重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌细胞增值的影响

目的 探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响.方法 重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞生长增值的影响.结果 携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P＞0.05).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P＜0.01).融合基因的疗效优于单一自杀基因(P＜0.01).结论 KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,抑制其增值.     

腺病毒介导的ING4基因对SMMC-7721人肝癌细胞生长的抑制效应

目的研究腺病毒介导的ING4（Ad-ING4）基因对体外SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用。方法将腺病毒空载体Ad-GFP及重组腺病毒Ad-ING4分别感染SMMC-7721细胞,采用RT-PCR法及间接免疫荧光检测ING4基因的转录和表达;荧光显微镜观察Ad-ING4对SMMC-7721细胞的细胞毒作用;MTT比色法绘制细胞生长曲线,计算生长抑制率;流式细胞术（FCM）检测Ad-ING4对细胞凋亡的影响;DAPI核荧光染色检测细胞凋亡的核形态学变化。结果 RT-PCR及间接免疫荧光显示Ad-ING4能在SMMC-7721细胞内稳定表达;Ad-ING4感染72h和96h后对细胞的生长抑制率达33.82%和50.70%;FCM检测有明显的凋亡峰,凋亡率可达46.7%;DAPI染色结果显示SMMC-7721细胞胞核呈现核深染、固缩、断裂等细胞核凋亡的形态改变。结论 Ad-ING4能够明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

腺病毒介导的p16对胆管癌细胞的生长抑制作用

目的 研究p16基因对胆管癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒p16转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体朱病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导,用RT-PCR方法检测,在胆管癌QTBC939细胞系中p16呈低表达,重组体腺病毒能介导外源基因p16在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,重组体朱病毒介导的p16在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数和细胞DNALadder,证实p16能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论 p16基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。     

腺病毒介导的PTEN与ING4基因的体外抗肿瘤作用

1研究背景肿瘤是当今社会影响人类健康的主要疾病之一。肿瘤基因治疗的原理是将目的基因转移导入靶细胞,使其获得特定的功能,继而执行或介导对肿瘤的杀伤和抑制作用,或保护正常细胞免受化学治疗与放射治疗的严重伤害。     

腺病毒介导的ING4诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

1研究背景前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤,其发病率及病死率都很高,目前首选的治疗方法仍然是手术治疗,但效果尚不理想。基因治疗作为肿瘤治疗的一种新模式,越来越受到人们的重视。     

腺病毒介导RA538基因转移及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

ＲＡ５３８是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将ＲＡ５３８基因成功地转导到人肺腺癌细胞系（ＧＬＣ－８２）中,经Ｘ－ｇａｌ染色证实转导效率达１００％（ＭＯＩ为２５）,转录ＲＡ５３８基因后的ＧＬＣ－８２肿瘤细胞生长受到明显的抑制,抑制率为７７．２％。经流式细胞计数（ＦＣＭ）及ＴＵＮＥＬ检测证实ＲＡ５３８可诱导肿瘤细胞发生凋亡,凋亡率为５９．４％。利用Ｗ     

p33ING1b真核表达质粒构建及其对胃癌细胞株生长抑制凋亡的作用

目的：构建pCDNA3/p33^ING1b真核表达质粒,探讨其对胃癌细胞株的生长抑制、凋亡的作用,探索新型的肿瘤治疗措施与方法. 方法： 构建pCDNA3/p33^ING1b真核表达质粒,将p33^ING1b转染至人胃癌细胞SGC-7901,研究其对胃癌细胞产生的作用. 结果： 重组pCDNA3/p33^ING1b真核表达质粒构建成功,经p33^ING1b转染的人胃癌细胞株SGC-7901生长速度减慢,融合时间变长,周期S期变短,G0/G1期延长,凋亡增加. 结论： 重组pCDNA3/P33ING1b质粒能在胃癌细胞SGC-7901细胞内表达,且能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡.     

定点突变重组ING4腺病毒基因转染系统的载体构建及鉴定

目的重组构建hING4（人ING4）氨基酸序列。方法运用定点突变技术,在鼠ING4的基础上,设计两对突变引物P1、P2和P3、P4及全长ING4上下游引物P5、P6,通过四轮PCR,将mING4基因序列进行人源化改造,获得了编码hING4氨基酸的基因序列。将获得酶切目的基因片段,连接到转移载体pAdTrack—CMV上,形成重组转移载体pAdTrack—CMV—ING4。重组转移载体经PmeI酶切后与pAdEasy-1腺病毒载体在BJ5183大肠杆菌中同源重组,得到重组腺病毒载体DAdeasy-1-pAdTrack—CMV—ING4,经PacI酶切后脂质体转染QBI-293A包装细胞,获得重组腺病毒Ad—ING4。结果测序和RT—PCR结果表明hING4基因构建成功。结论hING4基因重组腺病毒载体构建成功。     

腺病毒介导的ING4基因对人膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的 探讨腺病毒介导的人生长抑制因子4(ING4)基因对人膀胱移行细胞癌T24细胞体外抑癌效应及其分子机制.方法 将含ING4的重组腺病毒(Ad-ING4)转染T24细胞,以空载体组、未转染组细胞作对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在T24细胞中的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组T24细胞生长情况;流式细胞术(FCM)和Hochest 33258染色法检测各组T24细胞凋亡变化;半定量RT-PCR法检测各组细胞中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)、p53、缺氧诱导因子(HIF)1α和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;Western印迹法检测各组细胞中caspase-3蛋白的表达.结果 腺病毒介导的ING4基因在T24细胞中成功表达,能明显诱导T24细胞凋亡,其凋亡率可达17.2%±4.1%,高于空载体组(4.7%±1.2%)和未转染组(4.8%±1.2%,P<0.05);外源性ING4基因可引起T24细胞中p53、Bax基因表达上凋(1.40±0.11比0.27±0.04,1.50±0.12比0.60±0.05)和Bcl-2、HIF-1α基因表达下凋(0.19±0.02比1.20±0.08,0.33±0.03比0.98±0.06,均P<0.05),并促进caspase-3活化.结论 腺病毒介导的ING4基因在体外可通过上凋p53、Bax/Bcl-2基因和下凋HIF-1α基因表达,导致caspase-3的活化而抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞的生长,并诱导其凋亡.     

ING4基因及其抑癌作用的研究进展

ING4基因是Shiseki M.等[1]于2003年发现的抑癌基因ING家族的新成员,ING4基因位于染色体12p13.31,由8个外显子和7个内含子组成,跨越了13 000个碱基对,编码248个氨基酸[2-3]。ING4基因编码的蛋白定位于细胞核内,ING4蛋白有植物同源结构域(plant homeodomain,PHD)和核定位信号(nu     

生长抑制因子4在人胃癌中的表达及其意义

目的：探讨多种人胃癌细胞株中及胃癌组织中生长抑制因子4（ING4）的表达及其意义。方法：体外培养3种分化不同的胃癌细胞MKN-1（高分化）、SGC-7901（中分化）、BGC-823（低分化）以及人胃黏膜细胞GES-1,收集绍兴第二医院病理科40例原发胃癌患者的石蜡标本。以RT-PCR、Western Blot法分别检测4种细胞株ING4 mRNA及其蛋白表达水平。免疫组织化学法检测胃癌组织及癌旁组织中ING4蛋白表达情况。结果：SGC-7901、BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较MKN-1、GES-1组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较SGC-7901组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,MKN-1组与GES-1组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。胃癌组织中ING4表达阳性率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：ING4作为抑癌基因参与了胃癌的发生,且与胃癌分化程度有关。     

神经胶质瘤中ING4基因蛋白表达的研究

目的探讨ING4基因在神经胶质瘤发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法对34例神经胶质瘤患者和24例正常对照组ING4基因的蛋白表达进行研究。结果ING4基因在神经胶质瘤患者中的表达明显低于正常对照组（P〈0.001）。ING4基因的表达水平与神经胶质瘤的恶性程度呈负相关（rs=-0.470,P〈0.01）。结论ING4基因在神经胶质瘤的发生、发展中可能起重要的作用。     

Adenovirus-mediated PTEN gene transfection suppresses growth and promotes chemosensitivity of endometrial carcinoma

Objective： To determine the potential of sustained transgene expression by intratumoral injection of Ad-PTEN in the nude mouse model of endometrial carcinoma. Methods and Results： We constructed recombinant adenovirus carrying the wild-type PTEN gene （Ad-PTEN）. RL95-2 cells, an endometrial carcinoma cell line lacking PTEN function, was infected with Ad-PTEN and showed increased expression of PTEN and chemosensitivity to doxorubicin, decreased proliferation rate, and elevated apoptosis and Go/G1 arrest. Furthermore, the tumorigenicity of these cells was also completely suppressed. These results indicated that gene therapy with Ad-PTEN could significantly inhibit the endometrial carcinoma xenografts growth in nude mice by intratumoral injection, induce apoptosis of tumor cells, and reduce expression of proliferating cell nuclear antigen （PCNA）. Immunohistochemistry analysis also showed that the expression of progesterone receptors （PR） in Ad-PTEN treated tumor cells were induced, while P-glycoproteins （P-gp） and estrogen receptors （ER） decreased significantly. Conclusion： PTEN may play an important role in the development of endometrial carcinoma. Our findings cast new lights for treatment ofendometrial carcinoma.     

非小细胞肺癌中DPC 4基因的表达及其与凋亡的关系

目的探讨DPC4基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与凋亡的关系。方法利用免疫组织化学S-P法检测52例NSCLC组织、19例相应癌旁正常肺组织中DPC4的表达,应用TUNEL技术对细胞凋亡情况进行了检测并计算凋亡指数。结果DPC4在肺癌原发灶中的阳性表达率为63.46%(33/52),与癌旁正常肺组织中的阳性表达率为89.47%(17/19)相比显著降低(P<0.05);DPC4与组织学类型、肿瘤细胞分化程度无关(P>0.05),但与淋巴结转移显著相关(P<0.05)。DPC4阳性组凋亡指数(AI)明显高于DPC4阴性组(P<0.05)。结论DPC4的低表达可能是肺癌发生过程的早期事件,可促进肺癌的淋巴结转移,DPC4的高表达可能促进细胞的凋亡。     

ING4与胃癌关系的研究进展

ING4(Inhibitor of growth family member 4)基因是生长抑制因子家族新成员,在多种肿瘤中表现出表达水平的下降、基因的缺失和/或突变,广泛参与肿瘤发生以及发展的多项过程。研究表明,ING4在胃腺癌细胞和组织中的表达水平是降低的,ING4抑制胃癌的生长以及增殖与NF-κB信号通路,ING4异常的剪接变体与mi RNAs表达水平等相关,此外ING4还参与胃癌多重耐药,对ING4的进一步研究有望发现针对胃癌的更好的治疗手段。     

Aspirin suppresses growth of human gastric carcinoma cell by inhibiting survivin expression

Regular use of aspirin (ASA) could reduce the risk of gastric cancer although the precise mechanism remains unclear.Down-regulation of survivin may be one of the cyclooxygenase-independent mechanisms whereby ASA induces apoptosis of gastric cancer cell.In this study,we investigated the effect of ASA on the growth,apoptosis and survivin expression of gastric cancer cell line SGC7901.The survival of cells treated with 3.0 and 10.0 mmol/L ASA for 24 h was decreased by 44.6% and 88.5%,respectively.ASA at 3.0 mm...     

Gene therapy with antisense c-myc adenovirus for human gastric carcino- ma cell line in vitro and for implanted carcinoma in nude mice

Sufficient infonnation has been accumulated to suggest that achvation and alnplilication of oncogenes and inachvation and fUnchonal failme of tUInor suPPressor genesare responsible for the inihation and deVelopment of human malignant disease lhrough a mulhstep PIDCess['].Gastric careinoma, one Of the most common inalig~t tUmors, can be successop ~ with sopry inthe early stage, but adVanced cases are usually refectoryto chemotherapy or ladiotherapy. COnSeopenily, genetherapy becomes an at…     

野生型p53基因转染对人胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用

目的 研究野生型p53基因对人未分化胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用。方法 用表达人野生型p53基因全长cDNA的真核载体pcDNA3—p53，转染人未分化胃癌细胞系HGC27，对转染后细胞进行生长曲线、细胞生长抑制率及流式细胞术分析，观察其生物学特性变化。结果 外源野生型p53基因在HGC27细胞内稳定表达，经pcDNA3—p53转染的HGC27细胞生长速度受到明显抑制，流式细胞分析显示G1期增加，S期下降，细胞出现凋亡。结论 野生型p53基因能在HGC27细胞内表达，且能抑制其生长并促进细胞凋亡。