mL、94 IU /mL和78 IU/mL.结论 本研究初步建立了对献血者血液同时进行HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA检测的多重定量PCR检测方法;该检测体系经过进一步优化后,有望应用于临床大规模血液病毒筛查.     

血液病毒核酸集中化检测在柳州地区开展情况的研究

目的通过分析柳州地区血液病毒核酸集中化检测的情况,探讨进一步改进和完善血液检测的策略。方法对柳州地区开展血液病毒核酸集中检测的标本资料进行分析。结果从2015年10月至2018年9月,共检测标本253 229人份,经鉴别或拆分试验,乙型肝炎病毒(HBV)DNA阳性标本514人份(0.20%),丙型肝炎病毒(HCV)RNA阳性标本2人份(0.08‰),人类免疫缺陷病毒(HIV)RNA阳性标本2人份(0.08‰),核酸阳性率为0.21%(518/253 229),即血清学检测漏检率为0.21%。结论开展血液病毒核酸集中化检测,可以有效降低输血风险,保证血液安全。     

手足口病防治进展

近期在我国多个地区流行的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是分别由多种肠道病毒引起的丙类法定传染病,常见于婴幼儿,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症[1~3]。1病原学能引起手足口病的肠道病毒有20多种(型),主要为小RNA病毒科、肠道病毒属的柯萨奇病毒(Coxsackie virus,Cox)A组的4、5、9、10、16型,柯萨奇病毒B组的2、5、13型,肠道病毒(EV)71型,埃可病毒(E-CHOviruses,Echo)的某些血清型均为手足口病较常见的病原体,其中以柯萨奇病毒A16和肠道病毒71最为常见。研究表明,HFMD的病原体经历了较大的变迁:对药物具有抗性,75%酒精、5%来苏对肠道病毒没有作用,对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感,但对紫外线及干燥敏感,各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、甲醛、碘酒都能灭活。病毒在50℃可被迅速灭活,但1mol浓度二价阳离子环境可提高病毒对热灭活的抵抗力,病毒在4℃可存活1年,在-20℃可长期保存,在外环境中病毒可长期存活。2流行病学2&#183;1传染源人是肠道病毒惟一宿主,患者和隐性感染者...     

三种核酸共提取试剂盒对血液病毒提取效能的比较研究

目的比较不同核酸共提取试剂盒对血液病毒的提取效能差异。方法选择国内外广泛使用的3种血液病毒核酸共提取试剂盒,分别为OMEGA试剂盒、QIAGEN试剂盒和WATSON试剂盒,HBV阳性、HBV阴性、HCV阳性和HCV阴性血清样本均取自南京军区南京总医院。样本核酸提取按照各试剂盒说明书进行操作,定量方法采用实时荧光定量PCR。结果 OMEGA试剂盒对DNA的提取效率最高,对RNA的提取效率最低,耗时最短,成本居中;QIAGEN试剂盒DNA和RNA提取效率均较高,耗时居中,成本最高;国产WATSON试剂盒对DNA或RNA提取效率居中,耗时最长,成本最低。结论不同试剂盒对血液病毒的提取效能各不相同。对于已知病毒载量和病毒种类的样本,根据提取液DNA浓度和RNA浓度选择试剂盒;而对于未知病毒载量和病毒种类的样本,首选QIAGEN试剂盒,其次可选WATSON试剂盒。如只考虑成本,则首选WATSON试剂盒。     

重危病毒感染患儿的干扰素治疗

干扰素对属于粘液病毒类的呼吸道合胞病毒特别敏感,此外对其他的RNA病毒如流感、风疹、流行性腮腺炎、麻疹、肠道病毒和DNA病毒如带状疱疹、水痘病毒、巨细胞包涵体及腺病毒等均有一定疗效,故被认为是一种比较安全、广谱的抗病毒制剂。作者对25例病毒性肺炎患儿应用干扰素治疗,并设对照组     

柯萨奇病毒肺炎患儿血浆肿瘤坏死因子测定的意义

柯萨奇病毒为一种肠道病毒，属RNA病毒，虽其属肠道病毒，但可在呼吸道复制传播，引起小儿肺炎。本研究通过检测柯萨奇病毒肺炎患儿血浆肿瘤坏死因子α(TNFα)水平，以探索其在判断柯萨奇病毒肺炎患儿的病情严重程度和指导治疗方面的意义。对象和方法１.研究对象住院患儿50例,男26例，女24例。年龄为3月龄～5岁，病程3～10d，经临床和X线胸片诊断为病毒性肺炎。入院当天进行酶联免疫法检测柯萨奇病毒IgM,确诊为柯萨奇病毒感染。对照组系４０名近期无呼吸道和胃肠道感染的健康体检儿童（X线胸片正常、大便常规正常），年龄4个月～5岁。 2…     

NAT不能检出窗口期献血传播HBV、HCV、HIV危险的数学模型

背景 世界各地的血液中心基本上都引入了小混合样品NAT检测以减少窗口期献血传播HBV、HCV、HIV危险。本研究的目的是了解用单个样品NAT代替混合样品NAT能降低多少残余危险呢。研究设计和方法 本研究提出了一个数学模型以评估NAT筛查方法用于病毒学安全检测时输血传播病毒的可能性。研究使用了三种假设:1)在窗口早期病毒核酸浓度倍增期为2.8(HBV)天、0.74(HCV)天和0.90(HIV)天。2)筛查方法对病毒低拷贝数的DNA或RNA检出能力符合正规偏差模式;     

循环核酸测定在恶性肿瘤诊断中的应用

循环核酸是指存在于血液 (血浆或血清 )中的细胞外游离DNA和RNA。本文对血浆 (血清 )DNA如Ras和 p5 3基因突变、微卫星改变、肿瘤抑癌基因启动子的高甲基化、线粒体DNA突变和肿瘤相关病毒DNA等以及肿瘤相关RNA如酪氨酸酶RNA、端粒酶成分RNA、不同肿瘤相关基因编码的mRNA和病毒RNA等检测在肿瘤诊断和预后中的意义进行了综述 ,并简要展望了循环核酸测定的应用前景。     

循环核酸测定在恶性肿瘤诊断中的应用

循环核酸是指存在于血液(血浆或血清)中的细胞外游离DNA和RNA。本文对血浆(血清)DNA如Ras和p53基因突变、微卫星改变、肿瘤抑癌基因启动子的高甲基化、线粒体DNA突变和肿瘤相关病毒DNA等以及肿瘤相关RNA如酪氨酸酶RNA、端粒酶成分RNA、不同肿瘤相关基因编码的mRNA和病毒RNA等检测在肿瘤诊断和预后中的意义进行了综述，并简要展望了循环核酸测定的应用前景。