利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG63 OPG及TNFα表达的影响

目的研究利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG 63护骨素（OPG）及肿瘤坏死因子α（TNFα）表达的影响，以阐明利塞膦酸钠发挥骨保护作用的机制。方法以不同浓度（10^-10mol／L；10^-9mol／L；10^-8mol／L；10^-7mol／L）的利塞膦酸钠干预MG 63细胞72h；ELISA法测定细胞条件培养液中OPG及TNFα的含量。结果利塞膦酸钠可下词MG 63细胞TNFα的表达；上调OPG的表达；并提高碱性磷酸酶（ALP）活性。结论利塞膦酸钠可通过调节成骨样细胞MG 63 OPG、TNFα的表达，从而发挥其抗骨吸收的作用．     

阿仑磷酸钠对成骨细胞增殖、分泌和成骨功能的影响

目的　观察阿仑膦酸钠对人成骨细胞功能的影响 ,探讨使用此药防治人工关节无菌性松动的可行性。方法　采用体外培养成骨细胞的方法 ,观察不同浓度的阿仑膦酸钠 (1× 10 -11、1× 10 -9、1× 10 -7、1× 10 -5mol/L)对成骨细胞的增殖、碱性膦酸酶活性、分泌骨钙素及成骨能力的影响。结果　阿仑膦酸钠浓度达 1× 10 -5mol/L时抑制成骨细胞增殖 ;浓度为 1× 10 -7、1× 10 -5mol/L时增强成骨细胞的碱性膦酸酶活性和骨钙素分泌 ;对其成骨能力 ,浓度在 1× 10 -11、1× 10 -9mol/L时具有刺激作用 ,1× 10 -5mol/L有抑制作用 ,中间浓度 (1× 10 -7mol/L)无影响。结论　阿仑膦酸钠低浓度时有利于成骨细胞的成骨 ;局部使用有可能成为防治人工关节无菌性松动的方法之一。     

经骨向诱导的骨髓间充质干细胞在脱钙骨上生长行为的实验研究

目的:建立成骨细胞-脱钙骨支架复合物,观察其诱导成骨能力,从而探寻组织工程化骨的体外构建方法.方法:运用细胞沉淀法将大鼠BMSCs诱导形成的成骨细胞接种于脱钙骨支架,通过扫描电镜(SEM)、免疫荧光观察脱钙骨表面细胞生长情况,通过上清液碱性磷酸酶(ALP)活性及Ⅰ型前胶原羧端肽(PICP)、骨钙素检测观察成骨细胞活性.结果:扫描电镜示成骨细胞在脱钙骨表面生长良好,上清液ALP、PICP及骨钙素表达均明显高于对照组(P＜0.05),并随时间的增长而显著增加(P＜0.05).结论:采用细胞沉淀法成功将成骨细胞接种于脱钙骨支架,成骨细胞在支架材料中增殖旺盛,细胞活性状态良好,具有良好的骨形成能力,脱钙骨支架可作为骨组织工程中载体支架的较优选择.     

阿仑膦酸钠对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的观察阿仑膦酸钠对大鼠成骨细胞增殖的影响,探讨局部使用防治人工关节无菌性松动的可行性。方法取2代培养的大鼠成骨细胞在阿仑膦酸钠为1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L浓度的培养液中培养,MTT检测阿仑膦酸钠对成骨细胞增殖的影响。结果10-4、10-5mol/L浓度的阿仑膦酸钠抑制成骨细胞增殖,1×10-9、1×10-10mol/L对成骨细胞的增殖没有影响,1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L促进成骨细胞的增殖,1×10-8mol/L对成骨细胞的增殖作用最强。结论阿仑膦酸钠有利于成骨细胞的增殖功能,并且这种作用具有最适合的浓度。     

阿仑膦酸钠局部持续使用防治人工关节无菌性松动可行性的细胞学研究

目的验证不同浓度的阿仑膦酸钠对人成骨细胞和中性粒细胞功能的影响,从而决定局部持续使用此药防治人工关节无菌性松动的可行性。方法用体外细胞培养的方法,测试不同浓度1×10-11mol/L、1×10-9mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1×10-5mol/L的阿仑膦酸钠对人成骨细胞的增殖、分泌和成骨能力的影响,以及对人中性粒细胞的运动、呼吸爆发、吞噬和杀灭细菌能力的影响。结果高浓度1×10-6mol/L、1×10-5mol/L的阿仑膦酸钠虽然有利于中性粒细胞的抗感染作用,但浓度为1×10-5mol/L时可抑制成骨细胞的成骨能力;低浓度1×10-11mol/L、1×10-9mol/L、1×10-7mol/L的阿仑膦酸钠,虽然有利于成骨细胞的成骨能力,但可抑制中性粒细胞的吞噬和杀菌作用。浓度为1×10-11mol/L和1×10-9mol/L可促进成骨,而浓度为1×10-7mol/L和1×10-6mol/L的阿仑膦酸钠对成骨无影响。结论局部持续使用阿仑膦酸钠防治人工关节无菌性松动应慎重进行,需保证假体周围的药物浓度可随时间而发生相应变化,即早期浓度不低于1×10-6mol/L,后期浓度则应以1×10-11mol/L或1×10-9mol/L为宜。     

帕米膦酸钠对高磷诱发大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响,探讨帕米膦酸钠对RVSMC钙化的保护作用及相关机制。 方法 培养RVSMC细胞融合后,实验分为3组：正常磷对照组（Pi 1.4 mmol/L）、高磷组（Pi 4.5 mmol/L）、不同浓度帕米膦酸钠处理组（Pi 4.5 mmol/L+帕米膦酸钠10-5、10-6、10-7 mol/L）。甲O-酚酞络合酮吸光光度法测定细胞外基质钙含量。BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量,同时以von Kossa染色半定量钙化情况。Western印迹检测不同组细胞的转录因子核心结合因子α1（cbfα-1）、骨钙素的表达量。 结果 培养3 d后,与高磷组相比,帕米膦酸钠干预组细胞外基质钙含量均显著减少（均P < 0.05）;von Kossa染色显示帕米膦酸钠干预组钙质沉积（黑色颗粒）亦显著减少。Western印迹显示,培养3 d后帕米膦酸钠处理组cbfα-1、骨钙素的表达量均较高磷组显著减少（均P < 0．05）。 结论 帕米膦酸钠对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用可能与其阻断RVSMC向成骨细胞转化有关。     

阿仑膦酸钠、氟化钠联合作用对体外培养大鼠成骨细胞的影响

目的探讨阿仑膦酸钠联合氟化钠对体外培养大鼠成骨细胞的作用。方法采用酶消化法分离SD大鼠颅盖骨中成骨细胞,原代培养。分别给予不同浓度的阿仑膦酸钠和氟化钠分组刺激,观察药物对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,并用Western Blot法测定骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子-B受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-B ligand,RANKL)蛋白表达。结果阿仑膦酸钠最佳单药浓度为10~(-6) mmol/L,氟化钠的最佳单药浓度为10~(-8) mmol/L,两种药物最佳浓度联合应用更能促进成骨细胞增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性更强,OPG表达升高、RANKL表达下调,与对照组相比,差异有统计学意义。高浓度氟化钠(10~(-3)mmol/L、10~(-4)mmol/L)对成骨细胞有抑制作用。结论阿仑膦酸钠、氟化钠低浓度时均促进成骨细胞增殖和分化,二者联合有协同作用。高浓度氟化钠对成骨细胞有抑制作用。     

双膦酸盐类药物治疗骨质疏松症

目的 评价不同类型双膦酸盐药物的临床疗效。方法 骨质疏松妇女360人,随机分成3组,所有患者每天在接受元素钙500 mg和维生素D200IU治疗的同时,分别接受羟乙膦酸钠、阿伦膦酸钠和利塞膦酸钠治疗,其中羟乙膦酸钠200 mg,bid,用2周,间歇11周后再次重复;阿伦膦酸钠10mg,qd;利塞膦酸钠5 mg,qd。3种药物治疗时间均为1年。观察内容包括:骨痛,尿N肽端交联Ⅰ型胶原,NTx和血清骨碱性磷酸酶,BAP,骨密度,不良反应,脊柱新骨折。结果 3组患者经1年治疗,与用药前比较,骨痛症状均有不同程度改善;骨代谢指标N肽端交联Ⅰ型胶原和骨碱性磷酸酶均明显下降(P<0.01);腰椎和髋部骨量均有显著上升(P<0.01):其中阿伦膦酸钠治疗组骨密度腰椎L2-4上升5.51％,股骨颈上升2.66％,股骨粗隆上升4.37％,Ward’s区上升3.13％;利塞膦酸钠治疗组骨密度腰椎L2-4上升4.18％,股骨颈上升2.05％,股骨粗隆上升2.81％,Ward’s区上升3.08％;羟乙膦酸钠治疗组骨密度腰椎L2-4上升3.70％,股骨颈上升1.84％,股骨粗隆上升1.96％,Ward’s区上升1.50％;新骨折发生羟乙膦酸钠组4人,阿伦膦酸钠和利塞膦酸钠组均为1人;各组均未见明显不良反应。 结论双膦酸盐治疗骨质疏松症疗效确切,新型双膦酸盐阿伦膦酸钠和利塞膦酸钠更方便、高效。     

唑来膦酸对小鼠胚胎成骨细胞增殖和分化的影响

目的研究唑来膦酸对小鼠胚胎成骨细胞体外增殖和成骨分化的影响。方法将小鼠胚胎成骨细胞体外传代培养,使用含不同浓度（1.0、0.1μmol/L）唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞,不含唑来膦酸的培养基作对照,培养1、3、5 d采用CCK-8试剂盒检测唑来膦酸对成骨细胞增殖的影响;培养14 d行碱性磷酸酶（ALP）染色;培养21 d行茜素红染色;培养7 d,实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测转录因子Runx2、成骨标志物Ⅰ型胶原（Collagen TypeⅠ）、ALP、骨钙素（OCN）基因的表达,免疫印迹法（Western Blotting）检测转录因子Runx2蛋白的表达。结果不同浓度的唑来膦酸干预细胞后,CCK-8实验检测吸光度值随天数增加而升高,各组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。随着唑来膦酸浓度的升高,ALP染色和茜素红染色逐渐变浅,Runx2、Collagen TypeⅠ、ALP、OCN基因的表达量降低,Runx2蛋白的表达量降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论唑来膦酸在选定浓度（1.0、0.1μmol/L）下不影响成骨细胞的增殖,但对其分化功能的抑制作用随着浓度的增加而增强。     

钛合金颗粒对成骨细胞增殖、分化、表型表达的影响

目的　观察钛合金颗粒对成骨细胞的作用。方法　成骨细胞暴露于各种浓度的钛合金颗粒 ,用 MTT比色法检测成骨细胞增殖。免疫组化染色观察 、 型胶原、TGF- β1 :末端原位标记法和流式细胞仪检测成骨细胞凋亡。双抗夹心法测上清液中 型胶原 ,对硝基苯酯二钠盐比色法测上清液中碱性磷酸酶 ,放免法测上清液中骨钙素。反转录聚合酶链反应法 (RT- PCR)检测 型前胶原、 型前胶原 ,AL P,OCNm RNA表达。结果　钛合金颗粒可抑制成骨细胞增殖 ,浓度高的抑制更明显 ;免疫组化染色见成骨细胞 、TGF- β1 的合成减少 ,部分成骨细胞变性、产生 型胶原 ;TUNEL 检测成骨细胞凋亡发生比率为 :11.5 0 %± 3.6 7% ,Ti- 0 ,4 1.0 0 %± 14 .0 9% ,Ti- 10 ,4 7.33%± 14 .4 3% ,Ti-10 0 ;流式细胞仪检测成骨细胞凋亡发生比率 Ti- 0组 4 8h约 9.2 7% ,Ti- 10组 4 0 .8% ,Ti- 10 0组为 5 0 .4 8% ;上清液中 型胶原 ,AL P和骨钙素 (OCN)含量减少 ,RT- PCR分析其 m RNA的表达受抑制 ,少量成骨细胞出现异常的 型前胶原 m RNA表达。结论　钛合金颗粒抑制成骨细胞增殖、成骨表型表达 ,诱发成骨细胞凋亡和变性     

跖骨感染骨外露的显微外科治疗

[目的]回顾总结跖骨骨感染骨外露的显微外科治疗方法。[方法]自1995年～2005年采用显微外科技术治疗214例跖骨骨外露骨感染患者。[结果]全部病例获得随访1～10年，平均随访3年，14例游离植皮术后皮肤成活良好，199例术后皮瓣全部成活，1例腓肠神经营养血管皮瓣移位修复术出现远端部分皮肤坏死，后经换药处理后，伤口自然愈合。皮瓣移植术后质地良好，无溃疡复发。患足均可负重走路。[结论]应用显微外科技术治疗跖骨骨感染骨外露可获得较好的疗效。     

Genetic regulation of bone mass: from bone density to bone strength

Osteoporosis is a common disease characterized in adults by diminished bone density. Bone is an organ that evolves and grows throughout life, and establishing optimal bone density in childhood and adolescence serves to buffer bone loss later in life. Bone density, a measurable entity, is the clinical substitute for bone strength, or the ability to defend against fracture. Chronic diseases may adversely affect optimal peak bone density. Bone density is under genetic control, as revealed by three lines of investigations. These include (1) the finding of quantitative trait loci for bone density, (2) the finding that specific mutations in genes that are important in the development of osteoblast or osteoclast lineages alter bone density, and (3) the linkeage of known polymorphisms for genes involved in mineral homeostasis to bone density and/or fracture. Future therapeutics for improving peak bone density or delaying bone loss later in life may take advantage of the genetic nature of bone density development.This work was presented in part at the IPNA Seventh Symposium on Growth and Development in Children with Chronic Kidney Disease: The Molecular Basis of Skeletal Growth, 1–3 April 2004, Heidelberg, Germany     

重组合异种骨植骨修复骨囊肿所致骨缺损

2001年10月～2003年9月,笔者共收治28例骨囊肿患者,均采用病灶刮除,瘤腔灭活和重组合异种骨植骨治疗,获得满意疗效,体会如下。     

从骨免疫学到骨微生物学：肠道微生物如何调节骨骼

肠道微生物群被称为人体的第二个基因库,在维持人体平衡中起主要作用。不良饮食习惯、抗生素滥用、病理状态和生活环境改变会对肠道菌群产生负面影响,以引起多种疾病。最新研究发现肠道微生物群与骨质疏松症之间有着密切的联系,同时引入了一个新术语"骨微生物学",该研究领域旨在弥合骨骼生理学、胃肠病学、免疫学和微生物学之间的差距。本文简要介绍了肠道菌群通过免疫系统、新陈代谢和内分泌环境以及其他因素影响骨代谢的潜在机制,通过研究肠道菌群与骨骼健康之间的关系,不仅对于维持骨骼健康和最大程度地减少骨质疏松症很重要,而且对于肠道微生物群是否可作为骨质疏松症新型治疗靶标以及是否可用作骨折预测的生物标志物方面具有重要意义。     

复合人工骨修复骨良性病变切除后骨缺损

目的探讨骨良性病变切除后骨缺损的修复方法，并对其疗效进行评估。方法总结1999年1月-2003年10月我科应用混合自体骨松质的异体脱蛋白骨松质复合自体红骨髓治疗骨良性病变切除后骨缺损28例。年龄12—61岁，平均20，5岁。结果除2例因死亡失访外，其余26例均取得满意随访，平均骨愈合时间为4．2个月。骨腔大小或植骨量不同，骨愈合时间不同。骨腔越大，植骨越多，骨愈合时间越长。本组病例未见明显排斥反应及并发感染。随访至今，无一例复发。结论利用这种复合人工骨修复骨良性病变切除后骨缺损的方法可行性好，安全性高，自体损伤小，便于推广，可用于骨缺损的修复。     

Assessment of bone density and bone loss

Osteoporosis International - Dual-energy X-ray absorptiometry has become the standard for the evaluation of osteoporosis. It is useful both for identifying those people who are going to be at risk...     

Aneurysmal bone cyst of the occipital bone

A 13 years boy presented with a painless hard and fixed swelling in occipital region for the last three months. Plain X-ray, CT scan and MRI showed an expansile multi loculated cystic lesion in occipital bone. Histopathological examination revealed it to be an aneurysmal bone cyst. Treatment of choice is surgery. However, radiotherapy may be helpful in incompletely excised lesions.     

Development of bone canaliculi during bone repair

We recently found that silver impregnation staining with protargol (silver protein), that is, a modified Bodian method, is useful for histologically identifying the details of bone canaliculi structure, using thin sections of decalcified bone tissues. With this staining method, we conducted the present study to assess the development of bone canaliculi during the process of intramembranous ossification using a fracture-like stimulation model of the rat femur. After making a drill-hole in the cortex of the rat femur, decalcified thin sections were obtained after 3, 5, 7, and 14 days by the standard paraffin-embedding procedure. Silver staining for bone canaliculi was performed using our previously reported technique. The results showed that woven bone covered the fracture surface of the cortex after 5 days, then immature lamellar bone attached to the woven bone after 7 days, and finally the lamellar bone matured and became thick with appositional growth after 14 days. The osteocytes in the woven bone appeared at an early stage of bone repair and developed a few canaliculi that were short and irregularly distributed in the osteoid matrix, while the osteocytes in the lamellar bone at a late stage formed many bone canaliculi that were long and regularly distributed in mature bone matrix. Therefore, we concluded that woven bone osteocytes may be necessary for induction of the lamellar bone osteocytes followed by active appositional growth of the lamellar bone at the early stage of bone repair, and also that both bone tissues could be clearly distinguished from one another based on the pattern of development of bone canaliculi by the osteocytes, as seen with the use of our sensitive staining method.