氢醌对人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响。方法将HBE细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160、320μmo/lL)的氢醌作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定16HBE细胞的相对存活率,用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布。结果在0～40μmo/lL范围内HQ作用24 h后,16HBE细胞的存活率未见明显变化(P>0.05);当染毒剂量超过80μmo/lL时,细胞存活率明显下降(P<0.01)。SCGE显示随着HQ浓度的升高,16HBE细胞的DNA断裂程度加重。HQ作用浓度在10～320μmo/lL范围内,16HBE细胞的细胞周期表现为G2期阻滞,G1期比例下降。结论 HQ会对16HBE细胞的DNA产生损害,并且引起G2期细胞阻滞。     

氢醌对L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的 探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响.方法 将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320 μmol/L)的HQ作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定L-02肝细胞的相对存活率,采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤状况,并采用流式细胞术检测细胞周期分布状况.结果 在0～80 μmol/L的范围内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P＞0.05);当染毒剂量超过160μmol/L时,其存活率则明显地下降(P＜0.01).随着HQ作用浓度的升高,L-02肝细胞DNA链的断裂程度也随着逐渐增加.0～80μmol/L范围内的HQ作用24h后,L-02肝细胞的细胞周期也发生了明显的改变,表现为S期细胞比例明显增加,G1期细胞的比例下降.结论 HQ对L-02肝细胞DNA具有损伤作用,并且在体外能够引起明显的S期细胞阻滞.     

氢醌对人胚肺成纤维细胞中DNA及细胞核的影响

目的　研究氢醌 (HQ)对人胚肺成纤维细胞 (HLF)DNA及细胞核的损伤作用 ,探讨其遗传毒性。方法　分别用 0、10、2 0、4 0和 80 μmol/L的HQ染毒HLF细胞 3h ,用彗星试验检测DNA损伤。再用相同剂量组HQ染毒HLF细胞 1h ,继续培养 2 4h后进行微核试验。结果　彗星试验结果表明 ,各剂量组细胞DNA拖尾率分别为 12 %、19%、4 2 %、79%和 95 % ,彗星尾长分别为 7 87、9 35、11 0 3、19 2 8和 2 3 32 μm ,有明显的剂量效应关系 ,其中 2 0、4 0和 80 μmol/L剂量组的拖尾率和彗星尾长明显增加 ;且随着HQ剂量的升高 ,高度、重度DNA损伤的比例也逐渐增加。HQ也可致微核、核异常形成 ,各剂量组的微核率分别为 2 %、3%、10 %、9%和 15 % ,核异常率分别为 6 %、7%、16 %、2 7%和 2 8% ,剂量效应关系显著 ,其中 2 0、4 0和 80 μmol/L剂量组的微核率和核异常率显著增加。结论　HQ可致HLF细胞DNA和细胞核损伤 ,产生遗传毒性作用。     

茶对吸烟致人外周血淋巴细胞DNA损伤的保护作用

目的 探讨饮茶对吸烟所致人体DNA损伤的保护作用,以及为确证茶与人类肿瘤的关系提供直接依据.方法 选择46名吸烟者作为研究对象,以外周血淋巴细胞微核发生率和染色体畸变率为生物学观察终点,进行混合茶对吸烟致外周血淋巴细胞DNA损伤影响的6个月的随机、双盲干预试验研究.结果 试验组每天服用3g混合茶6个月后,其外周血淋巴细胞微核发生率和染色体畸变率明显降低,而试验对照组试验前后基本无变化.结论 混合茶对吸烟致外周血淋巴细胞DNA损伤可能有保护作用,从而对人类癌症可能有预防作用.     

OGG1对PM2.5造成人肺上皮细胞DNA损伤的修复作用

目的研究碱基切除修复酶OGG1对PM2.5造成肺上皮细胞线粒体损伤的保护作用。方法采集湛江市附属医院附近的PM2.5颗粒物,培养肺上皮细胞beas-2b,并转染OGG1过表达载体,以PM2.5 100μg/ml 24 h分别染毒正常和OGG1过表达的beas-2b细胞,DCFH染色后流式测定细胞内活性氧水平,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤水平。结果OGG1过表达后能显著抑制PM2.5造成的细胞内活性氧水平的升高,并能显著抑制PM2.5造成的beas-2b细胞DNA损伤。结论 OGG1能修复PM2.5造成的DNA损伤,该作用可能与其抑制ROS作用相关。     

镍和镉对人外周血淋巴细胞的DNA损伤作用

目的了解不同类型ＤＮＡ损伤在镍、镉遗传毒理中的不同意义。方法分别用ＮｉＣｌ２和ＣｄＣｌ２对人外周血淋巴细胞进行体外染毒,再用单细胞凝胶电泳法,测定其ＤＮＡ单链、双链断裂和ＤＮＡ蛋白质交联水平,同时用［３Ｈ］ＮＡＤ参入法测定了这些细胞的聚（腺苷二磷酸核糖）聚合酶（ＰＡＲＰ）活性。结果尽管在两种金属处理过的细胞中ＤＮＡ单链、双链断裂和ＤＮＡ蛋白质交联水平与对照相比均有明显增高,但只有０．１０～１０．００μｍｏｌ／Ｌ的ＮｉＣｌ２和０．１６～２０．００μｍｏｌ／Ｌ的ＣｄＣｌ２诱导的ＤＮＡ双链断裂呈剂量反应关系。两种金属在低浓度时（ＮｉＣｌ２０．１０～０．４０μｍｏｌ／Ｌ,ＣｄＣｌ２０．１６μｍｏｌ／Ｌ）还能通过诱导ＤＮＡ断裂而激活ＰＡＲＰ,高浓度时（ＮｉＣｌ２２．００～１０．００μｍｏｌ／Ｌ,ＣｄＣｌ２０．８０～２０．００μｍｏｌ／Ｌ）反而不激活该酶。结论ＤＮＡ双链断裂的形成和ＰＡＲＰ激活的受阻可能在镍和镉的致癌和致突变机制中起着重要的作用。     

共济失调毛细血管扩张基因和Rad3相关基因介导电离辐射诱导的A549细胞早衰作用研究

目的:研究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)基因和ATM-Rad3相关基因(ATR)对早衰相关的p53蛋白及p16蛋白的促进作用.方法:通过阐明ATM、ATR在电离辐射诱导的A549细胞早衰中是否发挥作用,对ATM、ATR与A549细胞早衰的关系做进一步验证.将采用ATM、ATR抑制剂处理的A549细胞定义为实验组,将...     

硫化镉量子点对人外周血淋巴细胞DNA损伤的研究

为观察硫化镉量子点( CdS)对人外周血淋巴细胞染色体的损伤作用,以正常人外周血淋巴细胞为材料,分为硫化镉量子点组(CdS Ⅰ,粒型,粒径3～5 nm)、硫代乙醇酸包裹组(CdSⅡ,粒型,粒径3～5 nm)和阴性对照组,每组6瓶.将CdS加到外周血淋巴细胞培养液中,CdS在培养液的浓度为2μg/ml.彗星试验培养6h,...     

汞化合物对人体外淋巴细胞的DNA损伤的比较研究

对人体外淋巴细胞用不同浓度的甲基氯化汞（ＭＭＣ）和氯化汞（ＭＣ）处理１ｈ，观察ＤＮＡ损伤的程度，采用细胞琼脂糖凝胶电泳技术（ＳＣＧＥ）进行比较研究。这两种汞化物均不同程度的显示了剂量反应关系。ＤＮＡ损伤的程度从１０－５ｍｏｌ／Ｌ起与空白对照相比，呈现有意义的增加，细胞ＤＮＡ断裂频率的增加与毒性呈现为线性增长的关系。剂量愈高，则ＤＮＡ的彗尾链愈长，两种化合物在同样的实验条件下显示了相似的分裂剂的潜能，氯化汞表现出的遗传毒性更明显     

N-乙酰半胱氨酸对甲苯二异氰酸酯诱导人支气管上皮细胞自噬激活作用的影响

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对于甲苯二异氰酸酯（TDI）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）自噬激活的影响。方法 （1）制备TDI-人血清白蛋白（HSA）偶联物，分别采用Gutmann法和BCA蛋白定量法测定偶联物中TDI和HSA的水平。（2）以不同浓度TDI-HSA（0、40.00、80.00和120.00 mg/L）处理HBECs 12 h，采用活细胞成像技术检测细胞中活性氧（ROS）水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中IL-4和IL-6的水平，蛋白质印迹法（Western blot）检测自噬相关蛋白腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、酵母自噬相关基因6（Beclin1）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3（LC3）和泛素结合蛋白p62的表达水平。（3）采用NAC（5 mmol/L）预处理HBECs 4 h后，再用TDI-HSA（120.00 mg/L）染毒12 h，检测细胞中ROS及IL-4、IL-6的水平，测定自噬相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、Beclin1、LC3、p62的表达水平。结果 （1）合成的TDI-HSA偶联物中TDI和HSA质量浓度分别为21.90 mg/L、1 955.00 mg/L，摩尔比为4.41。（2）随着TDI-HSA染毒剂量的增加，HBECs细胞中ROS和IL-4、IL-6水平明显增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。TDI-HSA中（80.00 mg/L）、高（120.00 mg/L）剂量染毒组自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin1表达明显增加，p-mTOR/mTOR比值和p62表达明显减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）与TDI-HSA高剂量染毒组相比，TDI-HSA+NAC组HBECs细胞中ROS和IL-4、IL-6水平明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin1表达明显降低，p-mTOR/mTOR比值和p62表达明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 通过抑制TDI-HSA诱导的HBECs中ROS水平，可显著抑制HBECs自噬激活，并降低细胞上清液中IL-4、IL-6的水平。     

镉诱导人外周血淋巴细胞金属硫蛋白-1基因亚型的表达

目的　研究金属硫蛋白- 1(MT- 1)基因在人外周血淋巴细胞 (HPBLs)中的基础表达和镉诱导表达水平。方法　应用RT- PCR方法检测HPBLs中 7种有功能的MT -1基因亚型的mRNA基础表达水平和不同时间、不同浓度镉诱导的表达水平。结果　HPBLsMT-1各亚型中 ,mRNAs的基础转录水平从高到低依次为MT -1X、MT- 1A、MT- 1H、MT- 1F、MT- 1E、MT- 1G ,而MT 1B没有表达 ,其中男性MT 1E的基础表达明显高于女性(P <0 . 0 5 )。在未引起细胞损伤时 ,80 μmol /LCdCl2 诱导 12小时可使MT- 1A ,MT- 1E ,MT 1XmRNA的转录水平开始显著增加 (P <0 . 0 5 ) ,4 0 μmol LCdCl2 诱导 4小时出现MT- 1FmRNA ,2 0 μmol/ LCdCl2 诱导 4小时出现MT- 1GmRNA ,80 μmol- LCdCl2 诱导 4小时出现MT -1HmRNA的转录水平开始显著增加 (P <0. 0 5 ) ,MT 1BmRNA表达无明显变化。结论　镉可诱导人外周血淋巴细胞MT-1F、MT -1G、MT- 1H、MT- 1XmRNA表达增加 ,并表现出剂量 -时间 -效应关系 ,可作为潜在的镉接触生物标志物。     

氢醌处理人胚肺成纤维细胞致DNA损伤和微核形成

目的观察氢醌(HQ)对人胚肺成纤维(HLF)细胞DNA损伤和微核形成情况。方法分别用不同剂量的HQ处理HLF细胞1 h,继续培养24 h后进行微核试验;处理HLF细胞2 h后直接用彗星试验检测DNA损伤。结果各剂量组的微核率为2‰~9‰(P<0.05),核异常率为3‰~13‰(P<0.05)。相关分析表明,存在明显的剂量—效应关系,其中20、40和80μmol/L剂量组的微核率和核异常率显著增加(P<0.05)。各剂量组细胞DNA拖尾率和彗星尾长均有明显的剂量—效应关系,其中20~80μmol/L剂量组的拖尾率和彗星尾长明显增加(P<0.05);且随着HQ剂量的增加,高度、重度DNA损伤的比例也逐渐增加。结论似乎HQ可致HLF细胞DNA损伤和细胞微核形成。     

纳米偏钒酸钠的DNA损伤研究

采用单细胞凝胶电泳方法用常规偏钒酸钠和纳米偏钒酸钠对人淋巴细胞进行遗传毒性实验,结果显示均无致突变性,不同浓度偏钒酸钠对淋巴细胞存活率的影响无明显梯度和差异,均在85%以上。纳米和常规偏钒酸钠对淋巴细胞增殖率的影响亦无明显差异,无细胞致突变性。     

Oxidative DNA damage in peripheral blood lymphocytes of coal workers

Reactive oxygen species are important mediators of both mineral dust-induced (malignant) lung disease and in vitro DNA damage. Therefore, we studied in vivo oxidative DNA damage in coal workers who had been chronically exposed to silica-containing dust. In peripheral blood lymphocytes of 38 retired coal miners (eight with coal workers pneumoconiosis, 30 references) and 24 age-matched, non-dust-exposed controls 7-hydro-8-oxo-2-deoxyguanosine (8-oxodG) was determined by reversed phase high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. The ratio of 8-oxodG residues to deoxyguanosine (dG) was related to individual cumulative dust exposure estimates and pneumoconiotic stage as established by chest radiography. The ratio of 8-oxodG to dG(x 10^–5) in lymphocytes did not differ between miners with coal workers' pneumoconiosis (2.61 ± 0.44) and miners without coal workers' pneumoconiosis (2.96 ± 1.86). However, oxidative DNA damage in all miners was higher than in the non-dust-exposed controls (1.67 ± 1.31). 8-oxodG/dG ratio was not related to individual cumulative coal dust exposure, age or smoking (pack years) when evaluated by multiple linear regression. We suggest that oxidative damage to the DNA of peripheral blood lymphocytes may be introduced by increased oxidative stress responses in subjects chronically exposed to mineral dusts. Whether this is an important pathway in the suggested carcinogenicity of silica is still an open question.     

醋酸铅致大鼠血淋巴细胞DNA损伤的研究

目的 研究醋酸铅致淋巴细胞的DNA损伤情况,了解铅的遗传毒性.方法 用不同浓度的醋酸铅分别对大鼠进行腹腔注射体内染毒24h及取正常大鼠血淋巴细胞进行体外染毒1 h,然后,采用单细胞凝胶电泳技术分别测定各血淋巴细胞DNA损伤程度.结果 体内实验组见淋巴细胞边缘不光滑,毛糙,体外实验各处理组都有明显彗尾形成,体内外实验各染毒组彗星出现率、DNA迁移长度均明显高于阴性对照组.结论 醋酸铅对大鼠淋巴细胞DNA具有一定的损伤作用.     

Genotoxicity induced by pesticide mixtures: in-vitro studies on human peripheral blood lymphocytes

To assess the damage caused by pesticides and their mixtures on humans, we designed in-vitro experiments to evaluate their cytotoxicity and genotoxicity. Three equimolar pesticide mixtures were investigated for their capability to affect cultured human peripheral blood lymphocytes. The LC50 values for cytotoxicity, using standard trypan blue dye exclusion and calculated by probit analysis, were 4.18, 5.76, and 7.5 microM for endosulfan, carbofuran, and monocrotophos, respectively. When combined in equimolar concentrations, the LC50 values for cytotoxicity were 0.7, 0.9, and 1.0 microM for monocrotophos + carbofuran, endosulfan + monocrotophos, and endosulfan + carbofuran, respectively, using the method. DNA damage was estimated using chromosomal aberrations (chromatid breaks, fragments, gaps, aneuploidy, and satellite association) and comet assays using 1/10 of the LC50 concentrations. Using a standard alkaline comet assay procedure, high concentrations of individual pesticides (0.5-4.0 microM) caused significant DNA damage as indicated by visible tail lengths. Lower concentrations (0.05-0.5 microM) of their binary mixtures could cause the same effect. The results suggest that analysis of genotoxicity may serve as an important biomarker for occupational and household exposure to pesticides, especially mixtures of pesticides, with different modes of action.     

Effect of protein intake, hyperglycaemia and micronutrients on DNA damage and mitogen responsiveness of peripheral blood lymphocytes

The aim of the study was to comprehensively assess foods differing in protein type (whey vs casein) relative to a low glycaemic index (GI) and high GI carbohydrate (CHO) food for their effects on DNA damage, DNA repair and mitogen response in peripheral blood lymphocytes using the cytokinesis-block micronucleus assay two hours after consumption. We also studied the relationship of these parameters with plasma folate, vitamin B12, zinc, magnesium and selenium immediately before the intervention and change in plasma glucose and plasma insulin during the two-hour period after consumption. There was no effect of protein, CHO or GI on genome damage or immune responsiveness except for a small but significant improvement in resistance to radiation-induced DNA damage in the high-GI CHO food relative to the casein food. Mitogen response was significantly and positively correlated with plasma zinc, magnesium, selenium and folate and baseline genome damage significantly negatively correlated with plasma folate and vitamin B12. There was no significant correlation between plasma micronutrients and change in plasma glucose or insulin except for a positive and significant correlation between change in plasma insulin and plasma selenium. The correlation between change in plasma insulin and change in plasma glucose was weaker. It is apparent from these preliminary data that micronutrient status may have a profound effect on genome stability and immune responsiveness while the effects of short-term changes in glycemia and dietary intake of carbohydrate or protein may have only minor effects on these parameters.     

卷烟烟气致人淋巴细胞细胞毒性和遗传毒性的体外试验

目的 用不同体外试验评价卷烟烟气粒相物提取液(CSCs)致人外周血淋巴细胞的细胞毒性和遗传毒性.方法 分别以25、50、75、100和125 ug/ml的CSCs在加或不加肝脏微粒体酶(S9)系统下作用于人外周血淋巴细胞3 h,然后用CCK-8试验检测细胞毒性,用彗星试验检测DNA损伤,用hprt和TCR基因突变试验检测体细胞突变;以75ug/ml的CSCs作用于人外周血淋巴细胞3 h,分别给予30、60、90、120和240 min的修复时间,然后用彗星试验评价淋巴细胞的DNA修复情况.结果 细胞活性随剂量增加明显降低,100、125 ug/ml CSCs加S9组细胞活性明显高于不加S9组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);随CSCs暴露剂量增加,DNA损伤明显增加,并明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);各剂量加S9组DNA损伤明显低于不加S9组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).各剂量组TCR基因突变率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).中高剂量组hprt基因突变率明显高于对照,差异有统计学意义(P<0.01),中、高剂量加S9与不加S9两组间TCR和hprt基因突变率均存在明显差异,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).加与不加S9两组DNA损伤均可基本修复至正常水平,但两者修复速度存在差异.结论 CSCs可在体外诱发人外周血淋巴细胞的细胞和遗传损伤,但S9可降低CSCs毒性的效应,并可影响人淋巴细胞DNA损伤的修复速率.     

人外周血淋巴细胞体外乙酸铅染毒后氧化应激损伤研究

目的 研究乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞致氧化应激与DNA氧化损伤情况。
方法 分别用浓度为0 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞6 h、12 h、24 h, 应用2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析和流式细胞仪检测染毒后细胞内活性氧类(ROS)水平, 高度水溶性四唑盐(WST-1)法检测染毒后细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性, 酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测染毒后细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平, 并对ROS、T-SOD、8-OHdG三指标间的关系进行相关性分析。
结果 乙酸铅染毒6 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01);20 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平与对照组相比, 差异无统计学意义(P>0.05), 而40 μmol/L和80 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。乙酸铅染毒12 h和24 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS、T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。相关性分析显示, 细胞内ROS含量与T-SOD活性呈负相关(r_{6 h}=-0.865、r_{12 h}=-0.890、r_{24 h}=-0.801, P < 0.01), 与8-OHdG含量呈正相关(r_{6 h}=0.840、r_{12 h}=0.829、r_{24 h}=0.866, P < 0.01)。
结论 乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞后会诱导细胞ROS生成, 抑制细胞内抗氧化酶SOD活性, 造成人外周血淋巴细胞氧化应激状态增强和DNA氧化性损伤。