外周循环血微小RNA表达水平与冠心病发病风险的关联分析

目的探讨微小RNA-133a(miRNA-133a)、miRNA-208a和miRNA-499a在冠心病患者外周循环血中的表达水平及其临床意义。方法选择冠心病患者290例,冠状动脉阴性对照组110例,收集两组样本临床资料;运用实时定量聚合酶链反应检测样本血浆中miRNA-133a、miRNA-208a和miRNA-499a表达水平,并分析其表达差异。结果 (1)与冠状动脉阴性对照组比较,冠心病组miRNA-133a[0.62(0.32-0.92)比0.39(0.21-0.72),Z=8.80]、miRNA-208a[5.85(2.31-9.78)比5.06(2.17-9.13),Z=2.32]和miRNA-499a[5.07(2.08-9.54)比3.12(1.96-5.03),Z=10.08]表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(均为P0.01);(2)根据Gensini评分将所有研究对象分为4组,各组之间miRNA-133a[0.36(0.21-0.66)比0.48(0.36-0.85)比0.60(0.42-0.87)比0.70(0.56-0.92),H=64.84]、miRNA-208a[4.99(2.17-6.73)比5.16(3.56-8.04)比5.85(4.31-8.63)比6.18(4.84-9.78),H=21.54]和miRNA-499a[2.94(1.96-4.93)比3.55(2.02-6.63)比4.51(2.38-7.54)比6.24(4.08-9.54),H=89.70]表达水平差异均有统计学意义(均为P0.01),且表达水平变化与Gensini评分即冠状动脉粥样硬化狭窄程度呈正相关(miRNA-133a:r=0.343,P0.01;miRNA-208a:r=0.395,P0.01;miRNA-499a:r=0.410,P0.01)。结论冠心病患者外周循环血中miRNA-133a、miRNA-208a和miRNA-499a表达水平较冠状动脉阴性对照者有显著差异,且表达水平变化与Gensini评分即冠状动脉粥样硬化狭窄程度呈正相关。     

MicroRNAs在急性心肌梗死早期诊断中的评价

目的 用荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测急性心肌梗死(AMI)患者血浆中的MicroRNAs水平,评价其在AMI早期诊断中的价值. 方法 选取AMI患者24例,对照组20例为研究对象,分别在症状发作后3h、6h、12 h、24 h、48 h、72 h检测血浆中microRNA-1、microRNA-133a、microRNA-208a、microRNA-499的水平. 结果 miRNA-1在缺血性胸痛发作后3 h血浆水平明显升高达到高峰,72 h基本降至正常;miRNA-133a在6h后血浆水平明显升高,12h达到高峰,48 h降至正常;miRNA-1和miRNA-133a表达水平与心肌肌钙蛋白I(cTnI)相关,miRNA-1的峰值出现在cTnI之前,miRNA-133a峰值与cTnI发生在同一时间. 结论 循环中升高的miRNA-1、miRNA-133a可能是诊断早期AMI的一种有潜力的、新型的生物标志物.     

下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响

目的探讨下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响。方法选取37例下肢动脉粥样硬化闭塞症(AS)患者外周血为AS组。另外选取同期37名健康体检者外周血为对照组。新鲜血管组织取自1例下肢AS患者截肢远端血管为实验组,以其截肢近端血管为对照。实时荧光定量PCR检测新鲜血管组织,分离得到的外周血中单核细胞和微泡中miRNA-199a-3p表达水平。以人单核细胞TTHP-1为载体,miRNA-199a-3p mimics组和miRNA-199a-3p inhibitor组分别转染miRNA-199a-3p mimics和miRNA-199a-3p inhibitor,同时设置空白对照组。实时荧光定量PCR检测各组miRNA-199a-3p、趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、调解活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)和Fractalkine表达水平。结果下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。AS组外周血单核细胞和微泡中miRNA-199a-3p表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。与空白对照组相比,miRNA-199a-3p mimics组miRNA-199a-3p表达水平显著上升(P<0.05),miRNA-199a-3p inhibitor组miRNA-199a-3p表达水平显著下降(P<0.05)。与空白对照组相比,miRNA-199a-3p mimics组MCP-1、RANTES和Fractalkine的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),miRNA-199a-3p inhibitor组MCP-1、RANTES和Fractalkine的mRNA表达水平显著上升(P<0.05)。结论动脉粥样硬化斑块内巨噬细胞高表达miRNA-199a-3p,并以微泡形式分泌到外周血中,抑制单核细胞中MCP-1、RANTES和Fractalkine等趋化因子的表达,是一种动脉粥样硬化保护因素。     

冠状动脉旁路移植术后miR-1、miR-133a、miR-208a、miR-499与炎性因子和高血压病史的相关性

目的:观察行冠状动脉旁路移植术(CABG)的患者血浆中microRNAs(miRs)的变化及其与炎性因子的相关性,并初步探讨高血压病史对其的影响。方法:收集心外科住院的26例急性冠脉综合征(ACS)患者,其中18例有高血压病史,采集所有患者术前24 h和术后24 h的外周静脉血6 ml,测定miRNAs和炎性因子水平。结果:①miR-1、miR-208a、miR-499分别与白细胞介素-6(IL-6)正相关;miR-1、miR-133a、miR-499分别与心肌肌钙蛋白T(cTnT)正相关,miR-1、miR-133a与肌酸激酶(CK)、肌酸激酶MM同工酶(CK-MM)正相关;手术前后,△miR-1、△miR-133a、△miR-499三者间正相关,与△miR-208a不存在相关性;△miR-208a与△IL-6相关(r=0.545,P=0.004);②术后血浆miR-1、miR-133a、miR-208a、miR-499、IL-6、cTnT、CK、CK-MB、CK-MM的水平较术前显著升高(P0.05);③非高血压病史组△miR-133a和△miR-499高于高血压病史组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:①CABG术后心肌再灌注损伤及继发炎症伴随miR-1、miR-133a、miR-208a、miR-499水平升高,与cTnT、CK、CK-MM有一定的相关性,其中炎性因子IL-6的变化与miR-208a的变化有关;②高血压病史对行CABG术患者的miR-133a、miR-499的表达有一定影响。     

小动脉闭塞性卒中患者血浆微小RNA表达谱

目的 探讨小动脉闭塞性卒中(small artery occlusion,SAO)患者与同期健康体检者血浆微小RNA(microRNAs,miRNAs)表达谱差异.方法 选取TOAST分型为小动脉闭塞性卒中患者8例,以8例同期健康体检者作为对照组,应用高通量测序技术检测血浆miRNAs表达谱,筛选出差异表达的miRNAs,采用实时荧光定量聚合酶链反应验证结果,并进行靶基因预测和生物信息学分析.结果 miRNAs差异化分析显示,SAO组miRNA-127、miRNA-99b-5p和miRNA-320等19个miRNAs 较对照组表达显著性上调(P均＜0.01),而miRNA-451a等5个miRNAs较对照组表达显著性下调(P均＜0.01).实时荧光定量聚合酶链反应对其中miRNA-127、miRNA-99b-5p、miRNA-320和miRNA-451a的验证结果与高通量测序结果一致.生物信息学分析显示,差异化表达的miRNAs调控的靶基因主要与细胞增殖、黏附、系统发育、高分子代谢等生物学功能相关.结论 SAO患者与健康体检者血浆miRNAs表达谱存在显著性差异,提示miRNAs可能通过靶基因在SAO的发病过程中发挥调节作用.     

急性ST段抬高型心肌梗死患者血浆微小核糖核酸-208a水平对并发急性心力衰竭的预测价值

目的:探讨血清微小核糖核酸-208a(miR-208a)表达水平对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者并发急性心力衰竭的预测关系。方法:连续性收集2018年1月至2019年6月,就诊于我科的152例急性STEMI患者纳入病例组,并随机选择同期在我院行健康体检的志愿者60例为对照组。根据发病48 h内是否发生急性心力衰竭(AHF)将病例组分为AHF亚组和非AHF亚组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测血浆miR-208a的相对表达水平。结果:病例组血浆miR-208a相对表达水平显著高于对照组(Z=10.919,P=0.000)。AHF亚组血浆miR-208a相对表达水平显著高于非AHF亚组(Z=9.573,P=0.000)。Pearson相关性分析结果显示,病例组患者血浆miR-208a相对表达水平与BNP、hsCRP和cTnI均呈正相关关系(r=0.612,P=0.000;r=0.447,P=0.000;r=0.378,P=0.000)。二分类Logistic回归分析结果显示血浆miR-208a相对表达水平是急性STEMI患者并发AHF的危险因素(OR=2.118,95%CI 1.127~3.982,P=0.007)。血浆miR-208a预测AHF的AUC为0.896(0.844,0.948),cut-off值为32.00,对应的敏感性和特异性分别为88.4%和83.3%。结论:急性STEMI患者血浆miR-208a表达水平显著升高,且可能是并发AHF的危险因素。     

血清miR-499及SOX6的表达与急性心肌梗死患者预后的关系及其预测价值

目的 探讨血清miR-499及SOX6表达对急性心肌梗死(AMI)患者预后的评估价值.方法 选取2016年2月～2019年10月在石家庄人民医院心内科确诊的AMI患者132例,收集患者一般临床资料,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测患者血清miR-499及SOX6的表达水平.根据患者随访期间是否发生主要不...     

微小RNA对心房颤动的影响

近年来研究表明微小RNA(miRNA)在心房颤动中的调控作用成为研究热点.现有研究表明miRNA-1、miRNA-328、miRNA-499、miRNA-208参与心房电重构,miRNA-26、miRNA-133、miRNA-21、miRNA-29参与心房结构重构,miRNA-30、miRNA-206参与自主神经重构....     

血浆miRNA-21和miRNA-126与心肌缺血再灌注损伤的相关性研究

目的观察血浆微小核糖核酸-21(miRNA-21)、微小核糖核酸-126(miRNA-126)在急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术前后表达水平的变化,探讨二者与心肌缺血再灌注损伤的关系。方法选取2017年6月至2018年12月山西白求恩医院住院治疗的STEMI患者100例,根据冠状动脉造影梗死相关血管心肌梗死溶栓治疗试验血流分级情况分为血管自发再通(SR)组(39例)和非SR组(61例),收集患者临床资料,比较两组患者PCI术前、术后心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、miRNA-21及miRNA-126的表达水平,分析miRNA-21、miRNA-126与cTnI、CK-MB及hs-CRP的相关性。结果两组患者一般临床资料比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。两组患者PCI术前cTnI、CK-MB及hs-CRP表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);非SR组术后cTnI[(58.43±39.11)ng/ml比(39.66±21.19)ng/ml]、CK-MB[(138.94±69.77)ng/ml比(92.78±37.01)ng/ml]、hs-CRP[(21.33±10.74)mg/L比(16.50±7.64)mg/L]表达水平较SR组更高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组患者PCI术前miRNA-21和miRNA-126的表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);非SR组患者PCI术后miRNA-21[(1.98±0.46)比(1.68±0.22),P<0.001]、miRNA-126[(2.54±0.56)比(1.63±0.22),P<0.001]表达水平较SR组更高,差异均有统计学意义。Pearson相关性分析显示,miRNA-21表达水平与cTnI(r=0.557,P<0.001)、CK-MB(r=0.625,P<0.001)、hs-CRP(r=0.606,P=0.001)呈正相关,miRNA-126表达水平与cTnI(r=0.543,P=0.004)、CK-MB(r=0.669,P<0.001)、hs-CRP(r=0.558,P=0.002)均呈正相关。结论再灌注损伤时miRNA-21和miRNA-126的表达水平上调,二者与心肌损伤程度呈正相关。     

CASC2和miRNA-21在STEAMI病人急诊PCI前后外周血中的表达变化

目的观察急性ST段抬高型心肌梗死(STEAMI)病人行急诊经皮冠状动脉介入(PCI)治疗前后外周血中长链非编码RNA癌易感性候选基因2(CASC2)及微小RNA-21(miRNA-21)的表达及变化,探讨CASC2及miRNA-21在STEAMI中的临床价值。方法选择2016年12月—2017年5月青岛大学附属威海市中心医院心内科住院行急诊PCI的STEAMI病人55例为STEAMI组,排除STEAMI的32名健康者为健康对照组。根据行PCI后是否发生缺血再灌注损伤(MIRI)将STEAMI组分为MIRI组(13例)及非MIRI组(42例),采用实时定量荧光聚合酶链反应技术检测各组外周静脉血中CASC2及miRNA-21表达水平,分析CASC2、miRNA-21与心肌肌钙蛋白T(cTnT)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)的相关性。结果 STEAMI组PCI术前及术后CASC2、miRNA-21表达水平均明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。MIRI组CASC2及miRNA-21表达水平均低于非MIRI病人,差异均有统计学意义(P <0.05)。STEAMI病人PCI术后外周血CASC2、miRNA-21与cTnT显著相关(r=0.35,P=0.04;r=0.45,P=0.03),与hs-CRP无相关性(r=0.12,P=0.32;r=0.22,P=0.45);STEAMI病人PCI术后外周血CASC2与miRNA-21呈正相关(r=0.33,P=0.04)。结论 CASC2与miRNA-21可能共同参与了STEAMI心肌MIRI,可预测心肌MIRI。     

microRNA与心脏干细胞治疗

随着心血管病发病率的逐年增高,心脏干细胞(CSCs)治疗心血管病的研究已成为新的潮流。现已证实,microRNA(miRNA)是心血管的发育、病理生理过程和疾病发生中一类重要的调节因子。人们对心脏特异性miRNAs的研究已取得一定进展,如miR-1、miR-133、miR-208、miR-21、miR-499、miR-155、miR-146b及miR-126等在与CSCs协同治疗心血管病中起着不可或缺的作用。在此,本文对miRNAs在CSCs治疗中所起的作用做一综述。     

Kinetics of plasma microRNA-499 expression in acute myocardial infarction

Background

MicroRNA (miRNA) is reported to be present in human plasma and has been increasingly suggested as a biomarker for diseases. Our study aimed to investigate the kinetics of cardiac-specific microR-499 (miR-499) in acute myocardial infarction (AMI).

Methods

Circulating concentrations of cardiac enriched miR-499 were measured by quantitative PCR in 73 patients with acute coronary syndrome (ACS), including 53 with AMI and 20 with unstable angina (UA). Thirty healthy subjects were used as controls. Plasma samples in AMI group were obtained immediately after admission and at 12 h, 24 h, 3 d and 7 d after onset of symptoms. Plasma samples in UA and healthy control groups were collected immediately after admission. The severity and extent of coronary stenotic lesions were evaluated on the basis of coronary angiography using Gensini score.

Results

miR-499 expression levels were significantly higher in the 53 AMI patients than in the 20 UA patients and 30 healthy controls immediately after admission (P<0.01). A measurable increase in miR-499 levels was observed in AMI patients within 24 h of the last onset of chest pain and the levels returned to the baseline after 7 d. Plasma miR-499 levels in the patients with AMI were positively-correlated with cTnI (r=0.384, P<0.01) and CK-MB (r=0.402, P<0.01). In addition, miR-499 levels in AMI patients with two- and three-vessel coronary artery disease (CAD) were significantly higher than those in patients with single-vessel CAD (P<0.05). Gensini scores were used to evaluate the severity of coronary stenosis. miR-499 were positively correlated with Gensini scores (r=0.52, P<0.01). miR-499 levels at admission were significantly higher than that those 24 h after percutaneous coronary intervention (PCI) in AMI patients (P<0.01) and were negatively correlated with LVEF (r=0.36, P=0.008).

Conclusions

Cardiac-specific miRNA-499 levels were found to be linearly proportional to myocardial damage. MiRNA-499 might prove to be a new biomarker for AMI and a predictor of the risk of myocardial ischemia.     

非酒精性脂肪性肝病患者血清中循环microRNAs表达水平及意义

目的研究microRNAs(miRNAs)在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清中的表达水平和意义。方法选择NAFLD患者78例(NAFLD组)和非NAFLD人群58例(对照组)。采集入组人群血清,提取总RNA,应用qRT-PCR方法对血清中miR-21、miR34a、miR-122及miR-451表达水平进行检测;分析miRNAs血清表达水平与脂肪变性程度之间的关系。结果两组人群血清中miR-145(P=3.290)和miR21(P=1.570)表达水平无显著变化;miR-451(P=0.0309)、miRNA-122(P=0.0083)和miR-34a(P=0.0032)表达水平显著升高。NAFLD组患者根据肝脏脂肪变性程度分为轻度(46例)和重度(32例),miRNA-122(P=0.0062)和miRNA-34a(P=0.0044)的表达水平随脂肪变性程度的增加而显著升高。结论 NAFLD患者较健康人群血清miR-21、miR-34a、miR-122及miR-451表达水平升高,特别是miR-34a和miR-122可以作为NAFLD诊断的一个生物学标志分子。     

血清胱抑素C水平与冠心病病变的关系

目的 评估血清胱抑素C（Cys C）水平与冠心病病变稳定性、病变严重程度的关系.方法 经冠状动脉造影入选199例患者,其中冠心病组128例,对照组71例;冠心病组再根据病变血管支数、临床类型分为各亚组.比较各组患者临床和生化指标是否有统计学意义.结果 冠心病组血清CysC水平显著高于对照组（P＜0.01）,不稳定型心绞痛组显著高于稳定型心绞痛组和对照组（P＜0.01）,AMI组明显低于SAP组及UA组（P＜0.01）,与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.血清Cys C水平与Gensini评分呈正相关（r=0.417,P＜0.01）.结论 血清Cys C水平与冠脉病变的稳定性相关,在一定程度上可以反映其病变的严重程度.     

痰液MicroRNAs检测在非小细胞肺癌诊断中的应用价值

目的检测肺癌患者痰中miRNA-21、miRNA-155、miRNA-137及let-7a的表达,探讨其在肺癌诊断中的价值。方法选取非小细胞肺癌(NSCLC)患者24例。肺良性疾病(OPD)患者24例。11例健康志愿者为对照。Real-time PCR检测痰中miRNA表达。结果 NSCLC患者痰中miRNA-21、miRNA-155表达均显著高于OPD患者及健康对照者,P均<0.01。NSCLC患者let-7a表达均显著低于OPD患者和健康对照者,P均<0.001。三组患者痰中miRNA-137表达无统计学差异,P均>0.05。miRNA-21、miRNA-155及let-7a从OPD中诊断NSCLC的ROC曲线下面积依次为0.863、0.840和0.887,P均<0.01。结论痰miRNAs可能成为肺癌诊断的一种新指标。     

血清肿瘤标志物对老年非小细胞肺癌检测的临床意义

目的探讨血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199（CA199）、鳞状上皮细胞癌抗原（SCC-Ag）、糖类抗原125（CA125）、细胞角蛋白19血清片段抗原21-1（CYFRA21-1）与非小细胞肺癌（NSCLC）患者病理分型以及分期的关系。方法2009年8月至2012年12月住院的90例年龄≥65岁NSCLC患者,全部经组织学诊断确认。应用电化学发光方法检测其血清中5种肿瘤标志物水平。结果血清中5种肿瘤标志物在肺癌患者中表达水平明显高于健康人组（P＜0.05）,在不同性别以及不同年龄段患者中的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。CEA,CA199,CA125在腺癌中的水平明显高于鳞癌（P＜0.05）;SCC-Ag和CYFRA21-1在鳞癌中的水平明显高于腺癌（P＜0.05）。CYFRA21-1和CA125在N2和N3患者中表达水平明显高于N0和N1患者（P＜0.05）。CEA在有远处转移的患者明显高于无转移的患者（P＝0.041）。CEA和SCC-Ag转移部位越多,其表达越高（P＜0.05）。CEA在Ⅳb患者中表达明显高于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ和Ⅳa患者（P＝0.046）。结论 CEA,CA199,CA125对晚期腺癌的诊断价值较高,SCC-Ag和CYFRA21-1是诊断鳞癌有价值的标志物。5种肿瘤标志物表达与性别、年龄无明显相关。CEA与临床分期正相关,高表达预示分期晚,低表达则对分期参考作用小。CEA和SCC-Ag高浓度应高度警惕有无多部位转移。     

循环miRNA-126在2型糖尿病患者中的表达变化及其相关性研究

目的 探讨不同阶段T2DM患者循环miRNA-126的水平变化及与内皮型一氧化氮合酶（eNOS）及相关代谢指标的关系。 方法 采用RT-PCR检测血浆miRNA-126表达水平,ELISA测定eNOS水平,分析miRNA-126与eNOS及相关代谢指标的关系。 结果 （1）与健康对照（NC）组比较,血浆miRNA-126在T2DM前期（A）组、单纯T2DM（B）组及T2DM并大血管病变（C）组中均下降（P〈0.05）。（2）miRNA-126与LDL-C、DBP及eNOS呈正相关（r=0.224、0.164、0.661,P均〈0.05）,与FPG、HDL-C、HbA1c及年龄呈负相关（r=-0.293、-0.153、-0.258、-0.277,P均〈0.05）。（3）多元逐步回归分析显示,FPG（β=-0.159,P〈0.01）、年龄（β=-0.030,P〈0.01）、LDL-C（β=0.208,P=0.037）、eNOS（β=0.353,P〈0.01）是影响血浆miRNA-126的相关因素。 结论 循环miRNA-126在不同阶段T2DM患者中均呈低表达,FPG、年龄、LDL-C及eNOS是影响miRNA-126的相关因素,推测miRNA-126可能受糖脂代谢的调控,其下调可能与血管内皮功能障碍有关。     

急性心肌梗塞患者行PCI前后激活素A与血清基质金属蛋白酶水平的变化

目的:探讨激活素A(ACT-A)及血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在急性心肌梗塞(AMI)患者急诊介入治疗前后的变化及临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测60例行急诊经皮冠状动脉介入(PCI)术治疗患者及30例冠状动脉造影正常者术前及术后第1 d及第3 d血清ACT-A及MMP-9的含量。结果:AMI患者术前,术后第1 d及第3 d的血浆ACT-A及MMP-9水平均明显高于冠脉造影正常者(P均0.05),AMI患者PCI术后1d、3d血清ACT-A水平均较术前明显降低[(421±224)pg/ml:(451±190)pg/ml:(551±289)pg/ml,P均0.05],血清MMP-9水平均较术前明显升高[(769±198)μg/L:(849±208)μg/L:(710±178)μg/L,P均0.05]。且MMP-9与ACT-A呈负相关(r=-0.36,P0.05)。结论:激活素A与基质金属蛋白酶-9参与了心肌梗塞的病理生理过程,二者可用作评价急性心肌梗塞患者介入术后预后的指标。     

微小RNA-199a对大鼠心肌肥厚的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-199a在心肌肥厚中的作用.方法 (1)Sprague-Dawley (SD)大鼠12只,分为腹主动脉缩窄(abdominal aortic constriction,AAC)组(AAC组,n=6)和假手术组(n=6).AAC组通过腹主动脉缩窄术建立大鼠心肌肥厚模型.实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心肌中部分miRNA表达的变化.(2)SD乳鼠心肌细胞分为两组,即miRNA-199a重组腺病毒(Ad-miRNA-199a)组(n=8)和腺病毒载体(Ad-vector)组(n=8),分别转染SD乳鼠心肌细胞48 h后qRT-PCR检测心肌细胞中miRNA-199a以及心肌肥厚标志分子α肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,αMHC)、β肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,βMHC)、心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)编码基因myh6、myh7、Nppa的表达变化,并利用免疫荧光分析检测细胞表面积的变化.(3)SD乳鼠心肌细胞分为两组,即miRNA-199a的反义寡核苷酸(As-miRNA-199a)组(n=8)和混杂寡核苷酸(As-ctl)组(n=8),分别转染SD乳鼠心肌细胞48 h后qRT-PCR检测心肌细胞中miRNA-199a的表达变化.(4)SD乳鼠心肌细胞分为4组,即空白对照组(n=8)、苯肾上腺素组(phenylephrine,PE)(n=8)、PE+As-cd组(n=8)和PE+As-miRNA-199a绀(n=8),分别转染SD乳鼠心肌细胞48 h,qRT-PCR检测心肌肥厚标志分子编码基因的表达变化,免疫荧光检测细胞表面积的变化.结果 (1)qRT-PCR结果显示,AAC组大鼠造模后1周miRNA-1、miRNA-133、miRNA-181a及miRNA-499的表达均显著低于假手术组,而miRNA-199a表达显著高于假手术组.(2)qRT-PCR结果显示,AdmiRNA-199a组SD乳鼠心肌细胞中miRNA-199a的表达显著高于Ad-vector组,myh7的表达亦显著高于Ad-vector组,而myh6的表达低于Ad-vector组.免疫荧光显示Ad-miRNA-199a组SD乳鼠心肌细胞的表面积大于Ad-vector组,P<0.05.(3)qRT-PCR结果显示,As-miRNA-199a组SD乳鼠心肌细胞中miRNA-199a的表达显著低于As-ctl组,P<0.05.(4)qRT-PCR结果显示,PE组Nppa及myh7的表达量显著高于空白对照组,而myh6的表达量低于空白对照组,P<0.05.免疫荧光检测显示,PE+As-miRNA-199a组SD乳鼠心肌细胞的表面积显著小于PE+As-ctl组,P<0.05.结论 miRNA-199a在心肌肥厚过程中可能发挥着调节作用.

Abstract：

Objective To investigate the role of miRNA-199a on cardiac hypertrophy.Methods (1)Male Sprague-Dawley rats were subjected to pressure overload induced by abdominal aortic constriction (AAC,n=6)and quantitative real-time polymerase chain reaction(qRT-PCR)was used to detect the change of microRNAs(miRNAs).(2)Neonatal rat ventricular myocytes were isolated from 2-day old Sprague-Dawley rats.The myocytes were divided into two groups:adenovirus miRNA-199a(Ad-miRNA199a) or adenovirus vector(Ad-vector).They were transfected in cardiomyocytes for 48 h using Lipofectamine 2000.qRT-PCR was used to detect the change of myocardial hypertrophy markers α-myosin heavy chain(αMHC,myh6),β-myosin heavy chain(βMHC,myh7)and atrial natriuretic peptide(ANP,Nppa).Software Axio Vision was used to detect the change of cardiomyocytes surface areas.(3)Neonatal rat ventricular myocytes were divided into two groups:antisense oligonucleotide-miRNA-199a(As-miRNA199a) and scramble oligonucleotides (As-ctl). They were transfected to cardiomyocytes respectively for 48 h. qRT-PCR was used to detect the change of miRNA-199a. (4) Neonatal rat ventricular myocytes were divided into four groups : A : control ( ctl), B : phenylephrine ( PE), C : PE + As-ctl, D : PE + As-miRNA199a. qRT-PCR was used to detect the change of myh6 ,myh7 and Nppa. Software Axio Vision was used to detect the change of cardiomyocytes surface areas. Results ( 1 ) qRT-PCR results showed that miRNA-1,miRNA-133, miRNA-181a and miRNA-499 were significantly decreased, while the miRNA-199a was significantly increased at 1 week post AAC hearts compared with the sham group. (2) qRT-PCR results showed that miRNA-199a and myh7 were increased and myh6 was decreased significantly in Ad-miRNA199a group compared with Ad-vector group. The cardiomyocytes surface area was increased in Ad-miRNA199a group detected by immunofluorescence. (3) qRT-PCR results showed that miRNA-199a was significantly decreased in As-miRNA-199a group compared with Ad-vector group. (4) The Nppa and myh7were significantly increased and myh6 was decreased in cardiomyocytes stimulated by PE for 48 h. The cardiomyocytes surface area determined by immunofluorescence was increased in PE + As-miRNA-199a groups compared with PE + As-ctl groups. Conclusion miRNA-199a may play a regulatory role in cardiac hypertrophy.     

MicroRNA-223及MMP-9在风湿性心瓣膜病合并心房颤动患者中的表达及临床意义

目的 探索miRNA-223与金属基质蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMP）在风湿性心瓣膜病（风心病）合并心房颤动（房颤）患者的表达水平及在房颤心肌结构重构的发生机制.方法 风心病接受瓣膜置换术患者31例,其中风心病窦性心律组15例,风心病慢性房颤组16例.收集患者右心房心肌组织,实时荧光定量聚合酶链反应检测心房肌组织和血清miRNA-223的相对表达量.酶联免疫吸附试验及免疫组织化学检测血清及心肌组织MMP-9蛋白的表达及分布水平;苏木素-伊红染色及Masson染色观察心肌组织病理结构及胶原纤维含量变化.结果 与窦性心律组相比,房颤组心房肌组织miRNA-223表达水平升高,差异有统计学意义（0.0603±0.0228 vs.0.0261±0.0035,P＜0.01）;房颤组血清MMP-9表达水平高于窦性心律组,差异有统计学意义[（4.2281±0.9165）ng/mLvs.（2.7613±1.2166）ng/mL,P＜O.05].MMP-9蛋白表达水平与胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）呈正相关（r=0.406,P＜0.05）;MiRNA-223表达水平与MMP-9蛋白表达呈正相关（r=0.901,P＜0.05）.结论 房颤患者心房组织中miRNA-223及MMP-9蛋白表达水平均升高.