c—Ha—ras癌基因低甲基化在胃癌形成中的作用

应用ｃ－Ｈａ－ｒａｓ（６．６Ｋｂ）探针检测人类胃癌组织中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因序列中５＇－ＣＣＧＧ－３＇甲基化状态，根据胃组织ＤＮＡ用ＨｐａⅡ酶切、杂交后所显示的杂交带的位置和出现的频率不同，并且与ＭｓｐＩ酶切、杂交带型比较来判定ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因甲基化程度的差异。本组胃癌ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因低甲基化发生率是４５％，癌旁组织中发生率是１５％，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因低甲基化是胃癌发生的重要早期事件。     

肺癌原癌基因c－Ha－ras点突变的研究

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，在１１例肺癌标本中观察到８例发生了ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变，突变率为７７．８％。上述肺癌病例中８例取到癌旁组织，发现１例发生了该位点突变，２例兼有突变与未突变杂交带。结合临床、病理资料分析结果提示：ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子，或突变至少在一部分肺癌病例中并非细胞恶变过程中的起始事件，但可能为早期事件；该位点突变在不同病理类型中未见显著性差异，与ＴＮＭ分期、吸烟史非密切相关。     

肝细胞癌c—myc基因DNA甲基化模式的研究

探讨肝细胞癌ｃ－ｍｙｃ基因是否存在低甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基敏感的限制性内切酶ＨｐａⅡ和ＭｓｐⅠ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交手段，对６例正常肝组织和１８例肝细胞癌ｃ－ｍｙｃ基因３′端ＣＣＧＧ位点的甲基化状态进行检测。结果６例正常肝组织ｃ－ｍｙｃ基因３′端至少５个ＣＣＧＧ位点均被甲基化，而这种高甲基化模式在１１例肝细胞癌消失，表现为不同程度的低甲基化。在同一肿瘤组织各亚克隆细胞的甲基化状态也不一样。具有低甲基化状态的肝细胞癌多属进展期，其分化程度较差，大多伴有不同程度的肝内、外转移。结论肝细胞癌ｃ－ｍｙｃ基因的甲基呈不同程度的丢失，由此可能导致ｃ－ｍｙｃ基因异常高表达；ｃ－ｍｙｃ基因低甲基化状态可反映肝癌的恶性程度，有助于判断病人的预后。     

PCR－SSP快速检测胰腺癌石蜡切片中K－ras基因点突变

胰腺癌第１２位点Ｋ－ｒａｓ基因点突变检出率达７２％～１００％，检测其点突变方法有数种。我们采用针对Ｋ－ｒａｓ基因点突变方式设计的引物，对胰腺癌石蜡包埋组织进行多聚酶链反应（ＰＣＲ），产物借助常规电泳即可判定有无Ｋ－ｒａｓ基因突变及突变方式，无需酶切、杂交、放射性及非放射性显影等技术。研究发现：３１例胰腺癌标本有２３例存在Ｋ－ｒａｓ基因点突变，方式分别为ＣＧＴ、ＧＡＴ、ＧＴＴ，而９例正常胰腺组织、１９例胰腺良性疾病、７例胆管癌及４例十二指肠乳头癌均未见Ｋ－ｒａｓ基因突变。该法简便、快速、特异、灵敏，易临床推广应用，可以作为胰腺病变良恶性鉴别的一种新方法。     

胃癌c—myc c—Ha—ras基因DNA甲基化与病理的关系

以限制性内切酶ＨｐａⅡ／ＭｓｐⅠ消化，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ方法，分析２２例进展期胃癌手术标本的癌灶，癌旁和外周正常组织细胞内ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌基因位点的ＤＮＡ甲基化状态，并与其组织病是学变化相比较。     

PCR—SSP快速检测胰腺癌石蜡切片中K—ras基因点突变

胰腺癌第１２位点Ｋ－ｒａｓ基因点突变检出率达７２％～１００％，检测其点突变方法有数种。我们采用针对Ｋ－ｒａｓ基因点突方式设计的引物，对胰腺癌石蜡包埋组织进行多聚酶链反应（ＰＣＲ），产物借助常规电泳即可判定有无Ｋ－ｒａｓ基因突变及突变方式，无需酶切，杂交，放射性及非放射性显影等技术，研究发现：３１例胰腺癌标本有２３例存在Ｋ－ｒａｓ基因点突变，方式分别为ＣＧＴ，ＧＡＴ，ＧＴＴ，而９例正常胰腺组织，１９     

C—Ha—ras基因突变与妊娠滋养细胞疾病发生,发展及恶变的关系

应用分子生物学ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对正常足月新鲜胎盘３０例，葡萄胎（ＨＭ）终止后发展成持续性滋养细胞（ＴＰＤ）３０例，未发展成持续性滋养细胞病（非ＰＴＤ）３０例，恶性滋养细胞疾病（ＧＴＤ）３０例Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变进行检测。结果：正常足月胎盘Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变；在恶性ＧＴＤ中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变的阳性率３６．７％，ＰＴＤ中阳性率４３．４％，非ＰＴＤ中阳性率１６．７％。提示：Ｃ－Ｈａ     

人宫颈癌多基因致癌机理的研究

应用核酸分子杂交、ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＡＳＯ杂交等技术，对人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ等三种癌基因、ＨＰＶ１６病毒基因及Ｐ５３、Ｒｂ抑癌基因等多基因变化及其致癌机理进行了研究。结果表明：①宫颈癌中存在Ｈａ－ｒａｓ第１２位密码子Ｇ→Ｔ点突变，突变率为１８．２％（８／４４），并有Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，扩增率为４５％（９／２０）；②ｃ－ｅｒｂＢ２基因在宫颈癌中的扩增率为７３．３％（１１／１５），５例伴有重排；③ｃ－ｍｙｃ基因在宫颈癌中的扩增率为９１．７％（１１／１２）；④ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７为引物的ＰＣＲ检测结果，宫颈癌中的阳性率为８０．５％（３３／４１）；⑤１２例宫颈癌中未发现Ｐ５８、Ｒｂ基因缺失。上述多基因致癌机理的研究表明，人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ２经点突变、扩增、重排而被激活，在癌变中起着协同致癌作用。ＨＰＶ１６基因的整合可能启动ｃ－ｍｙｃ，为癌变的起始因素，而Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２的基因改变可能为中、晚期事件，抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ的作用尚需进一步研究。     

肺癌原癌基因c—Ha—ras点突变的研究

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，在１１例肺癌标本中观察到８例发生了ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变，突变率为７７．８％。上肺癌病例中８例取到癌旁组织，发现１例发生了该点突变，２例兼有突变与未突变杂交带。结合临床、病理资料分析结果提示：ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子占突变至少三部分肺癌病例中并非细胞恶变过程中的起始事件，但可能为早期事件，该闰突变在不同病理类型中未见显著性差异，与ＴＮＭ     

人口腔粘膜鳞癌中Ha－ras癌基因第12位密码子G→T突变的研究

采用聚合酶链反应和寡核苷酸探针杂交技术，检测２１例口腔粘膜鳞癌组织中Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子Ｇ→Ｔ突变，结果有６例存在这种点突变（２８．６％），而１０例正常口腔粘膜组织无１例发生这种突变。提示：Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子Ｇ→Ｔ突变可能导致口腔癌中癌基因的激活。并对点突变的临床意义进行了讨论。     

Ha—ras,p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因，ｐ５３基因变异，并结合临床分期，病理分级等参数进行了综合分析，结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因，ｐ５３基因变异率分别为３６％，３０．８％两者均显著高于正常对照组（Ｐ〈０．０５），且与分级分期呈正相关，复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变，提示Ｈａ－ｒａ     

人宫颈癌多基因致癌机理的研究

应用核酸分子杂交、ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＡＳＯ杂交等技术，对人宫颈癌上Ｈａ－ｒａｓ等三种癌基因、ＨＰＶ１６病毒基因及Ｐ５３、Ｒｂ抑癌基因等多基因变化及其致癌机理进行了研究。结果表明：①宫颈癌中存在Ｈａ－ｒａｓ等１２位密码子Ｇ→Ｔ点突变，突变率为１８．２％（８／４４），并有Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，扩增率为４５％（９／２０）；②ｃ－ｅｒｂ Ｂ２基因在宫颈癌中的扩增率为７３．３％（１１／１５），５例伴有重排；③     

C-Ha-ras基因突变与妊娠滋养细胞疾病发生、发展及恶变的关系

应用分子生物学ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对正常足月新鲜胎盘３０例，葡萄胎（ＨＭ）终止后发展成持续性滋养细胞病（ＰＴＤ）３０例，未发展成持续性滋养细胞病（非ＰＴＤ）３０例，恶性滋养细胞疾病（ＧＴＤ）３０例Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变进行检测。结果：正常足月胎盘无Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变；在恶性ＧＴＤ中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变的阳性率３６．７％，ＰＴＤ中阳性率４３．３％，非ＰＴＤ中阳性率１６．７％。提示：Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变与ＧＴＤ的发生、发展和恶性演变有关；阳性率随组织学分级差而升高，反映恶性ＧＴＤ的恶性程度。     

Ha-ras、p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异，并结合临床分期、病理分级等参数进行了综合分析。结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异率分别为３６％、３０．８％，两者均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）；且与分级分期呈正相关。复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变。提示Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异及相互作用在很大程度上参与了膀胱癌的发生及演变，并与其生物学行为密切相关，有望成为判断肿瘤恶性程度、自然病程及预后的评估指标     

c－Ha－ras反义DNA及其衍生物对转化细胞恶性表型的逆转

应用突变ｃ－Ｈａ－ｒａｓ质粒ＤＮＡ转化小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２纤维细胞，发现细胞获得恶性表型。本文合成了反义ＤＮＡ（ｏｌｉｇｏ），它与ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因前４个密码子及其上游正链序列互补；并发现ｏｌｉｇｏ可有效地抑制恶性转化细胞内ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因表达、细胞在软琼脂中集落形成以及细胞在裸鼠体内的致瘤作用。补骨脂素修饰ｏｌｉｇｏ后，其生物学活性增强。     

情感性精神病与Ha－ras基因限制性片段长度多态性关系的研究

用人Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ－１全长基因组ＤＮＡ作探针，对３８例双相型情感性精神病人和正常对照人群６６人进行ＲＦＬＰ分析，ＳａｃＩ酶解产生５．２ｋｂ，５．７ｋｂ，６．２ｋｂ和６．８ｋｂ四种等位多态片段，但各等位片段的频率与北美人比较有较大差别。ＢＰ病人和正常人之间，等位片段分布及等位片段组成的基因型分布均无显著差异。对４个ＢＰ家系进行分析，其中两个家系可见到等位片段分离现象，但基因传递和情感性精神病之间的关系难以确定。研究结果不支持情感性精神病与Ｈａ－ｒａｓ基因连锁。     

原发性肝癌组织癌基因ras和抑癌基因P^53点突变研究

应用多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对４３例福尔马林固定、石蜡包埋肝癌组织癌基因ｒａｓ和抑癌基因Ｐ＾５３点突变进行分析。结果表明，ｒａｓ基因总突变率为４１．９（１８／４３），其中Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为３７．２％（１６／４３），ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为６．９％（３／４３），ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１３位、ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２和６１位密码子未发现有突     

胃癌组织中多种癌基因变异的观察

目的 探索胃癌癌变过程中多种癌基因和抑癌基因变异的规律。方法用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ和ＤＮＡ测序技术，检测３３例胃癌手术标本中原癌基因ｃ－ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＡＫＴ-２的扩增和重排，以及抑癌基因ｐ５３、ｐ１６、ｎｍ２３－Ｈ１的突变和缺失。结果大多数胃癌组织（７０％）存在１个或１个以上的基因改变。不同个体基因异常的种类和方式不同。其中ｃ－ｍｅｔ基因重排２／３３例（６％），扩增８／３３例（２４％）。ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增１／３３（３％），ＡＫＴ－２扩增２／１８例（１１％）。抑癌基因ｐ１６的纯合性缺失６／３３例（１８％），ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３的杂合性缺失分别是５／１７例（２９％）和２／１３例（１６％）。ｐ５３第５～８外显子点突变的检出率为２０／３３例（６１％）。癌基因的扩增和重排多发生于胃癌进展期，而ｐ５３基因的点突变可发生于癌变各期。结论胃癌癌变是多基因异常累积所引起的渐进性过程，基因改变的数目、种类及方式与肿瘤的恶性表型密切相关。     

人肝细胞总基因组DNA与c—myc,c—N—ras基因甲基化的改变

分别用两种方法研究了人原发性肝细胞癌基因组及特定癌基因片段的ＤＮＡ甲基化情况，并进行对比研究，以＾３Ｈ－ＳＡＭ掺入法研究总基团ＤＮＡ甲基化水平，以限制性内切酶切，Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ吸印法对ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｎ－ｒａｓ两种癌基因状况进行分析，结果：发现人肝细胞癌区和癌旁区组织内ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｎ－ｒａｓ癌基因分别有不同程度的低甲基化，且有癌区总基因ＤＮＡ甲基化水平明显下降，本文结果提示，两种方法检测均     

c—Ha—ras和c—myc反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞生长增殖…

作观察了人工合成的反义ｃ－Ｈａ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ，ＡＳＯ－ｍ）对两株胃癌细胞中Ｈａ－ｒａｓ癌基因表达和细胞生长增殖的影响，观察至ＡＳＯ－ｒ能显抑制ＭＧｃ－８０３细胞Ｐ２１蛋白合成（作用１２ｈ抑制率达４８．１０％，Ｐ＜０．０１），同时对其ＤＮＡ合成和细胞增殖也有较显的抑制作用（抑制率分别为７６．７９％，５５．６１％，Ｐ＜０．０５）。ＡＳＯ－ｒ对ＳＧｃ－７９０１细...