mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达

目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势.方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积.结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCR mdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85.杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质.免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱.P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上.SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强.SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P＜0.05).SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P＜0.001).结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中.     

人层粘连蛋白受体调节胃癌细胞多药耐药性的实验研究

目的：探讨相对分子质量为67000的人层粘连蛋白受体（LR）对胃癌细胞多药耐药性（MDR）的调节作用及其机制。方法：应用DNA重组技术构建LR前体蛋白（LRP）的反义RNA表达载体,并借助脂质体将其导入胃癌MDR细胞SGC7901／VCR中。用Western印迹法检测ＬＲ在胃癌细胞中的表达,ＭＴＴ法测定细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞仪测定细胞周期以及阿霉素在细胞内的蓄积和潴留。结果：转染LRP反义RNA表达载体显著降低了LR在SGC7901／VCR细胞中的表达。转染细胞（SGC7901／VCR－anLRP)对长春新碱、阿霉素、5－氟尿嘧啶和顺铂的敏感性明显升高,细胞内蓄积和潴留的阿霉素也明显增多。细胞周期分析表明,SGC7901／VCR－anLRP细胞发生了G1期阻滞,并出现了自发性凋亡。结论：LR可能通过影响药物蓄积和细胞凋亡参与对胃癌细胞MDR的调节。     

三氧化二砷对胃癌耐药细胞P-gP、GST-s表达的抑制

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对胃癌细胞多药耐药细胞的P-糖蛋白(p-glucoprotein,P-gp)、谷胱甘肽s转移酶(glutathione-s transferring enzyme,GST-s)抑制作用.方法 逐渐递增长春新碱(vincristine,VCR)浓度诱导胃癌细胞株SGC7901产生耐药性SGC7901/VCR.MTT法测定诱导前后VCR、5-氟尿嘧啶(fluorouacil,5-Fu)、表阿霉素等抗癌药对肿瘤细胞的杀伤作用,从而明确SGC7901/VCR是否对多种化疗药物产生耐药-即具有多药耐药性;Western blot测定肿瘤细胞内P-gp、GST-s表达.结果 胃癌SGC7901/VCR细胞对VCR、5-Fu、表阿霉素的耐药倍数分别为16.56倍、2.69倍及13.05倍.经As2O3预处理24 h后,VCR、5-Fu、表阿霉素对SGC7901/VCR的耐药倍数显著下降(P<0.05).SGC7901/VCR在静息时细胞内P-gP、GST-s8蛋白表达显著高于SGC7901.而As2O3可使SGC7901/VCR细胞内P-gP、GST-s蛋白表达显著下降.结论 三氧化二砷可以抑制P-gP、GST-s蛋白的表达,从而降低细胞的耐药性.     

胃癌细胞SGC7901/ADR耐药相关蛋白质分子的差异展示

[目的]应用蛋白质组学技术寻找新的胃癌多药耐药相关蛋白分子,探讨胃癌多药耐药机制。[方法]以胃癌细胞SGC7901和阿霉素诱导的耐药胃癌细胞SGC7901/ADR为研究对象,用固相pH梯度等点聚焦二维聚丙烯酰胺电泳技术展示两种细胞表达的全蛋白,凝胶考马斯亮蓝染色,Image Master 2D Melanie5.0凝胶分析软件分析并比较差异表达的蛋白分子。[结果]SGC7901中检测到414个蛋白点,SGC7901/ADR检测到553个蛋白点,两者匹配点386个,差异点71个,其中SGC7901/ADR蛋白质表达明显上调蛋白26个点,明显下调蛋白点45个。[结论]SGC7901/ADR细胞中差异蛋白分子可能与胃癌阿霉素耐药机制有关。     

贝母素乙逆转SGC7901/VCR细胞株多药耐药的初步研究

目的研究贝母素乙对胃癌耐药细胞SGC7901/VCR的逆转及诱导凋亡作用。方法采用四甲基唑蓝法(MTT)检测贝母素乙的细胞毒性及耐药逆转效果;采用流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)蓄积以及细胞凋亡率的变化。结果贝母素乙可剂量依赖性的的抑制亲本细胞系SGC7901和耐药细胞系SGC7901/VCR的细胞增殖,20μg/mL贝母素乙能够显著提高SGC7901/VCR细胞对化疗药(长春新碱、阿霉素、顺铂和5-氟尿嘧啶)的敏感性及细胞内ADR的浓度,贝母素乙和5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合用药后能诱导细胞凋亡,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐增加,处理48h后的凋亡率最高达44.5%。结论贝母素乙能够作为胃癌多药耐药逆转剂逆转MDR,其机制可能与减少药物外排和诱导细胞凋亡相关。     

SGC7901和SGC7901/ADR细胞中S100A6蛋白及mRNA的表达

目的：探讨S100A6与胃癌多药耐药的关系。方法：常规培养人胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞株SGC7901/ADR,在SGC7901/ADR细胞培养基中加入阿霉素（0.375mg/L）维持耐药。取对数生长期的SGC7901和SGC7901/ADR细胞,分别采用免疫细胞化学方法、Westernblot方法和RT-PCR检测S100A6蛋白及mRNA的表达情况。结果：免疫细胞化学染色结果显示S100A6在SGC7901细胞中的阳性染色强度高于SGC7901/ADR细胞;Westernblot结果显示SGC7901细胞中S100A6蛋白的相对表达量（4.356±0.759）高于SGC7901/ADR细胞的（2.243±0.089）（t=4.788,P=0.039）;RT-PCR结果显示SGC7901细胞中S100A6mRNA的相对表达量（0.659±0.017）与SGC7901/ADR的（0.582±0.060）相比,差异无统计学意义（t=2.125,P=0.150）。结论：S100A6蛋白在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的差异性表达可能与细胞多药耐药有关;这种差异表达是翻译后事件。     

NF-κB活化及livin,survivin表达上调与胃癌细胞耐药的关系

目的:探讨核转录调节因子NF-κB活性及凋亡抑制蛋白livin, survivin的表达与胃癌细胞耐药的关系.方法:MTT法检测化疗药物长春新碱(VCR)对胃癌细胞SGC7901及耐药细胞SGC7901/VCR的生长抑制作用;流式细胞仪检测VCR作用后细胞的凋亡率;ELISA法检测NF-κB核转录活性;Western blot检测livin, survivin蛋白表达.结果:化疗药VCR对SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用较SGC7901细胞显著降低,VCR作用SGC7901/VCR细胞的凋亡率减少;SGC7901/VCR细胞中NF-KB核转录活性增强(P<0.01);livin, survivin在SGC7901/VCR细胞中表达上调(P<0.05).结论:胃癌细胞SGC7901在化疗药VCR长期诱导后产生的继发耐药可能与NF-κB活化及livin, survivin表达上调有关;NF-κB活化是livin, survivin表达上调可能的调控因素.     

Pokemon基因表达与胃癌耐药性的关系

目的 探讨okemon基因表达与胃癌细胞药敏性及耐药基因的关系.方法 取60例胃癌组织和癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化技术检测组织中pokemon蛋白及耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、生存素(survivin)的表达,并分析pokemon蛋白与其他4种蛋白的关系.采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法检测5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、奥沙利铂(L-OHP)对胃癌细胞株SGC7901、胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR、胃上皮细胞株GES-1的抑制作用;qPCR及蛋白质印迹法检测上述3种细胞株中pokemon和耐药基因的表达.合成针对pokemon的siRNA并转染SGC7901/ADR细胞,检测转染前后SGC7901/ADR细胞的化疗药敏性及耐药基因的变化.结果 胃癌组织中pokemon、P-gp、MRP1、LRP、survivin蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织(P＜0.05);pokemon蛋白表达与P-gp、survivin蛋白表达间存在正相关关系(r=0.385 2,P=0.002;r=0.342 4,P=0.007).Pokemon、P-gp、MRP1、survivin蛋白在SGC7901/ADR细胞株中的表达高于细胞株SGC7901及GES-1;SGC7901/ADR细胞株的耐药性最强,SGC7901次之,GES-1最弱(P＜0.01).Pokemon-siRNA转染SGC7901/ADR细胞后细胞中pokemon mRNA的表达明显受到抑制;转染后化疗药物对细胞的抑制能力增强,P-gp、survivin表达减弱(P＜0.05).结论 Pokemon与P-gp、survivin通过相互调控而促进胃癌耐药性的形成.Pokemon可能成为胃癌靶向治疗的候选基因.     

人胃癌细胞中HSP27高表达与长春新碱耐药的关系

目的探讨长春新碱耐药的人类胃癌细胞株SGC7901/VCR发生多药耐受(MDR)的机制。方法采用比较蛋白质组学方法、反义寡核苷酸(ASOs)抑制法、质谱分析(MS)和免疫共沉淀(IP)法,对长春新碱耐药的SGC7901/VCR细胞系及其母细胞系SGC7901的总蛋白提取物进行测定,分析热休克蛋白27(HSP27)与MDR的关系,并对HSP27的相互作用组图进行综合研究。结果 HSP27作为一种与MDR相关的蛋白得到鉴定,并鉴定出25种HSP27相互作用蛋白。HSP27ASOs对HSP27表达的抑制可加强SGC7901/VCR对长春新碱和阿霉素的化疗敏感性。结论胃癌中HSP27与长春新碱耐受机制相关。     

胃癌耐药细胞系传统型蛋白激酶C的表达及活性

目的 观察传统型蛋白激酶C（cPKCs）在胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR1.0、耐药亚系SGC7901／VCR0.3,7901/0.7及药敏细胞系SGC7901表达及活性的变化,以及对细胞内药物浓度的影响。方法 用免疫荧光化学及蛋白印迹方法观察传统型蛋白激酶C在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系的表达;竞争蛋白结合法测定PKC的活性;应用流式细胞仪观察细胞内药物浓度的变化。结果 PKCα,PKCβⅠ,PKCβⅡ及PKCγ在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系均有表达,PKCα在耐药细胞表达呈强阳性,在药敏细胞表达呈阳性;PCKβⅠ及PKCβⅡ在耐药细胞及药敏细胞表达均为阳性;PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均为强阳性。免疫蛋白印迹实验证实,随耐药指数的增加,PKCα表达呈逐渐增高的趋势,薄层扫描蛋白印迹带的吸光度（A）分别为9584.17,9421.06,8534.64,8088.79,而PKCβⅠ、PKCβⅡ及PKCγ在耐药细胞系、耐药亚系及其药敏细胞系表达无明显变化。PKC活性检测结果提示,随耐药指数的增加,PKC活性呈逐渐增高的趋势,以细胞质及细胞核的PKC活性增高为主。结论 传统型蛋白激酶C在维持胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR的多药耐药中起重要作用且具有同工酶特异性。     

Upregulation of drug sensitivity of multidrug-resistant SGC79 01/VCR human gastric cancer cells by bax gene transduction

Objective To investigate the role of bax in a vincristine （VCR）-induced multidrug-resi stant （MDR） human gastric cancer cell line, SGC7901/VCR, in which the Bax prot ein expression level was significantly lower compared with that in parent cells .Methods A bax eukaryotic expression vector was constructed and transfected into SGC7901/ VCR cells by lipofectamine, and resistant clones were selected by G418. Western blotting detected Bax expression in transfectants. Tetrazolium blue (MTT) assa y evaluated the differences in drug sensitivity and cell cycle changes of transf ectants were analyzed using flowcytometry (FCM). Results The bax eukaryotic expression vector was constructed and transfected into SGC790 1/VCR cells. Through G418 selection, resistant clones were obtained. Western b lotting demonstrated that the expression of Bax protein was markedly increased i n bax transduced cells. These cells were more sensitive to adriamycin (ADR) and VCR than mock vector transducted cells. Moreover, bax transfection enhanced AD R-induced apoptosis and VCR-induced G(2)/M phase arrest of SGC7901/VCR cells. Conclusion Bax was involved in the MDR of SGC7901/VCR cells.     

TRF2 siRNA抑制多药耐药胃癌细胞Rapl表达

目的应用RNA干扰技术抑制多药耐药衍生胃癌细胞系TRF2表达,观察其对Rapl表达的影响。方法根据pSilencer3．1-H1载体要求构建TRF2siRNA真核表达载体,分别转染SGC7901／ADR和SGC7901／VCR细胞,免疫荧光技术和Westernblot方法检测Rapl表达。结果成功构建TRF2 siRNA真核表达载体能显著抑制耐药细胞TRF2表达,siRNA转染细胞中Rapl表达明显降低。结论TRF2调控Rapl表达。     

Rap1与胃癌多药耐药的相关性

目的探讨Rap1与胃癌多药耐药的相关性。方法采用免疫荧光技术和Westernblot方法检测胃癌细胞SGC7901、多药耐药胃癌细胞SGC7901／VCR和SGC7901／ADR中Rapl的表达。结果胃癌细胞SGC7901、多药耐药胃癌细胞SGC7901／VCR和SGC7901／ADR胞核和胞浆均有Rap1阳性染色,多药耐药胃癌细胞中Rap1表达明显高于亲本细胞SGC7901。结论Rap1与胃癌多药耐药相关。     

Reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in SGC7901/VCR cells by PPARγ activation by troglitazone

Over-expression of P-glycoprotein(P-gp),an ATP-dependent drug efflux pump,represents one of the major mechanisms that contribute to multidrug resistance(MDR) in cancer cells.This study examined the effects of troglitazone,a ligand of peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARγ),on P-gp-mediated MDR in SGC7901/VCR cells(a vincristine-resistant human gastric cancer cell line).The expression of P-gp was detected by RT-PCR and Western blotting,respectively.The SGC7901/VCR cells were treated with 0.1 ...     

人bax真核表达载体的构建及其在人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR中的表达

目的：构建人ｂａｘ真核表达载体,经脂质体导入人胃癌耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,并检测ｂａｘ基因在转导株的表达．方法：采用分子克隆技术将ｂａｘ基因插入真核表达载体ｐＢＫ－ＣＭＶ的多克隆位点之间,以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,Ｇ４１８筛选克隆细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｂａｘ基因的表达．结果：成功地构建了重组质粒ｐＢＫ－ｂａｘ,将之转入细胞后,经Ｇ４１８筛选３０ｄ获得了稳定的细胞克隆,即ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ－ｂａｘｃｅｌｓ．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实了ｂａｘ基因转导株具有明显的Ｂａｘ蛋白表达．结论：ｂａｘ真核表达载体的构建,为胃癌耐药的临床治疗打下了基础．     

TSG101 siRNA表达载体的构建及其作用研究

目的构建TSG101（tumor susceptibility gene 101，TSG101）小于扰RNA（TSG101 siRNA）的真核表达载体并鉴定，初步研究其与胃癌多药耐药的相关性。方法根据小于扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列，应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体；将TSG101 siRNA的真核表达载体转染胃癌长春新碱（VCR）耐药细胞SGC7901／VCR，通过Western blot鉴定TSG101 siRNA的抑制效率；以MTT实验检测细胞生长曲线和对VCR、阿霉素（ADM）的药物敏感性。结果所构建的载体经酶切后释放出预期大小的片断并经测序证实；TSG101 siRNA真核表达载体瞬时转染胃癌耐药细胞SGC7901／VCR后，发现TSG101的表达被显著抑制；细胞生长减慢，且对VCR、ADR的敏感性增加。结论成功构建了TSG101 siRNA的真核表达载体，并初步提示其参与了胃癌的多药耐药，为下一步工作奠定了基础。     

苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性实验研究

目的 研究苦参碱(Matrine)对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药的逆转效应及其机制.方法 以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,MTT法研究苦参碱对体外培养的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR细胞增殖的影响及逆转效应、用间接免疫荧光法经流式细胞仪检测MRP的表达并分析其机制.结果 MTT法显示苦参碱在0.5、1.0、2.0 mg·mL-1浓度下处理SGC7901/VCR细胞72 h后,其生长抑制率依次为10%、15%、32%,且可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药,呈剂量依赖性,逆转倍数分别为9.4、13.4、24.5倍.0.5 mg·mL-1苦参碱与SGC7901/VCR细胞共同培养24 h后,SGC7901/VCR细胞的MRP表达从(36.00±4.32)%降低至(25.00±3.85)%(P<0.01).结论 苦参碱可以体外逆转人胃癌细胞多药耐药细胞SGC7901/VCR的耐药性,其逆转机制与降低MRP的表达有关.