P16INK4A、CDK4和cyclin D1在子宫平滑肌肿瘤中的表达

目的：探讨P16^INK4A、CDK4和细胞周期蛋白D1（cyclin D1）在子宫平滑肌肿瘤中的表达及意义。方法：应用免疫组化SP法及原位杂交法检测P16^INK4A、CDK4和cyclin D1蛋白和P16^INK4A mRNA在21例子宫平滑肌肉瘤（leiomyosarcoma,LMS）、34例子宫平滑肌瘤（leiomyoma,LMA）和22例正常子宫平滑肌组织中的表达情况。结果：P16^INK4A、CDK4和cyclin D1蛋白在LMS、LMA和正常平滑肌组织中的阳性率分别为62%、90%、57%;15%、26%、53%;10%、10%、0%。P16INK4A、CDK4在LMS和LMA间的表达差异均有统计学意义（P〈0.05）;cyclin D1蛋白在LMS和LMA中的表达率均明显高于正常平滑肌组织,而在LMS和LMA间表达率差异无显著性。原位杂交结果与免疫组化结果基本一致。结论：P16^INK4A、CDK4在肉瘤发生过程中具有重要作用;cyclinD1过表达是常见的分子水平改变,且可能出现较早;检测P16^INK4A、CDK4蛋白有助于鉴别子宫平滑肌肉瘤和平滑肌瘤。     

子宫平滑肌肉瘤基因芯片比较基因组杂交分析

目的:采用基因芯片比较基因组杂交技术(array-CGH)在基因组范围内分析子宫平滑肌肉瘤D NA复制数量的变化。材料与方法:本研究分析了4例子宫平滑肌瘤和7例子宫平滑肌肉瘤。显微镜下切碎石蜡固定的组织标本并提取D N A。根据基因组数据库(肿瘤基因),采用基因芯片CG H和荧光原位杂交(FISH)技术进行分析。结果:子宫平滑肌瘤未显示出遗传变化,而7例子宫平滑肌肉瘤均显示特定的扩增或缺失。平均扩增和缺失率分别为4.86%和15.1%。扩增水平较高的区域为7q36.3,7q33-q35,12q13-12q15和12q23.3。纯合子缺失为1p21.1,2p22.2,6p11.2,9p21.1,9p21.…     

P16和C-fos在子宫平滑肌肿瘤中的表达及意义

目的:探讨抑癌基因P16和原癌基因C-fos在子宫平滑肌瘤和子宫平滑肌肉瘤中的表达.方法:采用免疫组织化学SP法对40例子宫平滑肌瘤、10例子宫平滑肌肉瘤和20例正常子宫平滑肌进行P16和C-fos基因蛋白检测.结果:P16基因蛋白在子宫平滑肌肉瘤中的表达率显著高于子宫平滑肌瘤和正常子宫平滑肌组(P＜0.05),其在子宫平滑肌瘤中的表达率亦高于正常子宫平滑肌组(P＜0.05);C-fos基因蛋白在子宫平滑肌肉瘤中的表达率显著高于子宫平滑肌瘤和正常子宫平滑肌组(P＜0.05),但其在子宫平滑肌瘤和正常子宫平滑肌组间的表达没有明显区别(P＞0.05).结论:P16和C-fos的表达可能和子宫平滑肌瘤向子宫平滑肌肉瘤的转化密切相关;其为临床鉴别子宫平滑肌肿瘤良恶性提供参考.     

p16蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

肿瘤发生与癌基因激活和抑癌基因失活有关,p16基因是继p53抑癌基因后新近发现的又一抑癌基因,又称MTS1,INK4,CDK4,CDK2基因。是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因,位于染色体9p21区［1］。有关胃癌组织中p16蛋白的表达与临床的病理关系研究不多,因此,本文对1998～1999年36例手术切除之胃癌石蜡标本,行p16蛋白的免疫组化检测,并结合临床资料,探讨p16蛋白表达的特点及临床意义。1 材料和方法1.1 材料本文胃癌标本,均以10%福马林固定,石蜡包埋,并行5 μm连续切片。所有标本均病理证实为胃癌。其中,男34例,…     

p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达及其意义

目的：检测p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达,探讨其与蒙古族患者宫颈癌发生发展的关系。方法：选取100例蒙古族患者宫颈癌、宫颈上皮内瘤变（CIN）、慢性宫颈炎和子宫平滑肌瘤病变组织石蜡切片,分为宫颈癌组25例、CIN组35例、慢性宫颈炎组20例和子宫平滑肌瘤组20例,利用免疫组织化学SP法检测各组石蜡切片组织中p16INK4a蛋白表达。结果：蒙古族患者宫颈癌、CIN、慢性宫颈炎、子宫平滑肌瘤组织中p16INK4a蛋白阳性表达率分别为100.0%、74.3%、25.0%和10.0%。多个样本比较的K-W H秩和检验,宫颈癌组p16INK4a蛋白阳性表达率高于CIN组、慢性宫颈炎组和子宫平滑肌瘤组（P<0.05）。结论：p16INK4a蛋白可以作为筛选蒙古族早期宫颈癌患者的一种检测指标。     

miR-365-3p抑制CDK-10表达对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的探讨miR-365-3p通过周期素依赖性激酶-10(CDK-10)影响口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡与周期的机制。方法收集在本院就诊的40例口腔鳞癌患者肿瘤组织样本及癌旁正常组织样本,检测其miR-365-3p和CDK-10表达水平。随机将人舌鳞癌细胞系(CAL-27)分为空白组、对照组及miR-365-3p三组。对照组与miR-365-3p组分别转染miR-365-3p NC与miR-365-3p mimic,空白组不进行转染。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-365-3p表达,CCK-8法及流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡。qPCR和Western blot检测CDK-10的表达水平。结果相较于对照组与空白组,miR-365-3p在miR-365-3p组的表达水平显著升高(P＜0.05),细胞增殖指数显著降低(P＜0.05);细胞凋亡水平显著升高(P＜0.05)。转染72 h后,相较于空白组与对照组,miR-365-3p组G1期比例显著降低(P＜0.05),S期+G2期比例则显著增加(P＜0.05)。转染48 h与72 h后,相较于空白组与对照组CDK-10蛋白在miR-365-3p组的相对表达量显著降低(P＜0.05)。结论miR-365-3p在口腔鳞癌细胞中的高表达能够抑制CDK-10表达,从而抑制细胞增殖,调节细胞周期,促进细胞凋亡。     

奥沙利铂对肝癌细胞HuH-7细胞周期的影响

目的探讨奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株HuH-7细胞周期的影响及其相关机制,为其应用于原发性肝细胞癌临床治疗提供理论依据。方法 MTT方法检测L-OHP对肝癌细胞HuH-7生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测L-OHP诱导HuH-7细胞周期阻滞的作用;RT-PCR和Western blot方法观察L-OHP对细胞周期调节因子Cyclin D1、CDK2、CDK4及p16、p21、p53表达的影响。结果 MTT结果显示L-OHP对HuH-7细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。L-OHP能够诱导HuH-7细胞周期阻滞于S期,并可下调CDK4和Cyclin D1蛋白的表达,上调p21蛋白的表达,低浓度上调p53表达而高浓度下调p53表达,CDK2和p16表达无明显变化。结论 L-OHP可能通过影响CDK4、Cyclin D1及p21的活性使HuH-7细胞阻滞在S期,从而抑制肝癌细胞HuH-7的增殖。     

全反式维甲酸对血管平滑肌细胞和p16表达的影响

目的探讨全反式维甲酸对大鼠血管平滑肌细胞增生、DNA合成和细胞周期素依赖激酶抑制蛋白p16表达的影响。方法采用血管平滑肌细胞培养,3H-TdR掺入,Western-blotting印迹和图像分析方法。结果全反式维甲酸(2.5μmol/L)明显抑制胎牛血清(20?S)刺激的血管平滑肌细胞增生和DNA合成;全反式维甲酸抑制FBS诱导的血管平滑肌细胞p16蛋白表达下降。结论全反式维甲酸具有抗血管平滑肌细胞增生作用,其机制与促进p16蛋白表达有关。     

p16基因异常甲基化与人类肿瘤发病的关系

p16位于人类染色体9p21，由3个外显子和2个内含子组成。p16基因的功能产物P16蛋白能与周期蛋白(cyclin)竞争结合细胞周期素依赖激酶(CDK4、6)结合，从而抑制细胞周期素D与CDK复合物的活性，使Rb磷酸化受阻。E2F不能游离，因而不能发挥促进G期→S期转化的作用,细胞增殖受到控制。p16对细胞的生长抑制作用是依赖于Rb基     

宫颈癌及癌旁组织中P16和CDK-4的表达

目的:观察宫颈癌及癌旁组织中P16蛋白(protein 16,P16)和人细胞周期素依赖激酶4(human cyclin-dependent kinase 4,CDK-4)的表达,探讨宫颈癌的发病机制.方法:选择我院病理室的术后宫颈癌和相应的癌旁组织标本60例(癌旁组织经病理证实不存在癌细胞)作为研究对象.HE染色后由病理学医师对组织学类型进行病理诊断.采用S-P免疫组织化学染色方法检测宫颈癌和癌旁组织中P16和CDK-4的表达.结果:宫颈癌和癌旁组织中P16阳性率分别为46.67%、70.00%.两组比较,差异有显著性(P＜0.01).宫颈癌和癌旁组织中CDK-4阳性率分别为65.00%、41.67%,两组比较.差异有显著性(P＜0.05).结论:CDK-4可考虑用作宫颈癌的肿瘤标志物.     

1α,25-（OH）2D3对大鼠成骨细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究1a,25-（OH）2D3对SD大鼠成骨细胞增殖及相关蛋白的表达的影响。方法采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期,RT-PCR和Westernblotting分别检测细胞G。期调节蛋白细胞周期素D1（cyclinD1）、细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）、p21mRNA和蛋白的表达。结果与0nmol·L-1组比较,各1d,25-（OH）2D3干预组细胞周期发生改变,G0／G1期细胞数递减,而S＋G2/M期细胞比例升高,PI增加,差异显著（P〈0．05）;且1a,25-（OH）2D3可诱导细胞cyclinDl、CDK4mRNA及蛋白表达和下调p21（P〈0．05）。结论置1d,25-（OH）2D3可上调cyclinD1、CDK4表达和抑制负性调节因子p21,调节相关蛋白表达以促进成骨细胞增殖。     

p16基因蛋白在宫颈癌中的表达

目的:观察细胞周期调节蛋白抑制因子p16在宫颈癌组织中的表达,并探讨其与宫颈癌的关系。方法:应用SP免疫组化法检测11例正常宫颈上皮,9例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和48例宫颈癌石蜡包埋组织切片中p16基因蛋白表达情况。统计处理用SSPS10.0软件分析系统。结果:在正常宫颈上皮、CIN和宫颈癌组织中,p16表达的阳性率分别为18.18％、66.67％、87.50％。从正常宫颈到CIN到宫颈癌组织中p16表达呈现逐渐升高的趋势。宫颈癌组织p16表达明显高于正常宫颈组织,具有极显著性差异(P<0.001),CIN和正常宫颈上皮比较,p16表达无显著性差异(P>0.05)。p16表达与宫颈癌的临床分期、组织类型、分化程度以及淋巴结转移均无显著相关性(P>0.05)。结论:细胞周期调节蛋白抑制因子p16基因蛋白高表达参与宫颈癌的癌变过程。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后，细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化，探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G／M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后，MTF法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内，DADS能抑制HL-60细胞增殖，细胞周期发生G2／M期阻滞，并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖，诱导其G／M期阻滞。     

HPV基因分型在子宫颈癌及癌前病变中发生发展表达规律的研究

HPV基因分型在宫颈细胞学筛查中的应用及意义;子宫颈癌及其癌前病变中HPV感染及其基因型分布;HPV感染相关子宫颈癌和癌前病变中细胞周期蛋白的表达特征及规律;HPV16、E6、E7癌基因在转录水平沉默的途径及沉默后细胞周期蛋白的表达变化。收集2050例本院妇科门诊及住院部送检的宫颈脱落细胞,进行HPV基因分型检测;收集整理子宫颈癌及癌前病变和慢性宫颈炎石蜡组织标本,通过HE阅片筛选出129例标本入组,分为子宫颈鳞癌(SCC)组、宫颈上皮内瘤变(CIN)组、慢性宫颈炎组;应用PCR-反向点杂交法进行子宫颈癌与癌前病变HPV基因分型检测,检测数据用SPSS13.0软件进行统计分析;选取79例宫颈病变石蜡标本进行p16、p21、p53、Rb、CyclinD1等指标免疫组化(SP法)染色;采用免疫组化、RT-PCR、Western blot技术检测子宫颈癌HCC94、SiHa细胞中p16、p21、p53、Rb、CyclinD1基因及其蛋白表达,利用基因转染技术研究SiHa、E6、E7基因瞬时沉默后细胞凋亡以及关键信号分子p16、p21、p53、Rb、CyclinD1、ki67的表达情况。     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖模型细胞周期相关蛋白表达的影响

目的研究三七总皂苷(TPNS)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖细胞周期相关蛋白表达的影响。方法以血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠VSMC,观察含药血浆对VSMC增殖的影响,以免疫荧光流式细胞术测定增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期相关蛋白的表达。结果血小板衍生生长因子(PDGF)剌激VSMC后,VSMC PCNA、VSMC细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达增强,细胞周期抑制因子P21蛋白表达下调。阿托伐他汀含药血浆和TPNS含药血浆均可抑制PDGF诱导的VSMC PCNA、cyclinD1和CDK4蛋白表达增强及P21蛋白表达下调。TPNS与阿托伐他汀比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF剌激VSMC后,可促进细胞周期转化,细胞增殖加快。阿托伐他汀、TPNS可抑制PDGF诱导的VSMC增殖,其作用可能是通过抑制了细胞周期相关调节蛋白的表达,从而抑制了VSMC细胞周期转化和增殖。     

子宫内膜癌中p21Cipl/Waf1和PCNA蛋白表达及意义

目的:研究细胞周期调控因子p21/Cipl/Wafl对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其表达临床意义.方法:用免疫组化技术检测子宫内膜石蜡标本中细胞增殖核抗原(PCNA)与P21的表达.结果:①PCNA在正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中均存在,其增殖指数分别为4.22±2.94和31.65±7.18,PCNA的表达在G2、G3期标本中高于G1标本.PCNA的表达与病理分级及临床分期有关.②内膜癌组织中p21表达率为44.44%(16/36),低表达的PCNA标本有P21的表达;p21的表达在G1期高于G2、G3期,浅表型高于浸润型,随临床分期上升而下降.p21Cipl/Wafl的表达与PCNA的表达呈负相关.结论:p21缺失可能导致细胞周期紊乱,细胞增殖;p21可抑制PCNA的表达.     

子宫内膜癌中p21^Cipl／Wafl和PCNA蛋白表达及意义

目的研究细胞周期调控因子p21/Cipl/Wafl对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其表达临床意义.方法用免疫组化技术检测子宫内膜石蜡标本中细胞增殖核抗原(PCNA)与P21的表达.结果①PCNA在正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中均存在,其增殖指数分别为4.22±2.94和31.65±7.18,PCNA的表达在G2、G3期标本中高于G1标本.PCNA的表达与病理分级及临床分期有关.②内膜癌组织中p21表达率为44.44%(16/36),低表达的PCNA标本有P21的表达;p21的表达在G1期高于G2、G3期,浅表型高于浸润型,随临床分期上升而下降.p21Cipl/Wafl的表达与PCNA的表达呈负相关.结论p21缺失可能导致细胞周期紊乱,细胞增殖;p21可抑制PCNA的表达.     

川芎当归提取物对血管平滑肌细胞MAPK信号通路与周期蛋白的调控效应

目的揭示川芎当归提取物(ELCAS)抑制血管平滑肌细胞增生的分子机制。方法以体外培养的原代大鼠血管平滑肌细胞为研究对象,应用Westernblot方法检测不同质量浓度ELCAS对血管平滑肌细胞内的ERK、JNK、p38磷酸化水平的影响,以及周期蛋白CyclinD1和细胞周期抑制子p21的表达情况。结果ELCAS能显著抑制ERK、JNK和p38的磷酸化以及血清诱导的CyclinD1蛋白的表达,并表现出良好的浓度依赖性;同时ELCAS能剂量依赖性地促进细胞内周期蛋白抑制子p21过表达,并抑制pRb磷酸化水平和CyclinD1蛋白表达。结论ELCAS可通过抑制MAPK信号通路以及对周期蛋白的调控来抑制血管平滑肌细胞增生。     

前列腺癌细胞PC-3M对外源基因pPSA-P21表达的抑制作用

目的:观察外源p21WAF-1/CIP1p21基因在前列腺癌细胞PC-3M中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建前列腺组织特异性表达载体pPSA-p21,用lipofectin转染PC-3M细胞,MTT法检测转染前后的细胞生长情况,转染后72h收集细胞进行Westernblotting检测P21蛋白的瞬时表达,并用流式细胞技术(FCM)分析细胞周期和检测细胞P53蛋白的表达。结果:转染后的细胞生长并未受到明显抑制,转染后72hWesternblotting未检测到P21蛋白,FCM分析显示PC-3M细胞多处于G0～G1期和S期,野生型P53和突变型P53蛋白均未见明显表达。结论:PC-3M细胞对外源p21的表达有抑制作用。     

子宫平滑肌瘤组织中相关基因及其蛋白的研究

目的　研究细胞间隙连接蛋白基因 connexin43及其蛋白、雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)在子宫平滑肌瘤中的表达 ,从核酸及蛋白水平探讨三者在子宫平滑肌瘤发生中的相关关系 .方法　应用核酸原位杂交技术和 SP免疫组织化学法 ,研究 37例子宫平滑肌瘤、 2 0例正常子宫平滑肌组织中 ,cx43m RNA及其蛋白、ER、PR的表达规律 .结果　 cx43m RNA及其蛋白、 ER、 PR在子宫平滑肌瘤中的表达明显高于在子宫平滑肌组织中的水平 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) .结论　 cx43m RNA及其蛋白在子宫平滑肌瘤中的过度表达 ,是子宫平滑肌瘤发生过程的重要事件 ,与 ER、PR水平升高呈现一致性 ,为进一步揭示子宫平滑肌瘤的复杂分子机制、寻求可靠的早期标志的研究有重要意义