卵巢储备功能下降患者颗粒细胞mtDNA拷贝数 及4 977 bp缺失的研究

目的：研究卵巢储备功能下降（DOR）患者颗粒细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数和4 977 bp缺失情况,初步探讨DOR患者颗粒细胞mtDNA结构的完整性。方法：选取DOR组及对照组各50例,分离提纯卵泡液中颗粒细胞,提取DNA,RT-PCR相对定量颗粒细胞mtDNA拷贝数及PCR检测其4 977 bp缺失情况。结果：DOR组及对照组均未检测到mtDNA 4 977 bp缺失,其拷贝数相对量差异亦无统计学意义（P＞0.05）。结论：DOR患者颗粒细胞mtDNA结构基本完整,颗粒细胞可作为DOR患者卵母细胞浆内线粒体自体移植的供体细胞。     

胃癌细胞系和胃癌组织中线粒体DNA4 977 bp缺失及其生物学意义

目的 明确线粒体DNA 4977bp大片段缺失在胃癌细胞系、胃癌组织及胃癌患者血清中的频率,为胃癌的早期临床诊断寻找简便准确的分子标记。方法 运用Primer-shift PCR和直接测序的方法对13个胃癌细胞系、52对胃癌组织及对应的癌旁正常组织（年龄从28-78岁）、40例胃癌患者血清及40名正常人血清进行筛查。取10例胃癌组织的石蜡切片,采用显微切割技术在同一患者的切片上同时分离3种组织（包括胃粘膜正常腺体、肠化上皮及胃癌组织）对mtDNA 4977bp缺失进行了分析比较。结果 在13个胃癌细胞系中12个有mtDNA4977bp缺失（缺失率为92.3%),52例胃癌组织中38例有缺失（缺失率为73.1%),52例癌旁正常组织中27例有缺失（缺失率为52%）,40名胃癌患者血清中17例有缺失（缺失率为42.5%),40名正常人血清中8例有缺失（缺失率为20%）。胃癌组织和癌旁正常组织mtDNA 4977bp缺失差异有显著意义,癌组织mtDNA 4977bp缺失率与胃癌的分型和患者的性别没有关联。胃癌患者血清与正常人血清mtDNA4977bp缺失差异也有显著意义。10例显微切割组织中2例肠化上皮及胃癌组织中有缺失,而胃粘膜正常腺体未见缺失。结论 线粒体DNA 4977bp大片段缺失可能在胃癌发生和胃粘膜病变演化及细胞癌变的过程中起重要作用,血清中可以检测到线粒体DNA 4977bp大片段缺失,而且在胃癌患者血清中检出率远高于正常人血清。检测胃癌患者血清中mtDNA 4977bp大片段缺失有望成为一种简便易行的胃癌生物学行为的分子标记物。     

线粒体4977-bp缺失对鼻咽癌的影响

目的分析线粒体4977-bp缺失对鼻咽癌（NPC）的影响,探讨NPC发病的可能分子机制。方法收集2019年1至12月杭州市第一人民医院手术的NPC患者66例,使用荧光定量PCR检测癌组织中线粒体4977-bp缺失,同时对携带该缺失的患者进行线粒体功能研究,包括活性氧（ROS）水平、ATP水平、线粒体DNA（mtDNA）拷贝数等。结果66例NPC患者中发现2例患者携带线粒体4977-bp缺失,与性别、年龄相仿的2例健康体检者相比,mtDNA拷贝数和ROS水平升高,而ATP水平降低。结论线粒体4977-bp缺失可能影响线粒体ATP、mtDNA拷贝数以及ROS水平,引起线粒体功能损伤,进而参与了NPC的发病进程。     

骨关节炎关节软骨中软骨细胞线粒体DNA缺失突变的分析

目的：分析骨关节炎病人关节软骨组织中软骨细胞线粒体DNA序列变化,探讨骨关节炎发病的潜在病理机制。方法：应用gap—PCR扩增方法检测10例骨关节炎病人和3例正常关节软骨中软骨细胞线粒体DNA的4977bp缺失突变。采用2轮PCR扩增,第1轮PCR反应以骨关节炎病人的关节软骨中软骨细胞线粒体DNA为模板;第2轮PCR扩增反应以第1轮PCR扩增反应的产物为模板,再次进行扩增。结果：第1轮PCR反应结果显示,mtDNA524bp扩增产物呈阴性,而533bp扩增产物均呈阳性;第2轮PCR扩增反应结果显示,10例骨关节炎病人病例标本中有2例出现524bp区带,而533bp扩增产物均呈阳性。两次扩增,正常关节软骨中软骨细胞和外周血对照524bp扩增产物全部为阴性。结论：骨关节炎病人关节软骨组织中软骨细胞线粒体DNA有8470～13447nt之间4977bp大片段缺失,提示骨关节炎的发病与关节软骨中软骨细胞线粒体DNA的突变关系密切。     

2 型糖尿病患者线粒体常见基因突变PCR检测的局限性

目的:研究北京地区汉族人群中线粒体DNA(m itochondrial DNA,m tDNA)多位点突变频率与2型糖尿病之间的相关性。方法:采用直接PCR、PCR-限制性片段长度多态性(restriction fragm ent length polymorph ism,RFLP)、PCR-时相温度梯度凝胶电泳(temporal temperature grad ient gel electrophoresis,TTGE)法筛查m tDNA 4977片段缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变和m tDNA T14577C突变。结果:在250例2型糖尿病患者及142例健康对照外周血基因组总DNA中,未发现m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变。结论:m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变在外周血中没有检出,采用常规PCR法检测2型糖尿病患者外周血线粒体DNA突变具有较大的局限性。     

茶多酚和茶色素对紫外线照射致小鼠皮肤光老化的防护作用

目的：研究茶多酚、茶色素对紫外线照射致小鼠皮肤光老化的防护作用。方法：光镜下观察茶多酚、茶色素对真皮弹性纤维的影响；通过嵌套PCR检测皮肤组织线粒体DNA(mtDNA)的缺失突变。结果：茶多酚、茶色素组的弹性纤维断裂、卷曲的程度较模型组轻，且mtDNA的缺失突变也无模型组严重。结论：茶多酚、茶色素能改善光老化模型小鼠真皮弹性纤维的病变，两者可不同程度地缓解小鼠皮肤组织mtDNA的缺失突变。在延缓皮肤光老化作用茶色素与茶多酚无显著差别。     

非小细胞肺癌线粒体基因组大片段缺失突变研究

目的 明确mtDNA 4 977 bp大片段缺失在肺癌组织、癌旁正常组织及非癌患者肺组织中的分布频率,探讨mtDNA 4 977 bp大片段缺失与肿瘤的关系.方法 采用长距离PCR方法对37例肺癌组织和相应的癌旁正常组织、20例非癌患者正常肺组织mtDNA 4 977 bp缺失进行了检测.结果 肺癌组织、癌旁正常肺组织及非癌患者正常肺组织中均检测出存在有线粒体DNA 4 977 bp片段缺失.37例肺癌组织标本中有20例(54.1%)检测到4 977 bp缺失,37例相应的癌旁肺组织22例(59.5%)有缺失, 其中8例在肺癌组织中未显示而却在癌旁正常组织检测到缺失,20例非癌患者正常肺组织中也有6例出现 4 977 bp片段缺失.线粒体DNA 4 977 bp缺失与年龄、吸烟因素有关.结论 线粒体DNA 4 977 bp缺失并非肺癌特异性突变,在癌变过程中不太可能起重要的作用,而可能仅仅是肿瘤发生发展过程中环境和遗传因素作用的反映.     

线粒体DNA4977bp缺失检测肿瘤细胞辐射敏感性的初步研究

目的:探讨mtDNA4977bp缺失用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的可行性。方法:分别采用MTT法和巢式PCR法测定人肿瘤细胞株—肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7)不同剂量γ射线照射后的存活分数(SF)和mtDNA4977bp缺失率。结果:MTT法:2Gy、4Gy和8Gy照射后,HepG2和EC-9706的SF显著低于MCF-7,表明HepG2和EC-9706细胞具有更高的辐射敏感性,HepG2细胞照射后的SF略低于EC-9706细胞,但统计学差异不显著。PCR法:1Gy和4Gy照射后3种肿瘤细胞mtDNA4977bp缺失率无显著性差异。8Gy照射后HepG2和EC-9706 mtDNA4977bp缺失进一步增加,而MCF-7的缺失率下降,显著低于HepG2与EC-9706细胞的缺失率,但HepG2和EC-9706细胞的缺失率无统计学差异,提示HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞,这与MTT法测定结果相符。结论:测定mtDNA4977bp缺失作为快速、简便的检测方法,有望用于肿瘤细胞辐射敏感性预测。     

慢性进行性眼外肌麻痹发病机制探讨

①目的 探讨慢性进行性眼外肌麻痹(CPEO)发病的分子机制。②方法 采用聚合酶链反应(PCR)、PCR-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术以及PCR-单链构象多态性(PCR—SSCP)技术，对4例CPEO病人和10例非CPEO病人受累眼外肌线粒体DNA(mtDNA)的8483—13459碱基部位的缺失突变、tRNA(Leu)基因A3243G位点的点突变以及tRNA(Leu)基因其他位点的突变情况进行检测分析。③结果 在1例CPEO病人眼外肌标本中检测到mtDNA的8483～13459碱基部位的缺失突变；未检测出A3243G点突变及mtDNAtRNA(Leu)基因的其他点突变。④结论 mtDNA的848313459碱基部位缺失突变可能与CPEO的发病有关。     

线粒体DNA缺失与疾病

线粒体疾病是由于线粒体功能异常导致的,线粒体功能异常往往是由于线粒体DNA(mtDNA)的突变造成的.mtDNA突变的种类包括点突变,大片段重组(缺失和重复),mtDNA数量减少,mtDNA突变的修复.mtDNA突变不仅能引起线粒体疾病,而且与一些常见病的发病也存在联系.     

Delta mtDNA4977 is more common in non-tumoral cells from gastric cancer sample

BACKGROUND: The aim of this study was to determine the frequency of delta mtDNA4977 in tumoral cells as compared with adjacent normal cells in gastric cancer. METHODS: In order to investigate whether a high incidence of mutation exists in mitochondrial DNA of gastric cancer tissues, we screened one of common region of the mitochondrial genome by PCR amplification and Southern blot followed by DNA sequence analysis. DNA isolated from these cells was used to amplify hypervariable regions ATPase8/6, COXIII, ND3, ND4 and ND5 of delta mtDNA4977. RESULTS: In 107 cancer patients, delta mtDNA4977 was detected in 6 cases (5.60%) of the tumoral tissues and 18 cases (16.82%) of the non-tumoral tissues that were adjacent to the tumors. Levels of delta mtDNA4977 deletions were found to be more in non-tumoral tissues than in adjacent tumoral tissues. There was no correlation of patients with certain clinical parameters like age, sex, tumor location and tumor size; however, there was an obvious relationship with intestinal-type of gastric cancer. CONCLUSIONS: Unknown genetic aspects, ambiguous environmental factors and reactive oxygen species (ROS) can cause the delta mtDNA4977 mutation rate to be increased in gastric cancer. The results suggest that percentage level of delta mtDNA4977 is less common and intolerable in tumoral tissue, probably because of high metabolism and ROS generation. We supposed that the cells initially had delta mtDNA4977 transform to tumoral cells and the existed deletion conferred metabolic disadvantage; thus, cells containing such a mtDNA deletion would be overgrown by other cancer cells without this mtDNA deletion. As a result, the presence of delta mtDNA4977 will be low in tumoral cells.     

精索静脉曲张的不育病人精子线粒体DNA片段缺失的调查

目的分析精索静脉曲张导致的不育病人的精子线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）中一个长为4 977 bp的片段缺失的情况。方法收集60例精索静脉曲张的不育病人和90名健康男性的精液标本,并抽提精子的总DNA,用Gap-PCR技术检测DNA 4 977 bp片段的缺失情况。结果在81.66%的患有精索静脉曲张的不育病人和4.44%的健康人对照中存在DNA 4 977 bp片段的缺失。患有精索静脉曲张的不育病人中DNA缺失频率更高（OR=139.80,95%CI=40.08~487.30,P < 0.01）。结论精索静脉曲张可能会导致一些男性精子DNA缺失,并导致不育。且精子线粒体DNA 4 977 bp片段缺失与精索静脉曲张所致不育症存在一定的相关性。     

人外周血细胞线粒体DNA中存在特大片段缺失突变

了解线粒体ＤＮＡ大片段缺失突变及其意义。方法采用６种方法提取人外周血细胞ＤＮＡ,,其中１种方法先分离线粒体,再抽提线粒体ＤＮＡ。以得到的人外周血细胞ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,其产生经琼脂糖凝胶回收后与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接、转化、测序。结果６种方法抽提ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增后,产物电泳行为相同,发现人血细胞线粒体ＤＮＡ存在１３１６２ｂｐ特大片段缺失突变。结论此缺失首首发现的,经测序证明为人线粒体ＤＮ     

肾气丸对拟老化大鼠耳蜗组织线粒体DNA4834bp缺失的影响

[目的]研究肾气丸对拟老化大鼠内耳组织线粒体DNA(mtDNA)4834bp缺失发生率的影响。[方法]3月龄大鼠经脑干诱发电位(ABR)检测听阈后分对照组、拟老化组、肾气丸组。拟老化组给予5%D-半乳糖颈部皮下注射连续8周,肾气丸组给予5%D-半乳糖颈部皮下注射连续6周后同时给予肾气丸混悬液灌胃2周。对照组、拟老化组最后2周同时给予等量生理盐水灌胃。[结果]对照组大鼠ABR反应阈与拟老化组、肾气丸组之间差异有统计学意义(P0.05),拟老化组、肾气丸组之间差异无统计学意义(P0.05)。拟老化组、肾气丸组与对照组大鼠比较,其内耳组织线粒体4834 bp缺失明显增加,且两组间检出率有明显差异(P0.05)。[结论]肾气丸能改善大鼠老化过程中的内耳组织线粒体4834 bp缺失的发生率,提示其对大鼠耳蜗老化有一定的改善作用。     

老年大鼠大脑皮质、海马和小脑的线粒体DNA缺失突变

目的】测定老年大鼠脑缺失型mtDNA比例,探讨mtDNA缺失与脑衰老的关系,为研究其分子机制提供基础资料。【方法】用碱裂解法抽提青年(3个月)SD大鼠10只和老年(24个月)SD大鼠17只的大鼠皮质、海马和小脑的mtDNA。稀释PCR法测mtDNA的缺失比例。【结果】青年鼠和老年鼠大脑皮质、海马和小脑均存在缺失型mtDNA,缺失片段为4834bp。青年鼠各脑区缺失型mtDNA比例分别为0000156%、0000148%、0000152%;老年鼠上述3个脑区缺失型mtDNA比例分别是0001446%、0001484%、0000987%,是青年鼠的9、10和65倍。【结论】衰老时脑缺失型mtDNA比例增多,以海马的mtDNA缺失增多最为显著。提示mtDNA缺失可能是神经元衰老性退变的主要因素之一。