慢性乙型肝炎病毒感染树鼩Kupffer细胞TLR2和TLR4的表达及其意义

目的探索慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染树鼩Kupffer细胞Toll样受体(TLR)家族中的TLR2和TLR4在mRNA水平的表达情况及其对Kupffer细胞功能的影响。方法树鼩分为确定慢性感染HBV的树鼩、疑似慢性感染HBV的树鼩和未接种HBV的正常对照树鼩。全部动物定期抽血和进行肝活检手术,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析血清和肝组织的HBV DNA水平;对手术切取的树鼩肝组织进行Kupffer细胞的分离、纯化和原代培养,采用qRT-PCR检测TLR2、TLR4以及TNF-α的mRNA表达水平;采用迁移实验及溶酶体荧光探针等方法分析TLR2和TLR4对Kupffer细胞迁移能力及溶酶体数量的影响。结果确定慢性感染HBV的树鼩TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达水平均低于疑似慢性感染HBV的树鼩和未接种HBV的正常对照树鼩(P0.05),表达水平均与动物肝组织的HBV DNA拷贝数呈负相关(P0.05),与Kupffer细胞的细胞迁移数、溶酶体密度及TNF-αmRNA表达水平呈正相关(P0.05)。结论 Kupffer细胞中的TLR2和TLR4可能通过影响Kupffer细胞功能而参与树鼩HBV感染后肝脏病变的慢性化发展过程。     

树鼩、熊猴感染人乙型肝炎病毒肝细胞内感染指征的研究

目的 对树鼩、熊猴感染人乙型肝炎病毒(HHBV)后对肝细胞病变进行动态观察。方法 10只成年树鼩，28只熊猴接种含人乙型肝炎病毒(HBV)血清后，定期肝活检，采用HE染色、免疫组化、原位杂交对实验动物肝组织进行研究分析。结果 80％树鼩感染HHBV后，通过免疫组化在肝组织内可找到乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，50％通过原位杂交可检测到HBV DNA。有25％熊猴的肝组织内可检测到HBsAg，但信号较弱，而肝组织内未发现HBV DNA。结论 树鼩感染HHBV后，肝细胞内出现病理改变，适用于对人乙型肝炎的研有．     

HBV颗粒的纯化及生物学活性鉴定

目的优化纯化HBV患者血清中HBV颗粒的技术方法。方法在蔗糖介质中,分别以100 000 g和70 000 g进行不连续蔗糖梯度(60%,45%,35%,25%,15%)离心5 h,离心后,分段吸取6份收集液,PCR荧光定量检测各组分HBV滴度;收集前5份收集液进行超滤,去蔗糖,PCR荧光定量检测HBV超滤液;电镜观察70 000g纯化后的HBV超微形态;70000 g纯化后的HBV颗粒感染树鼩肝细胞,检验70 000 g纯化后的HBV感染活性。结果100 000 g离心造成大量HBV在离心过程中损失,收获率只有21%,70 000g离心不仅降低了离心中的病毒损失,而且可有效对HBV和血清进行分离,收获率达到78%以上,较100 000g还提高3.7倍多。电镜可观察到纯化后病毒液中有大量的病毒颗粒;纯化后的HBV颗粒感染活性良好,可有效感染原代树鼩肝细胞。结论70 000 g不连续蔗糖梯度离心可有效分离纯化HBV病毒,较100 000 g收获率明显提高,纯化后的HBV不但具有典型的HBV特征,还具有良好的生物学感染活性。     

人类乙肝病毒体外感染树鼩肝原代细胞的研究

目的 为进一步研究人类乙肝病毒(HBV)提供接近自然感染状态的理想细胞模型.方法 体外二步灌流法分离树鼩原代肝细胞,纯化后的乙肝患者血清感染上述肝细胞,Southern blot和Noahem blot检测感染后细胞内的DNA和RNA,ELISA方法 检测细胞上清的HBsAg,免疫组化检测细胞内HBsAg的表达.结果 可检测出肝细胞内cccDNA(共价闭合环状DNA)、pgRNA(前基因组RNA)和sgRNA(亚基因组mRNA),感染后第7天,信号开始增强,持续到实验结束的第14天.细胞上清中HBsAg自第1天到第5天S/CO值逐渐下降,随后S/CO值逐渐升高.结论 HBV可在原代树鼩肝细胞中复制和表达.     

树鼩、熊猴感染人乙型肝炎病毒血清指征的研究

目的：验证树Qu、熊猴感染人乙型肝炎（乙肝）病毒（HHBV）血清感染指征。方法：用含HBV的人血清接种给233只树Qu，28只熊猕，每周定期采血，用不同公司生产的ELISA试剂检测接种后的动物血清感染指标。结果：树Qu感染HHBV后，90．0％呈急性感染，44．4％为可持续1年以上的慢性感染，33．3％持续2年2个月。熊猴感染HBV后，血清HBV标志物呈一过性。结论：熊猴对HHBV并不敏感，而树Qu对HHBV高度敏感，有望成为HHBV的动物模型。     

树鼩慢性感染乙肝病毒过程中枯否细胞变化的意义*

 目的：探索枯否细胞在树鼩感染乙肝病毒（HBV）慢性化过程中的意义。方法：树鼩分为3组：A组6只,为前期实验已确定慢性感染HBV的树鼩;B组3只,为疑似慢性感染HBV的树鼩;C组4只,为未接种HBV的正常对照树鼩。全部动物定期抽血和进行肝活检手术;对手术切取的树鼩肝组织进行枯否细胞的分离、纯化和原代培养,采用流式细胞术、细胞免疫组化、溶酶体荧光探针及实时荧光定量RT-PCR等方法检测CD163+细胞数量、溶酶体数量、溶菌酶的表达及肿瘤坏死因子α（TNF-α） mRNA表达水平。结果：（1）慢性感染HBV的树鼩肝脏枯否细胞比例及肝组织内CD163+细胞数量显著高于其它2组（均P<0.05）;（2）慢性感染HBV的树鼩肝脏枯否细胞的溶酶体荧光强度、肝组织内溶菌酶阳性细胞计数和TNF-α mRNA的表达水平均显著低于其它2组（均P<0.05）。结论：枯否细胞在宿主感染HBV的慢性化过程中可能起一定的调节作用。     

隐匿性HBV感染致慢加急重型肝炎1例

乙肝病毒(HBV)是一种嗜肝病毒,血清标志物(HBV-M)检测是乙型肝炎感染的重要依据.隐匿性HBV感染是血清HBsAg阴性,但血清和(或)肝组织中HBV DNA阳性,可有血清抗-HBs、抗-HBe和(或)抗-HBc阳性.可表现为无症状携带者,其临床症状表现缺如,隐匿性发展,可发生肝炎后肝硬化及肝细胞癌.如果诱因出现,体内病毒可大量复制,激活体内的免疫功能,HbsAg阳转,可以出现急性重型肝炎的表现,易被误诊为急性重肝炎诊断,不能及时诊断,失去治疗时机,延误治疗.     

乙型肝炎病毒感染小鼠肝组织视黄醇结合蛋白4表达降低

目的观察乙型肝炎病毒(HBV)感染对小鼠体内视黄醇结合蛋白4(RBP4)表达的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为正常组,HBV感染组(尾静脉高压注射rAAV8-1.3HBV病毒载体1×10~(11) vg/只),HBV感染+拉米夫定喂养组(拉米夫定150 mg/kg),分别于6周、12周和18周麻醉后处死6只小鼠。荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清HBV DNA含量;全自动生化仪以及ELISA检测血清相关生化指标以及RBP4含量;ELISA检测肝脏组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白细胞介素6(IL-6)炎性因子水平;RT-qPCR、Western blot分别检测肝脏组织中RBP4 mRNA以及蛋白的表达。结果 HBV感染组小鼠血清中HbsAg均保持较高水平且阳性率稳定在80%以上,小鼠血清HBV DNA含量显著高于对照组(P0.05),HBV感染小鼠模型构建成功;感染组小鼠肝脏组织中TNF-α以及IL-6水平均随时间的增加而升高,其中第12周、18周时要显著高于正常组(P0.05);此外,感染组小鼠肝脏组织中RBP4蛋白以及RBP4 mRNA的表达水平均随感染时间的增加而下降,其水平在第6周、12周、18周均要低于正常组以及拉米夫定喂养组(P0.05)。结论 HBV感染小鼠后能够显著降低小鼠肝脏组织中视黄醇结合蛋白4的表达水平。     

HSV-1感染单核巨噬细胞及其影响因素的研究

用HSV-1接种人单核细胞传代系U937细胞和小鼠腹腔巨噬细胞,并在接种前后以细菌脂多糖(LPS)或/和卡介苗(BCG)处理细胞,通过病毒滴定、间接荧光抗体试验检测病毒抗原及PCR技术检测病毒基因,初步研究了HSV-1感染单核巨噬细胞的特点及其影响因素。结果如下。 U937细胞接种HSV-1的剂量为1.0 TCID_(50)/细胞,在2周内降至测不出水平。病毒抗原阳性细胞于感染后第4天达高峰,为47.6％,随即迅速下降,2周内降至10％以下,3周后几乎全部消失。病毒DNA在感染2周后即不能从细胞中检出。感染过程中始终未见典型的CPE,但MTT比色分析法显示感染后1～2周细胞增殖受到明显抑制。2周后细胞增殖开始恢复。将细胞     

基于PCR的乙型肝炎病毒体外中和试验

目的　建立一种新的基于PCR的乙型肝炎病毒(HBV)体外中和试验,将其用于HBV中和抗体的检测,为新型HBV疫苗的评估提供一种体外模型。方法　待检免疫血清与已知HBV作用后接种HepG2 细胞,吸附、洗涤、培养后提取细胞核酸,PCR检测HBVDNA以判断中和试验结果。结果　免疫血清与10倍最小PCR感染剂量的HBV作用后接种细胞,培养2 4h后检测表明,其中和滴度高,结果稳定。市售疫苗免疫小鼠血清、多数抗HBsELISA阳性人血清和2份含HBVS区的新型候选疫苗的免疫血清中和试验阳性,而正常小鼠血清、戊型肝炎病毒重组蛋白免疫血清和抗 HBs阴性人血清中和试验阴性。结论　基于PCR的HBV体外中和试验简单、快速、经济,具有良好的特异性和敏感性,可以用于新型HBV疫苗免疫效果的评估。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.