γ干扰素与肿瘤坏死因子的协同抗肿瘤作用

一、IFN-γ对TNF的促诱生作用肿瘤坏死因子(TNF)是Mφ分泌的一种对肿瘤细胞有选择性杀伤作用的效应因子。Nedwin。发现虽然IFN-γ不能单独锈生TNF,但却能提高IL-2所诱导产生的TNF的活性。Gifford报道IFN-(?)     

γ—干扰素基因修饰人肿瘤细胞的研究

将人γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）念信号肽ｃＤＮＡ构建入可表达逆转录病毒载体质粒ｐＬＸＳＮ，体外包装成缺陷型逆转录病毒后分别感染人胃癌细胞株ＭＫＮ－４５及人肝癌细胞株ＨＨＣＬ，经筛选后得到ＩＦＮ－γ基因修饰的肿瘤细胞，流式细胞仪分别检测了基因修饰肿瘤细胞的细胞周期及ＨＬＡ－Ｉ，Ⅱ类抗原表达；裸鼠皮下接种观察其致瘤性是否变化；结果发现经ＩＦＮ－γ基因修饰后细胞增殖减慢；ＨＬＡ－Ｉ，Ⅱ类表达都有不同程度的增     

体内IFN—γ基因转洒小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤作用的研究

采用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法，将ＰＲＥＰ－８－ＩＦＮ－γ表达质粒直接注射至小鼠腹腔，可成功地转染腹腔巨噬细胞，并表达其基因产物，能有效抑制肿瘤生长；再次基因转染，可获得增强的抗肿瘤效应，还发现基因ＭΦ所分泌的激活因子能激活未转基因的ＭΦ；增加腹腔ＭΦ的数量；增加ＭΦ的杀瘤活性，并使ＭΦ分泌一定水平的ＮＯ、ＩＬ－１和ＮＦ等，进一步增强抗肿瘤作用。转基因ＭΦ及其表达产物可使脾细胞ＮＫ活性和内生ＬＡＫ活性     

γ干扰素增强阿霉素对HeLa细胞的杀伤作用

肿瘤的化疗是肿瘤治疗中的重要手段之一 ,如何减少化疗药物的用量 ,增加疗效 ,减少副反应是人们所期望的。本研究旨在探讨γ干扰素对化疗药物杀伤肿瘤细胞株时的影响。1　材料和方法1 1　材料　人宫颈癌ＨｅＬａ细胞株购自浙江省医学科学院。引入实验室后以ＲＰＭＩ 16 40 (ＧＩＢＣＯ产品 )培养基 ,37℃、5 %ＣＯ2 湿化孵箱中传代培养。重组γ干扰素 (ＩＦＮ γ) ,上海克隆生物高技术公司产品 ,每支含 10 0万ＩＵ ,批号 :96 0 92 1。阿霉素 (ＡＤＭ ) ,浙江海门制药厂产品 ,批号980 5 17。1 2　实验分组　采用嵌套设计 ,即组内分组设计。将…     

外源性FHIT基因表达对肺腺癌细胞株A549恶性表型的逆转作用

目的 探讨FHIT（fragile histidine triad)基因表达在肺癌细胞增殖、凋亡、成瘤性中的作用。方法 应用脂质体转染法构建能高效表达外源性FHIT基因的A549－FHIT细胞和作为空载体对照的A549－vector细胞，裸鼠皮下接种构建肺癌移植瘤动物模型，应用逆转录－PCR、Western杂交、免疫组化、流式细胞计数等技术检测外源性FHIT基因转录、表达及对肺癌细胞株增殖、凋亡、成瘤性等的影响。结果 A549－FHIT细胞的生长曲线、克隆形成率、移植瘤体积和重量均显著低于A549－vector和亲本A549细胞；A549－FHIT细胞凋亡水平显著高于A549－vector和亲本A549细胞；与两个对照组相比，A549－FHIT细胞G0／G1比例显著增高。结论 外源性FHIT表达基因能够显著抑制肺癌细胞增殖和分裂，诱导其凋亡，抑制其成瘤性，提示FHIT基因在肺癌中具有抑癌基因的功能。     

体内IFN-γ基因转染小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤作用的研究

采用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法，将ｐＲＥＰ－８－ＩＦＮ－表达质粒直接注射至小鼠腹腔，可成功地转染腹腔巨噬细胞（ＭΦ），并表达其基因产物，能有效地抑制肿瘤生长；再次基因转染，可获得增强的抗肿瘤效应。还发现转基因ＭΦ所分泌的激活因子能激活未转基因的ＭΦ；增加腹腔ＭΦ的数量；增强ＭΦ的杀瘤活性；并使ＭΦ分泌一定水平的ＮＯ、ＩＬ－１和ＴＮＦ等，进一步增强抗肿瘤作用。转基因ＭΦ及其表达产物可使脾细胞ＮＫ活性和内源性ＬＡＫ活性增强，提高机体抗肿瘤功能，为肿瘤的细胞因子基因治疗提供了一种简便而有效的抗肿瘤新途径。     

5-氟脲嘧啶与γ-干扰素作用于Lovo细胞的实验观察

目的观察5-氟脲嘧啶与γ-干扰素联合应用对人结肠癌Lovo细胞株的影响。方法采用Lovo结肠癌细胞体外培养,流式细胞仪检测细胞生长、增殖和凋亡的变化。结果 5-氟尿嘧啶与γ-干扰素联合应用后,细胞增殖率下降指数为0.82～1.99,而细胞凋亡率增加指数为2.48～4.89。结论 5-氟尿嘧啶与γ-干扰素联合应用可降低肿瘤细胞的增殖和提高肿瘤细胞的凋亡。     

重组人γ－干扰素单克隆抗体的制备及初步应用

应用常规方法制备了４株能稳定分泌抗人重组γ－干扰素单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系：３Ｄ３、３Ｄ１２、３Ｆ９和３Ｂ８．经免疫琼脂双扩散法鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的亚类分别为：ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ１和１ｇＧ１．相对亲和常数前两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１１、后两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１３．问接ＥＬＩＳＡ法测培养上清的效价为２×１０２～１．２８×１０５．由小鼠腹水提取的４株ＭｃＡｂ与天然γ－干扰素均产生交叉反应，对重组的人γ－干扰素均具有中和活性．其中３Ｆ９和３Ｄ３培养上清对重组人γ－干扰素亦有明显的中和活性。用３Ｆ９ＭｃＡｂ与溴化氢活化的ＳｅＰｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备了亲和层析柱，用其纯化粗提的γ－干扰素纯度达到９５％以上，比活性达１．９×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白．     

γ干扰素的负向免疫调节作用

γ干扰素作为Th1型细胞因子主要介导细胞免疫应答。近来越来越多的证据表明,γ干扰素具有抗炎和对免疫应答的负向调节作用。γ干扰素通过调节NK细胞受体及其配体的表达,负向调节NK细胞和CTL细胞的效应功能;可诱导调节性T细胞的产生,并作为调节性T细胞早期短时分泌的重要介质,抑制初始T细胞的活化和增殖、控制T细胞的效应功能和诱导T细胞的凋亡;抑制抗原特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化、扩增,并促进T细胞活化后的凋亡。γ干扰素在细胞和器官移植及自身免疫性疾病中诱导免疫耐受,抑制GVHD,内源性γ干扰素已成为防止自身免疫性疾病发生的保护性因子。深入探讨γ干扰素在免疫应答不同阶段和在不同病理生理条件下的作用及其机制对于阐明疾病的发病机制并设计有效的治疗策略具有重要的意义。     

大鼠γ—干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的实验研究

目的 探讨大鼠γ-干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的可行性。方法 构建重组大鼠γ-干扰素真核表达载体,将其转染大鼠气道上皮细胞,检测外源质粒的整合和培养上清液中γ-干扰素浓度和活性。结果 构建的重组载体中γ-干扰素的基因序列与Genebank中大鼠的γ-干扰素cDNA序列相同。转染后气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的基因片段条带,培养上清液中γ-干扰素浓度和活性显著高于对照组。结论 本研究构建的重组大鼠γ-干扰素真核表达载体可成功地转染大鼠气道上皮细胞,整合入基因组DNA,并分泌有活性的γ-干扰素。     

γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的免疫原性研究

目的研究ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞的免疫原性。方法利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ分别建立了四种ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进行鉴定分析，流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞表面ＭＨＣ分子表达，灭活肿瘤细胞体外刺激诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）产生。结果Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＩＦＮ－γ基因在宿主细胞中获得了正确整合和表达。ＦＡＣＳ分析结果表明，ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞表面ＨＬＡⅠ类分子表达强度显著增强，Ⅱ类分子的表达阳性百分率有显著提高。一些ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞在体外诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞的能力有所提高。结论ＩＦＮ－γ基因修饰可增强人肝癌细胞的免疫原性，为基因工程瘤苗的临床应用提供了一定依据。     

乙肝表面抗原诱生γ-干扰素的研究

对 8名抗 HBs阳性健康成人 ,12名慢性乙肝患者外周血单个核细胞 (PBMC )分别用酵母菌表达的重组HBsAg ,s抗原第 12 0～ 147位氨基酸合成肽及重组HBsAg HBIG复合物刺激 ,测定特异性诱生γ 干扰素水平。结果 2 0名中有 14名产生了比对照更高的γ 干扰素。用重组HBsAg与合成肽为抗原诱生的γ 干扰素阳性数基本相符 ,但用HBsAg HBIG复合物诱生 ,仅有 7名产生升高的γ 干扰素。结果提示今后可用酵母菌表达的重组HBsAg特异诱生PBMC产生γ 干扰素 ,作为一种筛选病人与预测治疗性疫苗疗效的指标     

γ—干扰素的~(125)I偶联标记

<正>小分子量细胞因子的~(125)I同位素标记是研究细胞因子作用机理及其检测十分有用的技术。由于细胞因子分子量通常较小,~(125)I的直接偶连常导致生物活性丧失。我们在~(125)I标记重组人γ-干扰素的实验中,比较了几种连接方法后,用自制的Bolton-Hunter酰化试剂标记取得了较满意的结果。现报道如下。     

B7—1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的实验研究

目的：研究B7-1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法：通过逆转录病毒载体。将小鼠B7-1基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/B7-1在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转B7-1基因诱导了CD80的高表达,EL-4/B7-1细胞在小鼠中的成瘤性下降,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗。基因修饰的瘤苗作用明显增强,EL-4/B7-1细胞能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,射线灭活的EL-4/B7-1瘤苗作用减弱。结论：B7-1基因修饰的肿瘤疫苗可诱导体内的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提供了实验依据。     

短期机械拉伸加载对人肺腺癌细胞A549细胞的增殖效应

目的测量人肺腺癌细胞株A549对机械拉伸加载的短期响应。方法用加载Flexercell-4000TTM系统在4h内对A549细胞进行正常生理参数范围的应变刺激,并测量细胞的增殖效应。结果细胞的增殖率均有不同程度的提高,增殖响应系数M(%)为:0.5h,M=18%;1h,M=22%;4h,M=5%。结论研究证明细胞对短期加载的增殖响应与人成骨细胞特征相似,在1800循环数左右有一峰值,间歇式加载能保持长期高增长率,而过去的研究表明连续加载相反,只会抑制细胞的增长。     

IL-17体内外抗肿瘤作用及其机制研究

目的研究IL-17体内外抗肿瘤作用及其机制,为IL-17基因疫苗进入临床提供实验依据。方法建立稳定转染小鼠IL-17全长基因的小鼠乳腺癌细胞(4T1/IL-17)及相应的对照细胞(4T1/pcDNA3.1、4T1),MTS法检测3种细胞的体外增殖情况;流式法检测3种细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达的变化及3种细胞的凋亡情况。建立荷瘤动物模型,观察3种细胞移植瘤在小鼠体内成瘤性、生长情况及小鼠生存期的变化。接种肿瘤细胞6周后分别检测3组小鼠脾细胞CTL杀伤活性、脾细胞增殖情况。用ELISA法检测小鼠脾细胞经刺激后产生IFN-γ、IL-12的情况;流式细胞技术检测4T1/IL-17细胞接种于小鼠体内的细胞凋亡情况及肿瘤组织细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1等分子表达的变化。结果转染IL-17基因后在体外对4T1/IL-17、4T1/pcDNA3.1和4T1细胞的增殖;MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达;细胞凋亡无影响。将4T1/IL-17细胞接种小鼠体内后,荷瘤小鼠的肿瘤生长速度、体积均明显小于4T1/pcDNA3.1细胞组及4T1细胞组,生存时间也明显延长(P<0.05);肿瘤细胞凋亡率明显增高(P<0.05);细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达水平显著性增高(P<0.01);CTL杀伤活性及对ConA刺激的细胞增殖反应性均明显升高(P<0.01);可产生高水平的IFN-γ、IL-12,有显著性差异(P<0.01)。结论 IL-17在体外未显示抗肿瘤作用,IL-17在小鼠体内具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用与促进肿瘤细胞细胞凋亡及增强机体免疫应答有关。     

淋巴细胞合成生长激素对自身细胞增殖及γ－干扰素产生的影响

淋巴细胞能够合成和分泌生长激素已被证实。本文的目的在于观察免疫反应性生长激素（ｉｒＧＨ）在体外诱导淋巴细胞应答反应中发挥的作用。以特异性抗体和ｉｒＧＨ结合进行阻断试验，结果显示ＰＨＡ诱导的淋巴细胞增殖程度显著下降。４５μｇ／ｍｌ的免抗人ＧＨ抗体使淋巴细胞增殖的抑制率达４１．２％；使γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）的产生从５６．３±２７．４ｎｇ／ｍｌ下降到４９．１±２３．０ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０５）由此说明ｉｒＧＨ参与体外淋巴细胞应答活动的调节。     

CEA 迷你基因串联体疫苗的体内抗肿瘤活性观察

目的:观察已构建的含有CEA625-667 基因单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体的DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 对荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制情况及小鼠存活时间的改变。方法:建立小鼠肝细胞癌实验动物模型,应用单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 免疫小鼠,以生理盐水为对照组,观察各实验组小鼠皮下肿瘤生长情况,记录皮下肿瘤生长曲线,观察疫苗对荷瘤小鼠肿瘤生长速度的影响以及疫苗对荷瘤小鼠生存时间的影响。结果:与生理盐水对照组相比,两种疫苗均能明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤体积以及生长速度(P <0.01),其中,pcDNA-triCEA625-667 疫苗组的抑制作用明显优于pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01),而二者均不能抑制CEA 阴性荷瘤小鼠的肿瘤生长。pcDNA-CEA625-667 疫苗组平均生存时间为(48.50±6.73)d,与生理盐水对照组(39.00±6.64)d 相比有显著差异(P<0.01);pcDNA-triCEA625-667 疫苗组生存时间(48.50依6.73)d 明显高于生理盐水对照组和pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01)。两组疫苗均不能延长CEA 阴性荷瘤小鼠的生存时间。结论:无论是单倍体还是三串联体的DNA 疫苗,均能够明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤生长速度(P<0.01)及明显延长其生存时间(P<0.01),而对CEA 阴性荷瘤小鼠则无治疗作用。     

9-顺-维甲酸对人肺腺癌细胞株细胞分化和凋亡的影响

维甲酸类化合物 (Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ)在调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动中起重要作用[1 ] 。其在体内的生理活性代谢产物包括全反式维甲酸 (ＡＴＲＡ)、1 3 顺维甲酸 (1 3 ｃｉｓ ＲＡ)和 9 顺维甲酸 (9 ｃｉｓ ＲＡ) ,它们可通过核维甲酸受体 (ＲＡＲ)结合于ＤＮＡ应答元