利用CRISPER/Cas9技术构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠

目的：通过 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑技术构建卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（lecithin-cholesterol acyltransferase， LCAT）基因敲入C57BL/6小鼠并与肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠配繁得到肝脏特异性敲入Lcat基因C57BL/6小鼠模型。 为Lcat基因在肝脏相关代谢疾病发生机制的研究提供动物模型。方法：利用CRISPR/Cas9技术构建Lcat基因敲入小鼠；利用肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠与Lcat基因敲入小鼠交配得到肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠；通过PCR法鉴定小鼠的基因型 ；利用实时荧光定量 PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）和 Western blot 技术验证 Lcat 基因的 mRNA 水平和蛋白水平。 结果：PCR结果显示肝脏特异性敲入Lcat基因的小鼠模型构建成功；qPCR结果显示Lcat基因在肝脏中特异性高表达；WB结果显示，与对照组小鼠相比，LCAT蛋白在肝脏特异性敲入Lcat的小鼠肝脏中有明显更高的表达。结论：成功构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠，为在动物水平探索Lcat基因在肝脏相关代谢疾病中的功能及相关发病机制提供研究平台。     

荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比较

目的 比较荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤脱氢酶氧化酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量的差异,为改进实验研究方法学提供参考依据。方法 提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR与半定量PCR进行相对定量检测,结果做比对分析。结果 两种检测方法均能检测到健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织0.4ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,半定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织15.625 ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR较半定量灵敏度高39倍。两种方法检测结果均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR与半定量PCR检测结果存在有一定差异。结论 两种方法均可用于检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量,荧光实时定量PCR灵敏度较高于半定量PCR法。     

腺相关病毒介导的腺苷激酶过表达减轻高脂饮食诱导的小鼠葡萄糖耐量异常与肝脏脂肪变性

目的 探讨特异性上调肝细胞中腺苷激酶（ADK）表达对高脂饮食诱导的小鼠葡萄糖耐量异常与肝脏脂肪变性的影响。方法 20只雄性C57BL/6J小鼠随机分为2组,每组10只,其中1组通过尾静脉注射将携带甲状腺素结合球蛋白（TBG）启动子驱动表达ADK的腺相关病毒（AAV8-TBG-ADK）注入小鼠体内（AAV8-TBG-ADK组）,另1组注射对照腺相关病毒AAV8-TBG（AAV8-TBG组）。上述2组小鼠接受腺相关病毒注射后,再分别随机分为2个亚组,每亚组5只,分别给予8周普通饮食或高脂饮食。造模过程中检测各组小鼠体质量变化。造模结束后处死小鼠,采用蛋白质印迹法与qRT-PCR检测各组小鼠肝脏ADK表达,葡萄糖耐量试验检测小鼠葡萄糖耐量情况,H-E染色、油红O染色检测肝组织病理改变及脂滴沉积,qRT-PCR检测小鼠肝组织中糖异生相关基因[葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）]和脂肪生成相关基因[胆固醇调节元件结合蛋白1（SREBP-1）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC-1）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A脱氢酶1（SCD-1）]的mRNA水平。结果 与普通饮食饲喂小鼠相比,高脂饮食可导致小鼠体质量增加、葡萄糖代谢紊乱和肝脏脂质沉积。与注射AAV8-TBG的小鼠相比,注射AAV8-TBG-ADK特异性上调小鼠肝脏ADK的表达后,对普通饮食和高脂饮食饲喂的小鼠体质量均无明显影响,但可减轻高脂饮食导致的葡萄糖耐量异常和肝脏脂质沉积（P均<0.05）,并可抑制高脂饮食饲喂小鼠肝脏糖异生与脂肪生成相关基因的表达（P均<0.05）。结论 利用腺相关病毒特异性上调肝细胞ADK表达可改善高脂饮食导致的小鼠葡萄糖耐量异常与肝脏脂肪变性。     

肝脏脂肪变对胰高血糖素受体的表达影响

目的 观察胰高血糖素受体（GCGR）在ob/ob小鼠肝组织以及肝癌细胞株HepG₂细胞脂肪变后表达变化。方法 分别检测10周龄的雄性ob/ob小鼠和同窝野生对照小鼠的体重、肝功、血糖、血脂以及胰岛素等指标,用荧光定量PCR方法、Western blot法和免疫组化分别检测两组鼠肝脏中gcgr基因、蛋白表达的差异以及定位情况。不同浓度油酸处理HepG₂细胞,油红O染色观察HepG₂细胞脂肪病变程度,QPCR法和Western blot法检测细胞gcgr mRNA和蛋白的表达变化。结果 GCGR广泛表达于多种组织,以肝脏表达较多,ob/ob小鼠呈现明显的脂肪肝性病变,且免疫组化结果发现,ob/ob小鼠与正常对照小鼠相比,肝脏中GCGR表达减少;mRNA表达水平分别为0.709±0.174 vs 1.000±0.000,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;蛋白表达水平分别为0.761±0.211 vs 1.200±0.346,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。不同浓度梯度油酸处理HepG₂细胞,其GCGR mRNA和蛋白水平表达随油酸浓度增加而逐渐降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 肝脏脂肪性病变降低了肝脏GCGR表达水平,从而可能影响肝脏的糖脂代谢。     

前列腺纤维性增生的差异表达基因筛选及富集研究

目的 筛选和初步鉴定良性前列腺纤维性增生的差异表达基因（DEGs）,发现新的良性前列腺纤维性增生的基因片段,为临床监测和治疗前列腺纤维性增生提供潜在的基因位点和标志物依据。方法 收集前列腺等离子电切术后组织标本,根据标本病理诊断结果,将标本分成纤维组和结节组。标本冷冻保存,分别提取前列腺结节性增生标本和纤维性增生标本的组织总RNA,构建转录组文库,通过二代高通量测序,对两组mRNA进行定量及差异分析,再做差异基因的GO、KEGG、网络互作分析。结果 两组标本总共发现差异表达基因1 598个,与结节组相比,纤维组相对表达量上调基因1 063个,相对表达量下调基因535个。通过GO富集分析发现,DGEs主要富集在离子转运、细胞黏附、细胞外基质组等生物学过程中,富集在近端启动子DNA结合转录激活剂、RNA聚合酶Ⅱ、DNA结合转录激活剂、信号受体结合等活性分子功能上,以及富集在细胞膜、细胞外区域、质膜等细胞部位。KEGG通路分析发现,DGEs主要富集在细胞外基质-受体作用、细胞因子与细胞因子受体作用等信号通路上。构建DEGs的PPI网络互作筛选出10个重要基因,发现PPBP、OPRM1、GAL 3个基因在前列腺纤维性增生组织中上调。结论 PPBP、OPRM1、GAL等DEGs参与前列腺纤维性增生的发生、发展,可能是良性前列腺纤维性增生监测和治疗的潜在分子标志物。     

BICD货物接头蛋白1基因作为胶质瘤级别进展分子标志物的研究

目的 检测BICD货物接头蛋白1（BICD1）基因在中国人群各级别胶质瘤样本中的表达水平,并探讨其在低级别胶质瘤向高级别胶质瘤进展过程中的潜在作用。方法 从中国脑胶质瘤基因组图谱（CGGA）的全转录组表达谱芯片数据库和全转录组测序数据库中收集BICD1的mRNA表达数据,结合胶质瘤的世界卫生组织（WHO）级别、分子亚型、患者无进展生存期和总生存期及经典分子标志物的表达与突变数据,分析BICD1表达与胶质瘤的级别进展及恶性程度的相关性。收集WHO Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤组织各10例,提取RNA并反转录为cDNA进行实时荧光定量PCR（qPCR）,分析各级别胶质瘤样本中BICD1在转录水平上的表达差异。结果 CGGA全转录组表达谱芯片和全转录组测序数据库中提取的表达数据显示,BICD1的表达水平随着胶质瘤的级别升高而升高（WHO Ⅲ及Ⅳ级vs WHO Ⅱ级：t=7.901,P<0.01）。qPCR结果显示较高级别的胶质瘤组织中BICD1的表达水平更高（WHO Ⅲ级vs WHO Ⅱ级：t=3.514,P<0.01;WHO Ⅳ级vs Ⅲ级：t=2.128,P=0.037 6）。BICD1高表达与胶质瘤患者更短的无进展生存期和总生存期均有关（P均<0.01）。BICD1在前神经元型、神经元型、经典型和间质型胶质瘤样本中的表达水平不同（F=21.8,P<0.01）,其中间质型胶质瘤样本中BICD1表达水平最高,前神经元型胶质瘤样本中表达水平最低。BICD1的表达水平与异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）突变、染色体1p19q联合缺失、人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因（PTEN）突变等指示胶质瘤恶性程度的经典分子标志物相关,其中IDH1突变胶质瘤样本中BICD1的表达水平低于野生型样本（t=7.769,P<0.01）。结论 BICD1可能是指示低级别胶质瘤发生级别进展和恶性进展的潜在分子标志物。     

西藏小型猪IGF-1基因在不同生长发育阶段和不同组织器官中的差异表达

目的 测定西藏小型猪的IGF-1基因在不同年龄阶段、不同组织中的表达分布情况,为未来的研究提供基础数据。方法 采用实时荧光定量PCR技术,以GAPDH基因为内参照,检测了IGF-1基因在西藏小型猪不同组织和不同生长阶段间的表达变化。结果 （1）IGF-1基因表达的时序性研究表明在0、0.25、0.5、1、2岁时肌肉组织的表达量最低,在0、0.25、0.5岁时皮肤组织中表达量最高,在0.1、2、3岁时肝组织的表达量最高。（2）IGF-1基因在在7个不同组织中均有表达,0.25岁时其在表达丰度由高到低依次为：皮肤、肺、肝、肾、脾、心脏和肌肉。且在皮肤中的表达量最高且极显著高于其他各组织（P<0.01）。同时在不同年龄阶段的表达中,IGF-1基因0.25岁时在各组织中的表达均达到峰值。结论 西藏小型猪的IGF-1基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

NADPH氧化酶Nox-4在DSS诱导的小鼠肠炎中的表达及作用

目的 研究Nox-4及抗氧化物在葡聚糖硫酸钠（dextran sulphate sodium,DSS）诱导的小鼠炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）模型中的表达水平,探讨氧化应激及NADPH氧化酶在IBD发病机制中的作用。方法 将16只SPF级雄昆明小鼠随机分为正常组和DSS组,每组8只,正常组正常饮水,DSS组饮用2.5% DSS溶液,7天建立小鼠肠炎模型。通过结肠长度、HE染色组织病理学评分、疾病活动指数（disease activity index,DAI）评估肠道炎症程度;免疫组织化学法检测结肠组织中Nox4蛋白含量,并分别采用实时定量PCR与生化方法检测组织中Nox-4的mRNA表达水平及血清浓度,评价机体氧化应激程度;利用实时定量PCR法分析小鼠肠道组织中Mn-SOD、GSH和CAT mRNA的表达情况,评价机体抗氧化功能;实时定量PCR法检测结肠组织中MCP-1、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平、ELISA法检测上述3种炎性因子血清浓度以反应机体炎症程度。结果 与正常组相比,DSS组小鼠体质量明显下降（P<0.01）,DAI评分明显增高（P=0.000）,结肠长度明显缩短（P<0.01）,肠道呈现中至重度炎症状态; DSS组结肠组织中Nox-4蛋白表达明显上调,Nox-4 mRNA含量显著升高（P=0.000）,血清Nox-4浓度在DSS组较正常组更高（P<0.01）;结肠组织中抗氧化物Mn-SOD、GSH和CAT mRNA的表达在DSS组中均明显增高（P=0.000）;比较机体炎症指标,DSS组小鼠血清中MCP-1、IL-1β、TNF-α浓度较正常组均呈不同程度上升（P均=0.000）,结肠组织中3种炎性因子的mRNA相对表达量较正常组显著升高（P均=0.000）。结论 Nox-4通过氧化应激途径参与了肠道黏膜炎性反应的进程,并可能在IBD的转归中发挥着更为重要的作用。     

结直肠癌差异基因筛选及功能预测

目的 基于美国癌症肿瘤基因图谱（TCGA）数据库分析结直肠癌组织及正常组织的差异表达基因,并探讨其相关分子机制。方法 从TCGA数据库下载所有结直肠癌中mRNA转录组数据。共包含样本740例,其中,结直肠癌组织为571例,正常组织为169例。在R语言环境下,采用edge R工具包处理数据,得到差异表达基因。利用DAVID数据库对差异表达的前1 000个基因进行GO分析及KEGG通路富集分析。对显著差异表达的前200个差异表达基因进行分析,基于Cysctoscape绘制蛋白互作网络图。比较关键基因在癌组织及正常组织中的表达水平。以关键基因的中位表达水平为界值,将关键基因分为高表达组与低表达组,比较高表达组与低表达组的生存情况。结果 共筛选出5 073个差异表达基因,其中,上调基因2 136个,下调基因2 937个。GO分析结果显示,其生物过程主要在细胞增殖、转运、rRNA加工、受体介导的内吞作用等功能富集。KEGG富集分析结果表明,差异表达基因的信号通路主要有细胞周期、转录失调、胆汁分泌、甲状腺激素信号通路、血小板活化等信号通路。筛选出的前7位关键基因为PLK1、BRD4、EHMT2、HIST2H4B、PRPF19、SUV39H1、TRIM28。进一步分析显示,癌组织中PLK1、PRPF19、SUV39H1表达均高于正常组织（P <0.05）。从生存分析曲线可知,PLK1和SUV39H1高表达组总生存时间与低表达组比较,差异无统计学意义（P >0.05）;HIST2H4B低表达组总生存时间高于HIST2H4B高表达组（P <0.05）。结论 基于TCGA数据库分析出PLK1在结直肠癌组织中高表达,其参与细胞增殖、有丝分裂细胞周期的G2/M转换等生物过程,通过P53信号通路发挥作用,在结直肠癌的发生、发展中起重要作用,有望成为诊断结直肠癌的肿瘤标志物。     

CRF及其受体在DSS诱导的实验性结肠炎中的表达

目的 研究CRF及其受体在实验性DSS结肠炎中的表达,探讨其在肠道炎症形成中的可能作用。方法 将6~8周的雌性BALB/c小鼠分为正常对照组和实验组,建立DSS诱导的实验性结肠炎小鼠模型,小鼠进行DAI和组织病理学评分。免疫荧光检测小鼠肠黏膜组织中CRF1受体和CRF2受体的表达。Western blot法检测小鼠肠黏膜组织中CRF、CRF1和CRF2受体的表达。结果 根据肠黏膜DAI评分和组织学评分提示DSS组肠黏膜组织炎症明显,造模成功。免疫荧光检测显示CRF1受体在DSS组和正常肠黏膜组织中表达差异无统计学意义（P>0.05）,而DSS组小鼠肠黏膜组织中CRF2受体表达明显高于对照组（P<0.05）且主要分布在肠上皮细胞和固有层单个核细胞中。Western blot法检测显示CRF1受体在DSS组和正常肠黏膜组织中表达差异无统计学意义（P>0.05）,而DSS组小鼠肠黏膜组织中CRF和CRF2受体表达明显高于对照组（P<0.05）。结论 DSS结肠炎模型周围肠黏膜炎症组织中存在着CRF和CRF2受体的表达增高,而这种增高可能与肠道炎症发生有关。     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

利用基因芯片研究针刺对快速老化小鼠海马基因表达的影响

[目的]利用基因芯片技术研究“益气调血,扶本培元”针法对快速老化小鼠(SAMP10)海马基因表达的影响。[方法]选取雄性8月龄快速老化小鼠(SAMP10)(分成针刺腧穴组,针刺非穴组,对照组)和同源正常老化小鼠(SAMR1),采用cDNAmicroarray技术,分析伴随快速老化SAMP10海马基因表达谱的变化以及针刺对其的影响。[结果]芯片结果显示,伴快速老化,P10海马共有7类10个基因的表达发生变化,8个基因表达下调,2个基因表达上调,施予“益气调血,扶本培元”针法后,所有与SAMP10快速老化相关基因的表达均被部分或全部的逆转,显示针刺具有特异性。[结论]“益气调血,扶本培元”针法能够良性调节脑老化相关基因的表达,并可能通过该种作用延缓脑衰老。     

Effect of oxymatrine on hepatic gene expression profile in experimental liver fibrosis of rats

Objective:To investigate the effects of oxymatrine on hepatic gene expression profile in a rat model of liver fibrosis.Methods:Forty healthy male SD rats were randomly divided into three groups,a normal group（n=8）,a model group（n=16）,and an oxymatrine treatment group（n=16）.Experimental hepatic fibrosis was induced by subcutaneous injection of carbon tetrachloride（CCI₄）.The rats in the treatment group received oxymatrine via celiac injection at a dosage of 40 mg/kg once a day at the same time.The rats in the model and normal groups received saline at the same dosage via celiac injection.Serum levels of aspartate aminotransferase （AST）,alanine transarninase（ALT）,alkaline phosphatase（AKP）,hyaluronic acid（HA）,and laminin（LN）were assayed.The deposition of collagen was observed with HE and Masson staining.Effect of oxymatrine on hepatic gene expression profile was detected by oligonucleotide microarray analysis with Affymetrix gene chip rat U230A. Quantitative real-time polymerase chain reaction（QRT-PCR）was carried out to confirm the expression changes of six genes.Results:Oxymatrine significantly improved liver function,lowered serum levels of HA and LN,and decreased the degree of liver fibrosis,compared with the model group（P<0.05）.A total of 754 differentially expressed genes were identified by gene chip between the model group and the normal group,among which 438 genes increased and 316 genes decreased over two folds.Compared with the model group,86 genes were downregulated markedly in the oxymatrine group（P<0.05）,including collagen I and other genes related to extracellular material（ECM）,integrin signal transduction genes,early growth response factor genes,and proinflammatory genes;28 genes were upregulated significantly（P<0.05）,including cytochrome P450（CYP450） superfamily genes,glycolipids metabolism and biological transformation related genes.Six genes were confirmed with QRT-PCR,consistent with the result from microarray.Conclusion:Oxymatrine could affect the expression of many functional genes and may be useful in the prevention and treatment of liver fibrosis.     

胎肝特异性癌胚RNA——AK003710的筛选及功能研究

目的 筛选胎肝特异性癌胚RNA,探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 对小鼠肝发育和肝再生的长链非编码RNA(IncRNA)芯片数据进行生物信息学分析,筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的候选IncRNA,利用实时定量PCR在小鼠肝癌组织中对候选IncRNA进行表达水平检测,综合芯片分析及实时定量PCR结果,选择表达差异最明显的IncRNA行进一步研究.首先在胎肝和肝再生模型中验证该IncRNA的表达,然后利用siRNA技术干扰该IncRNA,再通过EdU标记技术和Transwell实验分别检测细胞的增殖能力和侵袭能力.结果 生物信息学分析筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的7条IncRNA,其中3条在小鼠肝癌组织中较正常肝组织高表达,3条表达无差异,1条无表达;高表达的3条IncRNA中,IncRNA-AK003710在小鼠肝发育和肝再生芯片中的差异表达倍数最高,可作为进一步研究对象.进一步验证显示IncRNA-AK003710在胎肝及多种肝损伤修复模型中表达上调;功能实验表明对IncRNA-AK003710靶向干扰后能降低小鼠肝癌细胞Hepa1-6的增殖和侵袭能力.结论 IncRNA-A003710在胎肝、再生肝组织及肝癌组织中均高表达,是胎肝特异性癌胚RNA,可调控肝癌细胞的增殖及侵袭过程,有望成为肝癌治疗的潜在靶点.     

Quantitative Study of Iron Metabolism-related Genes Expression in Rat

Objective To investigate the multiple iron metabolism-related genes expression, its regulation by iron and the expression correlation among the genes in rat tissues. Methods Two groups （n=30） of Sprague-Dawley female weanling rats were fed with a control diet and an iron deficient diet respectively for 4 weeks. All rats were then sacrificed, and blood and tissue samples were collected. The routine blood examination was performed with a veterinary automatic blood cell analyzer. Elemental iron levels in liver, spleen and serum were determined by atomic absorption spectrophotometry. The mRNA expression of genes was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Results After 4 weeks, the hemoglobin （Hb） level and red blood cell （RBC） count were significantly lower in the iron deficient group compared with those in the control group. The iron levels in liver, spleen and serum in the iron deficient group were significantly lower than those in the control group. In reference to small intestine, the relative expression of each iron-related gene varied in the different tissues. Under the iron deficiency, the expression of these genes changed in a tissue-specific manner. The expression of most of the genes significantly correlated in intestine, spleen and lung, but few correlated in liver, heart and kidney. Conclusion Findings from our study provides new regulation by iron and correlation among the mRNA divalent metal transporter 1, ferritin, iron regulation protein, hepcidin, ferroportin 1 and hephaestin in intesti understandings about the relative expression, expressions of transferrin receptors 1 and 2, proteins 1 and 2, hereditary hemochromatosis ne, liver, spleen, kidney, heart, and lung of rat.     

雄激素非依赖性前列腺癌耐药转化过程中异常甲基化基因的鉴定

目的探讨DNA甲基化在雄激素非依赖性前列腺癌耐药转变过程中的作用。方法以雄激素依赖性前列腺癌LNCa P细胞为对照组,雄激素非依赖性前列腺癌细胞LNCa P-AI为实验组,采用Illumina DNA甲基化芯片检测两组细胞基因组DNA甲基化水平,并对甲基化芯片数据进行生物信息学分析;实时荧光定量RT-PCR检测前列腺特异抗原PSA mRNA的相对表达量。结果 LNCa P细胞相比,发现LNCa P-AI细胞共有2619个基因甲基化水平发生改变,其中758个基因发生高甲基化,占差异基因的28.9%,1860个基因表现为低甲基化,占差异基因的71.1%,这些差异甲基化基因涉及Notch信号通路和胰岛素样生长因子1信号通路。LNCa P-AI细胞PSA基因甲基化水平上升了3.67倍,其PSA mRNA表达水平下调了6.5倍。结论DNA甲基化参与了前列腺癌雄激素非依赖性转变的过程,可能是导致前列腺癌耐药的诱因之一。     

广西巴马小型猪PERV-env基因克隆及其组织表达谱分析

目的克隆广西巴马小型猪PERV-env部分基因,并研究其在不同组织中的表达差异。方法利用RT-PCR方法从巴马小型猪外周血白细胞中扩增PERV-env基因,并与部分国内外已发表的PERV-env基因序列进行同源性及遗传进化分析。以扩增获得的广西巴马小型猪PERV-env基因为模板设计引物,利用半定量RT-PCR的方法对广西巴马小型猪不同组织中PERV mRNA表达情况进行分析。结果在所检测的9个组织样品中PERV mRNA相对表达水平存在差异,肾及外周血淋巴细胞中PERV mRNA丰度最高,肺、心、肝、脾、胸腺、卵巢次之,且表达丰度差异不显著(P0.05),胰腺PERV mRNA表达丰度最低。结论以巴马小型猪胰岛细胞进行异种移植发生PERV感染的潜在危险性可能要低于其它器官,但仍需进一步研究证实。     

乙型肝炎肝硬化基因表达谱的研究

目的利用寡核苷酸芯片测定乙型肝炎肝硬化基因表达谱,筛选肝硬化差异基因。方法应用含有18 993个已知基因的A ffym etrix U133p lus2.0芯片,对从肝硬化抽提及纯化标记的mRNA进行芯片杂交,用GeneP ix 4 000A荧光激光扫描系统对芯片进行扫描,GeneP ix 3.0分析软件处理杂交信号获取结果。以Northern印迹技术检验芯片分析结果的可靠性。结果芯片分析结果具有可重复性。肝硬化差异表达基因共有118个,上调基因63个,下调基因55个。结论寡核苷酸芯片是筛选肝硬化差异表达基因的有力工具,多基因差异表达参与肝硬化发生。