定量PCR法检测人巨细胞病毒感染的研究进展

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染相当普遍,可引起免疫力低下者复发感染,造成严重的HCMV病。建立快速、灵敏且特异的检测方法,以便及时给予抗病毒治疗,可降低疾病的发生率及严重性。定量PCR具有灵敏、特异、快速、简便、可定量等优点,现已广泛应用于临床HCMV感染性疾病的检测中。该文就不同定量PCR法在检测HCMV感染中的应用及其优缺点作一综述。     

应用聚合酶链反应检测南京地区TT病毒感染

目的：了解南京地区ＴＴ病毒感染情况。方法：采用巢式ＰＣＲ方法检测血甭标本中ＴＴＶ－ＤＮＡ。结果：１６３例病毒性肝炎患者血清标本中,ＴＴＶ－ＤＮＡ总检出率为２１．５％（３５／１６３）,其中甲型肝炎１３．３％（４／３０）,乙型肝炎２１．３（１６／７５）,丙型肝炎２０．０％（３／１５）,戊型肝炎５．３％（１／１９）,非甲－庚型肝炎４５．８％（１１／２４）。结论：南 地区丰硕 导致非甲－庚型肝炎的重要病因     

荧光定量PCR检测巨细胞病毒感染的临床分析

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）又称人类疱疹病毒5型，属于疱疹病毒亚科。HCMV是有包膜的DNA病毒，为双链线性DNA分子，其基因组长约240kb。HCMV具有高度种属特异性，只能在人成纤维细胞中培养增殖，并可产生典型的细胞病变：细胞膨胀增大，细胞核及胞浆内出现包涵体。HCMV在体内除了可感染人成纤维细胞外，还可感染表皮细胞、内皮细胞、精子细胞及巨噬细胞等，引起巨细胞包涵体病、输血后传染性单核细胞增多症、先天畸形、肝炎、间质性肺炎及视网膜炎等疾病。     

生殖支原体在慢性非细菌性前列腺炎患者中感染的研究

目的 采用培养法、两种聚合酶链反应（PCR）技术，对长春地区部分慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液标本进行生殖支原体（Mg）的检测，以探讨Mg感染在慢性非细菌性前列腺炎的作用和地位。方法 本地区部分慢性非细菌性前列腺炎患者487例，取其前列腺液标本接种于自制培养基37℃培养，同时进行两种PCR技术检测。并与75名正常对照组进行比较。结果 在487例慢性非细菌性前列腺患者的前列腺液标本中，Mg阳性率达7．39％（36／487）；在75名正常的前列腺液标本中Mg阳性率为1．33％（1／75），两者比较，差异有统计学意义（X^2=3．88，P〈0．05）。结论 本地区慢性非细菌性前列腺炎患者的Mg感染率较高，认为Mg可能是引起慢性非细菌性前列腺炎重要病原体之一，性传播疾病防治工作中应加防范。     

应用聚合酶链式反应诊断婴幼儿巨细胞病毒感染观察

人类巨细胞病毒(HCMV)为DNA病毒,是广泛感染人类的重要病原之一,尤其是胎儿、新生儿、器官移植者和免疫缺陷者感染HCMV可致严重疾患,甚至是死亡的直接原因。由于HCMV感染的诊断手段目前主要依赖血清特异性抗体的测定和病毒分离,而前者可有交叉反应的干扰,后者费时颇长,常需4周左右,致使临床医生对HCMV感染的诊断存     

PCR法检测淋球菌的临床应用

应用ＰＣＲ法提高了淋球菌阳性检出率并与培养法做比较。１４８例拟诊淋病患者的样本采自尿道分泌的或宫颈分泌物。部份采自前段尿。用双盲法测定。结果表明：阳性出率分别为７９．７％和５７．４％，ＰＣＲ法的阳性检出率明显高于培养法，Ｐ＜０．００５。总阳性符合率分别为９５．２％和６８．５％，ＰＣＲ法显著高于培养法Ｐ＜０．００５。     

16SrRNA基因在诊断慢性非细菌性前列腺炎中的应用

目的探索快速可靠的检测慢性非细菌性前列腺炎细菌感染的新方法。方法应用PCR方法检测70例慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和尿道拭子中细菌16SrRNA基因。用PCR技术扩增实验室保留株10株的16SrRNA基因，以人类基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌为对照，检测该方法的特异性；采用倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测。结果细菌16SrRNA基因的检出率在前列腺液中和尿道拭子中分别为54．3％和7．1％，差异有显著意义（P＜0．01）。对所测细菌株均获得920bp扩增产物，而与人基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌无交叉反应；PCR最低能检测1．5^＊10^6／L大肠杆菌DNA。结论慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液中有细菌16SrRNA基因的检出。其病因可能与细菌感染有关。PCR具有快速，特异性和敏感性高的特点。     

荧光定量PCR检测儿童非典型EB病毒感染的临床评价

目的探讨荧光定量PCR检测对诊断和治疗非典型EB病毒(EBV)感染的临床意义。方法对2007-04-2009-10诊断为非典型EBV感染90例患儿,抽静脉血2 ml,注入枸橼酸钠抗凝剂与静脉血充分混匀,用核酸扩增荧光PCR法测定基因拷贝数,同时进行常规外周血及异型淋巴细胞检查,对照病因和首发临床表现,分析儿童感染非典型EBV时荧光定量PCR检测的基因拷贝数变化。结果 EBV-DNA拷贝数能早期反映出非典型EBV感染,拷贝数越高,出现多器官损害概率越高。结论荧光定量PCR检测EBV-DNA拷贝数有助于早期诊断非典型EBV感染,能减少诊疗的盲目性,对临床有一定指导意义。     

骨髓移植患者血及尿中巨细胞病毒感染核酸标志物的检测

目的　为骨髓移植患者寻找较好的诊断和治疗巨细胞病毒（ＣＭＶ） 感染的分子生物学依据。方法　用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 方法测尿中ＣＭＶＤＮＡ,逆转录（ＲＴ）ＰＣＲ 法测血中ＣＭＶ即刻早期抗原（ＩＥ）ｍＲＮＡ。结果　在被测的２７ 例患者１０３ 份标本中,发现１０ 例ＣＭＶ 感染者的尿ＣＭＶＤＮＡ 及血ＩＥ ｍＲＮＡ 几乎同时阳转。在连续使用抗病毒药甘昔洛瓦（ＤＨＰＧ） 治疗的６ 例患者中,ＩＥ ｍＲＮＡ 约一周左右阴转,而ＤＮＡ 约２０ 天左右阴转。结论　ＣＭＶＩＥｍＲＮＡ 可能反映病毒即刻早期转录的停止,对临床抗病毒治疗可能是一个较好的参考指标。     

荧光定量聚合酶链反应在患儿巨细胞病毒感染快速检测中的应用

巨细胞病毒 (HCMV)感染分原发性感染、潜伏性感染和激活性感染。患儿HCMV感染多为原发性感染 ,尤其是新生儿HCMV感染主要通过母体在宫内感染引起母婴垂直传播或分娩时通过产道或哺乳期通过乳汁传播婴儿[1] 。HCMV一旦感染终生相伴 ,通常无症状 ,病毒潜伏在宿主细胞中 ,多种诱因可使潜伏的病毒被激活 ,而引发明显的临床症状。小儿先天性或获得性感染HCMV可引起婴儿肝炎综合征、生长发育受阻或中枢神经系统障碍、神经性耳聋等并发症 ,其后果非常严重。HCMV感染的诊断通常检测血清中HCMV IgG和IgM抗体 ,或采用核酸杂交和聚合酶链…     

慢性前列腺炎患者前列腺液细菌16SrRNA基因的检测

目的通过采用聚合酶链反应（PCR）技术对慢性前列腺炎患者前列腺液中细菌16SrRNA基因检测,探讨PCR方法诊断慢性前列腺炎细菌学病因的价值。方法收集102例慢性前列腺炎患者的前列腺液进行细菌培养,同时采用PCR法检测前列腺液中细菌16SrRNA基因,并测定和分析所得片段的DNA序列。对培养结果与PCR法检测结果进行了比较。结果102份前列腺液标本中,细菌培养法18例阳性,84例阴性,阳性率17．7％;PCR法71例阳性,31例阴性,阳性率69．6％。细菌培养法与PCR法检测结果比较,其差异有统计学意义（P〈0．05）。测序结果显示DNA序列与GenBank公布的16SrRNA基因序列具有很高的同源性。结论PCR技术对慢性前列腺炎的临床诊断具有重要意义。     

巨细胞病毒感染实验室检查的临床意义

１ 引 言 巨细胞病毒感染是由人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）引起。当ＨＣＭＶ侵入人体后,不论是在宿主体内复制还是在体内潜伏,均称为巨细胸病毒（ＣＭＶ）感染。ＣＭＶ感染大多在幼年时期发生。据我国１项资料显示,１岁至３岁组幼儿ＣＭＶ感染率８３．２％,４岁至７岁组８３．７％,８岁至１４岁组为８７．３％,成人组高达９５％。国外资料显示：ＨＣＭＶ感染无季节性,受年龄、地理环境、文化背景、经济状况和生育状况的影响。发达国家中、上阶层ＣＭＶ感染率为４０％至 ６０％,下层为 ８０％以上,而发展中国家则达 ９５％以上。婴儿可…     

巢式聚合酶链反应和pp65抗原检测早期诊断巨细胞病毒感染

目的 比较人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）巢式聚合酶链反应（ｎＰＣＲ）与抗原ｐｐ６５血症检测技术在活动性ＨＣＭＶ感染中的早期诊断价值。方法 以１８例器官移植病人为研究对象,收集术后２～１２周抗凝血标本,分别采用ｎＰＣＲ和血ｐｐ６５抗原检测技术,观察两者的敏感性、相符率以及在早期诊断活动性ＨＣＭＶ感染中的作用。结果 １８例移植病人的１１４份系列血标本,ｎＰＣＲ检测阳性９７份,ｐｐ６５抗原检测阳性８７份,两者均阳性７６份,ｎＰＣＲ比血ｐｐ６５抗原检测更敏感,两者相符率为６６％。结论 ｎＰＣＲ和血ｐｐ６５抗原检测技术均能作为器官移植病人活动性ＨＣＭＶ感染早期诊断的有效手段,两者同时使用能更有效地提高诊断水平,监控疾病的发生发展。     

925例慢性前列腺炎患者病原学诊断及药敏试验结果分析

目的分析慢性前列腺炎(CP)患者前列腺液病原体的分布及耐药性,为确定病原学诊断、指导临床用药提供参考。方法对925例CP患者前列腺液标本进行普通细菌、淋病奈瑟菌(NG)、支原体、真菌培养及药敏试验。细菌鉴定及药敏试验采用VITEK-60全自动细菌鉴定仪;实时荧光聚合酶链反应(rt-PCR)检测沙眼衣原体(CT)。结果在分离出的648株病原体中,普通细菌占54.17%,其中以革兰阳性葡萄球菌为主;NG、真菌、支原体以及CT分离率分别为4.01%、7.10%、25.93%和8.79%,合并感染患者69例,占受检者的7.46%。普通细菌分离株对临床常用抗菌剂的耐药率均较高。结论系统综合地分析CP患者感染病原体分布及耐药性,对指导临床诊断、合理用药有一定价值。     

巨细胞病毒感染与早期自然流产的关系

目的：探讨巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV)感染与早期自然流产的关系。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）技术，对126例妇女早期自然流产的绒毛组织进行CMV－DNA检测，并以118例健康妇女人工流产的绒毛组织的检测作对照。结果：观察组CMV－DNA阳性率为11．1％，与对照组相比3．4％有显著性差异（P＜0．05）。结论：巨细胞病毒感染是导致早期自然流产的重要原因之一。     

慢性前列腺炎患者前列腺液细菌16S rRNA基因的检测

目的通过采用聚合酶链反应(PCR)技术对慢性前列腺炎患者前列腺液中细菌16S rRNA基因检测,探讨PCR方法诊断慢性前列腺炎细菌学病因的价值。方法收集102例慢性前列腺炎患者的前列腺液进行细菌培养,同时采用PCR法检测前列腺液中细菌16S rRNA基因,并测定和分析所得片段的DNA序列。对培养结果与PCR法检测结果进行了比较。结果102份前列腺液标本中,细菌培养法18例阳性,84例阴性,阳性率17.7%;PCR法71例阳性,31例阴性,阳性率69.6%。细菌培养法与PCR法检测结果比较,其差异有统计学意义(P<0.05)。测序结果显示DNA序列与GenBank公布的16S rRNA基因序列具有很高的同源性。结论PCR技术对慢性前列腺炎的临床诊断具有重要意义。     

样品处理与临床PCR检测

样品处理与临床ＰＣＲ检测江凌晓综述冯永清审校（第一军医大学附属珠江医院分子生物学实验室，广州５１０２８２）关键词聚合酶链反应样品处理聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是检测特异性核酸片断的最敏感的方法之一。现已用于...     

荧光定量PCR法在检测246例小儿巨细胞病毒感染中的应用

目的探讨FQ-PCR在诊断小儿巨细胞病毒感染的临床应用价值。方法分别应用血清抗体检测和荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）的方法对患者进行血液和尿液病毒的检测，并对确诊的患者进行母乳CMV病毒的检测。结果在怀疑为活动性CMV感染的169例患儿中，PCR法的阳性检出率为75．1％，血清IgM法为52．1％，两种方法的阳性符合率为86．4％；18例尿液CMV-DNA阳性的患者查出母亲乳汁中CMV-DNA，含量为1．7×10～4．5×10^3copies／ml。结论FQ-PCR可以准确检测患儿体液及血液中的CMV含量，提示体内复制情况，对于临床的诊断和治疗有一定的指导意义。     

多重实时PCR检测高危型人乳头瘤病毒感染

目的 调查不同宫颈病变组妇女生殖道13种高危型HPV(HR HPV)感染情况,分析HR HPV感染与宫颈病变的关系.方法 选择深圳市宝安区妇幼保健院宫颈专科门诊患者350例,利用TCT技术检测其宫颈上皮细胞学状况,根据细胞学结果分组.采用多重实时PCR(mRT PCR)检测其生殖道HR HPV感染情况和病毒载量,采用χ2检验或Fisher精确概率法比较各组间HR HPV感染率,采用Kruskal-Wallis或Wilcoxon秩和检验比较各组间HR HPV阳性者的病毒载量,采用Wilcoxon秩和检验比较HR HPV阳性和阴性组的年龄分布情况.结果 未见上皮内病变或恶性病变(NILM)组、意义不明的非典型鳞状上皮细胞增生(ASCUS)组、鳞状上皮细胞低度病变(LSIL)组、鳞状上皮细胞高度病变(HSIL)组的HR HPV阳性例数分别为10例(3.4%)、7例(20.0%)、11例(78.6%)和6例(6/6).NILM组HR HPV阳性率低于ASCUS组、LSIL组,ASCUS组HR HPV阳性率低于LSIL组,差异有统计学意义(χ2值分别为14.43、107.69、14.76,P均<0.01);NILM组低于HSIL组、ASCUS组低于HSIL组,差异有统计学意义(P值分别为0.000 1、0.000 4).NILM组、ASCUS组、LSIL组和HSIL组HR HPV阳性者的病毒载量分别为4.10 (3.38～6.27)、5.33 (3.63～6.66)、5.77 (4.01～7.01)和5.58 (4.19～5.85)(拷贝/ml,lg).将ASCUS组、LSIL组和HSIL组3组合并为宫颈细胞异常组,病毒载量为5.58(3.63～7.01)(拷贝/ml,lg)高于NILM组,差异有统计学意义(U=43.0,P<0.05).HR HPV阳性组平均年龄36(21～56)岁,与阴性组[33(21～58)岁]比较,差异无统计学意义(U=4 544,P>0.05).结论 HR HPV感染与宫颈病变有关;HR HPV病毒载量高低与宫颈病变程度无相关性,但病毒载量越高,存在宫颈病变的可能性越大.HR HPV阳性组与阴性组的年龄分布无差异.

Abstract：

Objective To investigate 13 high-risk types of HPV (HR HPV) infection rates in women with different grades of cervical lesions.Methods A total of 350 women, who were hospitalized in the department of gynecology in Bao′an Maternity & Child health hospital, were enrolled for the study.TCT technology was used to evaluate the cervical epithelium.The group were divided according to the cytology results.Multiplex real time PCR (mRT PCR) was used to detect the viral loads.HR HPV infection rate of different groups were analyzed using χ2 test or Fisher exact test.HR HPV viral loads of patients in different grades of cervical lesion groups were compared using Kruskal-Wallis or Wilcoxon test, and the age distribution of HR HPV positive group and negative group was analyzed by using Wilcoxon test.Results The HR HPV infection rates of NILM, ASCUS, LSIL, HSIL were 3.4% (10/295), 20.0% (7/35), 78.6% (11/14) and 100.0% (6/6), respectively.HR HPV positivity in NILM was lower than ASCUS (χ2=14.43,P<0.01) and LSIL (χ2=107.69,P<0.01), HR HPV positivity in ASCUS was lower than LSIL (χ2=14.76,P<0.01). The median of HR HPV viral loads in NILM, ASCUS, LSIL and HSIL were 4.10 (3.38-6.27), 5.33 (3.63-6.66), 5.77 (4.01-7.01) and 5.58 (4.19-5.85) respectively (copies/ml,lg).Combined ASCUS, LSIL and HSIL groups into cervical lesion group, HR HPV viral load of which was higher than that of NILM (U=43.0, P<0.05).The median Ages of HR HPV positive group and negative group were 36 and 33, respectively.No statistical significance was found between them (U=4 544, P>0.05).Conclusions The present study revealed that HR HPV infection was related to cervical lesion, but there was no correlation between viral load and cervical lesion grade. In additional, no difference in age distribution was found between HR HPV positive group and negative group.