补肾法防治原发性骨质疏松症的细胞、分子作用机理研究

目的:在骨细胞及分子水平观察了补肾法防治骨质疏松作用环节。方法:以建立的成骨细胞、破骨细胞及骨髓基质细胞培养体系进行体外实验,采用MTT比色分析法及3H-胸腺嘧啶核苷渗入法测定成骨细胞增殖及分化;采用流式细胞仪观察成骨细胞的凋亡;采用原位分子杂交研究TGF-β1、MMP-9 mRNA的表达。结果:补肾法可促进成骨细胞的增殖及分化;部分保护由肿瘤坏死因子α诱导的成骨细胞凋亡,使成骨细胞转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达增强;抑制破骨细胞的骨吸收活性;降低破骨细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达。结论:补肾法具有抑制骨吸收,促进骨形成的双重药效作用,其机理部分是在mRNA水平上,通过对骨细胞内的TGF-β1、MMP-9等影响骨代谢的细胞因子及蛋白酶的调控而达到的。     

补肾法防治原发性骨质疏松症的细胞、分子作用机理研贫

目的：在骨细胞及分子水平观察了补肾法防治骨质疏松作用环节。方法：以建立的成骨细胞，破骨细胞及骨髓基质细胞培养体系进行体外实验，采用MTT比色分析法及3H-胸腺嘧啶核苷渗入法测定成骨细胞增殖及分化，采用流式细胞仪观察成骨细胞的凋亡；采用原位分子杂交研究了TGF-β1，MMP-9 mRNA的表达。结果：补肾法可促进成骨细胞的增殖及分化；部分保护由肿瘤坏死因子α诱导的成骨细胞凋亡，使成骨细胞转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的表达增强；抑制破骨细胞的骨吸收活性；降低破骨细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA的表达。结论：补肾法具有抑制骨吸收，促进骨形成的双重药效作用，其机理部分是在mRNA水平上，通过对骨细胞的TGF-β1，MMP-9等影响骨代谢的细胞因子及蛋白酶的调控而达到的。     

补肾方对成骨细胞生长因子TGF-β_1 mRNA表达的影响

为探讨补肾方对成骨细胞转化生长因子 - β1 (TGF- β1 ) m RNA表达的影响 ,将体外分离培养的新生 SD大鼠的颅骨成骨细胞加入不同浓度的补肾中药密骨片药液 (10 0～ 10 0 0 0μg· ml- 1 )及阳性对照药物重组碱性成纤维细胞生长因子 (rb FGF)。2 4小时后 ,利用自行制备的地高辛标记的鼠 TGF- β1 c DNA探针进行成骨细胞的核酸分子原位杂交分析 ,以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表 TGF-β1 m RNA的表达水平。结果显示随着密骨片药液浓度的增加 ,成骨细胞内 TGF-β1 m RNA表达明显高于阴性对照组 ;但 5 0 0 0和 10 0 0 μg·m l- 1的密骨片药液组的 TGF- β1 光密度值与 5 ng· ml- 1的 b FGF组比较无明显差异 (P>0 .0 5 )。表明补肾中药密骨片可刺激成骨细胞 TGF-β1 的分泌和合成 ,从而促进骨形成和抑制骨吸收。这可能是该方能有效地防治骨质疏松的疗效机理之一。     

β转化生长因子在骨质疏松症中的作用

在骨的代谢过程中 ,破骨细胞的骨吸收作用和成骨细胞的骨形成作用是一对偶联 ,当这对偶联失去平衡 ,骨吸收增高而骨形成减少时 ,机体骨骼的骨量下降 ,则导致骨质疏松的发生。目前的研究表明 ,在这个过程中有多种细胞因子参与调节 ,其中β转化生长因子 ( TGF-β)是最重要、最基本的调节因子之一。多年来的研究证实 ,β转化生长因子 ( TGF-β)是一族具有多种功能的蛋白多肽 ,是体内存在的一种极其广泛的调节物质 ,广泛存在于动物正常组织细胞以及转化细胞中 ,以骨组织和血小板中的含量最为丰富 ,在骨形成和骨重建过程中起着极其重要的作用 …     

雌激素调控绝经后骨质疏松症骨吸收-骨形成耦联失衡的机制

绝经后骨质疏松症指妇女绝经后卵巢功能衰退、内分泌失调,引起雌激素水平下降,继发甲状旁腺功能亢进,降钙素分泌不足,从而导致骨吸收大于骨形成的代谢性疾病。骨重建过程的主要功能细胞是破骨细胞和成骨细胞,二者经由多种信号通路影响着对方的分化、聚集和功能活动。雌激素作为免疫细胞和骨细胞的共同交叉机制,通过经典激素受体途径,调节T细胞的活化和免疫因子的产生表达,影响成骨细胞、破骨细胞、免疫细胞的活性和功能;通过雌激素受体途径,调节破骨细胞与成骨细胞的增殖、分化、凋亡,参与骨形成与骨吸收的调控。雌激素对骨重建方向的影响,既有正性调节作用,又有负性调节作用。因此,雌激素通过直接调节机制和旁分泌机制,影响成骨细胞、破骨细胞的活性和功能,在绝经后骨质疏松症骨吸收-骨形成耦联失衡的病理过程中发挥着重要的调控作用。本文从骨形成-骨吸收与骨量的关系、雌激素调控骨形成-骨吸收耦联的机制以及雌二醇调控骨代谢的作用机制3个方面进行了阐述。     

巴戟天药物血清对成骨细胞生物学特性的影响

目的:通过观察巴戟天药物血清对体外培养成骨细胞(OB)增殖及其活性的影响,探讨巴戟天壮骨作用的实质。方法:取新生SD大鼠头盖骨提取成骨细胞,给巴戟天药物血清,测定巴戟天对成骨细胞(OB)增殖、分泌碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)及转化生长因子(TGF-β1)的影响。结果:巴戟天醇提物及巴戟天正丁醇部位能显著刺激OB增殖;巴戟天中正丁醇部位低剂量组可促进分化中的OB分泌ALP和OC,并可促进OB表达TGF-β1。结论:巴戟天中正丁醇部位低剂量组能够促进OB分泌碱性磷酸酶、表达TGF-β1mRNA,从而促进骨的生长。     

肾细胞分泌HGF、IGF、TGF-β促进骨细胞生长的实验研究

目的:探索肾细胞分泌细胞因子HGF、IGF、TGF-β对促进骨细胞生长的作用。方法:通过体外培养人成骨细胞h Fo B1.19和人肾小管上皮细胞HK-2,用不同浓度HK-2细胞培养上清处理骨细胞,48h后,收集h Fo B1.19细胞培养上清,采用Elisa法检测其中HGF、IGF、TGF-β的含量。在确定环磷酰胺对h Fo B1.19细胞和HK-2细胞损伤的情况下,用它损伤h Fo B1.19细胞与HK-2细胞共培养,损伤HK-2细胞与h Fo B1.19细胞共培养,采用Elisa法检测共培养上清中HGF、IGF、TGF-β的含量变化。结果:环磷酰胺损伤细胞抑制率为25%、50%、75%时的条件是h Fo B1.19为5u M-24h、10u M-24h、100u M-48h,HK-2细胞为10u M-24h、10u M-48h、50u M-72h。当受损的肾细胞与骨细胞培养后,共培养上清中HGF、IGF、TGF-β的含量分泌减少,差异具有统计学意义(P0.05),且随着肾细胞损伤程度的增加,3个细胞因子分泌相应的减少(P0.05);而骨细胞受损时肾细胞分泌的这3个细胞因子明显增加(P0.05)。结论:肾小管上皮细胞HK-2与成骨细胞h Fo B1.19共培养,肾细胞分泌具有促进细胞增殖的常见生物因子HGF、IGF、TGF-β,促进了骨细胞生长。     

骨发生和形成过程中TGF-β/BMPs的信号传导

骨的胚胎发育及创伤后的修复过程受到许多生长因子的调控,β转化生长因子(transforminggrowth factor-beta,TGF-β)和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是最重要的骨生长因子,在骨及软骨的修复、成骨细胞和破骨细胞的分化增殖过程中发挥着极其重要的作用.随着研究的深入,人们对它们的生物活性及细胞外的作用机制都有了深入的了解,近年来,分子生物学技术得到了突飞猛进的发展,研究者们开始对其在细胞内部的信号传导进行深入的研究,试图阐明这些骨生长因子是通过一个什么样的机制来影响基因的表达及蛋白质的合成的.本文将对近年来在TGF-p/BMPs的信号传导方面的国内外研究进展作一综述,并重点介绍一下在骨的胚胎发育及创伤后的修复过程中TGF-β/BMP的配体、受体及它们细胞内信号传导的重要介质SMADs信号蛋白、核转录因子等所发挥的不同作用.     

巴戟天对成骨细胞生物学特性影响的实验研究

目的:观察巴戟天对体外培养成骨细胞(OB)增殖及其活性的影响,探讨巴戟天补肾壮骨作用的实质.方法:取新生SD大鼠头盖骨提取成骨细胞,进行生长曲线分析,测定巴戟天对细胞增殖及分泌ALP、BGP、TGF-β1的影响.结果:巴戟天能显著刺激OB增殖;巴戟天与密钙息均可促进分化中的OB分泌ALP和骨钙素,促进OB表达TGF-β1.结论:巴戟天具有与密钙息相同的作用,即促进OB分泌ALP和骨钙素,促进OB表达TGF-β1mRNA,从而大量分泌Ⅰ型胶原,以利钙盐沉积.     

细胞因子在骨质疏松症中的作用及中医药干预研究进展

骨质疏松症（OP）是当今世界范围内老年人群中发病率最高的疾病之一。由于世界人口结构的加速变化,对OP的有效防治正日益成为全球关注的健康焦点和临床研究的热点。OP可受遗传、内分泌失调、营养缺乏、不良生活习惯等多种因素影响而发病,由破骨细胞介导的骨吸收与成骨细胞介导的骨形成的偶联平衡被打破致使骨吸收大于骨形成是目前公认的OP发病的主要病理机制。现代医学对OP的研究已经深入到分子免疫学水平,研究发现相关细胞因子在OP的病理机制中扮演着重要角色,通过调节破骨细胞对骨骼的吸收和成骨细胞对骨骼的形成,是调控OP发生和发展的重要转导因子。肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-1β和白细胞介素-6通过刺激破骨形成和抑制成骨细胞功能,在骨破坏中发挥关键作用,而血管内皮生长因子,转化生长因子-β,骨形态发生蛋白,骨保护素等细胞因子可通过增强成骨细胞的分化功能、促进骨形成。目前临床多使用降钙素、雌激素及双磷酸盐等西药进行治疗OP,但长期服用患者的依从性差,胃肠道不良反应明显。中医药治疗OP以其整体调节、价廉及不良反应小等优势占据重要治疗作用,并且随着网络药理学和分子生物学等领域研究的深入,发现中医药可通过干预多种细胞因子表达,进而调节骨稳态,发挥治疗OP的作用。该文阐述相关细胞因子在OP发病中的作用,以及中医药调控相关细胞因子的研究成果,以期为OP的中医药防治提供参考依据。     

中医药对前列腺癌信号通路的调控作用

综述近年来有关中医药对前列腺癌信号通路调控作用的研究进展。中医药可以调控前列腺癌多条信号通路,按其作用机制分类,主要包括对前列腺癌Notch信号通路的调控(如大黄素、姜黄素、人参皂苷Rh2、异荭草素等),对前列腺癌磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT信号通路的调控(如苦参碱、黄芩素、淫羊藿素、肿节风、前列消癥汤、中药复方CFF-1等),对前列腺癌分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)信号通路的调控(如前列消癥汤、槲皮素等),对前列腺癌转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路的调控(如连翘三萜类化合物、姜黄素等),对调控前列腺癌核转录因子(NF-κB)信号通路的调控(如雷公藤红素、冬凌草甲素、姜黄素等)。这些调控可阻滞前列腺癌细胞周期,抑制细胞增殖,增强化疗敏感性,抑制细胞迁移、克隆、侵袭能力,诱导细胞凋亡,从而发挥相应的治疗作用。     

中医药基于转化生长因子-β信号通路在动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化(AS)是由脂质沉积引起的慢性炎症性疾病,其病变部位易引起不稳定斑块脱落,导致血栓形成,最终可能导致心肌梗死和中风等不良心脑血管事件发生。转化生长因子-β(TGF-β)信号通路参与调控多种细胞生长、分化、凋亡等过程,在AS主要发病机制与治疗中发挥着关键作用。近年来,中医药靶向TGF-β信号通路,调控AS内脂质沉积、内皮功能损伤及稳定斑块,为减轻AS患者症状及改善预后提供有效帮助。现将从TGF-β信号通路在AS中的作用机制及中医药靶向调节TGF-β信号通路防治AS方面进行综述,以期为预防和延缓AS及其并发症提供更多的临床应用方向。     

TGF-β通过不同机制对肿瘤侵袭转移影响的研究述评

转化生长因子-β(TGF-β)是一种分泌性多肽,在调控细胞周期,参与调节细胞的增殖、分化、发育和凋亡等方面起着重要作用,它的信号经由受体丝氨酸苏氨酸激酶以及细胞内Smad效应器而发生作用。TGF-β与多种疾病,尤其是肿瘤的发生发展密切相关,在各种细胞类型中,TGF-β抑制增殖,诱导细胞凋亡。TGF-β超家族与其相应的受体,组成一个影响肿瘤发生和发展的信号通路,在血管生成,免疫及细胞外微环境方面起了重要的作用。此外在肿瘤进展的末期,TGF-β经由免疫系统的抑制而促进肿瘤发生,改变上皮肿瘤细胞的分化,促成上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的形成,促进肿瘤的侵袭转移。     

齐墩果酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞转化生长因子β1分泌的实验研究

目的 探讨齐墩果酸(OA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维细胞(CFs)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 采用胰酶消化法及差速贴壁法培养大鼠CFs,建立AngⅡ诱导的大鼠心肌间质纤维化体外模型,采用MTT法检测各组CFs增殖活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组CFs上清液中TGF-β1水平.结果 与对照组比较,AngⅡ组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平明显增加(P＜0.05);60,100μmol/L OA组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平较AngⅡ组明显降低(P＜0.05).结论 OA能抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,其机制可能与抑制TGF-β1分泌有关.     

肾康丸对高糖培养的大鼠系膜细胞TGF-β1及FN的影响

目的:观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞(MC)分泌转化生长因子(TGF-β1,及纤连蛋白(FN)分泌mRNA表达的影响,探讨其防治DN的分子机制。方法:体外培养大鼠MC,将细胞分为6组:低糖组、高糖组、正常血清组、开搏通组、肾康丸高、低剂量组。培养72 h后,采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测高糖对MC分泌TGF-β1和FN的影响;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测高糖对TGF-β1和FN mRNA的表达的影响;同时研究药物血清对上述指标的影响。结果:高糖可以促进MC分泌TGF-β1和FN,并提高MC中TGF-β1和FN mR-NA的表达,肾康丸可以明显抑制上述作用。结论:肾康丸可以通过TGF-β1途径抑制MC基质分泌。     

治疗牙周疾病的草药提取物

WO2006088324-A1一种草药混合的提取物由侧耳属植物Pleurotuseryngii、五加皮和三七根组成。在成骨细胞中可促进护骨素(osteoprotegerin,OPG)的表达,抑制破骨细胞的增殖,也即它通过提高护骨素在成骨细胞中的表达来抑制破骨细胞的生成和活化,从而防止牙槽骨受损、保持牙周韧带细     

加味三根汤含药血清对成骨-破骨细胞共育体系中破骨细胞功能及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的检测成骨-破骨细胞共育体系中应用加味三根汤含药血清后抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)以及白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,探讨加味三根汤的作用机制。方法建立成骨-破骨细胞共育体系,制作SD大鼠含药血清,分为空白对照组,加味三根汤低、中、高剂量组,每组设6个复孔,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系上清液中TRACP及IL-1β、TNF-α的含量。结果经鉴定成功培养成骨细胞和破骨细胞,并建立成骨-破骨细胞共育体系。加味三根汤含药血清中、高剂量组TRACP活性低于空白血清对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。与空白血清对照组比较,加味三根汤中、高剂量组IL-1β含量有所下降,加味三根汤高剂量组TNF-α含量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加味三根汤能够抑制共育体系中破骨细胞的功能,此作用可能是通过抑制IL-1β、TNF-α的分泌而达到。     

柴胡对胰腺纤维化大鼠TIMP-1及TGF-β1增效作用的研究

目的探讨引经药柴胡对胰腺纤维化动物模型TIMP-1及TGF-β1增效作用及部分机制。方法将50只SD大鼠随机分成模型组、假手术组、柴胡组、大黄丹参组和柴胡大黄丹参组。假手术组开腹后直接关腹,其余各组均通过结扎胰胆管联合腹腔注射雨蛙素复制胰腺纤维化模型;用药组均分别于术前、后3天用相应药物灌胃(剂量1.38 g·kg~(-1)·d~(-1)、3.04 g·kg~(-1)·d~(-1)及4.11 g·kg~(-1)·d~(-1))。术后第4天取材。采用ELISA测血清TIMP-1表达,免疫组化测胰腺TGF-β1表达,Real-time PCR和Western blot分别测胰腺TGF-β1mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,用药组均可降低血清TIMP-1含量(P0.01);与柴胡组比较,柴胡大黄丹参组TIMP-1含量降低(P0.01);与大黄丹参组比较,柴胡大黄丹参组TIMP-1含量下降(P0.01)。与模型组比较,用药组TGF-β1 mRNA及蛋白均表达下降(P0.01);与柴胡组比较,柴胡大黄丹参组TGF-β1 mRNA及蛋白表达下降(P0.01),大黄丹参组TGF-β1蛋白表达下降(P0.01);与大黄丹参组比较,柴胡大黄丹参组TGF-β1蛋白表达下降(P0.01)。结论 "下调TGF-β1表达—抑制PSC活化—减少ECM合成"和"下调TGF-β1表达—抑制TIMP分泌—促进ECM降解"可能是柴胡、大黄丹参以及柴胡大黄丹参抗胰腺纤维化的两条作用主线。三者对TGF-β1的调控在ECM合成和降解中发挥双重作用。柴胡对大黄丹参在抗胰腺纤维化方面存在一定的增效作用,主要表现在抑制TIMP分泌和下调TGF-β1蛋白方面。     

TGF-β/Smad信号通路在糖尿病肾病中的作用及中药干预的研究进展北大核心CSCD

糖尿病肾病(diabetic kidney disease)既是糖尿病重要的微血管并发症之一,也是诱发终末期肾病(end stage renal disease)的主要病因,其病理特性主要包括肾小球上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、足细胞凋亡与自噬、肾小球滤过屏障受损。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad途径受多种机制特异性调控,是参与生物体细胞凋亡、增殖、分化等生理活动的经典信号通路。目前,诸多研究发现TGF-β/Smad信号通路在糖尿病肾病发病机制中占据重要地位。中药多组分、多靶点、多途径的特性在治疗糖尿病肾病进程中优势显著,部分中药提取物、中药及中药复方能够通过调控TGF-β/Smad信号通路,改善糖尿病肾病肾损伤。该文通过阐述TGF-β/Smad信号通路关键靶点与糖尿病肾病的联系,明确TGF-β/Smad信号通路在糖尿病肾病中发挥的作用机制,归纳并总结近年来中药通过干预TGF-β/Smad信号通路治疗糖尿病肾病的研究现状,以期为今后糖尿病肾病的药物研发和临床治疗提供一定参考。     

杜仲叶β-谷甾醇对成骨细胞和卵巢颗粒细胞的影响

目的研究杜仲叶β-谷甾醇(β-sitosterol)对骨代谢平衡的调控作用及其机制。方法采用溶剂法、柱层析与重结晶等技术从杜仲叶提取部位Ⅰ中分离得到白色针状晶体B,根据理化性质和光谱分析鉴定化学结构为β-谷甾醇;建立体外大鼠成骨细胞、卵巢颗粒细胞单独培养与混合培养模型,研究杜仲叶β-谷甾醇对骨代谢平衡的调节作用。结果杜仲叶β-谷甾醇可明显促进卵巢颗粒细胞分泌雌二醇E2,有效提高成骨细胞护骨素与破骨细胞分化因子的比值(OPG/ODF),是调节骨代谢平衡的机制之一。结论杜仲叶β-谷甾醇通过提高成骨细胞OPG/ODF比值和刺激卵巢颗粒细胞分化E2,从而促进和加强成骨作用。