登革病毒重要蛋白及其结构差异与致病性关系

近年来,登革病毒(DEN)感染在全球许多地方卷土重来,已成为世界上分布最广、发病最多、危害最大的虫媒病毒性疾病之一。本文就DEN基因组结构、DEN重要蛋白、DEN结构差异与病毒致病性关系等作了综述。     

Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1的克隆表达及抗体制备

目的 克隆表达Ⅱ型登革病毒(dengue virus 2,DV2)非结构蛋白1(DV2-NS1)基因,并制备其单克隆抗体。方法 提取Ⅱ型登革病毒的RNA,扩增其NS1全长基因片段,经TA克隆将NS1基因克隆至pQE30载体中进行诱导表达,表达产物经变性处理后用Ni柱亲和层析纯化并复性,经免疫印迹法(Western Blot)鉴定抗原性。用复性后的NS1蛋白和灭活Ⅱ型登革病毒交替免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法、间接免疫荧光法(IFA)进行单抗亚类、特异性的筛选与鉴定。结果 携带重组质粒pQE30/DV2-NS1的菌株经诱导,可高效表达重组DV2-NS1蛋白,经复性获得可溶性蛋白,Western Blot证实重组的DV2-NS1蛋白具有抗原性;用重组蛋白和病毒混合免疫,共获得10株抗NS1蛋白的单抗,其中3株为特异性抗DV2-NS1蛋白,与其他3型登革病毒无交叉,另7株为混合交叉型;亚类分析一株为IgG2b,余为IgG1。结论 获得重组Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1,并得到10株抗DV2-NS1蛋白的杂交瘤细胞株,为进一步研究NS1的生物学特性和临床诊断试剂建立奠定了基础。     

汉坦病毒致病性及其结构蛋白抗原性研究

汉坦病毒（Hantavirus,HV）属于布尼亚病毒科（Bunyaviridae）,汉坦病毒属,在临床上引起肾综合征出血热（HFRS）和汉坦病毒肺综合征（HPS）。自1976年李镐汪等从疫区的黑线姬鼠肺组织中分离到汉坦病毒76—118株以来,各国学者相继分离到不同型别的汉坦病毒。目前汉坦病毒已鉴定出多种型别：姬鼠型（Hantaan,HTN）、家鼠型（Seoul,SEO）、Puumala（PUU）、Sin Nombre（SNN）、Dobrave（DOB）等,在我国主要流行型别为HTN和SEO。     

Ⅱ型登革病毒非结构蛋白1多克隆抗体制备和免疫特征分析

目的制备抗Ⅱ型登革病毒(dengue virus type 2,DENV2)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)多克隆抗体,分析该抗体的免疫特性。方法采用NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取血分离血清,纯化获得抗NS1抗体。酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析抗NS1抗体与NS1蛋白和DENV2结合特性。免疫荧光法测定抗NS1抗体与人微血管内皮细胞株1(human microvascular endothelial cell 1,HMEC-1)的交叉反应性。ELISA法分析抗NS1抗体、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养体系中活化补体的含量。结果抗NS1抗体能与NS1和DENV2特异性结合,抗体最高滴度分别为1∶1 280和1∶640。抗NS1抗体能与HMEC-1细胞交叉结合,抗NS1抗体、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养上清液中C3a、C4a、C5a和s C5b-9含量均显著高于HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养(均P<0.05),以及PBS、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养(均P<0.05)。结论抗DENV2 NS1抗体能交叉结合于血管内皮细胞并激活补体系统,可能在登革出血热的免疫病理机制中起重要作用。     

登革病毒E蛋白抗原表位研究进展

提要登革病毒是虫媒病毒B组的一个成员,其RNA编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。研究发现,病毒抗原中既存在有中和性抗原表位,又有免疫增强抗原表位。本文阐述了登革病毒主要抗原E蛋白的表位研究进展。     

肠道病毒衣壳蛋白致病性研究进展

肠道病毒是人类感染率很高的一种病毒,其衣壳蛋白在病毒的致病性方面起着重要的作用.近年来,大量的研究工作致力于肠道病毒农壳蛋白的致病性研究.此文就衣壳蛋白的基因组结构、基因分型、与病毒受体的相互作用和疫苗研制等方面作了综述.     

广东省江门地区登革病毒分离株的鉴定及结构蛋白序列分析

目的：对广东省江门地区2001年夏、秋季一批发热、出疹患者进行确诊，并从分子水平分析流行株的可能来源。方法：分别采用免疫荧光、细胞毒力、乳鼠毒力实验以及逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术进行病毒鉴定，并对其结构蛋白基因序列进行克隆、测序及同源性搜索。结果：37份患者血清登革病毒（DV）IgM抗体阳性率为97％（36／37），IgG抗体阳性率为59％（22／37），最高抗体滴度均可达1：640。所得病毒可致C6／36细胞病毒，具有乳鼠神经毒力；其结构基因序列长度为2325bp，编码774个氨基酸；与其他登革2型病毒株TSV01、GD06／93、NGC、44、ThNH、04'GD08/98及S1进行比较，其核酸序列同源性（％）分别为98、96、94、94、92、92、92、91。结论：2001年江门地区登革热流行为登革2型病毒感染所致，推测其可能是输入性传染。     

幽门螺杆菌粘附素及其致病性

幽门螺杆菌粘附于胃粘膜是其致病的首要步骤，粘附素是其粘附定居的物质基础，本文就幽门螺杆菌粘附素及其致病性，以及粘附素在幽门螺杆菌疫苗研究中的应用作了综述。     

登革病毒包膜蛋白E第三结构域的研究进展

登革病毒是目前人类最重要的虫媒病毒之一,登革病毒包膜蛋白E的第三结构域是研究登革病毒亚单位疫苗及病毒入侵宿主细胞的重要靶点。     

2型登革病毒NS1蛋白单克隆抗体的生物学特性研究

目的制备抗2型登革病毒NSl蛋白的单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法以重组NS1蛋白免疫Balb／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗M蛋白的mAb，采用间接ELISA方法和Westernblot进行mAb特异性鉴定；同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得9株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞Ⅲ1A6andU13D2；相对亲和力均在10^6以上。Westernblot显示9株mAb能特异识别重组NS1蛋白。结论成功地制备出抗登革病毒2型病毒NS1蛋白的9株mAb，为建立快速特异检测登革病毒的实验方法提供了有力的工具。     

幽门螺杆菌粘附素及其致病性

幽门螺杆菌粘附于胃粘膜是其致病的首要步骤,粘附素是其粘附定居的物质基础,本文就幽门螺杆菌粘附素及其致病性,以及粘附素在幽门螺杆菌疫苗研究中的应用作了综述。     

4种血清型登革病毒NS1蛋白序列及B细胞抗原表位特异性分析

目的比较4种血清型登革病毒NS1蛋白型特异性抗原表位基因序列及氨基酸序列之间的差异,为利用基因差异进行血清学分型及疫苗研究提供新的线索。方法利用DNAstar数据包中的Editseq程序,从20株登革病毒分离株的全基因组序列中将NS1基因型特异性抗原表位序列截取出来,再用ClustalX软件进行多序列比对,进行同源性分析,找出型内最为保守的抗原表位序列。并将比对结果在120株登革病毒序列中进一步验证。结果 NS1蛋白36～45和71～85位氨基酸为型特异性抗原表位,高度保守,型内完全相同,型间不同。结论 NS1蛋白36～45位氨基酸可以作为登革病毒血清分型和研制亚单位疫苗的靶标。     

流感病毒血凝素蛋白与致病性研究进展

流感病毒的致病性差异由多种因素共同决定,其中血凝素(HA)在感染初期介导受体结合与融膜作用,与病毒毒力密切相关.此文从多个方面来阐述HA对病毒致病力的影响,包括HA受体结合特异性与宿主细胞受体,HA裂解位点与宿主细胞蛋白酶,HA的糖基化,宿主固有免疫应答等.     

乳腺癌细胞核差异蛋白筛选

目的 比较体外培养的正常乳腺细胞和乳腺癌细胞核蛋白指纹图谱,筛选差异蛋白,为乳腺癌亚细胞蛋白标志物的研究奠定基础.方法 提取正常乳腺细胞株HBL-100和乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231的核蛋白,表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测蛋白表达,重复试验30次,Biomaker Wizard Software分析软件统计结果并筛选差异蛋白.结果 分子量(Mr) 2～100 kD范围内MCF-7和MDA-MB-231与HBL-100相比差异蛋白点数目分别为78个和69个(P＜0.05),其中5.8 kD、8.3 kD和18.2 kD的蛋白在两株癌细胞中表达均降低,9.9 kD和15.7 kD的蛋白在两株癌细胞中表达均增高.结论 SELDI-TOF-MS能够快速灵敏地检测分析乳腺癌细胞核差异表达蛋白,为乳腺癌亚细胞蛋白标志物的研究提供了新思路.     

白念珠菌二相性与致病性关系

目的探讨白念珠菌二相性与致病性的关系。方法分别将孢子相、菌丝相白念珠菌与人口腔颊粘膜细胞(BEC)进行粘附试验,比较二相性白念珠菌对BEC的粘附率;用兔抗人sIgA血清和人唾液sIgA,125I-sIgA放射免疫分析法检测唾液中sIgA的浓度,比较含sIgA及不含sIgA的唾液对二相性白念珠菌粘附BEC的影响;分别用小鼠腹腔中性粒细胞(PMN)、巨噬细胞(MΦ)对二相性白念珠菌进行吞噬实验,研究对二相性白念珠菌的吞噬作用。结果菌丝相白念珠菌对BEC的粘附率显著高于孢子相(P<0.001);含sIgA的唾液抑制孢子相及菌丝相白念珠菌粘附BEC的能力强于不含sIgA的唾液(P<0.005),且唾液中sIgA抑制孢子相白念珠菌粘附BEC的能力强于抑制菌丝相白念球菌粘附BEC的能力(P<0.05);PMN、MΦ对孢子相白念珠菌的吞噬作用强于菌丝相白念珠菌(P<0.01)。结论菌丝相白念珠菌的致病力强于孢子相白念珠菌的致病力。     

卵巢癌细胞系中差异表达蛋白的相关性研究

目的:筛查卵巢癌细胞系中差异表达蛋白,寻找与卵巢癌发生发展相关的基因。方法:体外培养卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780、OVCA433、OVCA420和正常卵巢细胞系IOSE386,利用蛋白阵列方法分析卵巢癌细胞系和正常卵巢细胞系中蛋白表达的差异性;利用QUANTITY 1分析软件分析图片结果,并对图片结果进行统计学分析。结果:分析发现卵巢癌细胞系中17种蛋白的表达水平相对于正常卵巢细胞系差异有统计学意义。结论:卵巢癌细胞系和正常卵巢细胞系存在着差异表达蛋白,这些蛋白可能与卵巢癌的发生发展存在着一定的相关性。     

西尼罗病毒E蛋白的结构和应用进展

西尼罗病毒是一种单股正链RNA病毒,属于黄病毒属黄病毒科,主要通过库蚊传播,能引起西尼罗热及神经侵袭性疾病如脑炎、脑膜炎等。近年来,该病毒在多个国家和地区间广泛流行,给发病国家带来了极大的危害。目前对于西尼罗病毒尚未有可用于人类的疫苗上市,也没有特定的抗病毒药物可用,因此加强病毒监测、研发新的疫苗及掌握实验室诊断方法变得尤为重要。本文主要通过对西尼罗病毒E蛋白的结构、疫苗及检测方法的最新进展加以探讨,为研发西尼罗病毒疫苗及诊断试剂盒提供理论依据。     

支原体抗原、抗体阳性与致病性关系

近年来,随着性病的增多,卫生部要求上报的8种性病亦越来越多,有的治疗机构由于自身的限制及利益的驱动,有的使不应是性病的病人,误诊为性病.给人民群众的家庭、精神、经济造成不应有的损失.本文仅就非淋性尿道炎的支原体进行研究,进一步阐明支原体抗原,抗体两者与致病性的关系.     

三株登革2型病毒广东分离株结构蛋白E基因序列测定及分析

目的对广东省分离的3株登革2型病毒(DEN2)的结构蛋白E基因扩增、克隆、测定及分析,了解流行株之间的相互关系及基因型.方法应用RT-PCR技术扩增广东省不同年份流行的3株DEN2型病毒的结构蛋白E基因.分别克隆到PMD18 T载体,转化JM109宿主菌,挑取阳性克隆进行鉴定及序列测定.结果3株DEN2病毒结构蛋白E基因序列长度均为1 485 bp,编码495个氨基酸.其核苷酸(氨基酸)的同源性分别是GD06/93与GD19/2001为98%(98%)、GD06/93与GD08/98为92%(95%)、GD08/98与GD19/2001为91%(94%).3株DEN2与国际参考株比较表明GD06/93与澳大利亚TSV01株共享序列非常接近,核苷酸(氨基酸)的同源性为99%(99%);GD19/2001和澳大利亚TSV01株核苷酸(氨基酸)的同源性为98%(98%);GD08/98与泰国株ThNH-P28/93核苷酸(氨基酸)同源性为98%(98%).结论GD06/93、GD19/2001与TSV01亲缘关系较近,属同一基因型.GD08/98与TnNH-P28/93共享序列非常接近,属同一基因型.     

多糖蛋白结合疫苗中载体蛋白的研究与应用

多糖蛋白结合疫苗能弥补多糖疫苗的局限性,有效预防和控制脑膜炎球菌、肺炎球菌、b型流行性感冒嗜血杆菌等侵袭性细菌引起的婴幼儿和高危人群感染。目前,多糖蛋白结合疫苗的研制范围日趋广泛,但可供选择的载体蛋白种类有限,载体蛋白的重复使用可能会引起免疫干扰等现象。为满足结合疫苗发展的需要,解决载体蛋白单一的现状,各种新型载体蛋白正在不断开发,现就多糖蛋白结合疫苗中载体蛋白的研究、应用和发展前景进行综述。。