肾康丸对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨肾康丸对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）大鼠TGF-β1／Smad信号通路影响。方法用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病（diabetes mellitus，DM）模型，模型成功后随机分为3组：模型对照组、开搏通组、肾康丸组，另设正常对照组，治疗8周后，取大鼠肾脏，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白（fibronetin，FN）和TGF-β1mRNA基因表达情况；采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织Smad2、Smad3蛋白表达的情况。结果在治疗的8周里，模型组大鼠血糖均维持在16．7mmol／L以上；出现多饮、多食、多尿、消瘦的DM症状；8周后，DN模型组大鼠与正常大鼠比较，肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达显著上调（P〈0．01），Smad2、Smad3蛋白表达明显增加。肾康丸和开搏通都可以抑制DN大鼠肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达，差异具有统计学意义（P〈0．01），都可以减少Smad2、Smad3蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGF-β1／Smad信号转导通路的激活，减少细胞外基质合成和分泌，从而延缓DN进程。     

肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1/Smad 7通路的影响

目的探讨肾康丸对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏TGF-β1/Smad 7信号通路的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病(DM)模型,模型成功后随机分为3组:模型对照组、开搏通组、肾康丸组,另设正常对照组。治疗8周后,取大鼠肾脏,采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad 7蛋白表达的情况。结果8周后,DN模型组大鼠与正常大鼠比较,肾脏组织中FN和TGF-β1蛋白表达明显增加,Smad 7蛋白表达明显减少。肾康丸和开搏通都可以减少FN和TGF-β1蛋白的表达,增加Smad 7蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGF-β1/Smad信号传导通路的激活,减少ECM的沉积,从而延缓DN进程。     

解毒通络保肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织中Col Ⅳ及FN表达的影响

目的探讨解毒通络保肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织中Ⅳ型胶原（ColⅣ）及纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法高脂饲料喂饲加腹腔注射链脲佐菌素复制DN大鼠模型,随机分为正常对照组、模型组、解毒通络保肾组、阳性对照组（罗格列酮联合贝那普利）。16周后采用免疫组化技术检测各组大鼠肾小球中ColⅣ及FN的表达水平,同时检测血糖、尿素氮、肌酐、尿微量白蛋白等指标的变化情况。结果模型组大鼠血糖、尿素氮、肌酐、尿微量白蛋白、ColⅣ及FN的表达明显升高（P〈0.01）,与模型组相比,解毒通络保肾组大鼠血糖、尿素氮、肌酐、尿微量白蛋白、ColⅣ及FN的表达均明显降低（P〈0.01）。结论解毒通络保肾胶囊能够减少肾组织中ColⅣ、FN含量,抑制肾小球ECM积聚,延缓DN的进展。     

二黄益肾汤调控TGF-β1/Smad信号通路治疗慢性肾功能衰竭研究

[目的] 观察二黄益肾汤对5/6肾切除大鼠肾组织血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA及蛋白表达的影响。[方法] 健康SPF级雄性SD大鼠,采用5/6肾切除方式建立慢性肾功能衰竭模型。造模成功后,随机分为模型组、尿毒清组和二黄益肾汤组,各给药组分别给予相应药物进行灌胃治疗,时间为12周。实验结束后,检测BUN、Scr含量,苏木精-伊红（HE）染色分析病理改变。采用实时定量-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）方法检测TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7 mRNA及蛋白表达量。[结果] 5/6肾切除方法可以成功建立慢性肾功能衰竭动物模型。与模型组比较,二黄益肾汤组与尿毒清组能够降低Scr、BUN含量,差异具有统计学意义（P<0.01）。二黄益肾汤组和尿毒清组肾间质内有少量炎性细胞浸润及纤维组织增生,纤维化面积缩小,能够改善肾功能衰竭肾纤维化病变程度。基因和蛋白表达量分析结果显示,与模型组比较,二黄益肾汤组和尿毒清组TGF-β1、Smad3、Smad4表达呈降低趋势,差异有统计学意义（P<0.05）,Smad7的表达呈升高趋势,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 二黄益肾汤能够改善慢性肾功能衰竭大鼠肾脏纤维化程度,抑制TGF-β1、Smad3、Smad4的基因和蛋白表达量,促进Smad7的表达量增多,可能通过调控TGF-β1/Smad信号通路而发挥相关治疗作用。     

转染Smad2基因的大鼠肾系膜细胞纤连蛋白和Ⅳ型胶原表达的改变（摘要）

目的 通过对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）转染Smad2基因，观察转染的阳性细胞克隆纤连蛋白（FN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）表达的改变，以探讨转化生长因子β（TGF-β）／Smad信号转导通路引起细胞外基质积聚导致肾小球硬化发生的分子机制。方法经磷酸钙介导将含有Smad2重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及Western印迹分析法鉴定，又分别采用Western印迹分析法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染阳性细胞克隆FN及ColⅣ表达的改变。结果 成功建立高表达Smad2蛋白的阳性MsC克隆（T-12、T-31、T-35、T-40），并证实其FN及ColⅣ的mRNA和蛋白的表达水平均明显上调。阳性MsC克隆FN蛋白为对照组2．4倍（P〈0．05），mRNA为对照组的2．7倍（P〈0．05）；阳性MsC克隆ColⅣ蛋白为对照组的2．9倍（P〈0.01），mRNA为对照组的3．3倍（P〈0．01）。结论 TGF-β／Smad信号转异途径中Smad2可能是促进FN及ColⅣ在肾小球中积聚，是导致肾小球硬化发生的重要信号转导分子。     

糖尿病肾病TGF-β1,Ⅳ型胶原水平变化的临床意义及辛伐他汀的治疗作用

目的探讨血清转化生长因子-β1 (TGF-β1),Ⅳ型胶原水平变化在糖尿病肾病患者中的临床意义及其在辛伐他汀治疗后的变化. 方法糖尿病患者80例根据尿白蛋白排泄率(UAER)分为糖尿病无肾病组(A组)36例和糖尿病肾病组(B组)44例. B组接受辛伐他汀治疗. 分别采取所有患者于辛伐他汀治疗前和治疗后6,12和24 wk的静脉血和24 h尿. 用ELISA法测定不同时期、用辛伐他汀治疗后糖尿病肾病患者血清TGF-β1,Ⅳ型胶原水平,以黄柳酸比浊法测定24 h尿中总蛋白含量. 40例健康者作为对照组. 结果糖尿病患者血中TGF-β1,Ⅳ型胶原水平较对照组明显升高(A组均为P<0.05,B组均为P<0.01),B组较A组患者血中TGF-β1,Ⅳ型胶原水平明显升高(均为P<0.05). 用辛伐他汀治疗后尿中蛋白含量减少,血中TGF-β1,Ⅳ型胶原水平逐渐降低. 结论TGF-β1和IV型胶原可能在糖尿病肾病的发病过程中起重要作用. 辛伐他汀治疗糖尿病肾病的机制可能是通过抑制TGF-β1的表达实现的.     

十味芪黄益肾方对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的干预作用

目的 观察十味芪黄益肾方对腺嘌呤肾纤维化模型大鼠转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin,FN）的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法 将55只SD大鼠随机分为益肾方组（n=14）、缬沙坦组（n=14）、模型组（n=12）和正常组（n=15）。益肾方组按10 mL/kg给予大鼠灌胃浓缩为2.4 g/mL的十味芪黄益肾方水煎剂;缬沙坦组按10 mL/kg给予大鼠灌胃0.002 g/mL的混悬液;正常组和模型组给予等量蒸馏水,按10 mL/kg灌胃。疗程均为8周。检测各组大鼠血清肌酐（serum creatinine,SCr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、24 h尿蛋白（24-hour urinary protein,24hUPro）及肾组织中TGF-β1、HGF、α-SMA、FN蛋白的表达水平,并采用苏木精-伊红染色、Masson染色观察肾组织病理变化。结果 模型组、缬沙坦组、益肾方组BUN、SCr、24hUPro水平均高于正常组（P＜0.05）;与模型组比较,缬沙坦组和益肾方组BUN、SCr、24hUPro水平明显降低（P＜0.05）;与缬沙坦组比较,益肾方组BUN、SCr、24hUPro水平明显降低（P＜0.05）。模型组、缬沙坦组和益肾方组TGF-β1、α-SMA、FN、HGF水平均明显高于正常组（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦组和益肾方组TGF-β1、α-SMA、FN蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,HGF蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与缬沙坦组比较,益肾方组TGF-β1、α-SMA、FN蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,HGF蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。缬沙坦组和益肾方组肾脏病理损害明显减轻,其中益肾方组优于缬沙坦组。结论 十味芪黄益肾方可以降低肾纤维化模型大鼠尿蛋白,保护肾功能,降低TGF-β1、α-SMA、FN水平,升高HGF水平,减轻肾脏病理损害,具有改善慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的作用。     

通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织转化生长因子-β1的影响

目的观察通络益肾汤对糖尿病肾病（DN）模型大鼠肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨其对DN大鼠肾脏保护作用的可能机制。方法采用单侧肾脏切除＋腹腔注射链脲佐菌素复制DN大鼠模型。大鼠分为正常对照组、模型组、通络益肾汤组及西药洛汀新＋糖适平组。观测各组大鼠空腹血糖,肾功能（BUN、CREA）、甘油三酯（TG）、肾组织TGF-β1的表达。结幕与模型组比较,通络益肾汤组大鼠空腹血糖、BUN、CREA、TG显著下降（P〈0．01）,TGF-β1阳性表达率明显下降（p〈0．05）;与西药洛汀新＋糖适平组比较,各项指标无明显差异（P〉0．05）。结论通络益肾汤对DN模型大鼠具有保护作用。其作用机理可能与降低肾脏TGF-β1表达,抑制肾间质纤维化有关。     

E3泛素连接酶APC对糖尿病大鼠肾组织SnoN蛋白表达的影响

目的：观察APC10在糖尿病大鼠肾组织中的表达变化,并初步探讨其与糖尿病肾病（DN）发生发展中SnoN蛋白表达变化的关系。方法：大鼠随机分为糖尿病2、4和8周组,每组均设鼠龄匹配的正常对照组;生化方法测血糖、血肌酐和24 h尿蛋白,并观察肾脏指数;免疫组织化学检测APC10、核转录共抑制因子SnoN（SnoN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2/3及链脲佐菌素（FN）蛋白的表达变化;RT-PCR检测SnoNmRNA的表达。结果：APC10阳性染色见于各组大鼠肾小管,随DN病程进展其表达逐渐增多,SnoN蛋白表达逐渐减少,TGF-β1、Smad2/3及FN蛋白亦随DN发展而增多;各时点糖尿病大鼠SnoN mRNA的表达与正常对照组相比差异无统计学意义。结论：APC10在DN发生发展中的表达增多可能介导了SnoN蛋白的泛素化降解,可能是SnoN蛋白表达减少的主要机制之一。     

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的保护作用及对TGF-β1/Smad3信号通路的影响

[目的] 观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾功能、肾脏病理、纤维化指标及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad3通路的影响,探讨该方对肾纤维化的保护作用及可能的机制。[方法] 40只C57BL/6小鼠中随机选取10只作为假手术组,30只制作5/6肾切除模型,造模2周后测血清肌酐,确定造模成功,并将造模组随机分为温阳消癥组、缬沙坦组、模型组。温阳消癥组予温阳消癥方灌胃,缬沙坦组予缬沙坦灌胃,模型组与假手术组予等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,给药8周后测定血清肌酐、尿素氮,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)及Masson染色观察肾脏病理学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)和免疫印迹法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白表达。[结果] 与假手术组比较,模型组肾脏纤维化改变明显,血清肌酐、尿素氮、胶原染色阳性率及α-SMA、FN、TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白表达均显著升高(P＜0.01)。与模型组比较,温阳消癥组和缬沙坦组小鼠的肾脏病理纤维化形态改变较轻,血清肌酐、尿素氮、胶原染色阳性率,α-SMA、FN、TGF-β1的mRNA和蛋白表达,Smad3蛋白表达均显著降低(P＜0.01);Smad3 mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05)。与缬沙坦组比较,温阳消癥组的α-SMA mRNA和蛋白表达,以及TGF-β1 mRNA表达显著降低(P＜0.01);胶原染色阳性率和FN mRNA表达降低(P＜0.05)。[结论] 温阳消癥方可改善5/6肾切除小鼠肾功能,减轻病理改变,下调肾纤维化标志物α-SMA及FN的表达,减轻细胞外基质(extracellular matrix,ECM)异常堆积,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

mTORC2通路调控CD4+CD25highTreg在糖尿病肾病大鼠中的研究

目的 观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路阻断剂对糖尿病肾病(DN)大鼠CD4⁺CD25^highTreg的影响,探讨调节性T细胞(Treg)在DN中的可能机制。 方法 以正常大鼠作为对照组(A组),DN大鼠随机分为模型组(B组)、FK506干预组(C组)及ku0063794干预组(D组)。第4,8周时分别检测肾脏病理、肾组织mTOR、Raptor蛋白水平、Rictor、血白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和CD4⁺CD25^highTreg。 结果(1)4,8周时,B组的mTOR,Raptor和Rictor水平较A组均明显升高(P<0.05); 4周时,C组的mTOR下降,低于B组(P<0.05); 8周时,C,D组均下降,低于B组(P<0.001); 4,8周时,C,D组的Raptor均下降低于B组(P<0.05); 4周时,C,D组的Rictor均低于B组(P<0.05),8周时进一步下降,与A组比较差别无统计学意义,C,D组间比较差别无统计学意义。(2)4,8周时,B组的CD4⁺CD25^highTreg明显低于A组(P<0.05),C,D组4周后逐步回升,高于B组(P<0.05); 8周时进一步升高,均高于4周时(P<0.05); C,D组间比较差别无统计学意义。(3)C,D组的病理评分较B组均降低(P<0.05),组间比较差别无统计学意义。(4)4,8周时,B组的血TGF-β1和IL-17均高于A组(P<0.05),C,D组下降(P<0.05); 4,8周时C组的TGF-β1低于D组(P<0.05);(5)8周时,B组大鼠的Rictor与CD4⁺CD25^high Treg呈负相关(P<0.05),与TGF-β1,IL-17及病理评分呈正相关(P<0.05); Raptor与病理评分呈正相关(P<0.05),与CD4⁺CD25^high Treg,TGF-β1及IL-17均无相关性(P>0.05)。 结论 CD4⁺CD25^highTreg可能受Rictor-mTOR通路调控,参与DN的发病。     

加味消渴康对糖尿病肾病大鼠纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原表达的影响

目的观察加味消渴康对糖尿病肾病大鼠肾组织纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和Ⅳ型胶原表达的影响。方法采用单侧肾切除加链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropahy,DN)模型,将造模成功后的24只DN大鼠随机分为正常组、模型组、氯沙坦组和中药组。中药组予加味消渴康灌胃,氯沙坦组予氯沙坦灌胃,正常组及模型组每日灌服等量蒸馏水,共灌胃12周。各组大鼠于第12周末处死取出肾脏,运用免疫组织化学法观察肾组织FN、LN和Ⅳ型胶原的表达。结果加味消渴康能降低肾组织FN、LN及Ⅳ型胶原的表达。结论加味消渴康对DN大鼠有一定的治疗作用。     

血清TGF—β1、CⅣ水平在糖尿病肾病早期中的变化及其受辛伐他汀的影响

目的探讨早期糖尿病肾病（DN）患者血清转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅳ型胶原（CⅣ）水平的变化及其受辛伐他汀干预的反应。方法88例2型糖尿病患者，根据尿白蛋白排泄率（UAER）分为糖尿病无肾病组（DM组）40例和早期糖尿病肾病组（早期DN组）48例。早期DN组又分为2个亚组，常规治疗组24例和辛伐他汀治疗组24例。采用EuSA法测定患者血清TGF-β1、CⅣ水平，采用放射免疫法检测24h尿白蛋白排泄率（UAER）。结果与糖尿病无肾病组比较，早期DN组患者血中TGF-β1、CⅣ水平有明显升高（均P〈0．05），且与UAER呈明显正相关（P〈0．05），TGF-β1与CⅣ呈明显正相关（P〈0．05）。与常规治疗组比较，辛伐他汀组治疗后血中TGF-β1、CⅣ水平及UAER明显降低（P〈0．05）。结论血清TGF-β1、CⅣ水平在早期DN中显著升高，辛伐他汀能降低其血清TGF-β1、CⅣ水平，改善肾功能。     

糖肾康对糖尿病肾病气阴两虚血瘀证患者血清MCP-1和ICAM-1水平的影响

目的 观察糖肾康对糖尿病肾病（DN）气阴两虚血瘀证患者血清单核细胞趋化性蛋白-1（MCP-1）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）指标的影响,研究糖肾康对其干预作用。方法 将66例Ⅲ-Ⅳ期DN气阴两虚血瘀证患者随机分为两组（治疗组33例,对照组33例）,失访3例,实际完成治疗组32例和对照组31例,并设正常组20例。对照组给予常规降糖、降压治疗,治疗组在对照组基础上加用糖肾康,两组疗程均为8周。观察临床疗效、治疗前后尿白蛋白/尿肌酐（ACR）、血清MCP-1及ICAM-1水平的变化情况。结果 治疗组临床疗效优于对照组（P<0.01）;治疗后两组ACR水平均降低（P<0.01）,治疗组下降幅度优于对照组（P<0.01）。血清MCP-1、ICAM-1水平均较正常组显著升高（P<0.01）;治疗后,治疗组和对照组均能降低MCP-1、ICAM-1水平（P<0.01）,治疗组下降幅度均优于对照组（P<0.05）。结论 糖肾康可改善气阴两虚血瘀证DN患者的临床症状,减少尿蛋白,降低血清MCP-1、ICAM-1水平,从而抑制免疫炎症反应,具有保护肾脏、延缓肾脏病进程的作用。     

糖尿病肾病患者血清sfrp-1水平及其与肾损害的关系研究

目的分析糖尿病肾病（DN）患者血清分泌型卷曲相关蛋白-1（sfrp-1）水平及其与肾功能和肾纤维化指标的关系。方法选取90例DN患者为研究对象,为DN组;另择同期行健康体检者90例作为对照（C组）。采用酶联免疫吸附试验检测两组血清sfrp-1水平,肾功能指标白蛋白（Alb）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、β2-微球蛋白（茁2-MG）和肾纤维化指标转化生长因子茁1（TGF-茁1）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、结缔组织生长因子（CTGF）、Ⅳ型胶原（CⅣ）水平。结果DN组患者血清sfrp-1水平低于C组（P＜0.05）。DN组Alb水平低于C组（P＜0.05）,Scr、BUN、UA、β2-MG水平均高于C组（P＜0.05）。DN组TGF-茁1、TIMP-1、CTGF、CⅣ水平均高于C组（均P＜0.05）。DN患者血清sfrp-1水平与Alb水平呈正相关（P＜0.05）,与Scr、BUN、UA、茁2-MG、TGF-茁1、TIMP-1、CTGF、CⅣ水平均呈负相关（均P＜0.05）。结论DN患者血清sfrp-1水平降低,可反映其肾损害程度。     

冬虫夏草对糖尿病肾病患者转化生长因子β1及Ⅳ型胶原水平的影响

目的观察冬虫夏苹制荆对糖尿病肾病（DN）患者血清TGF-β1、Ⅳ型胶原水平的影响，探讨其临床意义及机制。方法选取40例糖尿病肾病患者（DN组），分别采取应用冬虫夏草治疗前和治疗后12及24周时的静脉血和24小时尿，测定患者血清TGF—β1、Ⅳ型胶原水平及24小时尿蛋白量，并与40例健康者（对照组）做对照。结果与对照组比较，DN组治疗前血清TGF—β1、Ⅳ型胶原及尿蛋白含量明显增高（P〈0．01）。DN组经治疗12、24周时与治疗前比较，血清TGF—β1、Ⅳ型胶原及尿蛋白含量明显下降（P〈0．01）。结论冬虫夏草在临床上可降低耱尿病患者血清TGF-β1、Ⅳ型胶原水平及24小时尿蛋白量，其机制可能由于冬虫夏苹通过下调肾组织TGF—β1、CTGF表达，抑制胶原分泌，发挥抗纤维化的作用，从而有效保护肾脏。     

糖尿病大鼠肾脏蛋白聚糖Ⅱ和转化生长因子-β1mRNA的动态变化

目的了解糖尿病大鼠肾皮质中蛋白聚糖Ⅱ(PGⅡ)mRNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA随时间的变化及相互关系.方法用链脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病模型,在造模成功后第3、7、14、30、60、90天分别用免疫组化法检测糖尿病组和对照组肾脏Ⅳ型胶原分布,半定量RT-PCR法检测肾皮质PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA的含量.结果与对照组相比,糖尿病组肾脏Ⅳ型胶原含量增加(除第3、7天,其余时点均P<0.05),TGF-β1mRNA从第7天起升高(P<0.05),PGⅡmRNA后期升高(第60天P<0.05;第90天P=0.01).PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA呈正相关关系(r=0.7,P<0.01).结论STZ诱导的糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1mRNA和PGⅡmRNA先后升高,TGF-β1mRNA可能是引起PGⅡmRNA升高的原因之一.     

二甲双胍抑制大鼠胆管成纤维细胞胶原生成的分子信号机制

目的 探讨二甲双胍是否通过活化腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激的大鼠胆管成纤维细胞胶原生成并揭示其分子信号机制。方法 取雌雄各半的SD大鼠共50只（体质量150~200 g）,CO2窒息法处死后,无菌条件下分离并培养大鼠胆管成纤维细胞,倒置显微镜观察所培养的细胞,发现不同体质量及性别的大鼠所获取的细胞形态及活性无差异。采用随机数字表法进行随机分组,分别设置对照组、TGF-β1组、Smad3 siRNA干预组、结缔组织生长因子（CTGF）siRNA干预组、二甲双胍干预组、Compound C干预组,每组3个样本。设置对照组：大鼠胆管成纤维细胞正常培养;TGF-β1组：10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Smad3 siRNA干预组：Smad3 siRNA转染24 h后＋10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;CTGF siRNA干预组：CTGF siRNA 转染 24 h 后＋10 ng/mL TGF-β1 孵育细胞;二甲双胍干预组：10 mmol/L 二甲双胍＋10 ng/mL TGF-β1 孵育细胞;Compound C干预组：10 μmol/L Compound C＋10 mmol/L二甲双胍＋10 ng/mL TGF-β1孵育细胞。以TGF-β1刺激大鼠胆管成纤维细胞分泌胶原,以Smad3 siRNA或CTGF siRNA转染细胞以抑制Smad3或CTGF蛋白的表达,以二甲双胍孵育细胞以激活AMPK,以Compound C预处理细胞以抑制AMPK的活性。采用ELISA或Western-blot的方法检测CTGF、胶原（I Col I）蛋白水平;Western-blot的方法检测p-Smad3/t-Smad3、p-AMPK/t-AMPK、CTGF水平。结果 TGF-β1以时间和剂量依赖的方式刺激胆管成纤维细胞胶原I生成,二甲双胍激活的AMPK也剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的胶原I生成;AMPK抑制剂Compound C预孵育细胞,可显著逆转二甲双胍激活的AMPK抑制胶原I生成的作用（P<0.01）。进一步发现,二甲双胍激活的AMPK对TGF-β1刺激的Smad3磷酸化无抑制作用,却可抑制其下游的CTGF蛋白表达（P<0.01）及胶原I生成（P<0.01）,而AMPK抑制剂可逆转二甲双胍对CTGF及胶原I的上述作用。结论 二甲双胍通过激活AMPK抑制TGF-β1/Smad3信号通路诱导的CTGF蛋白表达,进而抑制胆管成纤维细胞胶原I生成。     

十味芪黄益肾方对腺嘌呤所致肾纤维化大鼠模型TGF-1/Smads/BMP-7信号通路的影响

目的 探讨十味芪黄益肾方对腺嘌呤所致肾纤维化大鼠模型TGF -1/Smads/BMP-7信号通路的影响。方法 选取40只6周龄SPF级大鼠,体重（200±30)g,采用腺嘌呤灌胃的方法制备肾纤维化大鼠模型,并分为芪黄益肾方组,模型组、正常对照组和TGF B抑制剂组。通过灌胃的方法给大鼠服用十味芪黄益肾方4周,每隔一周检测大鼠体重、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和血红蛋白（Hb）的含量。使用Westen Bolt和RTPCR定性、定量检测大鼠TGF-1、Smad 2、Smad 6及BMP-7、BMP-7 RII、PDGFR 、PDGFR 、PDGF-A和PDGF-B蛋白表达情况,将大鼠肾脏组织染色后,观察大鼠肾脏组织的病理改变及肾间质纤维化情况。结果 与模型组大鼠比较,十味芪黄益肾方组和TGF-B抑制剂组大鼠体重显著增加,Scr、BUN显著降低,Hb显著升高;TGF -1、Smad 2蛋白表达量显著降低,Smad 6、BMP-7和BMP-7 RII蛋白表达量显著升高（均P＜0.05）。 结论 十味芪黄益肾方通过下调TGF β1、Smad 2蛋白表达量,上调BMP-7和BMP-7 RII蛋白表达量,从而抑制了TGF -1信号向细胞核内转导的通路,缓解了腺嘌呤所致肾纤维化的进程。     

Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制

目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml)。通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少。Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P<0.01),而且呈现剂量效应。刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P<0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P<0.01)。结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的。