基于PARP-1/AIF信号通路分析针刺对急性缺血性卒中大鼠脑血流及行为学恢复的影响

目的 基于PARP-1/AIF信号通路分析针刺对急性缺血性卒中大鼠脑血流及行为学恢复的影响。方法 将40只健康成年雄性SPF级大鼠分为Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组,每组10只,除Sham组外均建立动物模型,针刺组及针刺+PJ34组大鼠均进行针刺治疗,针刺+PJ34组以10 μmoL/g腹腔注射多聚腺苷二磷酸核糖转移酶-1（PARP-1）抑制剂PJ34,Sham组及模型组不进行针刺干预,均注射相同体积的0.9%生理盐水。11分制单盲评分评价建模后、干预第1、2、3天行为学评分;多普勒仪探头记录软脑膜微循环血流量;HE染色观察脑组织病理形态;TUNEL 法检测各组神经细胞凋亡率;免疫组化检测Bax、Bcl-2阳性表达;免疫印迹检测PARP-1、凋亡诱导因子（AIF）蛋白含量。结果 建模后,模型组、针刺组及针刺+PJ34组的行为学评分均升高,与Sham组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,干预第1、2、3天时与模型组相比,针刺组行为学评分均降低（P＜0.05）,针刺+PJ34组上述时间行为学评分均降低,与针刺组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组的软脑膜微循环血流量分别为（756.35±102.33）、（233.06±45.17）、（416.40±63.55）、（560.80±72.04） AU,组间比较差异均有统计学意义（F=90.390,P＜0.001）;HE染色示Sham组大鼠脑组织及神经细胞排列整齐,模型组脑组织紊乱且神经细胞数目减少,针刺组及针刺+OJ34组神经细胞存活较多,排列整齐;Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组的神经细胞凋亡率分别为（3.30%±0.21%)、（30.04%±4.52%）、（16.30%±2.25%）、（11.69%±1.33%）,组间比较差异均有统计学意义（F=90.390,P＜0.001）;与Sham组比较,模型组大鼠Bax阳性细胞数降低,Bcl-2阳性细胞数、PARP-1、AIF蛋白升高（均P＜0.05）,与模型组相比,针刺组及针刺+PJ34组的Bax阳性细胞数及Bcl-2阳性细胞数、PARP-1、AIF蛋白升高（均P＜0.05）,针刺组及针刺+PJ34组上述指标比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 急性缺血性卒中大鼠采用针刺干预后能够改善行为学,增加脑血流灌溉的同时可通过调节细胞凋亡因子而减少神经细胞凋亡,研究机制可能与抑制PARP-1、AIF活性相关     

五福饮含药血清对肿瘤坏死因子-α诱导凋亡软骨细胞活性及基质金属蛋白酶表达的影响

摘 要 目的 观察五福饮含药血清对肿瘤坏死因子-α诱导凋亡软骨细胞活性、胶原蛋白（collagen）II、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-3、基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶-13表达的影响，探讨其防治骨性关节炎的机制。方法 应用随机数字表法将2月龄大鼠分为3组，分别为生理盐水组（生理盐水灌胃）、硫酸氨基葡萄糖组（硫酸氨基葡萄糖灌胃）、五福饮组（五福饮灌胃），经干预后取得相应血清。用Ⅱ型胶原酶消化法获取2月龄SD 大鼠膝关节软骨细胞，应用随机数字表法将软骨细胞分为：空白组：采用肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）-α0μg/l+10％生理盐水组血清；模型组：采用TNF-α20μg/l+10％生理盐水组血清，C：对照组，采用TNF-α20μg/l+10％硫酸氨基葡萄糖组血清；实验组：采用TNF-α20μg/l+10％五福饮组血清。干预48 h后检测软骨细胞collagen II的表达、软骨细胞凋亡增殖、MMP-3、-9、-13mRNA的表达。结果 collagen II的平均荧光表达值：空白组（70.92±3.72），模型组（43.39±1.52），对照组（62.92±5.32），实验组（53.33±2.33）。模型组、对照组和实验组显著低于空白组（p<0.01）；对照组和实验组高于模型组（p<0.05, p<0.01）。对照组和实验组比较无统计学差异（ p>0.05）。软骨细胞凋亡：模型组凋亡率最高，对照组与实验组凋亡率接近，低于模型组，高于空白组。软骨细胞增殖能力吸光度（OD）值：给药24h后，空白组（0.396±0.017），模型组（0.297±0.014），对照组（0.342±0.021），实验组（0.316±0.028），三组对比空白存在差异（p<0.01）。给药48h后，空白组（0.470±0.018），模型组（0.333±0.021），对照组（0.414±0.029），实验组（0.394±0.028），三组均显著低于空白组（p<0.05，p<0.01）；与模型组相比，对照组和实验组细胞OD值显著升高，有统计学差异（p<0.05, p<0.01）。给药72h后，空白组（0.570±0.031），模型组（0.361±0.014），对照组（0.510±0.035），实验组（0.493±0.030）。三组均显著低于空白组（p<0.05，p<0.01）；与模型组相比，对照组和实验组细胞OD值显著升高，有统计学差异（ p<0.01）；三个时间点实验组与对照组比较无统计学差异（ p>0.05）。MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达：与空白组比较，模型组、实验组中MMP-3、MMP-9、MMP-13，对照组中MMP-9水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，对照组和实验组中MMP-3、MMP-9、MMP-13的mRNA水平显著下降（P<0.01）。与对照组比较，实验组中MMP-3升高显著（P<0.01），MMP-9、MMP-13表达无差异（p>0.05）。结论 五福饮能延缓肿瘤坏死因子-α诱导引起的软骨的细胞凋亡，其机制可能与抑制MMP-3、MMP-9、MMP-13等基质金属蛋白酶表达相关。     

针刺对脑出血大鼠自噬相关蛋白p62、Beclin-1表达的影响

目的：观察针刺“百会”透“曲鬓”穴对脑出血（ICH）大鼠自噬相关蛋白的影响,探究针刺促进ICH后大鼠神经功能恢复的作用机制。方法：将80只雄性SD大鼠（250-300 g）随机分成4组,假手术组、模型组（50 μL自体血注入尾状核）、非穴位组（平行中线距“百会”穴1 cm 处）、针刺组（患侧“百会”透“曲鬓”）,每个亚组20只。于行为学评分（前肢放置试验、拐角试验）结束后取患侧出血半暗带区脑组织,用免疫组化检测p62蛋白表达,用Western blot检测p62、Beclin-1表达含量变化。结果：在ICH后7天模型组出现明显神经功能缺损体征（均P＜0.01,转角试验（%）：28±8.37 vs. 60±15.81;前肢放置试验（%）：36±8.94 vs. 88±8.37）,并上调脑组织p62、Beclin-1蛋白表达含量（均P＜0.01,p62：0.85±0.07 vs. 0.37±0.03;Beclin-1：0.57±0.05 vs. 0.28±0.04）;而针刺干预能够明显提高ICH大鼠行为学评分（均P<0.01 vs. 模型组/非穴位组,44±11.41 vs. 28±8.37 or 22±8.37; 64±11.40 vs. 36±8.94 or 38±8.37）,并下调ICH大鼠脑组织p62,上调Beclin-1蛋白表达含量（均P＜0.01 vs. 模型组/非穴位组,0.61±0.05 vs. 0.85±0.07 or 0.82±0.06; 0.82±0.07 vs. 0.57±0.05 or 0.61±0.08）。结论：针刺能下调ICH大鼠脑组织p62蛋白表达,上调Beclin-1蛋白表达,进而改善大鼠神经功能缺损体征。     

miRNA-29b、MMP-2在大鼠颅内动脉瘤中的相关性及药物干预

目的 观察miRNA-29b与MMP-2在颅内动脉瘤壁组织中的变化,探讨其在动脉瘤中的相关性及不同药物干预的影响.方法 将40只雄性SD大鼠(6周龄)采用随机数字表法分为模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组,每组各10只.模型组、多西环素组、丙戊酸钠组大鼠均采用颈外动脉结扎制造颅内动脉瘤模型,对照组大鼠不做造模处理.前三组于造模成功后分别注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)、多西环素15 mg/(kg·d)、丙戊酸钠15 mg/(kg·d),对照组大鼠注射生理盐水0.1 mL/(kg·d).2个月后取各组动脉组织,采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29b的表达,采用免疫组化检测MMP-2的表达.结果 模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中miRNA-29b的相对表达量分别为(0.27±0.04),(0.68±0.03),(0.47±0.15),(0.95±0.12),差异均有显著统计学意义(F=10.235,P<0.01);miRNA-29b表达量经两两比较,模型组明显低于对照组,丙戊酸钠组明显高于模型组,而多西环素组明显高于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中MMP-2阳性细胞数分别为(21.10±3.36),(10.27±1.20),(15.24±2.13),(4.50±0.44),差异均有显著统计学意义(F=6.013,P<0.01);MMP-2阳性细胞数经两两比较,模型组明显高于对照组,丙戊酸钠组明显低于模型组,而多西环素组则明显低于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-29b、MMP-2的表达水平与颅内动脉瘤的发生相关,多西环素对MMP-2的抑制作用明显强于丙戊酸钠.     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后MMP-9表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（Intracerebral Hemorrhage,ICH）后脑组织基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法将sD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组,每组5只大鼠。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,观察48h时点各组大鼠血脑屏障通透性变化,RT．PCR分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9mRNA表达的影响,WesternBlot分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9蛋白表达的影响。结果大鼠实验性脑出血后48hMMP-9阳性细胞数及伊文思蓝渗出量增多,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达增加;安宫牛黄丸处理后,MMP-9阳性细胞数减少（P〈0．01）,伊文思蓝渗出量降低（P〈0．01）,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达下降。结论脑出血后MMP-9表达与血脑屏障通透性密切相关,安宫牛黄丸能够有效抑制大鼠脑出血后MMP-9表达,减轻脑水肿。     

局部亚低温对大鼠脑出血后水通道蛋白4表达的影响

目的观察局部亚低温对大鼠自体血注入法脑出血模型水通道蛋白4(AQP-4)mRNA及蛋白质表达的影响,探讨局部亚低温减轻脑出血后水肿的可能机制。方法雄性W istar大鼠240只,随机分为脑出血(ICH)组和脑出血加局部亚低温(ICH+H)组。每组分为对照、脑出血后6、24、72 h,5、7 d共6个亚组,ICH+H组于注血后给予4 h的局部亚低温治疗,各亚组分别进行血脑屏障(BBB)通透性、脑水含量的检测以及应用逆转录(RT)-PCR及W estern印迹对AQP-4进行测定。结果ICH组大鼠脑组织水含量、BBB通透性以及AQP-4 mRNA表达的增加始于脑出血后6 h,AQP-4蛋白质表达的增加始于脑出血后24 h,均至72 h达高峰(P<0.01)。AQP-4 mRNA及蛋白质表达的变化与BBB通透性的变化呈正相关(r=0.78和r=0.76)。ICH+H组的脑组织水含量和BBB通透性在各时间点与ICH组相比明显下降,而AQP-4 mRNA吸光度值(A)在脑出血后48 h与ICH组相比开始较低,在72 h,由ICH组的1.25±0.03降至1.04±0.02(P<0.01),AQP-4蛋白质A值在各时间点与ICH组相比明显下降,在72 h,由ICH组的0.77±0.08下降至0.25±0.04(P<0.01)。结论脑出血后BBB完整性的破坏可以导致AQP-4表达的上升。局部亚低温可以抑制脑出血后AQP-4 mRNA和蛋白质表达的增加。局部亚低温可能既通过减轻BBB完整性的破坏在转录水平抑制AQP-4 mRNA表达的增加,也可以在翻译水平直接抑制AQP-4蛋白质的表达,来减轻脑出血后的脑水肿形成。     

甲基强的松龙对创伤性脑水肿中AQP4及MMP-9的影响

目的研究大鼠创伤性脑水肿皮质中AQP-4与MMP-9的表达关系及甲强龙对其表达的影响。方法采用成年雄性SD大鼠随机分为甲强龙组（n=25）、模型组（n=25）、假手术组（n=5）;甲强龙组和模型组均采用改进Feeney法制作脑损伤模型。甲强龙组致伤后即刻腹腔内给药,模型组则注射对应生理盐水。根据处死时间分为6h、24h、3d、5d、7d,5组。过度麻醉并断头取脑,对损伤皮层采用HE染色及免疫组化进行AQP4与MMP-9的检测。结果在模型组与甲强龙组中6h已可见AQP4与MMP-9的表达,MMP-9与AQP-4的表达均在3d达到高峰,模型组AQP4及MMP-9的表达显著高于甲强龙组（P〈0.05）,相关系数（r=0.753,P〈0.01）。结论创伤性脑损伤后大鼠AQP4与MMP9的表达呈正相关;甲强龙冲击治疗能够通过下调AQP4及MMP9的表达来发挥减轻脑水肿的作用。     

重组人促红细胞生成素对大鼠急性创伤性脑损伤脑组织中基质金属蛋白酶-9及水通道蛋白-4表达的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠急性创伤性脑损伤的神经保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠55只随机分为假手术组（n=5）、对照组（n=25）和EPO治疗组（n=25）;对照组和治疗组采帽改进的Feeney等的方法制作脑创伤模型,EPO治疗组在模型建立后立即腹腔注射rhEPO5000U／kg,对照组和似手术组往等时间点给予等量生理盐水。根据伤后处死时间点不同每组再分为5个亚组,即6h、24h、48h、3d、7d组．每个亚组5只动物。断头、取脑,行HE染色和免疫组织化学方法检测大脑皮层组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及水通道蛋白-4（AQP-4）的表达。结果脑创伤大鼠6h创伤灶脑组织出现MMP-9和AQP-4的表达。与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。EPO治疗组和对照组槲比较MMP-9及AQP-4的表达明显降低（P〈0．05）。结论 rhEPO对大鼠急性创伤性脑损伤有一定的神经保护作用,其机制可能是通过降低MMP-9及AQP-4的表达来实现的。     

诱发癫痫持续状态后基质金属蛋白酶-2在小鼠海马与皮层中的表达

目的：观察氯化锂-匹罗卡品所致癫痫持续状态（status epilepticus,SE）小鼠皮层和海马基质金属蛋白酶-2（matrix met－alloproteinases-2,MMP-2）的表达变化,探讨 MMP-2在癫痫发病机制中的作用。方法：选用成年雄性C57/BL6小鼠 48只,并随机分成实验组和对照组。实验组小鼠腹腔注射氯化锂-皮罗卡品制备SE模型,在确定模型成功后8 h采取动物标本进行检测。使用 RT-PCR测定 MMP-2 mRNA含量变化,Western blot检测 MMP-2蛋白表达变化,免疫组化观察 MMP-2分别在海马与皮层的分布规律与特点。结果：（1）海马组织中,对照组与实验组MMP-2 mRNA的表达分别为 0.155 5±0.018 1和 0.743 1±0.014 4,皮层组织中的表达分别为0.204 9±0.018 5和0.871 6±0.037 0,实验组MMP-2 mRNA的表达均比对照组高,差异有统计学意义（t=-45.60,P=0.000;t=-71.83,P=0.000）。（2）MMP-2蛋白水平的表达,在海马组织中分别为 0.084 5±0.009 6和 0.728 4±0.245 1,在皮层组织中对照组与实验组分别为 0.155 6±0.003 9和0.912 5±0.027 7,实验组MMP-2蛋白的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义（t=-76.52,P=0.000;t=-6.99,P=0.000）。（3）免疫组化结果显示,实验组MMP-2在皮层广泛表达,在海马的表达增加主要以 CA1、齿状回、CA3区为主。结论：SE后小鼠海马及皮层内MMP-2在mRNA和蛋白水平的表达均明显升高,表达增加的区域以海马CA1、齿状回及CA3区为主,提示 MMP-2与癫痫的发生、发展可能有着密切的关系。     

大鼠脑出血后不同时间血肿周围脑组织IL-1β的表达

目的探讨大鼠实验性脑出血(ICH)后血肿周围脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。方法将30只大鼠随机分为ICH组(n=30)和假手术组(n=6);ICH组进一步随机分为ICH后3、61、2、24、48 h 5个时间点(n=6)。ICH组采用自体不凝血注入大鼠尾状核制备ICH模型,免疫组化法检测ICH后不同时间点血肿周围脑组织IL-1β的表达;假手术组大鼠尾状核注入生理盐水。结果血肿周围脑组织IL-1β阳性细胞表达在ICH后1 h开始上升(12.58±2.10),6 h达峰值(29.39±2.78),12 h阳性细胞数开始下降(24.13±1.47),24 h降至11.36±1.51,48 h阳性细胞消失(F=32.8)。假手术组无阳性细胞表达。结论IL-1β参与了ICH继发性脑组织损伤。     

水通道蛋白-1 在肝硬化腹水大鼠腹膜上的表达

目的探讨腹膜上水通道蛋白-1(AQP-1)的表达与肝硬化大鼠腹水形成之间的相互关系.方法 32只健康SD大鼠分为肝硬化组(20只)和正常对照组(12只),采用苯巴比妥钠诱导加皮下注射CCl4制造细胞毒性肝硬化大鼠伴腹水模型;免疫组织化学检测 AQP-1 在大鼠腹膜上的分布及蛋白质的表达.RT-PCR方法检测各组大鼠AQP-1在肝硬化腹水形成前后腹膜上 mRNA的表达,并以3-磷酸甘油醛脱氢酶相对定量.结果腹膜免疫组化显示,AQP-1 主要表达在腹膜毛细血管及小静脉的内皮细胞上,同时,间皮细胞上也有 AQP-1 的表达.在肝硬化早期(第6周末)两组AQP-1蛋白质[相对积分光密度正常对照组(23±10),肝硬化组(21±13)]和 mRNA[正常对照组(0.63±0.11) μg/μl,肝硬化组(0.67±0.15) μg/μl]的表达量差异均无统计学意义.在肝硬化晚期 (第12周末)AQP-1 蛋白质[相对积分光密度正常对照组(23±9),肝硬化组(15±8)]和 mRNA[正常对照组(0.58±0.15) μg/μl,肝硬化组(0.43±0.16) μg/μl]的表达均下调. 结论在肝硬化伴腹水模型大鼠腹膜的毛细血管及小静脉的内皮细胞上AQP-1表达减少, AQP-1 的减少可能参与了腹水的形成.     

持续惊厥后幼年大鼠海马电生理学变化及脑源性神经营养因子表达变化

目的：研究幼年期大鼠长时程惊厥（status convulsion,SC）后海马电生理学与海马脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）表达变化,探索两者之间的可能关系。方法：选择生后 21 d Wistar 鼠160只,随机分为对照组和实验组,每组 80 只。腹腔注射氯化锂-匹罗卡品制造SC模型;以腹腔注射生理盐水为对照组。造模后 1、7、14、21 d 膜片钳技术检测海马场兴奋性突触后电位（field excitatory postsynaptic potentials,fEPSP）斜率与波幅的变化,比较长时程增强（long-term potenti－ation,LTP）现象。造模后12 h、1 d、3、7、14、21 d免疫组织化学观察海马区BDNF表达的定位情况,Western blot方法鉴定其表达情况。结果：（1）SC后7 d,实验组fEPSP斜率为（162.30±28.50）%高于对照组（124.01±26.46）%（P＜0.05）;SC后14 d实验组和对照组fEPSP斜率分别为（83.06±8.32）%和（121.64±23.12）%,波幅分别为（100.54±16.03）%和（135.65±35.85）%,实验组较对照组斜率及波幅明显降低,有统计学差异（P＜0.05）。（2）免疫组织检查发现SC后大鼠海马CA1,CA3区BDNF阳性着色均有不同程度的增强,实验组在SC后12 h、1 d、3、7 d 较正常组有增多趋势,14 d及21 d组无明显差别。（3）Western blot测定BDNF表达情况,SC后 12 h、1 d、3、7 d分别为：1.08±0.10、1.39±0.08、0.85±0.04、0.53±0.06,对照组分别为：0.39±0.16、0.37±0.03、0.39±0.02、0.37±0.04,实验组与对照组比较有统计学差异（P＜0.05）。结论：（1）幼年大鼠 SC 后 fEPSP 斜率在 SC 后 7 d 较正常组增高;在SC后14 d fEPSP斜率及波幅较对照组和其他实验组明显降低。提示 SC 后急性期 LTP 增高,潜伏期LTP降低。（2）经免疫组化和Western blot方法检测,提示BDNF表达受 SC 刺激影响,在 SC 后急性期表达明显增多。（3）BDNF在LTP 形成过程中可能起重要作用。     

穴位电针对功能矫治大鼠咀嚼肌基质金属蛋白酶－9表达的影响

目的：研究穴位电针对大鼠下颌前伸后咀嚼肌中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法：60只雄性SD大鼠随机分为12组（n=5）：空白对照3、7、14、21 d组,条件对照3、7、14、21 d组和实验3、7、14、21 d组。采用免疫组化染色法和荧光定量PCR法检测大鼠二腹肌前腹中MMP-9表达的差异。结果：与空白对照组比较,条件对照组在7、14 d时MMP-9表达明显上升（P<0.05）,实验组在3、7、14 d时MMP-9的表达明显上升（P<0.05）;与条件对照组比较,实验组在3、7 d时MMP-9的表达明显上升（P<0.05）,14 d时两组无明显差异（P >0.05）,实验组21 d MMP-9表达量降低（P<0.05）。结论：穴位电针可早期上调大鼠下颌前伸咀嚼肌中MMP-9的表达,促进大鼠咀嚼肌的适应性改建。     

雌激素在大鼠腹主动脉瘤形成中的作用

目的研究雌激素在大鼠腹主动脉瘤（AAA）形成中的作用,探讨雌激素对腹主动脉瘤抑制作用的机制。方法雄性Wistar大鼠20只,随机分为实验组、对照组各10只。实验组定期腹腔内注射雌二醇,对照组定期腹腔内注射生理盐水（NS）,分别用弹性蛋白酶灌注肾下腹主动脉制成AAA模型。14d后用放射免疫法检测血清雌二醇的含量,用免疫组织化学、实时荧光定量聚合酶链反应（Real-Time PCR）测定动脉瘤组织基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、9）的mRNA及蛋白的表达。结果实验组与对照组比较雌二醇水平显著增高,P〈0．01。其动脉瘤扩张率分别为（103±4）％和（172±13）％（P〈0．01）、MMP-2 mRNA的相对表达量分别为0．07±0．04和0．22±0．07（P〈0．01）、MMP-9 mRNA的相对表达量分别为1．4±0．7和7．4±2．8（P〈0．01）、MMP-2的表达率分别为（22±3）％和（50±12）％（P〈0．01）、MMP-9的表达率分别为（23±2）％和（45±10）％（P〈0．01）。结论在腹主动脉瘤形成的过程中雌激素可能通过降低MMP-2、9的mRNA表达、蛋白合成及减少炎性细胞浸润来抑制腹主动脉瘤的形成。     

老年抑郁大鼠海马CA3区c-fos和Caspase-3蛋白的表达

目的:探讨慢性应激老年抑郁大鼠海马CA3区c-fos和Caspase-3蛋白的表达,以探讨老年抑郁症的发病机制。方法:将20只Wistar老年大鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组大鼠每天强迫游泳20 min,并每周给予电刺激和强光照射各1次,经过21 d应激制作老年大鼠慢性应激抑郁模型,对照组正常喂养,不给予上述处理。采用特异性抗体标记的免疫组织化学方法,检测实验21 d后老年大鼠海马CA3区c-fos和Caspase-3蛋白的表达情况,并观察大鼠开场行为和排便情况。结果:①实验组老年大鼠中央格停留时间延长,水平穿越格数减少,修饰行为减少,排便次数增多;②c-fos平均灰度值:实验组(166.56±9.73),对照组(149.62±12.91),有显著差异P=0.000;③阳性细胞数:实验组(41.12±4.72),对照组(31.12±3.25),P=0.000;④caspase-3平均灰度值:实验组(202.59±2.64),对照组(179.74±8.24),有显著差异P=0.000;⑤阳性细胞数:实验组(24.73±2.57),对照组(18.86±1.13),有显著差异P=0.000。结论:慢性应激老年抑郁大鼠海马CA3区c-fos和caspase-3蛋白表达增加,行为表现异常,可能与慢性应激所致细胞凋亡增强,海马区脑组织损伤有关。     

RGS2抑制大鼠脑出血后炎症反应的实验研究

目的：探讨G蛋白信号调节因子2（regulators of G-protein signalling,RGS2）抑制大鼠脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）继发的炎症反应。方法：69只大鼠分为假手术组、ICH组、阴性对照慢病毒+ICH组、RGS2过表达慢病毒+ICH组和时间窗组,前4组各组12只SD大鼠,时间窗组下设normal、ICH6h、ICH12h、ICH24h、ICH48h、ICH72h和ICH7d,每小组各3只SD大鼠。基底节注射VⅡ型胶原酶,建立大鼠ICH模型,对大鼠ICH后3 d进行神经功能评分,干湿法检测脑含水量,采用Western blot和ELISA法测定血肿周围脑组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）和白介素-1β（interleukin-1,IL-1β）的含量,免疫荧光染色方法检测病灶周边髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）表达情况。结果：①RGS2在ICH后表达量从（0.579 2±0.019 8）开始升高,并且在术后12 h达到峰值（0.809 3±0.076 2）,然后降低,术后7 d恢复正常（0.600 0±0.083 0）。②与ICH组脑含水量（0.804 7±0.003 4）和神经功能评分（11.570 0±2.070 0）相比,RGS2过表达慢病毒+ICH组在ICH术后3 d脑水肿明显减轻（0.794 0±0.001 5）,神经功能评分明显改善（7.429 0±0.976 0）。③RGS2过表达慢病毒+ICH组术后3 d血肿周边TNF-α和IL-1β的表达（1.407±0.055、0.762±0.046）明显低于ICH组（1.743±0.179、0.917±0.085）,RGS2过表达慢病毒+ICH组TNF-α和IL-1β的A值（32.92±1.13、32.84±1.08）低于ICH组A值（40.38±0.99、39.29±1.39）。④RGS2过表达慢病毒+ICH组大鼠病灶周边MPO的表达明显低于ICH组和阴性对照慢病毒+ICH组。结论：RGS2抑制大鼠脑出血后血肿周边区TNF-α、IL-1β和MPO表达,能减轻脑水肿,改善神经功能,抑制脑出血后的炎症反应。     

缬沙坦对动脉粥样硬化大鼠模型主动脉内皮细胞保护作用及对血浆内皮脂肪酶水平影响

目的：通过血管紧张素Ⅱ受体阻断剂（angiotensin Ⅱ receptor blocker,ARB）对动脉粥样硬化性大鼠模型进行治疗,探讨ARB对主动脉内皮细胞保护作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为3组,每组10只,模型组通过高脂饲料建立动脉粥样硬化大鼠模型,实验组增加缬沙坦干预,8周后比较各组主动脉内皮一氧化氮（nitric oxide,NO）、内皮素（endothelin,ET）、细胞色素c（cytochrome,Cyt-c）及内皮脂肪酶（endothelia lipase,EL）水平。结果：实验结束时,模型组HE染色可见明显斑块形成并伴有大量脂质细胞浸润,Cyc-c免疫组化染色显示内皮细胞凋亡阳性率（36.85±12.45）,高于对照组（0.81±0.11）和实验组（13.85±6.41）（P=0.000）,平滑肌细胞凋亡阳性率（9.65±2.62）高于对照组（0.06±0.01）（P=0.000）,但与实验组（7.85±1.34）差异无统计学意义（P=0.058）;模型组和实验组总胆固醇（total cholesterol,TC）和低密度脂蛋白-胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）明显增加,与对照组相比差异具有统计学意义（P=0.000）;模型组和实验组相比,TC和LDL-C差异也有统计学意义（P=0.000和0.002）;模型组和实验组大鼠ET-1、NO、EL与对照组相比差异均有统计学意义（P=0.000）,与模型组相比,实验组NO水平升高,ET-1、EL水平降低,差异具有统计学意义（P=0.017、0.008和 0.000）。结论：缬沙坦在细胞损伤期,即具有明显内皮细胞保护功能。对动脉粥样硬化患者早期用药,能够保护细胞完整性,减少凋亡发生,起到疾病预防和治疗的重要意义。     

氟西汀对抑郁模型大鼠海马CA1区少突胶质细胞作用的研究

目的：探讨抗抑郁药物氟西汀对抑郁症慢性不可预知性应激（chronic unpredictable stress,CUS）模型大鼠海马CA1区内CNPase+少突胶质细胞的作用。方法：选用青年雄性Sprague Dawley（SD）大鼠（4~6周龄）,随机分为对照组（12只）和模型组（38只）,给予模型组大鼠连续4周的CUS干预。随后依据大鼠的糖水偏好百分比筛选出模大鼠,随机分为CUS组（12只）和CUS+fluoxetine组（FLX组）（12只）,第5~7周CUS组和FLX组继续给予慢性应激,同时FLX组大鼠给予5 mg/（kg·d）氟西汀腹腔注射,对照组和CUS组给予等量生理盐水腹腔注射。干预结束后利用免疫组织化学方法结合现代体视学对大鼠海马CA1区CNPase+少突胶质细胞的数量进行精确的三维定量研究。结果：实验发现,CUS模型组大鼠的体质量（251.4±15.9） g较对照组（323.3±25.9） g明显下降（P=0.00）,但与FLX组大鼠的体质量（257.9±22.7） g相比无差异（P=0.473）。CUS组大鼠的糖水偏好百分比（62.0±14.2）%明显低于对照组（89.2±4.8）%（P=0.000）及FLX组（78.2±12.8）%（P=0.020）。CUS组大鼠海马CA1区CNPase+细胞数量（18 650.7±1 812.0）明显低于对照组（33 606.9±4 471.4）（P=0.007）及FLX组（29 080.7±2 877.5）（P=0.042）。结论：大鼠海马CA1区内少突胶质细胞在抑郁症发病过程中可能起着重要作用,氟西汀治疗可防止抑郁症模型大鼠海马CA1区的CNPase+少突胶质细胞的丢失。本研究结果为探索新的抗抑郁策略提供了形态学基础。     

新生血管生成抑制剂治疗膝骨性关节炎大鼠的疗效研究

目的探讨新生血管生成抑制剂舒尼替尼治疗膝骨性关节炎（KOA）大鼠的疗效，为防治KOA新类药物的研发提供实验基础。方法将32只SD大鼠随机分成4组，即空白组（不造模，不给药）、治疗4周组（KOA造模后灌胃舒尼替尼1mg·kg-1·d-1，持续4周）、治疗8周组（KOA造模后灌胃舒尼替尼1mg·kg-1·d-1，持续8周）及对照组（KOA造模后灌胃同等体积的0.9%氯化钠溶液），每组8只。实验结束后处死大鼠，收集关节液标本，采用ELISA法检测并比较4组大鼠关节液中血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶13（MMP-13）的表达水平。结果对照组、治疗4周组、治疗8周组大鼠关节液中VEGF、MMP-13表达水平分别为（237.95±69.1）、（168.43±47.47）、（136.75±27.48）pg·ml-1和（94.98±37.63）、（75.43±20.23）、（68.54±19.82）pg·ml-1；2个治疗组与对照组比较，关节液中VEGF、MMP-13表达水平均明显降低（均P＜0.01）；治疗4周组与治疗8周组比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论新生血管生成抑制剂舒尼替尼能有效降低关节液中VEGF、MMP-13表达水平，长期用药可将VEGF和MMP-13的表达维持在较低水平，从而达到防治KOA的作用。     

介入法建立大鼠冠状动脉微栓塞模型

目的：探讨自体血栓颗粒经右颈总动脉介入法建立大鼠冠状动脉微栓塞模型。方法：36只雄性SD大鼠随机分为：模型24 h组（n=10）、模型30 d组（n=10）、假手术组（n=10）、空白组（n=6）。模型24 h组、模型30 d组用介入法将0.5 mL大鼠自身血栓颗粒注入其主动脉根部,制成冠状动脉微栓塞模型。模型24 h组和模型30 d组分别在造模术24 h后、30 d后采血并处死大鼠,假手术组和空白组在30 d后处死大鼠。摘取心脏,取左心室前壁、心尖部切片,经HE染色、马休黄猩红蓝染色、苏木素碱性复红苦味酸染色计数栓塞的冠状微动脉阳性数量、缺血心肌的面积。结果：HE染色显示模型24 h组[（47.23±6.20）%]、模型30 d组[（62.88±15.68）%]被栓塞的阳性微动脉数量明显高于假手术组[（6.75±5.23）%,P＜0.008];马休黄猩红蓝染色显示模型24 h组[（46.20±10.41）%]、模型30 d组[（55.30±16.34）%]被栓塞的阳性微动脉数量明显高于假手术组[（8.13±8.80）%,P＜0.008];苏木素碱性复红苦味酸染色显示模型24 h组[（2.46±1.41）%]、模型30 d组[（6.52±2.22）%]染色阳性缺血面积明显高于假手术组[（0.05±0.02）%,P＜0.017]。结论：介入法将大鼠自身血栓颗粒注入其冠状动脉内可以建立稳定、可靠、经济的冠状动脉微栓塞模型。