白血病细胞对白细胞介素-2的反应研究

为研究重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）对白血病治疗的可用性和安全性，用３Ｈ胸腺嘧核苷（３ＨＴｄＲ）掺入法检测有白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因表达的７个白血病细胞株，６例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者和８例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者白血病细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应性。结果显示：ＩＬ－２Ｒ基因表达阳性细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性。ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ均为阳性的Ｎｕｌ细胞株ＮＫＬ－１，２例ＡＬＬ和１例Ｍ５型ＡＭＬ患者细胞呈增殖反应；３个白血病细胞株，２例ＡＬＬ和２例ＡＭＬ患者细胞呈抑制反应，其余３个白血病细胞株及７例患者白血病细胞对ｒｈＩＬ－２无反应。本研究表明：白血病细胞对ｒｈＩＬ－２的反应不均一，可出现增殖、受抑或不反应。给白血病细胞体外对ｒｈＩＬ２呈受抑和无反应的患者使用ｒｈＩＬ－２作免疫治疗是合适的，而白血病细胞呈增殖反应者不宜使用ｒｈＩＬ－２。     

原发性肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞的特性

１０例原发性肝癌手术切除的肿瘤标本用于分离培养肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）。分离制备ＴＩＬ采用机械剪切，酶消化和用Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ分离结合的方法。分离制得的ＴＩＬ以一定浓度于含ｒＩＬ－２１０００Ｕ／ｍｌ，ＰＨＡ２０μｇ／ｍｌ的ＲＰＭＩ１６４０完全培养液中，在５％ＣＯ２，３７℃条件下培养３０～４０ｄ。实验观察了ＴＩＬ悬液中的细胞组成、ＴＩＬ的体外扩增及肿瘤细胞的消失情况；用透射电镜观察了培养前后ＴＩＬ的超微结构变化；实验采用免疫组化和单克隆抗体技术（ＡＢＣ法）检测了培养前后ＴＩＬ的主要淋巴细胞亚群变化；还采用３Ｈ－ＴｄＲ释放法测定了ＴＩＬ的体外抗肿瘤活性。实验结果表明，原发性肝癌（ＨＣＣ）的ＴＩＬ在体外培养可以得到较好扩增并显示其在体外对新鲜自体瘤靶细胞的抗肿瘤活性。     

增殖细胞核抗原反义核酸对人肝癌细胞增殖的抑制作用

目的 观察增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）反义核酸对人肝癌细胞的抑增殖效应。方法 设计针对ＰＣＮＡｍＲＮＡ的１８个碱基的反义核酸,分反义组、正义组和空白组作用于ＨｅｐＧ－２肝癌细胞,ＭＴＴ法和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观测肝癌细胞的生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果 反义组肝癌细胞生长受到明显抑制,抑制作用于培养４８ｈ达高峰,达５０％左右,７２ｈ后减弱,９６ｈ已基本消失。反义组肝癌细胞与空白对照     

急性髓细胞白血病细胞IL-2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病细胞有ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ表达分别为２８例（６８．３％）和３２例（７８．０％），ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ同时表达者２１例（５１．２％）。ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞对ｒｈＩＬ－２的体外反应呈不均一性，表现为细胞增殖、受抑或不反应，８例中仅１例Ｍ５型患者细胞呈增殖反应。本研究表明ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒ基因表达是一普遍现象，这些细胞在体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性，大多表现为无反应或受抑。     

双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用

目的研究双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用。方法采用化学交联法，用异型化学交联剂Ｎ－琥珀酰亚氨基－３－（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ），将具有高亲和性的抗肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２与抗单核－巨噬细胞的单抗ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２联结成双特性单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２，经ＦＰＬＣＳｅｐｈａｃｒｙ１Ｓ－２００纯化。用间接免疫荧光法鉴定其特性。结果ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２对肝癌细胞间接免疫荧光染色阳性，ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２对单个核细胞染色为阳性。而这些抗体对肺腺癌细胞均呈阴性；单纯ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２无导向单核－巨噬细胞杀伤肝癌细胞作用，ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２及ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２均可介导单核－巨噬细胞对肝癌细胞起杀伤作用，并且前者强于后者。结论ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）是一种具有双特异性的单克隆抗体，可以提高人单核－巨噬细胞杀伤肝癌细胞的作用。     

白血病细胞对白细胞介素—2的反应研究

为研究重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）对白血病治疗的可用性和安全性，用＾３Ｈ胸腺嘧核苷（＾３ＨＴｄＲ）掺入法检测有白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因表达的７个白血病细胞株，６例急林巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者和８例生髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者白血病细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应性。结果显示，ＩＬ－２Ｒ基因表达阳性细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性。ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ均为阳性的Ｎｕ     

用IL—2／LAK细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响

为了探讨ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响，用＾２Ｈ－ＴｄＲ掺入ＤＮＡ法测定了１７例中晚期癌闰病人在ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后外周血加ＰＨＡ或不加ＰＨＡ淋巴细胞外增殖试验，结果显示无论空白对照（１１／１６）还是ＰＨＡ诱Ｔ淋巴细胞增殖试验（１２／１６），ｃｐｍ值较治疗前均事明显的提高（Ｐ〈０．０５，Ｐ〈０．０１）；在 Ｔ细胞亚群的测定中，ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后比较，ＣＤ＾＋和     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群及膜白细胞介素2受体表达的研究

目的：探讨乙型病毒性肝炎（乙肝）患者外周血淋巴细胞亚群及膜表面白细胞介素２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）与乙肝发病机制的关系．方法：采用ＡＰＡＡＰ技术检测９２例慢性乙肝患者外周血淋巴细胞亚群及ｍＩＬ－２Ｒ．结果：慢性乙肝患者ＣＤ＋４细胞数明显降低（Ｐ＜０．０５），ＣＤ＋８细胞数显著上升（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），以致ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值下降；ｍＩＬ－２Ｒ显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０５），在ＰＨＡ激活后与正常接近，但均较ＰＨＡ激活前显著增高（Ｐ＜０．０１）．２０例慢活肝恢复期ｍＩＬ－２Ｒ已趋于正常．结论：慢性乙肝患者存在着免疫调节功能异常，可能与乙型肝炎病毒的持续存在互为因果关系．     

肝癌瘤苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞对血清sIL-2R水平的影响及意义

目的：为了探讨肝癌瘤苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）对原发性肝癌（ＰＨＣ）患者血清可溶性白介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的影响及意义,方法：使用冷冻方法制成肝癌瘤苗,用于激活ＴＩＬ。对２２例原发性肝癌患者使用经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ治疗,并应用双抗体夹心ＥＬＩＳＥＡ法检测治疗前后ｓＩＬ－２Ｒ水平变化以及与对照组相比较,结果：用经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ治疗者,其血清ｓＩＬ－２Ｒ水平下降幅度最大。用未经     

性激素对人免疫功能影响的体外试验

以生理浓度的雌二醇（Ｅ２）和睾丸酮（Ｔｅ）体外作用于人外周血淋巴细胞，观察对ＰＨＡ刺激的淋巴细胞增殖反应，白细胞介素－２（ＩＬ－２）诱生水平及淋巴细胞对ＩＬ－２的反应性，取肝素抗凝血１０份，男女各５份，设Ｅ２，Ｔｅ及Ｅ２＋Ｔｅ实验组和无激素对照组，结果表明：Ｅ２可明显抑制ＰＨＡ刺激的淋巴细胞增殖反应，ＩＬ－２诱生水平及静止淋巴细胞ＩＬ－２的反应性，对ＰＨＡ活化的淋巴细胞反应性无影响，Ｔｅ的作用在各     

肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖的抑制作用

目的研究肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞的抑制作用及其临床意义.方法分离和培养肺癌细胞及TIL细胞,用MTT法检测原代肺腺癌细胞及腺癌细胞株A549对TIL体外增殖的抑制作用及FasL抗体对TIL的保护作用.结果原代肺癌细胞及A549细胞株对TIL均有不同程度的抑制作用.结论肺癌细胞对TIL细胞的抑制作用可能是机体逃避免疫攻击的机制之一.     

肝癌瘤苗激活的TIL在体外抗肿瘤活性的研究

目的：为了提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的抗瘤活性。方法：使用肝癌瘤苗来激活ＴＩＬ，观察其抗瘤活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养护增１０、２０、３０和４０ｄ的体外对自体肝癌细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０ｄ时为最高。结果：经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ具有更高的体外杀伤自体肝癌细胞的能力。     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗ＣＤ３单克隆抗体辅以少量的基因重组人白细胞介素２和植物血凝素诱导外周血淋巴细胞，成功地研制出具有抗瘤活性的ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞。     

原代培养的肺癌细胞对TIL的反杀伤作用

目的探讨肺癌细胞对TIL细胞是否具有反杀伤作用及意义。方法用MTT法检测8例人原发性肺癌的原代培养肿瘤细胞被Fas配体(Fasligand.FasL)抗体封闭前后对肿瘤浸润淋巴细胞(TumorInfiltratingLymphocytes,TIL)的杀伤活性。结果发现原代培养的肺癌细胞被FasL抗体封闭前后对T1L均有不同程度的杀伤作用,但经FasL抗体封闭后的肿瘤细胞对TIL的杀伤活性均有所下降,两组之间存在显著差异(p<0.05)。结论提示肺癌细胞对TIL细胞的反杀伤作用可能是其逃避免疫攻击的机制之一。     

腹腔镜脑室肝膈间隙分流术腹腔端引流管固定方法的临床研究

结合脑积水４例的腹腔镜脑室肝膈间隙分流术，就在腹腔镜下怎样放置固定脑室腹腔引流管进行了临床研究。在腹腔镜缝合打结法、腹腔镜钛夹固定法、腹腔镜穿刺皮下固定法３种方法中，穿刺皮下固定法具有创伤小，操作简单，手术时间短等优点，是理想的手术方法。     

肝癌疫苗激活的TIL细胞对原发性肝癌患者的NK细胞活性的影响及意义

目的：探讨经肝癌疫苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)对原发性肝癌患者NK细胞活性的影响。方法：使用冷冻方法制成肝癌疫苗，用于激活TIL细胞。对26例原发性肝癌患者使用经肝癌疫苗激活的TIL细胞治疗，检测其治疗前后．NK细胞活性的变化，并与对照组相比较。结果：应用肝癌疫苗激活的TIL细胞的患者，其NK细胞活性明显提高。结论：应用肝癌疫苗激活的TIL细胞，能明显地提高原发性肝癌患者的NK细胞活性。     

小鼠肝癌浸润性淋巴细胞的分离和培养

作者对小鼠肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor-infiltratjng lymphocyte,TIL)的分离和培养进行了初步研究。结果表明:运用酶消化加Ficoll或Percoll不连续密度离心法均能有效地获得TIL,两者相比,后者分得的TIL纯度更高(P<0.01)。TIL在含2000u/ml重组白细胞介素2(recombinant IL-2,rIL-2)RPMI 1640培养基中被激活,5～7 d后开始扩增,呈集落样生长,同时肿瘤细胞逐渐减少,至14d左右基本消失。培养40d时TIL扩增到原来的10~5倍,致分裂素PHA刺激的脾细胞上清液或LAK细胞上清液(称条件培养基)可促进TIL的扩增。     

Induction of antitumor activity and experimental expansion of human lung cancer-infiltrating lymphocytes.

In order to look for effector cells which are more efficient and less toxic than LAK cells induced from PBL for use in adoptive immunotherapy, we studied the antitumor activity and in vitro expansion of tumor infiltrating lymphocytes (TIL) from human lung cancers and compared their cytological properties with those of autologous PBL. The results showed: 1) Large numbers of TIL could be obtained from lung cancer tissue, approximately 1-5 x 10(8)/g tumor tissue, with an average TIL to tumor cell ratio of 2.3:1 (21 samples). 2) Fresh TIL were not cytotoxic against either NK-sensitive or -resistant tumor targets. After culturing for 6 to 8 d in the presence of rIL-2, TIL showed significant cytotoxicity and were able to kill autologous and allogeneic tumor targets and fresh solid tumor targets. 3) When maintained in the presence of rIL-2, TIL were able to continue proliferating and expanding for more than 2 mon, with expansion indices of 4-512. TIL stopped proliferating following the disappearance of autologous tumor cells in the culture. 4) Chronological studies revealed that the cytotoxicity appeared after 4 days in culture and reached a peak on the 14th day, and cultured TIL remained cytotoxic for at least 4 wk.     

肝癌细胞转铁蛋自受体的表达及WuT9单抗对肝癌细胞的抑制作用

应用间接免疫荧光法检测了正常人肝组织、肝癌组织及培养的肝癌细胞转铁蛋白受体表达情况。11例肝癌组织中,10例免疫荧光阳性;原代培养的肝癌细胞荧光阳性率为84.1±11.4％,远高于正常肝细胞的阳性率(5.1±2.6％)。WuT9、WuT9-阿霉素连接物在体外对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,对正常肝细胞的影响较小。     

维生素C对体外胃癌细胞的影响

目的探讨维生素Ｃ对体外胃癌细胞的作用。方法用原代细胞培养及ＭＴＴ法检测药敏试验的方法测定不同浓度维生素Ｃ对胃癌细胞的抑制率。结果维生素Ｃ从０．２ｍＭ到２．０ｍＭ的不同浓度对胃癌细胞均显示抑制作用，抑制率随浓度增高而增高，但２．０ｍＭ和２．５ｍＭ之间，抑制率无显著差异（Ｐ＞０．０５）。结论维生素Ｃ对体外胃癌细胞有一定的抑制作用，抑制率在一定范围内随浓度的增加而增高。