益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3表达的影响

目的 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血大鼠海马Wnt/β-catenin信号通路Wnt3a、卷曲蛋白9(Frizzled9)和T细胞因子3(TCF3)蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组,脑缺血2h后持续灌注7d.采用Western-Blot法检测缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,用免疫组化Envision两步法检测缺血侧海马CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达.结果 在缺血侧海马区,与假.手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01),补肾生髓方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01或P＜0.05).在缺血侧海马CA1区,与假手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组与补肾生髓方组能显著降低CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达(P＜0.01).结论 2种中药复方能通过抑制缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,调节Wnt/β-catenin信号通路,促进局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织修复.     

当归补血汤对骨髓干细胞移植急性心肌梗死模型大鼠 NF-κB介导的炎症反应影响*

目的探讨当归补血汤对骨髓干细胞移植急性心肌梗死模型大鼠NF-kB介导的炎症反应影响。方法选择72例健康雄性SD大鼠为研究对象，均经实验成功建立AMI模型，随机选择24例为对照组，另选择24例为观察组，剩余24例为模型组。模型组应用常规生理盐水灌胃，对照组应用骨髓干细胞移植治疗，观察组则在对照组基础上应用当归补血汤灌胃。2 w后观察各组大鼠心功能、心肌NF-kB蛋白表达和心肌凋亡情况，以及NF-kB介导的炎症反应情况。结果观察组和对照组LVIDs、LVIDd水平均分别低于模型组，LVEF水平分别高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组LVIDs、LVIDd水平均低于对照组，LVEF水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组和对照组NF-kB表达水平及心肌凋亡指数均分别低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组NF-kB表达水平及心肌凋亡指数低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组和对照组IL-6、TNF-α水平均分别低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组IL-6、TNF-α水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论在骨髓干细胞移植急性心肌梗死模型大鼠中应用当归补血汤效果明显，可通过减轻NF-kB介导的炎症反应，有效减少心肌细胞凋亡，改善大鼠心肌损伤，促使心肌功能恢复。     

老鹳草素对骨质疏松大鼠BMSCWnt3a表达的影响

［摘要］目的　研究老鹳草素对骨质疏松（OP）大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）信号分子Wnt3a表达的影响．方法　摘除大鼠双侧卵巢,复制骨质疏松症模型,分离、培养BMSC．将源于假手术大鼠第3代BMSCs常规培养作为正常对照组,将骨质疏松模型大鼠的BMSCs分别设以下组别:模型对照组、1 μmol/L的辛伐他汀阳性对照组、0.01、0.1、1、10、100 μmol/L的老鹳草素组．分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白的表达．结果　与正常对照组比较,OP模型对照组Wnt3a蛋白及其mRNA的表达明显降低,且有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,1 μmol /L辛伐他汀、0.1、1、10、100 μmol/L的老鹳草素明显升高Wnt3a蛋白及其mRNA的表达,且均有统计学意义,而0.01 μmol/L老鹳草素对Wnt3a表达无明显影响．结论　老鹳草素可能通过增加BMSC中Wnt/β-catenin信号通路的信号蛋白Wnt3a的表达,进一步激活Wnt/β-catenin信号通路,这有利于BMSC的成骨分化及骨形成．     

抵当汤对糖尿病大鼠心肌组织JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探讨抵当汤及其拆方对糖尿病大鼠肥大心肌细胞JAK2/STAT3信号通路的影响。〖JP〗方法 单次注射链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、抵当汤组、桃仁大黄组、水蛭虻虫组和缬沙坦组,以正常雄性SD大鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组大鼠接受相应药物灌胃,连续8周。采用Western blot法检测心钠素（atrial natriuretic peptide,ANP）、心肌组织JAK2和STAT3蛋白表达,采用实时荧光定量PCR法检测JAK2、STAT3 mRNA表达。结果 与正常对照组比较,模型组ANP、JAK2、STAT3蛋白以及JAK2、STAT3 mRNA表达水平均显著上调（P<0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织ANP、JAK2和STAT3蛋白表达的主效应均具有统计学意义（P<0.05）,两者的交互作用均无统计学意义（P>0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织JAK2、STAT3 mRNA表达的交互作用具有统计学意义（P<0.05）。缬沙坦组、抵当汤组及两个抵当汤拆方组ANP、JAK2蛋白及JAK2 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 抵当汤延缓糖尿病大鼠心肌细胞肥大的机制与抑制JAK2/STAT3信号通路有关,其拆方对JAK2、STAT3 mRNA表达的效应存在相互影响。     

加味当归补血汤对小鼠造血功能的影响

对急性失血性贫血、溶血性贫血模型小鼠给予加味当归补血汤进行观察,对小鼠外周血ＷＰＣ、ＲＢＣ、Ｈｂ、网织红细胞（ＲＣ）及骨髓有核细胞（ＢＭＣ）等多项指标进行检测,同时从多能造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）及骨髓ＤＮＡ合成代谢方面探讨加味当归补血汤对小鼠造血功能的影响,结果表明：加味当归补血汤具有明显促进外周血细胞回升及骨髓造血功能的作用。     

肾癌组织中Wnt5a的表达及其临床意义

目的探讨Wnt5a在肾癌组织中的表达与病理意义以及对肾癌细胞增殖及侵袭潜能的影响,为寻找肾癌有效的治疗途径及预后判定指标提供依据。方法对43例肾癌组织标本和11例正常肾组织标本中的Wnt5amRNA和Wnt5a蛋白表达水平进行检测,分析肾癌组织Wnt5a mRNA表达与临床病理特征的关系,及Wnt5a蛋白表达与预后的关系。结果 Wnt5a mRNA和Wnt5a蛋白在肾癌组织中的阳性表达率均显著高于正常肾组织（P〈0.05）。肾鳞癌的Wnt5a mRNA表达水平明显高于肾腺癌（P〈0.01）;低分化组显著高于高分化组（P〈0.01）。Wnt5a蛋白阳性的肾癌患者2年生存率明显低于阴性患者（P〈0.01）。结论 Wnt5a表达水平在肾癌细胞中明显增高,且与肾癌的细胞分化程度、组织类型及预后密切相关,提示Wnt5a可能参与肾癌的发生发展过程。     

当归补血汤化学成分及其促造血功能研究进展

当归补血汤是补气生血的经典中药名方,具有促进造血、保护肾组织、调节免疫、抗纤维化、抗肿瘤及抗抑郁等作用。本文通过分析近15年关于当归补血汤促进造血功能的研究文献,总结了当归补血汤的化学成分,并从促进造血干细胞和外周血细胞的形成、抑制造血干细胞衰老、改善骨髓造血微环境、调节肠道菌群、调节免疫系统及调节髓外器官造血等方面综述当归补血汤对造血系统的影响。     

艾灸对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)中Wnt/β-catenin信号通路的影响,探索艾灸影响骨代谢的内在机制。方法 将60只6月龄SD大鼠随机分为正常组（20只）和去卵巢组（40只）,采用去卵巢法复制大鼠骨质疏松症模型,将去卵巢组再随机分为模型组、雌二醇组和艾灸组,每组10只。采用MTT法检测大鼠BMMSCs活性,酶联免疫吸附法检测大鼠BMMSCs中骨钙素（bone glaprotein,BGP）含量,实时荧光定量PCR法测定Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（low density lipoprotein receptor associated protein-5,LRP-5）、LRP-6、Dkk1、β-连环蛋白（β-catenin）和T细胞因子（T-cell factor, TCF）mRNA相对表达水平,Western blot法测定Wnt3a、Dkk1、β-catenin、TCF蛋白的表达水平。结果 在体外培养第12、16天时,艾灸可显著提高骨质疏松症大鼠降低的BMMSCs活性。艾灸可显著升高骨质疏松症大鼠BMMSCs中降低的BGP含量,显著上调BMMSCs中降低的LRP-5、LRP-6 mRNA的表达水平,显著上调降低的Wnt3a、β-catenin和TCF mRNA及其蛋白的表达水平,显著下调升高的Dkk1 mRNA及其蛋白的表达水平,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 艾灸三阴交、关元穴增加去卵巢大鼠BMMSCs活性,提高BGP含量,其机制与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。     

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

  目的  探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。  方法  HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况; 采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况; qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况; 通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1, 观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。  结果  MTT结果显示, 与对照组相比, 高糖组细胞增殖率明显降低(P < 0.05, P < 0.001), 当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P < 0.05, P < 0.001)。Western blot结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P < 0.05, P < 0.01)。qPCR结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P < 0.05, P < 0.01)。TGF-β1处理细胞后, 细胞纤维化加重, miR-27a的表达升高(P < 0.05, P < 0.01), 当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P < 0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖, 并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。      

神经营养因子-3通过Wnt通路促进人骨髓间充质干细胞生长和成骨分化的研究

目的  阐明神经营养因子-3（NT-3）促进人骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的能力,并分析Wnt通路的作用机制。方法  正常培养的人骨髓间充质干细胞为对照组;NT-3刺激的人骨髓间充质干细胞为NT-3组;加入ICG-001作用30 min后,用NT-3刺激者为Wnt抑制剂组,每组进行成骨诱导实验。利用噻唑蓝细胞增殖、酶联免疫吸附试验、Western blot检测、茜素红染色等实验分别检测各组人骨髓间充质干细胞增殖、细胞凋亡、碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白-1（BMP-1）等蛋白表达及钙结节形成能力。结果  与对照组比较,NT-3组间充质干细胞（MSC）增殖吸光度值增高（P <0.01）;NT-3组碱性磷酸酶活性、BMP-1等蛋白表达或茜素红染色效果均高于对照组（P <0.01）;与NT-3组比较,Wnt抑制剂组MSC增殖吸光度值降低（P <0.01）;而Wnt抑制剂组的碱性磷酸酶活性、BMP-1等蛋白表达均低于NT-3组（P <0.01）。结论  NT-3通过Wnt通路,促进人骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化。

     

益气活血方及其拆方对出血性血小板病患者静脉血iRhom2及GPⅤ表达的影响

目的 观察益气活血方及其拆方对出血性血小板病患者静脉血非活性的菱形蛋白(inactive rhomboid-like protein,iRhom)2及血小板膜糖蛋白(platelet membrane glycoprotein,GP)Ⅴ表达的影响。方法选取33例出血性血小板病患者及30例血小板聚集检测无异常发现的健康献血员的静脉血,体外加益气活血方及其拆方进行中药孵育后,采用Real-time PCR法检测iRhom2mRNA的相对表达水平,采用ELISA法检测GPⅤ蛋白表达水平。结果阴性对照组iRhom2 mRNA相对表达水平明显高于正常对照组,GPⅤ蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.05)。全方组、益气活血组iRhom2 mRNA相对表达水平明显低于阴性对照组,GPⅤ蛋白表达水平明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论益气活血方全方及其部分拆方治疗出血性血小板病的机制可能与下调iRhom2mRNA表达及上调GPⅤ蛋白表达有关。     

石斛合剂对高脂高糖糖尿病大鼠心肌细胞Ca2+代谢的影响

目的以糖尿病心肌病大鼠为研究对象,探讨石斛合剂对糖尿病心肌病心肌细胞Ca2+代谢的影响。方法 Wistar大鼠24只,取5只作为正常组,余19只采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素腹腔注射进行糖尿病心肌病造模。成模后,随机分为模型组、二甲双胍组、石斛合剂组。二甲双胍组、石斛合剂组分别予二甲双胍、石斛合剂灌胃,正常组、模型组予生理盐水灌胃。4周后,测空腹血糖,取左心室心肌组织进行组织病理学观察和心肌细胞内游离钙(MyoCa2+)浓度测定,Western blot法检测肌浆网Ca2+-ATP酶（SERCA2a）、L型钙通道α1C亚单位蛋白（CACNA1C）蛋白表达,RT-PCR法测定SERCA2a mRNA表达。结果石斛合剂组心肌纤维较模型组、二甲双胍组排列整齐,断裂较少。与正常组比较,模型组血糖、心肌细胞MyoCa2+含量和CACNA1C蛋白表达明显升高（P<0.01,P<0.05）,SERCA2a mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.01）。与模型组比较,石斛合剂组血糖、心肌细胞MyoCa2+含量和CACNA1C蛋白表达明显降低（P<0.01,P<0.05）,SERCA2a mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.01,P<0.05）;二甲双胍组血糖明显降低（P<0.01）。与二甲双胍组比较,石斛合剂组心肌细胞MyoCa2+含量明显降低（P<0.01,P<0.05）,血糖、SERCA2a mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论石斛合剂通过提高SERCA2a mRNA和蛋白表达,加快摄取Ca2+的速率,降低细胞质Ca2+负荷,缓解钙超载,最终达到维持糖尿病心肌病钙稳态的作用,有效维持心肌细胞的正常收缩舒张功能;其降糖作用不是预防糖尿病心肌病的主要机理,而在于抑制CACNA1C蛋白表达,抑制钙诱导钙释放过程。     

加味小陷胸汤对接种人胃癌SGC- 7901裸鼠移植瘤生长及Wnt/β- catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的 观察加味小陷胸汤抑制人胃癌细胞株SGC- 7901裸鼠皮下移植瘤生长作用,以及对Wnt/β- catenin信号通路相关蛋白和基因表达的影响,探讨加味小陷胸汤抗胃癌侵袭转移作用的分子机制。方法 构建人胃癌细胞SGC- 7901裸鼠皮下移植瘤模型。药物连续干预4周动态观察移植瘤体积变化,4周后剖取瘤组织称质量,采用Western blot法检测瘤组织β- 连环蛋白（β- catenin）、糖原合成酶激酶- 3（glycogen synthase kinase- 3,GSK- 3β）、原癌基因蛋白（cellular- myelocytomatosis viral oncogene,c- Myc）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达水平;采用RT- qPCR检测β- catenin、GSK- 3β mRNA表达水平。结果 与模型组比较,加味小陷胸汤各剂量组可显著降低SGC- 7901胃癌移植瘤模型裸鼠皮下移植瘤体积和质量（P<0.05）,能显著抑制移植瘤组织β- catenin、c- Myc、VEGF蛋白和β- catenin mRNA表达（P<0.05）,上调GSK- 3β蛋白和mRNA的表达水平（P<0.05）,降低基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）- 2、MMP- 9含量（P<0.05）。结论 加味小陷胸汤能够有效抑制人胃癌细胞SGC- 7901裸鼠皮下移植瘤的生长,并且可以调控与胃癌侵袭转移密切相关Wnt/β- catenin通路的过度激活。     

益心泰有效组分对扩张型心肌病心力衰竭兔心肌组织CaN、SERCA2a mRNA及蛋白表达水平的影响研究

背景　扩张型心肌病是心力衰竭的主要病因之一，益心泰具有较好的抗心力衰竭作用，但具体作用机制尚不完全明确。目的　探讨益心泰有效组分（ECYXT）对扩张型心肌病心力衰竭兔心肌组织钙调神经磷酸酶（CaN）、肌浆网钙泵（SERCA2a）mRNA及蛋白表达水平的影响。方法　2018年1月，采用阿霉素耳缘静脉注射+丙基硫氧嘧啶混悬液灌胃复制兔心力衰竭模型。将造模成功的模型兔分为心力衰竭模型组（17只）、ECYXT低剂量组（17只）、ECYXT中剂量组（17只）、ECYXT高剂量组（17只）和氯沙坦钾组（16只），另设正常对照组（20只）。ECYXT各剂量组分别予以浓度2.1 g/kg、4.2 g/kg、8.4 g/kg的ECYXT进行灌胃处理，氯沙坦钾组予以2.75 mg/kg氯沙坦钾悬液进行灌胃处理，心力衰竭模型组和正常对照组予以等量的0.9%氯化钠溶液；6组灌胃量均为每次10 ml/kg，1次/d，连续4周。比较各组兔心肌组织形态学，血清心钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）水平，左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（LVFS）和E峰与A峰的比值（E/A比值）等心功能情况，心肌细胞［Ca2+］i浓度，心肌组织CaN、SERCA2a mRNA及蛋白表达水平。结果　心力衰竭模型组心肌细胞出现水肿、坏死，胞核皱缩，间质变宽，少许炎细胞浸润，心肌纤维排列紊乱，部分断裂。ECYXT各剂量组和氯沙坦钾组心肌细胞损伤程度均较心力衰竭模型组有所减轻，以ECYXT中剂量组、ECYXT高剂量组、氯沙坦钾组较为明显。与正常对照组比较，心力衰竭模型组血清ANP、BNP水平升高（P<0.01），LVEF、LVFS、E/A比值降低（P<0.01），心肌细胞［Ca2+］i浓度及心肌组织CaN mRNA、蛋白表达水平升高（P<0.01），心肌组织SERCA2a mRNA、蛋白表达水平降低（P<0.01）。与心力衰竭模型组比较，ECYXT各剂量组和氯沙坦钾组血清ANP、BNP水平降低（P<0.01），LVEF、LVFS和E/A比值升高（P<0.01），心肌细胞［Ca2+］i浓度及心肌组织CaN mRNA、蛋白表达水平下降（P<0.01），心肌组织SERCA2a mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01）。与ECYXT低剂量组比较，ECYXT中剂量组、ECYXT高剂量组和氯沙坦钾组血清ANP、BNP水平降低（P<0.01），LVEF、LVFS和E/A比值升高（P<0.01），心肌细胞［Ca2+］i浓度及心肌组织CaN mRNA、蛋白表达水平下降（P<0.01），心肌组织SERCA2a mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01）。ECYXT高剂量组和氯沙坦钾组与ECYXT中剂量组比较，心肌组织SERCA2a mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01），其余指标比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。ECYXT高剂量组与氯沙坦钾组比较，以上各指标差异 均无统计学意义（P>0.05）。结论　ECYXT可提高心肌组织SERCA2a mRNA及蛋白表达水平，降低心肌细胞［Ca2+］i浓度，抑制心肌组织CaN mRNA及蛋白表达，提高心功能，改善心力衰竭。     

脐血粒系祖细胞发育过程中HoxB8的表达及干预

目的：探讨人脐血造血干细胞（HSC）向粒系祖细胞（CFU-G）发育过程中,全反式维A酸（ATRA）和（或）三氧化二砷（As2O3）对HoxB8 mRNA/蛋白表达的影响,为ATRA和As2O3治疗提供依据。方法：12例脐带血样本采自胎盘段脐带血,在人脐血造血干细胞（HSC）向粒系祖细胞（CFU-G）增殖分化过程中,加入ATRA 10 nmol/L和（或）As2O310 nmol/L持续干扰培养的细胞。采用real-time PCR和Western Blotting方法分别测定HoxB8 mRNA/蛋白的表达水平。结果：人类造血干细胞向粒系祖细胞增殖分化过程中,对照组、ATRA组、As2O3组及ATRA＋As2O3组的HoxB8 mRNA/蛋白第3 d开始表达,第7 d表达较强烈,第12 d表达减弱;在real-time PCR方法中,与对照组比较,ATRA组、As2O3组及ATRA＋As2O3组HoxB8 mRNA的表达上调（P〈0.05）。在Western Blotting方法中,与对照组比较,ATRA组、As2O3组及ATRA＋As2O3组HoxB8蛋白的表达上调（P〈0.05）。结论：在人脐血造血干细胞（HSC）向粒系祖细胞（CFU-G）发育过程中,HoxB8基因与粒系造血密切相关。ATRA、As2O3及ATRA＋As2O3能显著上调HoxB8 mRNA及蛋白的表达。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体保护脓毒症相关急性肾损伤的体外研究

目的研究骨髓间充质干细胞来源外泌体（exosomes derived from bone mesenchymal stem cells, BMSCs-Exo）对脓毒症相关急性肾损伤体外模型的作用。方法利用超速离心法提取骨髓间充质干细胞分泌的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析及Western印迹法鉴定外泌体。用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）处理人肾小管上皮细胞（HK-2）建立脓毒症相关急性肾损伤（sepsis-induced acute kidney injury, SAKI）细胞模型,将细胞分为对照组（CON组）、脂多糖组（LPS组）和脂多糖+外泌体组（LPS+EXO组）。CCK-8法检测各组细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、Bax和bcl2水平,采用qRT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA水平。结果应用LPS处理HK-2细胞成功构建了SAKI细胞模型。LPS组中,HK-2细胞经LPS（100 μg/mL）处理后细胞活性和抗凋亡蛋白bcl2表达明显下降（P<0.05）,而细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved-Caspase3、Bax表达水平显著上升（P<0.01）,同时炎性指标TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表达上调（P<0.01）。LPS+EXO组中,BMSCs-Exo逆转了LPS对HK-2细胞的作用,细胞活性升高、凋亡蛋白cleaved-Caspase3以及Bax下降和抗凋亡蛋白bcl2升高（P<0.05）,同时还下调了炎性因子（TNF-α、IL-6和IL-1β）mRNA表达水平（P<0.05）。结论BMSCs-Exo在LPS诱导的SAKI体外模型中发挥抗炎和抗凋亡的保护作用,为未来临床利用BMSCs-Exo治疗SAKI提供理论基础。     

当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响

目的:观察当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响。方法:分离小鼠肌源性干细胞并培养鉴定。制备含有不同剂量当归补血汤的大鼠载药血清及对应剂量的骨髓基质细胞条件培养基。将肌源性干细胞随机分为8组:正常大鼠血清组、当归补血汤载药血清1～3组、正常大鼠血清条件培养基组、条件培养基1～3组,免疫组化法检测CD45的表达情况。结果:培养的肌源性干细胞呈desmin染色阳性;培养3天时载药血清3组、条件培养基两组及3组阳性细胞与正常大鼠血清组之间相比CD45表达量有显著性差异;随当归补血汤载药血清浓度增大CD45表达量增多,10倍剂量载药血清作用效果最佳,条件培养基也呈同样的变化趋势,经10倍剂量载药血清干预的条件培养基作用效果显著。结论:当归补血汤载药血清及含载药血清的条件培养基可促进肌源性干细胞向造血细胞方向分化。     

当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响

目的：观察当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响。方法：分离小鼠肌源性干细胞并培养鉴定。制备含有不同剂量当归补血汤的大鼠载药血清及对应剂量的骨髓基质细胞条件培养基。将肌源性干细胞随机分为8组：正常大鼠血清组、当归补血汤载药血清1～3组、正常大鼠血清条件培养基组、条件培养基1～3组,免疫组化法检测CD45的表达情况。结果：培养的肌源性干细胞呈desmin染色阳性;培养3天时载药血清3组、条件培养基两组及3组阳性细胞与正常大鼠血清组之间相比CD45表达量有显著性差异;随当归补血汤载药血清浓度增大CD45表达量增多,10倍剂量载药血清作用效果最佳,条件培养基也呈同样的变化趋势,经10倍剂量载药血清干预的条件培养基作用效果显著。结论：当归补血汤载药血清及含载药血清的条件培养基可促进肌源性干细胞向造血细胞方向分化。     

人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制

【摘要】 目的 探讨人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制。 方法 将人肝癌细胞株HepG2细胞分为肝癌组（无干预的HepG2细胞）、miR-26a组（HepG2细胞转染miR-26aminmics）（模拟物）、miR-26a-NC组（HepG2细胞转染miR-26a-NC）（空转）,多种方法检测HepG2生物活性,免疫印迹和PCR分别检测β-catenin、Wnt3蛋白水平和mRNA表达。结果 miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,与miR-26a NC组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3蛋白水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3蛋白水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3mRNA水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3mRNA水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论miR-26a抑制HepG2细胞活性,促使其凋亡,其作用机制可能与抑制β-catenin、Wnt3表达相关。     

当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸值、IL-1β、TNF-α、COX-2的影响

目的 探讨当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸值,大鼠滑膜组织白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、环氧化酶-2（COX-2）表达的影响.方法 将60只大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤全方组（全方组）、当归拈痛汤拆方1组（茵陈等药组）、当归拈痛汤拆方2组（羌活等药组）和西药治疗组（西药组）,先采用腺嘌呤合乙胺丁醇灌胃造成大鼠高尿酸血症模型,再在踝关节内注射尿酸钠（MUS）诱导大鼠急性痛风性关节炎模型.测定各组大鼠血尿酸值,应用免疫组化染色方法（S-ABC法）检测IL-1β、TNF-α、COX-2在大鼠滑膜组织中的表达.结果 （1）血尿酸值：中药各组中全方组、茵陈等药组、羌活等药组血尿酸值明显低于模型组,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中全方组下降最为明显;（2）IL-1β、TNF-α、COX-2值：中药各组中全方组、茵陈等药组、羌活等药组IL-1β、TNF-α、COX-2值分别明显低于模型组,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中全方组下降最为明显;西药组与全方组TNF-α含量相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 当归拈痛汤全方组及其拆方茵陈等药组、羌活等药组均有降低血尿酸的作用,并对急性痛风性关节炎的滑膜组织中炎性因子有抑制作用,其中以当归拈痛汤全方组作用最佳.