尿激酶型纤溶系统在乳腺癌细胞侵袭中的作用

目的研究尿激酶型纤溶系统组分uPA、uPAR、tPA及PAI-1在人乳腺癌细胞侵袭中的作用。方法以3株具有不同侵袭转移能力的乳腺癌细胞株作为研究对象,应用RT?PCR方法比较纤溶组分在此3株细胞中的表达,牛奶板法检测细胞培养上清中的纤溶活性,用Boyden小室模型测定细胞侵袭能力。结果发现MDA-MB-231细胞表达较高水平的uPA、uPAR、PAI-1和中等水平的tPA,无血清培养上清中总纤溶活性和uPA纤溶活性最高;MDA-MB-435细胞表达较低水平的uPA和较高水平的tPA,但未测出uPAR和PAI-1的表达,无血清培养上清中总纤溶活性较高,主要是tPA活性;MCF-7细胞表达较低水平的uPAR和较高水平的PAI-1,但未测出uPA和tPA的表达,无血清培养上清中几乎没有纤溶活性。与纤溶活性相一致的是,Boyden小室模型实验结果发现MDA-MB-231在3株细胞中体外侵袭能力最强,MDA-MB-435次之,MCF-7则几乎无体外侵袭能力。经抗uPA和抗uPAR抗体预处理MDA-MB-231细胞,分别使侵袭能力下降83.1%和43.9%(P<0.05)。结论uPA和uPAR的活性与乳腺癌细胞的侵袭转移能力密切相关     

uPA及其受体激活与血管重建后再狭窄

尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)在血管壁中是一类多功能物质,在血管重建再狭窄中uPA与uPAR可以促进血管平滑肌细胞VSMC黏附和迁移,增强VSMC增殖和血管内膜增生,并可调控血管重建后血管收缩性重塑。因此,针对其在血管重建后血管内膜中的过度表达进行干预,将可能成为一个有前途的治疗手段。     

肝硬化患者血浆纤溶酶原活化系统变化及其意义

目的探讨肝硬化患者血浆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)变化及其意义。方法检查确诊的72例乙肝后肝硬化患者,依据Child-Pugh分级分为3级,其中A级23例,B级29例,C级20例。健康志愿献血者6例做为正常对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆uPA、uPAR、PAI-1的变化。同时检测血浆TGF-β1、透明质酸、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)变化以及血浆白蛋白、胆红素、凝血酶原活动度改变。结果随着肝硬化的进展,血浆uPA、uPAR、PAI-1逐渐增加,血浆TGFβ1、血透明质酸、Ⅲ型前胶原也明显增加。Child C组患者血浆uPA、uPAR、PAI-1水平明显高于ChildA、ChildB组。Child A组PAI-1/uPA值下降,而Child B组、Child C组PAI-1/uPA又复升高。Child C组血浆uPA、uPAR、PAI-1水平与正常组、Child A组相比,差异显著。在Child A组,血浆uPA与PCⅢ呈负相关,与TGFβ1正相关;在Child C组血浆TGFβ1与血Ⅲ型胶原呈正相关,与HA呈正相关。结论血浆uPA、uPAR、PAI-1变化与肝硬化发生发展密切相关。肝硬化晚期,虽然血浆uPA、PAI-1增加,但总的效应表现为uPA相对不足,肝基质纤维降解受抑。适当增加uPA活性,抑制TGFβ1的早期激活,抑制肝硬化晚期PAI-1过度表达,可能有助于抑制HSC的激活、增加肝细胞外基质降解,从而有助于延缓肝硬化的发生发展。     

Expression and Significance of Plasminogen Activator Inhibitor in Osteoarthritis Synovial Membrane

目的探讨两种纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)在骨关节炎的发生发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测滑膜组织中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA),组织型纤溶酶原激活物(tPA),PAI-1,PAI-2的表达。结果骨关节炎滑膜中PAI-1,PAI-2的阳性表达比例高于正常滑膜(P<0.05),骨关节炎滑膜中PAI-1与uPA、tPA蛋白表达阳性细胞百分比呈直线正相关关系。结论 PAI可能与骨关节炎软骨退变表现为长期慢性过程有关。     

同型半胱氨酸对乳腺癌患者外周血单个核细胞uPA系统表达的影响

目的：探讨Hcy是否影响乳腺癌患者外周血MNC表达uPA、uPAR和PAI-1。方法：采用不同浓度Hcy对乳腺癌患者外周血MNC进行短期（4h）培养后,粉碎细胞,ELISA法检测其uPA,uPAR和PAI-1的表达.结果：Hcy诱导乳腺癌患者外周血MNC表达uPA,uPAR,而抑制MNC表达PAI-1,并且呈剂量依赖性,Hcy浓度为0,12.5,25,50,100μmol／L时,uPA分别为47.00±21.26,57.70±26.72,72.38±38.64,83.33±42.74,94.83±44.47ng／L;uPAR分别为1299.3±291.7,1447.2±408.8,1607.6±467.0,1731.3±521.1,1815.3±522.3ng／L;PAI-1分别为52.5±20.7,41.6±21.9,35.4±17.9,32.6±18.3,28.7±16.2μg／L。结论：Hcy可以影响乳腺癌患者外周血MNC表达uPA,uPAR和PAI-1,可能在乳腺癌的侵袭和转移中发挥一定的作用。     

磁热化疗对人胶质母细胞瘤U251及其uPA系统的抑制作用

目的 研究磁热化疗联合作用对人胶质母细胞瘤U251的抑制作用及其机制分析.方法 采用溶剂挥发法制备纳米Fe3O4粒子及抗肿瘤药物多西紫杉醇共混的复合膜,植入U251荷瘤裸鼠皮下模型肿瘤,通过体外交变磁场加热,观察裸鼠肿瘤体积及生存期,通过免疫组化方法观察检测肿瘤组织的尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activation,uPA),尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase plasminogen activation receptor,uPAR)及纤溶酶原激活物抑制剂1(plasminogenactivator inhibitor 1,PAI-1)的表达.结果 对照组肿瘤终末体积为3 683.16mm3,中位生存期13d;热疗组1 156.12mm3,中位生存期30d;化疗组2 749.943mm3,中位生存期18d;热化疗组71.882 25mm3,中位生存期41d.与对照组相比,热化疗组uPA,uPAR及PAI-1表达均有明显下调(P＜0.05).结论 热化疗联合应用可通过下调U251的uPA系统表达而抑制胶质瘤的侵袭和复发.     

Gene expression of fibrinolytic factors urokinase plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1 in rabbit temporo-mandibular joint cartilage with disc displacement

Background The urokinase plasminogen activator system is believed to play an important role in degradation of the extracellular matrix associated with cartilage and bone destruction; however its precise roles in temporomandibular disorders have not yet been clarified. The aims of this study were to investigate the gene expression of fibrinolytic factors urokinase plasminogen activator (uPA) and plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1) in the articular cartilage of rabbit temporomandibular joint (TMJ) with disc displacement (DD) and to probe the relationship between fibrinolytic activity and cartilage remodeling.Methods Disc displacement of right joints was performed in 36 of 78 rabbits under investigation. The animals were sacrificed at 4 days and 1, 2, 4, 8 and 12 weeks after surgery, respectively. The right joints of these animals were harvested and processed for the examination of mRNA expression of uPA and PAI-1 in articular cartilage using in situ hybridization techniques.Results The expression of uPA and PAI-1 was co-expressed weakly in the chondrocytes from transitive zone to hypertrophic zone and mineralized zone, while no hybridizing signals were shown in proliferative zone and superficial zone in control rabbits. The most striking was the up-regulation of uPA and PAI-1 mRNA in 4-day rabbits postoperatively at the onset of cartilage degeneration. The strongest hybridizing signals for uPA and PAI-1 were seen in 2-week rabbits postoperatively. After 2 weeks, the expression of uPA and PAI-1 began to decrease and reached nearly normal level at 12 weeks.Conclusions The expression of the uPA/PAI-1 system coincides with the pathological changes in condylar cartilage after DD. The uPA/PAI-1 system may be one of the essential mediators in articular cartilage remodeling.     

氯沙坦对高糖诱导大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物及其抑制物表达的影响

目的 研究高糖对正常大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物(tPA和uPA)及其抑制物-1(PAI-1)表达的影响,并探讨血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂氯沙坦对其改善作用.方法 培养大鼠肾近端小管上皮细胞,并分组为正常对照组、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖 25 mmol/L 甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、氯沙坦组(10-3 mmol/L氯沙坦)、高糖 氯沙坦组(30 mmol/L D-葡萄糖 10-3 mmol/L氯沙坦).RT-PCR法检测各组细胞tPA、uPA及PAI-1 mRNA表达. 结果与正常对照组比较,高糖组肾小管上皮细胞tPA和uPA mRNA表达下降(P＜0.01), PAI-1 mRNA表达增加(P＜0.01);氯沙坦可部分逆转高糖的作用,高糖加氯沙坦组tPA、uPA表达分别是高糖组的2.06倍、1.69倍(P＜0.01),PAI-1表达为高糖组的44% (P＜0.01). 结论高糖可使肾近端小管上皮细胞PA/PAI-1 mRNA异常表达, 氯沙坦可以在肾小管中通过维持PA/ PAI-1的平衡,对糖尿病肾病防治起一定的作用.     

联合检测tPA、PAI-1、uPA及uPAR对急性脑梗死诊治及预判的价值

目的对急性脑梗死病人进行血浆tPA、PAI-1、uPA及uPAR水平的联合检测,探讨其治疗观察及预后判定的临床价值。方法急性脑梗死病人(36例)及对照组在治疗前和治疗后分别进行血浆tPA、PAI-1、uPA及uPAR的联合检测(ELISA法)。结果 36例脑梗死病人治疗前与对照组相比tPA、PAI-1、uPA和uPAR水平均有明显增高(均P<0.01);治疗后与治疗前比较tPA又有明显升高(P<0.05),而PAI-1,uPA and uPAR则在治疗后明显降低(P<0.05,P<0.01),PAI-1及uPAR降至接近对照组水平(P>0.05)。结论血浆tPA、PAI-1、uPA和uPAR水平的变化与脑梗死病人的治疗状况密切相关,联合检测有利于对急性脑梗死的治疗观察和预后判定。     

上皮性卵巢癌组织uPA、uPAR及PAI-1表达及意义

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、uPA受体(uPAR)及其抑制剂(PAI-1)在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学PV-9000法检测60例上皮性卵巢癌、30例良性卵巢肿瘤及30例正常卵巢组织中uPA、uPAR及PAI-1蛋白表达,并结合临床病理因素进行分析.结果 uPA、uPAR、PAI-1在上皮性卵巢癌中的表达率(75.0%、65.0%、66.7%)明显高于良性肿瘤(40.0%、33.3%、30.0%)及正常组织(30.0%、26.7%、33.3%),差异均有显著性(χ2=11.779～19.510,P<0.05),而良性肿瘤与正常组织比较无明显差异.uPA、uPAR、PAI-1在上皮性卵巢癌组织表达与手术病理分期、组织分级和有无淋巴结转移有关(χ2=8.242～36.906,P<0.05).结论 uPA、uPAR、PAI-1在上皮性卵巢癌组织高表达,可能与卵巢癌发生、发展及浸润有关.     

二烯丙三硫对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的抑制及对uPA系统的调节

目的 研究二烯丙三硫（DATS）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的影响及对尿激酶型纤溶酶激活物（uPA）系统的调节作用。方法 实时定量PCR法(real time PCR)检测乳腺癌细胞株uPA系统中uPA、uPA受体（uPAR）和uPA抑制物（PAI-1）的表达;使用不同浓度DATS处理乳腺癌细胞,MTS比色法测定细胞的增殖能力;Matrigel体外浸润实验检测DATS（20~60μmol/L） 对细胞浸润能力的影响;Transwell小室迁移实验和划痕试验评价60μmol/L DATS对细胞迁移能力的影响;RT-PCR和Western blot分别测定60μmol/L DATS作用后,乳腺癌细胞中uPA、uPAR和PAI-1 mRNA和蛋白表达的变化;ELISA法检测细胞培养液中PAI-1蛋白含量的变化。结果 20~80μmol/L DATS对高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。60μmol/L DATS明显抑制MDA-MB-231细胞的浸润和迁移能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达,但对uPA和uPAR的表达水平无显著影响。结论 DATS抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达。     

Northern印迹杂交检测胃癌组织中uPA和uPAR mRNA表达及其意义

目的 :检测胃癌和相应癌旁组织中 u PA和 u PAR m RNA表达水平 ,并探讨它们与胃癌的侵袭、转移之间的关系。方法 :运用 c DNA- m RNA Northern印迹杂交方法定性和定量地检测了 2 0例胃癌和相应癌旁组织中u PA和 u PAR m RNA的表达水平。结果 :在检测的 2 0例胃癌组织中分别有 13例 u PA和 15例 u PAR m RNA表达显著高于相应的癌旁组织 ( P<0 .0 1) ,其中 12例 u PA和 u PAR m RNA协同高于相应癌旁组织 ;11例伴有淋巴结转移的胃癌组织中 u PA和 u PAR m RNA表达水平显著高于 9例无淋巴结转移者。结论 :u PA、u PAR m RNA在胃癌组织中表达增强 ,并且与胃癌侵袭、转移密切相关     

食管鳞状细胞癌组织中uPA和PAI-1表达与浸润转移及预后的关系研究

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）和纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）基因表达及其对预后的影响。方法应用免疫组织化学方法检测uPA、PAI-1基因在80例食管鳞癌患者及20例食管癌旁正常组织中的表达,并应用Cox回归模型和Kaplan-Meier生存曲线检测分析其与患者预后的关系。结果在食管癌组织中uPA、PAI-1蛋白表达显著高于食管正常黏膜组织（P〈0．05）。uPA、PAI-1的表达与食管癌浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0．05）,但与年龄、民族无关。uPA和PAI-1的表达呈正相关（r=7．092,P〈0．05）。单因素Kaplan-Meier生存分析表明,10年总生存率为20％。食管癌uPA、PAI-1阳性表达组较阴性表达组有生存优势,但差异无统计学意义。Cox模型多因素分析表明,uPA、PAI-1不是影响生存期的独立因素,而肿瘤浸润深度和转移是影响生存期的独立因素。结论uPA、PAI-1蛋白表达与食管癌的发生发展有-定的关系,并可能成为判断预后的指标之一。     

纤溶酶原激活、抑制系统与肿瘤发生、发展的关系

纤溶酶原激活因子(PA)包括尿激酶型(uPA)及组织型(tPA),在诱发细胞外基质蛋白水解中起重要作用。活性可被其特异抑制因子(PAI)压抑。细胞膜上受体uPA—R对uPA活性具有定位活化作用。纤溶激活与抑制系统介入多种生理功能,与肿瘤的发生、发展有密切关系。     

Clinical significance of the uPA system in gastric cancer with peritoneal metastasis

Background

It has been demonstrated that urokinase-type plasminogen activator (uPA) is involved in tumor cell metastasis by degrading the extracellular matrix. However, there is little direct evidence of clinical uPA system expression in peritoneal metastatic tissues of gastric cancer. The objective of this study was to investigate uPA system expression in peritoneal tissues of peritoneal and nonperitoneal metastasis patients, and to explore the diagnostic value of the uPA system.

Methods

Expressions of uPA, uPAR, and PAI-1 were measured by semi-quantitative RT-PCR and ELISA. uPA activity was detected using a uPA activity kit.

Results

There was no significant difference in uPA, uPAR, and PAI-1 expression in two types of peritoneal tissue in seven patients with peritoneal metastasis. However, uPA, uPAR, and PAI-1 expressions in peritoneal metastatic lesions were significantly higher than those in normal peritoneal tissues of 24 nonperitoneal metastasis patients (P <0.05). Moreover, no statistical discrepancy of uPA activity was observed in various different tissues.

Conclusions

The expression of the uPA system positively correlates with peritoneal metastasis of gastric cancer. This expression difference in peritoneal or nonperitoneal metastasis patients may provide a reference for diagnosis of peritoneal metastasis.     

骨关节炎滑膜中尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体蛋白的表达

OBJECTIVE: To study the expression of urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR) in the synovial tissures, and the significance of uPA and uPAR in degradation of extracellular matrices in osteoarthritis (OA), then analyse the possible relationship between uPA and uPAR. METHODS: Immunohistochemical analysis technique was used to detect uPA and uPAR protein expression and distribution in synovial tissues in 26 OA patients and 10 mormal individuals. RESULTS: Positive staining of uPA and uPAR protein were detected in 19 cases in the 26 OA samples (73%), while only 2 positive cases were seen in the 10 mormal tissues (20%). The expression rate of uPA protein was markedly higher in OA than in the normal (P < 0.01). The expression of uPAR was seen in 14 cases in all 26 OA samples (54.6%), while there was only one case in 10 normal samples (10%), the positive rate was significantly higher in OA than in normal samples (P < 0.05). Positive expression of uPA and uPAR proteins were found in synovial lining cells, mononuclear cells, macrophage-like cells and endothelial cells. Using the correction analysis, we found a positive correlation between uPA and uPAR reactivity in the synovial tissues in OA (r = 0.920, P < 0.01). CONCLUSIONS: The high expression of uPA and uPAR protein in OA synovial tissues indicate that the uPA system may play an important role in the process of synovitis and degradation of OA cartilage extracellular matrices. In the pathologic process of OA, uPA and uPAR coordinate each other, lead to the genesis and development of OA cartilage degradation.     

uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体。方法：采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-TEasy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his（-）B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达。结果：成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达。结论：成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础。     

骨关节炎滑膜中尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体蛋白的表达

目的 :检测尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA)及其受体蛋白 (uPAR)在骨关节炎 (OA)滑膜中的表达 ,探讨uPA系统在OA发病中的病理作用。方法 :采用免疫组织化学方法检测 2 6例OA和 10例正常滑膜组织中uPA和uPAR蛋白的表达水平。结果 :2 6例OA滑膜组织中uPA阳性表达 19例 (73% ) ,uPAR阳性表达 14例 (5 4 6 % )。 10例正常滑膜组织中 ,uPA阳性表达 2例 (2 0 % ) ,uPAR阳性表达 1例 (10 % )。uPA和uPAR在OA滑膜中主要分布于滑膜衬里层细胞、衬里下层单核细胞、巨噬样细胞及血管内皮细胞。OA滑膜组织中uPA和uPAR蛋白的表达水平呈直线相关 (r =0 .92 0 ,P <0 .0 1)。结论 :OA滑膜组织中高水平的uPA和uPAR蛋白表达 ,提示在OA滑膜炎症和软骨降解等病理过程中 ,uPA系统起着重要作用 ,uPA起协同作用     

实验性肺癌尿激酶型纤溶酶原激活物和抑制物的表达及意义

目的 研究尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,uPA)和抑制物-1(PA inhibitor．PAI-1)在实验性肺癌的发生、发展及侵袭转移过程中的作用。方法 将Lewis肺癌瘤株腹腔注射C57／BL小鼠．于接种后9、17、13天各处死6只．取瘤、肺组织匀浆．低温离心取上清液．采用酶联免疫吸附(enzyme-liked immunosorbent assav．ELISA)法检测血浆和组织中uPA和PAI-1的含量．按环磷酰胺 刺五加组、环磷酰胺组、刺五加组、肿瘤对照组和正常对照组分别进行对比分析。结果 肿瘤组uPA和PAI-1含量高于正常对照组;环磷酰胺一刺五加组血浆、瘤和肺组织中uPA和pAI-1活性低于肿瘤组。结论 检测实验性肺癌uPA和PAI-1含量可能对其侵袭转移、预后等有一定的参考价值。     

uPA与uPAR在肾细胞癌中的表达及其意义

①目的 探讨尿酸氧化酶(uPA)、尿酸氧化酶受体(uPAR)在肾细胞癌中的表达特征及其在肾癌恶性生长中的作用。②方法 选取40例不同分化程度及临床分期的肾细胞癌组织和10例正常肾组织，采用Supervision法进行免疫组织化学染色，检测uPA、uPAR的表达。③结果 uPA、uPAR的表达程度与肾癌细胞分化程度及临床分期有关，分化越差、临床分期越晚，则表达程度越高。在肿瘤细胞增殖密集区域，uPA、uPAR阳性的肿瘤细胞比例较低，而在肿瘤细胞生长稀疏、肿瘤血管增殖旺盛的区域，阳性细胞比例较高。正常肾组织未见uPA、uPAR的表达。④结论 uPA、uPAR的表达是浸润性生长的肾细胞癌的特征之一，其表达程度可作为判断肾癌浸润性的重要参考指标之一。uPA、uPAR的表达对肾细胞癌血管发生可能起重要作用。