体外hEGF对食管癌EC9706细胞增殖影响的研究

目的:研究人表皮生长因子(hEGF)对食管癌EC9706细胞增殖的影响作用,探讨hEGF不同浓度、不同时间对食管癌细胞生长的影响。方法:体外正常条件培养EC9706食管鳞癌细胞株,无血清饥饿细胞,加入hEGF,通过镜下形态观察、MTT染色、流式细胞技术等观察细胞增殖变化情况。结果:hEGF在200ng/ml浓度、24h作用时间点,对EC9706细胞有明显刺激增殖作用;倒置显微镜下观察,hEGF刺激细胞呈长梭形改变,细胞连接紧密;细胞周期分析,hEGF刺激细胞30.03%处于增殖活跃的S期,较之对照组15.52%,有极显著性差异。结论:hEGF能够刺激食管癌EC9706细胞增殖,其对细胞增殖的刺激作用呈量效、时效关系。     

Cathepsin B反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞中CB mRNA表达的影响

目的:探讨组织蛋白酶B(CB)反义寡核苷酸(ASODN)对CB mRNA表达的影响。方法:将食管癌EC9706细胞分5组培养,5组分别用设计合成的3条封闭CB不同基因位点的反义寡核苷酸(ASODN1、ASODN2、ASODN3)及1条无关寡核苷酸(N-ODN)转染,另1组不转染(空白对照组)。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中CB mRNA表达情况。结果:3条CB ASODNs转染的EC9706细胞中CB mRNA表达均下调,差异无统计学意义,但均明显低于N-ODN组及空白对照组。结论:CB ASODN可抑制食管癌EC9706细胞中CB mRNA表达,为临床预防食管癌等恶性肿瘤浸润转移奠定理论了基础。     

DMS0对EC9706细胞端粒酶活性及生长的影响

目的 研究二甲基亚砜(DMSO)对EC9706细胞端粒酶活性及生长的影响。方法 用1．3％DM50处理食管癌EC9706细胞，TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变，流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果 DMSO处理后的EC9706细胞，端粒酶活性明显下降，且细胞周期明显改变，Gl期细胞比率显著增高，S期细胞数显著降低。结论 DMSO可抑制EC9706细胞端粒酶活性，使EC9706细胞生长停滞于Gl期，并诱导细胞凋亡。提示DMSO可用于食管癌的治疗。     

上调stathmin基因表达对食管鳞癌EC9706细胞的作用

目的 构建stathmin基因真核表达载体,研究上调stathmin基因表达对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用RT-PCR扩增stathmin cDNA,克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体.重组载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染细胞株.显微镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞stathmin蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成,流式细胞仪分析细胞周期,裸鼠移植瘤实验研究转染细胞的成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pcDNA3.1(+)载体,获得pcDNA3.1-stathmin重组表达载体.Western印迹法证实重组载体上调EC9706细胞stathmin蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组细胞比较,pcDNA3.1-stathmin转染细胞形态变大、多核、有丝分裂障碍;pcDNA3.1-stathmin转染细胞倍增时间延长(25～28 h)、增殖活性降低、细胞克隆形成率下降(34.5%±6.9%),细胞分裂阻滞于G2/M期(21.7%±3.4%),裸鼠体内致瘤性降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 重组质粒pcDNA3.1-stathmin上调stathmin基因表达能够抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖和致瘤性,stathmin可能成为食管鳞癌患者治疗的理想靶点.     

全反式维甲酸对食管癌EC9706细胞NDRGl mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响.方法:将10μmol/LATRA作用于人食管癌EC9706细胞,应用免疫组织化学SP法和RT-PCR方法分别检测对照组及ATRA作用1 d、2d、3 d及5 d组NDRG1蛋白和mRNA的表达.结果:ATRA作用1 d、2 d、3 d及5 d组NDRG1 mRNA相对含量分别为1.47±0.18、1.69±0.24、1.72±0.19和1.58±0.25,均高于对照组的1.08±0.10(P＜0.05或0.01).ATRA作用1 d、2 d、3 d及5 d组NDRG1蛋白表达积分分别为254±37、277±34、265±30和239±24,均高于对照组的164±29(P＜0.01).结论:ATRA可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1的表达,从而促进其分化.     

人食管癌EC9706细胞中Gadd45α基因的表达

Gadd45α基因位于人类1号染色体短臂上,其mRNA全长1355 bp.研究[1-4]发现,Gadd45α在细胞周期调控、细胞凋亡、DNA损伤修复以及维持基因组稳定性中起重要作用,与许多肿瘤(如肝癌、胰腺癌、乳癌、非小细胞肺癌等)的发生发展关系密切.作者采用实时定量PCR技术检测人食管癌EC9706细胞培养不同时间Gadd45α基因的相对表达量,观察EC9706细胞Gadd45α基因表达的稳定性,为食管癌的基因研究提供一定的参考.     

不同基因位点的人端粒酶RNA反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的:探讨封闭人端粒酶RNA不同基因位点的硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌细胞增殖及端粒酶活性的影响.方法:采用阳离子脂质体介导的方法,将不同浓度(0 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L和30 μmol/L)的5条ASODN(ASODN-1、ASODN-2、ASODN-3、ASODN-4和ASODN-5)和无关序列寡核苷酸(N-ODN)分别导入食管癌EC9706细胞中,应用MTT法及端粒酶活性的定性及定量检测法,测定ASODN对食管癌EC9706细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用.结果:5条ASODN和1条N-ODN按照N-ODN、ASODN-4、ASODN-5、ASODN-2、ASODN-1和ASODN-3的顺序,对细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用逐渐增高(P＜0.05).结论:封闭hTR功能区的反义寡核苷酸可有效抑制食管癌细胞增殖及端粒酶活性.     

血红素加氧酶-1基因在三氧化二砷诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达

目的:检测三氧化二砷(As2O3)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,探讨HO-1的表达与化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的内在联系。方法:以食管癌EC9706细胞系作为研究模型,3μmol/L AS2O3作用于EC9706细胞,镜下观察细胞形态变化;MTT法绘制细胞生长曲线;以RT-PCR方法检测HO-1mRNA的表达。结果:As2O3作用于EC9706细胞4 h即可检测到HO-1基因表达升高,12 h表达水平升至最高,24 h回落到正常水平。结论:As203诱导EC9706细胞凋亡过程中,HO-1基因表达升高,呈时间依赖性变化,可能起到短暂的对抗氧化应激作用。     

RNA干扰对EC9706细胞mTOR表达及细胞生长与凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人食管癌EC9706细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达及细胞生长与凋亡的影响.方法:设计合成mTOR siRNA,采用低、中、高浓度(50、100与150 nmoL/L)的mTOR siRNA分别转染EC9706细胞24、48与72 h.同时设无义对照组(转染无义对照siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用免疫细胞化学与原位杂交法分别检测各组EC9706细胞中mTOR蛋白与mRNA的表达;应用MTT法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率;应用TUNEL法检测转染24 h时细胞凋亡,计算凋亡指数(AI).结果:转染24、48与72 h,6组细胞mTOR蛋白和mRNA的表达差异均有统计学意义(mTOR蛋白:F=24.14,45.78,59.19,P均＜0.001;mTOR mRNA:F=41.42,69.74,43.71,P均＜0.001),细胞生长抑制率差异亦有统计学意义(F=143.85,172.98,155.01,P均＜0.001);低、中、高浓度组转染不同时间点间比较,mTOR蛋白(F=42.23,29.46,50.22,P均＜0.001)、mTOR mRNA(F=6.48,8.50,4.80,P均＜0.05)及细胞生长抑制率(F=78.77,76.14,52.28,P均＜0.001)差异均有统计学意义.mTOR siRNA转染组EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达均低于各对照组,且mTOR蛋白及mRNA的表达随mTOR siRNA浓度的增加及转染时间的延长而减弱(P＜0.05).不同浓度mTOR siRNA转染组EC9706细胞生长抑制率均高于各对照组,且细胞生长抑制率随mTOR siRNA浓度的增加和转染时间的延长而升高(P＜0.05).转染24 h,6组细胞AI相比,差异有统计学意义(F=442.96,P＜0.001),mTOR siRNA转染组AI均高于各对照组,且高浓度转染组AI高(P＜0.05).结论:mTOR siRNA可有效抑制EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达,且能抑制EC9706细胞的增殖并促进其凋亡.     

FEZ1/LZTS1基因在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:探讨FEZ1/LZTS1基因在膀胱移行细胞癌中的表达及在肿瘤发生、发展中的作用。方法:对40例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜应用RT-PCR方法检测FEZ1/LZTS1基因mRNA的表达。结果:FEZ1/LZTS1基因mRNA在正常膀胱黏膜中阳性率100%,无表达缺失;而在膀胱移行细胞癌中阳性率42.50%,阴性率57.50%,两者间阴性率的差异有统计学意义(P<0.01);FEZ1/LZTS1基因mRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱移行细胞癌中的阴性率分别28.57%、61.54%和84.62%,三者之间阴性率差异有统计学意义(P<0.05);在表浅性和浸润性膀胱移行细胞癌中阴性率分别为28.57%和89.47%,两者之间阴性率差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论:FEZ1/LZTS1基因mRNA在膀胱移行细胞癌中出现表达缺失,并且与肿瘤的病理分级和临床分期有关。FEZ1/LZTS1基因表达缺失可能作为评价肿瘤分化程度、估计预后的参考指标。     

PDE5基因沉默对肾透明细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨PDE5基因对肾透明细胞癌细胞株786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成PDE5 siRNA序列,按照HiPerFect转染试剂盒操作手册转染786-O细胞.采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)和Western blot法检测转染后PDE5 基因的表达,通过WST-1法检测细胞增殖情况,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性.结果 与空白对照组和阴性对照组相比较,PDE5 siRNA转染组的mRNA及蛋白表达水平显著降低,786-O细胞增殖能力明显受到抑制,caspase-3活性明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 siRNA干扰PDE5基因表达可抑制肾透明细胞癌细胞株786-O细胞的增殖并促进凋亡.     

食道鳞癌凋亡相关基因表达及原位凋亡的同步检测

用免疫组织化学染色法对食道鳞癌标本进行凋亡相关基因Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ表达的检测,同时采用ＴＵＮＥＬ方法原位探测细胞凋亡。检测结果显示：①５２例食道鳞癌标本中,Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２、Ｂａｘ和细胞凋亡的阳性率分别是６１．５％、６１．５％、６９．２％、９８．１％和２８．８％。②１８例对照标本中相应指标的阳性率分别为１６．７％、１００％、３８．９％、１００％和６１．１％。③比较２组标本,肿瘤组Ｐ５３和Ｂｃｌ ２的阳性率显著高于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）,肿瘤组Ｆａｓ与ＴＵＮＥＬ的阳性率显著低于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）。④以上４种蛋白与细胞凋亡存在与否无独立相关性。上述结果表明,在食道癌变中,不仅存在细胞凋亡功能的减低,同时伴有多种凋亡相关基因的表达异常。凋亡功能的异常,可能是多基因共同调控的结果。     

XRCC1基因在食管癌组织、癌旁组织中的蛋白表达与临床因素的相关性研究

目的:探讨DNA修复基因XRCC1在人食管癌组织、癌旁组织中的蛋白表达及其临床意义。方法:应用免疫印迹技术对66例食管癌患者的癌、癌旁组织中XRCC1的蛋白表达水平进行检测和比较。结果:66例食管癌患者XRCC1在癌组织的蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05);淋巴结转移阳性患者组XRCC1在癌组织与癌旁组织的表达差异程度高于淋巴结转移阴性患者组(P<0.05);不同临床分期、病理类型、鳞癌中不同分化程度、族别病例组之间XRCC1在食管癌和癌旁表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:XRCC1的蛋白表达在癌组织和癌旁组织表达差异程度与食管癌发生及淋巴结转移有关联。     

KAI1基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌CaSki细胞体外增殖和侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染技术,将真核表达质粒pCMV-KAI1导入低表达的宫颈癌CaSki细胞,免疫组化及实时荧光定量RT-PCR法检测转染前后细胞内KAI1蛋白和mRNA的表达,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭力小室测定KAI1基因对细胞增殖能力及侵袭能力的影响.结果 转染目的基因的CaSki细胞中KAI1 mRNA水平及蛋白表达明显增强(P<0.05),细胞体外增殖能力明显弱于未转染组和转染空载体组(P<0.05),细胞穿膜数量明显少于未转染组和转染空载体组(P<0.05).结论 肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌细胞体外增殖及侵袭能力有一定抑制作用.     

Effects of Cyclin D1 Antisense Oligodeoxyneucleotides on the Growth and Expression of G_1 Phase Regulators in Gastric Carcinoma Cells

CyclinDisinvolvedintheregulationofG1phrasecellcycle ,andithasthreesubtypes (D1,D2 ,D3) .CyclinD1islocatedin 11q13,withitscDNAbeing 4 .3kb .Itisidentifiedastheproto oncogengandisfoundtobeoverexpressedinbreast,esophageal,andhepaticcarcinoma .ItwasreportedthatthepositiverateforCyclinD1ingastriccarcino mawas 2 3.7% - 47% [1,2 ] .CyclinD1mRNAoverexpressionwasfoundin 2 2 %ofgastriccancertissues,andwascorrelatedwithinvasionoftu mors[3] .WetransfectedgastriccarcinomacellswithCyclinD1antisenseo…     

吉西他滨对体外乳腺肿瘤细胞抑制及其MTA1 mRNA表达的影响

目的：探讨吉西他滨对体外培养的乳腺肿瘤MCF－7细胞株抑制作用及其作用机制。方法 将浓度为25 mg／mL、50 mg／mL、100 mg／mL、200 mg／mL和400 mg／mL吉西他滨培养液分为5组：A组、B组、C组、D组和E组。 A组、B组、C组、D组和E组均作用于体外传代培养对数生长期乳腺肿瘤细胞株MCF－7细胞24 h;使用四甲基偶氮唑盐（ MTT）法检测5组各对乳腺肿瘤细胞株MCF－7的生长抑制率;用实时定量聚合酶链反应（ PCR）检测5组各对乳腺肿瘤MCF－7细胞株肿瘤转移相关基因1（MTA1）mRNA的相对表达量。结果 A组、B组、C组、D组和E组对乳腺肿瘤MCF－7细胞株抑制率A组＜B组＜C组＜D组＜E组,差异均有统计学意义（P＜0．05）;C组、D组和E组MTA1 mRNA的相对表达量均人低于空白对照组,且这3组的MTA1 mR－NA的相对表达量依次降低,差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论 吉西他滨能抑制乳腺肿瘤MCF－7细胞株增殖,且有剂量依赖性,其主要作用机制是通过下调MTA1 mRNA的表达,从而发挥抑制乳腺肿瘤MCF－7细胞株转移与抗乳腺肿瘤作用。