白香丹上调经前期综合征肝气逆证大鼠下丘脑神经类固醇受体的表达

目的：研究白香丹治疗经前期综合征（PMS）肝气逆证的中枢作用靶点。方法：阴道涂片法测定大鼠动情周期、动情前期电刺激复制PMS肝气逆证大鼠模型并用白香丹治疗。免疫荧光标记＋激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测脑组织内主要的神经类固醇受体的蛋白表达水平及定位分布模式。结果：白香丹胶囊能够显著上调PMS肝气逆证模型大鼠下丘脑中雌激素受体、孕酮受体的蛋白表达水平。结论：下丘脑中雌激素受体（ER）和孕酮受体（PR）是白香丹的两个重要作用靶位,白香丹可能通过上调ER、PR表达水平发挥平肝理气作用。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型大鼠下丘脑类固醇激素受体表达的影响

目的 观察白香丹胶囊对模型大鼠下丘脑类固醇激素受体表达的影响,探讨该药治疗经前期综合征（PMS）肝气逆证的中枢作用靶点.方法 以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆证大鼠模型,经中药白香丹胶囊干预,采用免疫荧光标记结合激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测下丘脑中主要的类固醇激素受体（雌激素受体α、孕酮受体）的蛋白水平表达量及定位分布模式.结果 白香丹胶囊能够显著上调PMS肝气逆证模型大鼠下丘脑中类固醇激素受体（雌激素受体α、孕酮受体）的蛋白表达水平.结论 下丘脑中雌激素受体α、孕酮受体是白香丹胶囊的两个重要作用靶位,该药可能通过上调上述两种受体的蛋白表达水平发挥其疗效.     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证大鼠血清及大脑皮层中γ-氨基丁酸和谷氨酸的影响

目的:研究白香丹胶囊对经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠血清和大脑皮层中γ-氨基丁酸(GABA)与谷氨酸(Glu)的影响,进而探讨PMS肝气逆证的发病机制。方法:以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆证大鼠模型,经药物白香丹胶囊干预,采用柱前衍生高效液相色谱法检测大鼠血清及皮层中GABA与Glu的含量。结果:大鼠造模后血清和大脑皮层中GABA、Glu含量均显著降低,白香丹胶囊给药后GABA、Glu含量均显著升高。结论:PMS肝气逆证大鼠血清及大脑皮层中GABA、Glu含量变化与PMS肝气逆证关系密切,白香丹胶囊可能通过调节血清及大脑皮层中GABA、Glu的表达发挥疗效。     

白香丹胶囊干预经前期综合征肝气逆证大鼠血清代谢组学研究

目的通过代谢组学方法研究白香丹胶囊(白芍、香附和丹皮)干预经前期综合征肝气逆证大鼠血清内源性代谢物的变化,探索与该病证密切相关的代谢模式及白香丹胶囊的作用途径。方法基于代谢组学理论,以UPLC/Q-TOF-MS为技术平台,建立大鼠血清代谢指纹谱,通过多元统计分析方法研究PMS肝气逆证大鼠血清的代谢差异及白香丹的干预作用。结果模型组、给药组与对照组的血清内源性代谢物发生了明显变化,模型组血清中肾上腺素、四氢脱氧皮质酮、5a-四氢皮质醇、雌酚酮、赖氨酸、5-羟基赖氨酸、乙酰半胱氨酸水平升高,孕二醇水平降低,给药组中显示白香丹胶囊对其有调节作用。白香丹表现出糖皮质激素、雌激素、神经递质及氨基酸等多靶点的作用特点。结论应用代谢组学方法可以从整体出发研究PMS肝气逆证及中药复方干预后的代谢模式差异,为PMS的临床诊断和治疗提供依据。     

舒郁胶囊对PMS肝气郁证模型大鼠海马μ阿片受体分布表达的影响

目的：探讨经前期综合征（PMS）肝气郁证模型大鼠海马脑区μ阿片受体（MOR）分布形态、蛋白水平表达,初步揭示PMS肝气郁证的发生机理及舒郁胶囊对该病证的干预作用。方法：采用慢性束缚应激法复制PMS肝气郁证模型大鼠,分别予以调肝方药舒郁胶囊进行干预。采用免疫荧光标记（IF）和蛋白免疫印迹（WB）技术对各组大鼠海马CA1、CA3脑区MOR进行检测。结果：与正常组大鼠相比,模型组大鼠海马脑区MOR分布排列杂乱且蛋白含量增多（P<0.01）,给予药物干预后,MOR蛋白含量基本恢复至正常水平。结论：PMS肝气郁证的发病机理可能与大鼠海马中CA1、CA3区 MOR高表达有关;舒郁胶囊可以有效纠正其恢复近正常水平,这可能是舒郁胶囊治疗PMS肝气郁证的中枢机制之一。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证大鼠下丘脑GABA_ARβ_2亚基分布及表达的影响

目的:研究白香丹胶囊对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型大鼠下丘脑γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)β2亚基蛋白分布和蛋白、mRNA表达的影响及PMS肝气逆证发病中枢机制。方法:以免疫荧光技术(IF)、蛋白印迹技术(Western blot)、半定量逆转录多聚合酶链式反应(半定量RT-PCR)依次检测大鼠下丘脑GABAARβ2亚基蛋白的分布模式,蛋白、mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,肝气逆组大鼠下丘脑GABAARβ2亚基主要分布在下丘脑组织的边缘,蛋白、mRNA表达水平显著升高;造模同时给予白香丹胶囊后,受体蛋白在下丘脑中均匀分布而趋于正常,蛋白、mRNA表达水平有不同程度的降低。结论:GABAARβ2亚基蛋白分布异常,蛋白、mRNA表达上调可能是PMS肝气逆证发病中枢机制之一,白香丹胶囊可以对上述异常变化起纠正作用。     

经前期综合征肝气逆、郁病证结合模型大鼠外周血和不同脑区性激素及其调节激素含量变化的实验研究

目的:借助前期研制成功的PMS肝气逆、郁两证大鼠模型检测其血清与不同脑区中E2、P、PRL含量,探索"肝失疏泄"的微观机制.方法:挑出动情周期非接受期大鼠40只,随机分为5组:正常对照组、PMS肝气逆证造模组、PMS肝气郁证造模组、PMS肝气逆证造模给药组、PMS肝气郁证造模给药组.肝气逆证大鼠模型以情志刺激为主多因素复合造模法制备,肝气郁证大鼠模型以慢性束缚应激法制备,模型复制成功后肝气逆大鼠模型用经前平颗粒干预,肝气郁证大鼠模型用经前舒颗粒干预.放射免疫法测定血清及中枢中E2、P、PRL含量,比较各组差异并进行分析.结果:旷场实验中,与正常对照组比较,大鼠造模后逆模组水平得分、垂直得分及可旷场实验总分均显著增加(P＜0.05),而郁模组大鼠则显著减少(P＜0.05),用药后这一趋势得到明显纠正(P＜0.05).肝气逆证模型大鼠症状呈现其血清中E2和P含量均呈下降趋势,肝气郁证模型大鼠血清中E2和P含量亦较正常对照组明显降低.中枢内激素变化与血清中相反.结论:PMS两证症状产生可能与体内性激素及其调节激素异常波动有关,经前平、经前舒颗粒可分别对外周血及中枢上述指标的异常变化起到调节作用.     

经前期综合征肝气逆、郁病证结合模型大鼠外周血和不同脑区性激素及其调节激素含量变化的实验研究

目的:借助前期研制成功的PMS肝气逆、郁两证大鼠模型检测其血清与不同脑区中E2、P、PRL含量,探索"肝失疏泄"的微观机制.方法:挑出动情周期非接受期大鼠40只,随机分为5组:正常对照组、PMS肝气逆证造模组、PMS肝气郁证造模组、PMS肝气逆证造模给药组、PMS肝气郁证造模给药组.肝气逆证大鼠模型以情志刺激为主多因素复合造模法制备,肝气郁证大鼠模型以慢性束缚应激法制备,模型复制成功后肝气逆大鼠模型用经前平颗粒干预,肝气郁证大鼠模型用经前舒颗粒干预.放射免疫法测定血清及中枢中E2、P、PRL含量,比较各组差异并进行分析.结果:旷场实验中,与正常对照组比较,大鼠造模后逆模组水平得分、垂直得分及可旷场实验总分均显著增加(P＜0.05),而郁模组大鼠则显著减少(P＜0.05),用药后这一趋势得到明显纠正(P＜0.05).肝气逆证模型大鼠症状呈现其血清中E2和P含量均呈下降趋势,肝气郁证模型大鼠血清中E2和P含量亦较正常对照组明显降低.中枢内激素变化与血清中相反.结论:PMS两证症状产生可能与体内性激素及其调节激素异常波动有关,经前平、经前舒颗粒可分别对外周血及中枢上述指标的异常变化起到调节作用.     

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证模型大鼠不同脑区孕酮受体表达的影响

目的:研究经前平颗粒对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型大鼠不同脑区(下丘脑、顶区皮质)孕酮受体(PR)表达的影响。方法:阴道涂片镜检法和旷场实验筛选合适大鼠,随机分为正常组、PMS肝气逆证模型组和肝气逆证造模给药组[经前平颗粒给药剂量10 g/(kg.d),给药5 d];电刺激法复制PMS肝气逆证模型,同时采用宏观行为学观察和旷场实验评价模型;采用免疫荧光标记结合激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测大鼠下丘脑和顶区皮质中PR的蛋白表达量及定位分布模式。结果:与对照组相比,PMS肝气逆证模型组大鼠旷场实验得分显著增加,下丘脑和顶区皮质中PR蛋白表达水平均有不同程度降低,阳性细胞少且趋向于边缘;与造模组比较,造模同时给予经前平颗粒干预组大鼠旷场实验得分显著下降,两脑区PR表达水平较模型组有不同程度上调,细胞分布模式趋于正常。结论:PMS肝气逆证发病与下丘脑和顶区皮质中PR密切相关,经前平颗粒能够显著上调两部位PR蛋白表达,这可能是其治疗PMS的机制之一。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型猕猴表情行为及性激素的影响

目的:研究白香丹胶囊(白芍、香附)对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型猕猴表情行为及性激素指标的影响。方法:选择24只高地位处在排卵期猕猴,放入挤压笼中,每天挤压7h,连续挤压造模5d,造模同时口服给药,对照组服用经前平颗粒;采用《雌性实验猕猴情绪评价量表》评定猕猴表情行为的变化,采用放射免疫法测定血清中泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量。结果:造模后猕猴愤怒因子积分显著增加,血清中E2、P含量显著降低,PRL含量明显升高。与对照组相比,白香丹胶囊可明显降低造模猕猴愤怒因子积分,增加血清中P与E2含量,降低PRL含量。结论:白香丹胶囊对PMS肝气逆证猕猴情绪及性激素异常具有较好的调节作用,能够使其恢复或接近正常水平。     

经前期综合征肝气逆证大鼠造模及用药后行为学观测与分析

目的:探讨居住入侵法制备经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠模型适用性。方法:采用居住-入侵法造模,记录并分析大鼠行为变化,经前平颗粒与白香丹胶囊药物干预反证模型可靠性。结果:造模组大鼠混合攻击行为得分为37.22±9.80,得分显著高于正常组;用药组大鼠行为学混合攻击行为得分分别为16.75±7.77和15.17±4.24,行为学指标在用药后均得到明显纠正;旷场实验中的水平得分、垂直得分及总分,造模组与正常组和用药组均有显著性差异(P<0.01)。结论:该模型是理想的PMS肝气逆证大鼠模型,经前平颗粒与白香丹胶囊对PMS肝气逆证均有较好的治疗效果。     

白香丹对PMS肝气逆证模型大鼠GABA_BR亚基分布及表达的影响

目的观察白香丹对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型大鼠额区和下丘脑中γ-氨基丁酸(GABA)B1受体(GBR1)、γ-氨基丁酸B2受体(GBR2)分布及表达的影响,探讨白香丹对PMS肝气逆证的干预机制。方法通过旷场实验和阴道涂片法筛选健康雌性Wistar大鼠进入实验,采用电刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,用免疫荧光双标记技术检测GBR1和GBR2在额区和下丘脑中的表达。结果与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠垂直得分、水平得分和总分均显著增加(P<0.01),GBR1和GBR2蛋白在额区和下丘脑中的表达水平降低(P<0.01);与模型组大鼠比较,白香丹组和巴氯芬组大鼠旷场得分显著降低(P<0.01,P<0.05),GBR1和GBR2蛋白在额区和下丘脑中的表达水平明显上升(P<0.01,P<0.05),但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GABABR亚基(GBR1和GBR2)表达的下调可能与PMS肝气逆证的发生密切相关;白香丹可对GBR1、GBR2的表达起到调节作用。     

经前期综合征肝气逆证模型大鼠脑雌激素α受体蛋白水平的表达

目的研究经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠不同脑区雌激素α受体蛋白水平的表达差异,探讨PMS肝气逆证的发病机制。方法以电刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,采用免疫荧光标记结合激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体的蛋白表达量及定位分布模式。结果模型组大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体蛋白表达水平与正常组相比有明显降低(P0.01),经前平颗粒干预后大鼠下丘脑和顶区皮质中该受体表达水平较模型组明显升高(P0.01,P0.05)。结论 PMS肝气逆证模型大鼠会出现下丘脑和顶区皮质雌激素α受体蛋白表达下调,经前平颗粒干预后可改变异常下调状态。     

白香丹胶囊对PMDD肝气逆证模型大鼠海马NMDAR1亚基蛋白分布及表达的影响

目的：以PMDD肝气逆证模型大鼠为载体,研究PMDD肝气逆证的病机以及白香丹胶囊对本病的干预机制。方法：改进情志刺激为主多因素分段刺激造模法,复制PMDD肝气逆证大鼠模型;用白香丹胶囊和氟西汀分散片予以干预,最后进行旷场实验评价模型;免疫荧光技术和蛋白印迹技术检测大鼠海马CA1、CA3区NMDAR1受体亚基分布情况及表达水平。结果：模型组大鼠与正常组相比较,其旷场实验的运动总距离明显增加（P<0.001）、中央区域的进入次数及停留在中央区域的时间显著减少（P<0.01）,海马CA1、CA3区细胞呈现稀疏杂乱的分布状态,且同氟西汀组一样,其NMDAR1蛋白表达量明显降低;白香丹组大鼠与模型组相比较,其旷场实验的运动总距离明显降低（P<0.05）、中央区域的进入次数和停留在中央区域的时间明显增多（P<0.05）,而氟西汀组与之相比,除了运动总距离明显降低（P<0.05）,其它指标不存在显著性差异,同氟西汀组一样,白香丹组大鼠海马CA1、CA3区细胞分布、排列无显著异常,但其NMDAR1蛋白表达量显著升高（P<0.0001）;氟西汀组大鼠与白香丹组相比较,其NMDAR1蛋白表达量明显降低（P<0.05）。结论：情志刺激为主多因素分段刺激造模法对大鼠学习记忆能力的损伤机制可能与大鼠海马CA1、CA3区神经细胞的减少和NMDAR1亚基的表达量降低有关,白香丹胶囊通过调整NMDAR1蛋白表达量纠正上述异常改变,从而改善大鼠的学习记忆能力。     

经前期综合征肝气逆证患者月经周期血清雌二醇、孕酮含量的动态变化

目的：探明卵巢激素水平变化在经前期综合征（PMS）特定亚型发病机理中的作用与影响，揭示PMS肝气逆证部分微观机制。方法：采用放射免疫法检测月经周期不同时相雌二醇（E2）、孕酮（P）含量的动态变化。结果：PMS肝气逆证组E2、P卵泡期分泌峰值明显减低，黄体期的分泌峰值未有形成。结论：E2、P卵泡期分泌高峰的低平与黄体期分泌峰的阙如是PMS肝气逆证微观机理之一。PMS特定亚型病理生理机制之一可能是E2、P水平持续性低下。     

白香丹胶囊对PMS肝气逆证模型大鼠海马GABAAR β2亚基蛋白分布模式及表达水平的影响

目的:探讨中药复方白香丹胶囊(BXD)对经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气逆证模型大鼠海马中γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)β2亚基蛋白分布模式及表达水平的影响.方法:阴道涂片镜检法和旷场实验筛选合适大鼠,随机分为正常组、肝逆组和肝逆给药组(BXD给药剂量10 g·kg-1·d-1,给药5 d);电刺激法复制PMS肝气逆证模型,同时采用宏观行为学观察和旷场实验来评价模型;免疫荧光技术和蛋白印迹技术(Western Blot)测定大鼠海马神经元中GABAA R β2亚基蛋白分布模式及表达水平.结果:与正常组相比,肝逆组大鼠旷场实验得分明显增加,海马神经元GABAAR较集中分布于组织边缘,β2亚基蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);而造模同时给予BXD后,大鼠旷场实验得分明显减少,海马神经元GABAAR分布模式无明显变化,而β2亚基蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论:大鼠海马神经元GABAA R β2亚基蛋白表达水平上调可能是与PMS肝气逆证密切相关的重要微观机制之一;中药复方BXD可对GABAA R β2亚基蛋白表达水平变化起到纠正作用.     

经前期综合征肝气逆证模型大鼠下丘脑ERα、ERβ mRNA表达的研究

目的：检测经前期综合征（PMS）肝气逆证模型大鼠下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达,观察经前平颗粒对PMS肝气逆证的干预作用。方法：以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆大鼠模型,以经前平颗粒干预治疗,采用RT-PCR法检测模型大鼠下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达。结果：与正常组相比,PMS肝气逆证组下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达降低,PMS肝气逆给药组下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达无差异。结论：肝气逆证模型下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达显著性升高,经前平颗粒对PMS肝气逆证的异常变化具有调节作用。     

白香丹胶囊对PMS肝气逆证模型大鼠海马γ-氨基丁酸B受体亚基分布表达及ERK1/2蛋白的影响

目的:研究经前期综合征(PMS)肝气逆证的发病机制及白香丹胶囊治疗该病证的作用靶点,为新药研发奠定基础。方法:采用电刺激应激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,5d后进行脑组织固定及海马分离,用免疫荧光双标记技术检测GABABR1和GABABR2在各组大鼠海马中的分布,计算海马CA1和CA3区平均荧光强度(MFI),Western Blot检测ERK1/2、P-ERK1/2在各组大鼠海马中的表达,计算P-ERK1/2的相对含量。结果:免疫荧光双标记结果显示,各组大鼠海马中GABABR1和GABABR2分布模式无统计学差异;模型大鼠海马CA1和CA3区的GABABR1和GABABR2表达明显下降(P<0.01),海马P-ERK1/2的相对含量明显下降(P<0.01);给予白香丹后,GABABR1和GABABR2表达明显上升(P<0.05,P<0.01),海马P-ERK1/2的相对含量明显上升(P<0.01)。结论:海马CA1、CA3区GABABR亚基蛋白以及海马中ERK1/2蛋白水平下降可能是PMS肝气逆证的重要病机,也是白香丹胶囊的作用靶点。     

舒郁胶囊对PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑μ-阿片受体的影响

目的:通过观察经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑中μ-阿片受体(MOR)的蛋白表达,探讨舒郁胶囊治疗PMS肝气郁证的机制。方法:Wistar大鼠56只,随机分为正常组、模型组、舒郁胶囊组(0.408 g·kg-1)和纳洛酮组(0.4mg·kg-1),每组14只,旷场实验和阴道涂片筛选动情周期规律非接受期大鼠进入实验,除正常组,其余各组采用慢性束缚应激法复制PMS肝气郁证模型,旷场实验对模型进行行为学评价,各组大鼠下丘脑采用免疫荧光化学技术(IF)和Western blot分别观察MOR分布及蛋白表达变化。结果:宏观行为学表明,与正常组比较,模型组大鼠旷场总分显著降低(P0.01);免疫荧光结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑细胞分布排列杂乱且增多,与模型组比较,舒郁胶囊、纳洛酮给药组均得到显著改善;蛋白免疫印迹结果显示,与正常组比较,模型组下丘脑中MOR表达水平显著升高(P0.01),与模型组比较,舒郁胶囊、纳洛酮给药组MOR表达水平均显著下降(P0.01)。结论:舒郁胶囊可通过对下丘脑中MOR的拮抗作用而改善PMS肝气郁证的症状,另外,下丘脑中MOR上调可能是PMS肝气郁证的发病机制之一。     

两种PMS肝气逆证大鼠模型造模方法的效果比对分析

目的：本文主要研究PMS肝气逆证标准化大鼠模型的造模方法。方法：分别采用情志刺激为主择时分段刺激造模法和情志刺激为主连续刺激造模法,制备PMS肝气逆证大鼠模型,选择氟西汀分散片和白香丹胶囊进行药物干预。通过对2种造模方法所得关键行为学指标结果进行比对分析,筛选出最佳造模条件。结果：①择时分段刺激造模法可以诱导大鼠的焦虑样行为,并且在非接受期减弱、接受期加强,大鼠的各行为学指标间发生明显的同步改变,给予临床PMS 肝气逆证有效药物能够改善这一现象;与正常组相比,造模组的各项行为学指标具有统计学差异。②连续刺激造模法也可诱导大鼠的焦虑样行为,但给予药物干预后没有改善;在各项焦虑样行为指标中,仅进入开放臂时间百分比在接受期和非接受期存在明显变化;虽然与接受期相比,模型组大鼠非接受期进入开放臂次数和百分比下降、旷场实验总分提高,但其结果没有统计学差异。结论：情志刺激为主的择时分段刺激造模法,诱导出的PMS肝气逆证大鼠模型,更为契合PMS 肝气逆证患者临床表现。